Grupo N° 2

LABORATORIO N° 4 DE MICROBIOLOGIA

TINCION DE GRAM Y ESPORAS

Benavides Castillo Jaime (217127011), Bernal Enríquez Nicolás (217127015), Erazo

Pejendino Alex (217127045) Recalde Jojoa Luis (217127120) López Cerón Madelein
(217127069).

Universidad de Nariño, Facultad de Ciencias Pecuarias - Semestre 2

INTRODUCCIÓN la clasificación taxonómica de

TI N CI O N D E G R AM Y E S PO R AS
La tinción de Gram es uno de los
métodos más útiles para la
microbiología o el laboratorios de
bacteriolog ía, dado que la mayoría
de microorganismos vivos o
activos son incoloros excepto las
algas y las cianobacterias, por lo
cual debemos estar totalmente
familiarizados con este
procedimiento, en la microbiología
las referencias de morfología
celular bacteriana (cocos, bacilos,
positivos, negativos etc..)Se
basan justamente en la tinción de
G R AM . Est e nom bre se l e h a da do
por el bacteriólogo danés
Christian Gram en 1884. La tinción
de Gram se da de diferente forma,
por una parte están las Gram
positivas las cuales se tiñen de
color azul o violeta esto ocurre
para su pared celular la cual es
gruesa y tiene mayor cantidad de
peptidoglucano, las Gram
negativas se tiñen de color rosado
estas poseen una capa más
delgada de petidoglucano y dos
paredes celulares una interna y
otra externa. Por otra parte
tenemos la tinción de endoesporas
la cual se hace por medio de
tinciones selectivas las cuales
permiten observar estructuras
especializadas que son útiles para
bacterias. Por ejemplo: la tinción
de endoesporas permite identificar
bacterias tipo Bacillus y
Clostridium, esta tinción al
observar al microscopio nos
permite identificar si positivo para
endoesporas lo cual se podría
definir si se observa un contorno
de color rojo y estructuras
ovaladas de color verde, por lo
contrario si fuese negativo para
endoesporas no se podría
observar estas estructuras de
color verde.
OBJETIVO: aprender las técnicas
de separación de frotis, fijación y
tinción más utilizadas en el
estudio microscópico de cultivos.
.
METODOLOGIA
se siguió el protocolo establecido en la guía
de laboratorio estipulada por el docente.
1. Extensión: en un porta objeto bien
limpio, se colocó una gota de agua
destilada en el centro de la placa,
posteriormente con el asa de siembra
previamente esterilizada, se sacó una
pequeña cantidad de bacterias de las
cajas Petri A, B Y C simultáneamente
y con ayuda del asa se extendió la
gota con las bacterias por toda la
1
 placa se fijó por calor, flameando
suavemente a la llama del mechero
hasta que seco.
2. COLORACION O TINCION DE
GRAM :
 Se agregó sobre la extensión
CRISTAL VIOLETA se dejó
por un minuto
 Se eliminó el colorante con
agua destilada
 Se agregó sobre la extensión
LUGOL dejándolo actuar por
1 minuto
 Se eliminó el exceso y se
decoloro con ALCOHOL
 Posteriormente se lavó con
agua destilada
 Se agregó sobre la extensión
FUCSINA y se dejó actuar por
1 minuto.
 Se eliminó el colorante
mediante lavado con agua
destilada
 Se deja secar la placa
suavemente al ambiente
 Se marcó las placas
 Una vez seca la placa se
observó al microscopio con el
objetivo de 100x usando una
gota de aceite de inmersión.
3. TINCION DE ENDOESPORAS
TECNICA 2 :
 Se colocó un pedazo de papel filtro
que cubra en su totalidad la placa
sobre el frotis de la cepa A, B Y C
correspondientemente.
 Se agregó VERDE DE MALAQUITA
sobre el papel filtro, cubriendo toda la
preparación.
 se colocó el portaobjetos sobre un
Erlenmeyer con agua en ebullición
por 10 minutos, evitando que se
seque el colorante, se agregó un
poco más debido a que se iba
secando.
 Se lavó eliminando el colorante y se
cubrió con SAFRANINA por 30
segundos.
 Se lavó nuevamente eliminando el
exceso de colorante y se dejó secar
suavemente al ambiente.
 Posteriormente se observó al
microscopio en el objetivo de 100x
usando una gota de aceite de
inmersión.
2
 RESULTADOS

CUADRO DE RESULTADOS
TINCION DE GRAM
CAJAS TAMAÑO MORFOLOGIA TINCION DE GRAM
LARGO ANCHO COCOS BACILOS POSITIVA NEGATIVA
CAJA PETRI 1 pequeño pequeño Bacillos Gram positiva (color
morado)
CAJA PETRI 2 pequeño pequeño Bacillos Gram positiva (color
morado)
CAJA PETRI 3 pequeño pequeño Bacillos Gram positiva (color
morado)

IMÁGENES

3
 CUADRO DE RESULTADOS
TINCION DE ENDOESPORAS
CAJAS TAMAÑO MORFOLOGIA TINCION DE SITUACION DE LA ESPORA EN EL
ENDOSPORAS ESPORANGIO
LARGO ANCHO POSITIVO NEGATIVO CENTRAL SUBTERMINAL TERMINALES
CAJA - A bacilos SP positivo centrales
CAJA - B filamentosa positivo centrales ventrales
CAJA – C redondas positivo centrales ventrales

IMÁGENES

CAJA - C CAJA - B

CAJA – A

4
BIBLIOGRAFIA:
1. http://www.academia.edu/downloa
d/40735413/Practica_6.docx
2. Guía de laboratorio, tinción de Gram
y esporas.