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Bioseguridad en laboratorio de
microbiología
1. Esquematice el área del laboratorio
2. Explique el nivel de seguridad que debe
tener el laboratorio en el que usted trabaja.
En cualquier laboratorio, se deben tomar precauciones para que
las personas que realizan investigación o tratan de identificar
organismos no se infecten. Debido a este peligro, los laboratorios
deben adherirse a normas de seguridad muy específicas para
trabajar con organismos que pueden constituir una amenaza
para la salud humana.
Los laboratorios se dividen en 4 niveles de bioseguridad, y las
prácticas obligatorias de protección aumentan con cada nivel.
Nivel de Bioseguridad 1
Este nivel no representa una amenaza para la salud humana; esto
quiere decir que aparentemente no causan enfermedad en
adultos saludables.
Para este nivel sólo se requieren prácticas estandarizadas de
trabajo en laboratorio.
Lavado frecuente de manos, especialmente después de
quitarse los guantes y antes de salir del laboratorio.
Límites en el acceso al espacio del laboratorio al trabajar;
No fumar, comer, beber, o almacenar alimentos en el
laboratorio;
Descontaminación de superficies de trabajo después de
cada uso y después de cualquier derrame;
Descontaminación de desechos del laboratorio;
Uso de pipetas mecánicas (no usar la pipeta por medio de
succión oral);
Tener precauciones al usar objetos punzantes, lo que
incluye el uso de contenedores especiales para desecho
de agujas y otros objetos punzantes.
Nivel de Bioseguridad 2
Se requiere generalmente para trabajar con cualquier derivado
de sangre humana, otros fluidos corporales o tejidos en los cuales
la presencia de un agente infeccioso puede ser desconocida. Al
trabajar los principales peligros para el personal son pinchaduras
accidentales con agujas, infección potencial mediante
exposición a los ojos y nariz e ingestión de materiales infecciosos.
Sin embargo, se debe tener extremo cuidado con las agujas e
instrumentos punzantes cuando éstos están contaminados con
estos agentes.
Nivel de Bioseguridad 3
Debe utilizarse cuando el trabajo de laboratorio se realiza con
agentes nativos o exóticos que tienen potencial de ser
transmitidos por vía respiratoria (aerosol) y que pueden causar
infecciones serias y potencialmente letales.
Entrenamiento específico para el personal de laboratorio,
en el manejo de agentes potencialmente letales.
Descontaminación de todos los desechos.
Cambio de ropas de protección de laboratorio y
descontaminación de toda la ropa de laboratorio antes de
su lavado
Nivel de Bioseguridad 4
Agentes peligrosos y exóticos que poseen un alto riesgo de
infección y riesgosos para la vida, y agentes infecciosos de
transmisión por vía aérea se encuentran en laboratorios 4.
También se estudian en estos laboratorios agentes relacionados
con riesgo de transmisión desconocido. Estos agentes suponen un
alto riesgo de enfermedad mortal, pueden ser transmitidas por vía
aerosol (respiratoria) y no tienen vacuna o terapia disponible Las
prácticas de laboratorio para el BSL-4.
Acceso estrictamente controlado al laboratorio,
Cambio de ropa antes de entrar y salir del laboratorio (se
recomienda ducharse al salir del laboratorio) y
Descontaminar todo el material al salir del lugar. Las
barreras primarias incluyen la realización de procedimientos
en gabinetes de bioseguridad usados en los otros niveles de
bioseguridad en combinación con un traje que cubre todo
el cuerpo, con oxígeno y presión positiva.
Hecho de un vidrio
especial que resiste
las temperaturas muy
altas, sin embargo los
cambios de
temperatura muy
radicales pueden
provocar el
rompimiento de tubo
(Pírex).
Tecnicas de esterilizacion de
materiales y medios de cultivo
Esquema de la tecnica de esterilizacion de materiales de vidrio
Presión de vapor:
El vapor será saturado y libre de impurezas utilizando agua tratada.
La pureza del vapor, la saturación y la disponibilidad del vapor son
importantes variables del proceso. De la calidad del vapor depende
que la esterilización sea efectiva o no. Éstas impurezas pueden oxidar
el instrumental.
Tiempo de esterilización:
Tiempo de exposición del producto o de la cámara a la temperatura
de esterilización. Es la duración de la fase de esterilización.
Temperatura de esterilización:
Temperatura a la que se mantiene la cámara durante la fase de
esteriliza
Cantidad 1,5 g
pesada
Aspecto ambar amarillento
Estado físico liquido solido
complejo Complejo
Según la naturaleza de
los ingredientes
a) Medios selectivos
b) Medios diferenciales
c) Medios de enriquecimiento
Tener en cuenta:
Temperatura de incubación
Condición de oxigeno
Tiempo de incubación
Agar nutritivo
Tryptic Soy Agar (TSA)
Agar Sangre (AS)
Agar Muller-Hinton (MH)
Caldo Nutriente (CN)
Agar McConkey (McC)
Kilosa-Lisina-Tergitol 4 (Agar (XLT4)
Salmonella-Shigella Agar (SSAgar)
Manitol Sal Agar (MSA)
Métodos de siembra
a) Estrías
b) Dispersión o Agotamiento
c) Puntura
Con una aguja de platino, tomar una pequeña cantidad de una colonia
sembrar en el agar semisólido o sólido introduciendo la aguja en forma
vertical.
o Flamee el asa o aguja por unos segundos en forma vertical.
o Quite el tapón del tubo y manténgalo en la misma mano en que
tiene el asa o aguja para inoculación. Flamee la boca del tubo y
tome una pequeña porción de inoculó.
o Flamee nuevamente la boca del tubo que tiene el espécimen que
va a trasferir y tápelo.
o Quite el tapón del tubo que va a inocular y proceda de acuerdo de
acuerdo al medio de cultivo:
Caldo: Basta con tocar el medio con el asa o aguja, si es poco caldo
inclínelo de manera que no introduzca en el tubo el mango del asa o aguja.
e) Inclinación
Los medios de agar inclinado se realizan llevando el agar a punto de
ebullición y vertiéndolo en un tubo de ensayo. Antes de que el agar se enfríe
y solidifique, el tubo de ensayo se coloca inclinado sobre un lado. Una vez
que el agar se enfría, el tubo puede volver a colocarse en posición vertical
y el agar que se encuentra en su interior se verá inclinado.
El inóculo se siembra, con ayuda de ansa, de la siguiente manera:
• En profundidad con ansa de punta: se pica con el ansa el cultivo a
sembrar y se introduce mediante punsión en el medio contenido en la parte
inferior del tubo
• En superficie con ansa de aro: se pica con el ansa el cultivo a sembrar y se
esparce el mismo sobre la superficie en bisel en forma de zigzag.
METODOS DE DESCRIPCION DE LA MEDIO DE CULTIVO
SIEMBRA SIEMBRA USADO
ESTRIA Agar Nutritivo
Con la asa de
siembra se toma una
muestra y se hace
estrías en zigzag
El tipo de siembra por estriado a diferencia de los otros nos ofrece una
mejor apreciación en el aislamiento de colonias respecto a su
monografía.
Las siembras por inoculación, puntura, etc. Nos ofrece entender como
las bacterias aprovechan el medio de cultivo con la condición que
estas se les puede agregar reactivos y visualizar cómo reaccionan
ante ello (metabolismo).
1. Cite para cada uno de los tipos de siembra y explique su motivo de uso
a) Métodos Físicos:
a) Expulsión del aire por ebullición: antes de efectuar la siembra, los
medios líquidos y sólidos se llevan a ebullición en baño María con el fin
de eliminar el aire. Este proceso se denomina “regeneración” de los
medios. Esto evita el reoxigenamiento de los medios líquidos.
b) Reemplazo del aire por gases inertes: este método consiste en la
eliminación del aire, mediante bomba de vacío, del recipiente que
contiene los medios sembrados y su reemplazo por Hidrógeno,
Nitrógeno, CO2, etc.
b) Métodos Químicos:
a) Sustancias reductoras tóxicas para las bacterias, por cuyo motivo
no se adicionan a los medios de cultivo, sino que en un lugar
adecuado del recipiente que contiene los tubos sembrados. Se utiliza
principalmente Acido Pirogálico o Hidróxido de potasio
b) Sustancias reductoras no tóxicas que se agregan directamente a
los medios de cultivo, por ejemplo Glucosa al 1-2%, Tioglicolato de
sodio 0. 1 – 0.2%, Cistina al 0.05% entre otros.
c) Métodos Biológicos:
a) Tejidos animales que se adicionan a los medios de cultivo, como
por ejemplo: carne picada, cerebro, hígado, etc.
Informe n°5
Análisis Microbiológico del Agua
INTRODUCCION
2. ¿Cuáles son los criterios para ser considerado como parámetro microbiológico
para el agua potable?
CALDO LACTOSA:
Es un medio rico en nutrientes y no contiene inhibidores del crecimiento
bacteriano. Permite recuperar células injuriadas diluye sustancias
toxicas o inhiben y favorecen el desarrollo de salmonella con respecto
a otras bacterias. El extracto de carne y la peptona son la fuente de
carbono y nitrógeno mientras que la lactosa es el hidrato de carbono
fermentable. Por la fermentación de la lactosa se produce ácido y gas
(el cual se evidencia al utilizar las campanas Durham).
CALDO BRILA:
En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para
el adecuado desarrollo bacteriano, la bilis y el verde brillante son los
agentes selectivos que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positiva
y Gram negativas a excepción de coliformes, la lactosa es el hidrato de
carbono fermentable.
Es una propiedad del grupo de coliforme, la fermentación de la lactosa
con producto de ácido y gas.
CALDO EC:
En el medio de cultivo la tripteína es la fuente de péptidos, aminoácidos
y nitrógeno, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y favorece
el desarrollo de bacterias coliformes, las sales biliares inhiben el
crecimiento de la flora acompañante de Gram positiva, las sales fosfato
constituyen un sistema buffer que impide que los productos ácidos
originados por la fermentación de lactosa afecten el crecimiento
microbiano y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
Dentro del grupo de los coliformes totales existe un subgrupo que es el de los
Coliformes fecales. Los coliformes fecales son coliformes totales que además
fermentan la lactosa con producción de ácido y gas en 24-48 horas a
temperaturas comprendidas entre 44 y 45ºC en presencia de sales biliares. Los
coliformes fecales comprenden principalmente Escherichia coli y algunas
cepas de Enterobacter y Klebsiella.
CALDO LACTOSA
Discusión:
El grupo coliforme se caracteriza por fermentar a la lactosa, le damos a la
bacteria lo que a ella necesita para que lo poco que queda de ella se
comiencen a crecer; la mínima probabilidad de que un coliforme esté presente
en una muestra, ahora se verá favorecido porque ha encontrado algo que
fermentar (un factor de crecimiento que es la lactosa).
Conclusión:
Después de dejarlas incubar, encontramos:
tubo de 10 ml un tubo con película, turbidez y gas, signos de bacteria
tubo de 1 ml encontramos un tubo de con película, turbidez y gas
tubo de 0.1 ml también encontramos un solo tubo con película, turbidez y
gas.
10 ml presencia
de bacterias
(burbuja y
precipitado).
1 ml (más oscuro)
presencia de
bacterias (burbuja
y precipitado)
0.1 ml no se ve
evidencia de
presencia de
bacterias.
10ml
Presenta
turbidez,
película y
sedimento
Presenta gas
1ml
Presenta
turbidez,
película y
sedimento
Presenta gas
1ml
Presenta
película y
sedimento
Presenta gas
Resultados: Numero de tubos positivos para cada dilución.
VOLUMEN INOCULADO
MEDIO DE CULTIVO 10 ml 1 ml 0.1 ml
CALDO BRILA 1 2 1
CALDO EC 1 2 0
Conclusión:
Hasta este proceso hemos concluido que la muestra contiene
coliformes fecales.
Aislamiento e identificación de coliformes fecales: Escherichia coli
LECTURA DE COLONIA:
Tipo de bacteria: Escherichia coli
CARACTERÍSTICAS:
Forma: circular
Elevación: elevada
Borde: entera
Superficie: Lisa
Tamaño: 0.1 mm
Consistencia: cremosa
Cromogénesis: negro
Medio EMB: Este medio (también
denominado E.A.M.) es utilizado para el
aislamiento selectivo de bacilos Gram
negativos de rápido desarrollo y escasas
exigencias nutricionales. Permite el
desarrollo de todas las especies de la
IDENTIFICACION
familia Enterobacteriaceae.
LIA:
En la superficie que esta inclinada, en la
parte inferior, podemos observar una
coloración negra, diferente al color del
medio que es de morado, esto nos indica
que hubo cambio del medio, por lo tanto
la descarboxilacion de la lisina es
negativa.
Citrato:
TSI:
Presencia de
turbidez difusa en el
medio.
INDOL:
Conclusiones: