METODOLOGÍA PARA LA DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD Metanogénica específica (AME)

1 INTRODUCCIÓN
La actividad específica metanogénica (SMA) se puede definir como la capacidad
Máxima de producción de metano por un consorcio de microorganismos anaerobios,
llevó a cabo en condiciones controladas de laboratorio, para permitir la actividad
Máximo de conversión bioquímica de orgánicos biogás sustratos. La determinación de
capacidad del lodo anaeróbico para producir metano es importante porque la eliminación de los
electrones equivalente (es decir compuestos reducidos causando demanda química
oxígeno - COD) de las aguas residuales a tratar, de hecho, sólo se producen con la formación de
metano, que es prácticamente insoluble en agua, se escapa fácilmente de la fase líquida.
Así, la SMA se puede utilizar como un parámetro para el seguimiento de la
"Eficiencia" de la población metanogénica presente en un reactor biológico y, como tal,
También constituye una importante herramienta para el control operacional de los reactores
anaerobios. El conocimiento del reactor de lodos AME permite cierta
establecer, en última instancia, la fase de remoción de DQO máxima
líquido, y por lo tanto permite estimar la carga orgánica máxima se puede aplicar con
minimizar el riesgo de desequilibrar el proceso anaeróbico. Realización de una
análisis inverso, la AME para determinar la masa mínima de lodo anaeróbico que
mantenida en el reactor para eliminar cierta carga orgánica aplicada.
Por lo tanto el conocimiento de la AME permitir la adopción de procedimientos
más racional para la eliminación de los sistemas de lodos anaeróbicos.
Hay, en la literatura, diversos protocolos para la determinación de la actividad metanogénica
lodo anaeróbico. Los protocolos difieren tanto en los procedimientos adoptados
incubar el lodo (concentración de biomasa, tipo y concentración de sustrato
relación con los alimentos / microorganismo, el tipo de nutrientes y la concentración, tiempo de
incubación,
etc), y para la cuantificación de metano producido. En la cuantificación de
metano, es métodos más sofisticados, tales como las que emplean cromatógrafos de gases
y / o interfaciados respirómetros con micro-computadoras, así como los métodos de
que se basan en la purificación simplificada de metano del biogás seguido por su
de medición volumétrica.
Aunque existen en la literatura, un procedimiento estándar para determinar la actividad
metanogénicas, un esfuerzo de la Asociación Internacional del Agua (IWA) dio lugar a la creación
un grupo de expertos para armonizar los diversos protocolos de análisis, entre
que es SMA. Debido a que hay hasta el momento, el consenso sobre el mejor
condiciones de incubación del lodo anaeróbico, así como para la medición de metano
producido, no puede ser sugerido en este capítulo, un procedimiento único para
determinación de la AME. Por lo tanto, se presentan los principales métodos utilizados
por las autoridades nacionales y la comunidad científica internacional para determinar la AME
prestando especial atención al principio de cada método, el principal
equipos y materiales necesarios para su aplicación, el protocolo simplificado
para su ejecución, y el procedimiento para el cálculo de la SMA.
Es importante aclarar que la falta de un estándar internacional
aceptado para la prueba de AME difícil en cierto modo, la comparación de los resultados
absoluto obtenido de cada método está disponible actualmente. En este sentido,
se entiende que los resultados obtenidos de cada uno de los métodos descritos aquí
se debe utilizar más basada en la comparación en cada lugar en
que se aplica y teniendo en cuenta también la finalidad principal de la aplicación de
resultar. En otras palabras, una vez que un método particular elegido para la prueba
AME, los resultados obtenidos con la misma será más útil en términos
comparación, por ejemplo, entre ciertas condiciones y los pasos operativos del
reactores anaeróbicos.
Por lo tanto, la principal contribución de este capítulo será el fin de ofrecer subsidios para la
de la comunidad científico y para los operadores para elegir un ambiente anaerobio
método específico de medida de los lodos de SMA, como proposición algunos
exigencia de la normalización a ser empleado por cualquier método que puede ser
elegido, tales como temperatura de incubación, la solución de sustrato de
nutrientes, etc.

2 CONSIDERACIONES SOBRE LAS CONDICIONES DE LA PRUEBA DE AME

2.1 Tipo y concentración de sustrato
Para evaluar, en el sentido estricto, la actividad metanogénica específica de lodos debe ser
darle de comer con un sustrato que sólo es compatible con la actividad metabólica de
metanógenos. Como es sabido, la mayor parte de metano, alrededor del 70%, proviene de la
escisión del acetato durante el metabolismo de los microorganismos
acetoclásticos metanógenos. El restante 30% de metano son producidos por
hidrogenotróficos microorganismos de la reducción de dióxido de carbono. Este
Por lo tanto, muchos investigadores suelen usar sales de acetato o el ácido acético como
sustrato. El cálculo de SMA sólo mediante el uso de acetato como una fuente de carbono y
energía subestimada por lo menos 30% de la producción de metano máximo,
hidrogenotróficos desde microorganismos tienen mayores tasas de crecimiento
la acetoclásticos (Harper y Polonia, 1986; Pavlostathis y Giraldo-Gómez, 1991) y
ciertamente se presentan en los reactores reales debido a la degradación del sustrato sobre
complejos (proteínas, carbohidratos y lípidos) que resulta en la producción de hidrógeno
(H2) y dióxido de carbono (CO2).
Con el fin de evaluar la actividad metanogénica de ambos grupos
los microorganismos, y hidrogenotróficos acetoclásticos, algunos investigadores (de campo en al,
1987; Florencio et al, 1993; Ahmed et al, 2005) utilizando una mezcla de ácidos grasos
volátiles (AGV), por lo general consta de etilo (C2), propionato (C3) y butirato
(C4) en relación de 100:100:100 g / l, respectivamente. La DQO de la mezcla resultante
AGV es la proporción de 24,3:34:4:41,3% de C2, C3 y C4, respectivamente.
(Tabla 1). En este caso, la prueba evaluará no sólo la actividad de los microorganismos
metanógenos, sino también la capacidad del sistema sintrófica, es decir, la actividad de
microorganismos que convierten el acetato de propionato y butirato. Es digno de mención
que la evaluación de la actividad de los microorganismos sintróficos es fundamental para un buen
funcionamiento de los digestores anaeróbicos. A medida que los metanógenos no
producir metano a partir de propionato y butirato, la disminución de la eficiencia de un reactor
anaeróbico puede estar más relacionado con la baja actividad de los microorganismos sintróficos
productores de acetato de que la actividad de los microorganismos metanogénicas
consumidores de acetato.

En esta línea de razonamiento, algunos investigadores sostienen que una prueba de la actividad de
Lodos deben evaluar todo consorcio microbiano, y por lo tanto el uso de sustratos
más compleja, tal como la glucosa, se recomienda, simulando lo que ocurre en una
escala completa del reactor. De hecho, el uso de actividad metabólica de la glucosa
microorganismos fermentativos (acidogênicos) sintróficos (acetogênicos) y los productores
metano (metanógenos), lo que permite evaluar la actividad del consorcio anaerobio
como un todo. Si la prueba con glucosa muestran una baja producción de metano, entonces
pruebas con la mezcla de nuevo o para AGV etilo se podría hacer para identificar
qué grupo (s) de microorganismo (s) es (son) se limitan a la degradación anaeróbica.
Las concentraciones del sustrato, es importante que la prueba
SMA se debe hacer con un exceso de nutrientes y el sustrato de modo que la cinética de
la degradación de acercarse a una reacción de seudo orden cero, va a depender
sólo de la concentración de microorganismos (inóculo) presente. Así, el
Es importante destacar que la concentración del sustrato es mayor que el valor K, en cuyo caso
la acetoclásticos metanógenos se encuentra en el rango de 11-421 mg / l
de etilo (Harper y Pohland, 1986; Pavlostathis y Giraldo-Gómez, 1991). Así
una concentración de 2 g / L de acetato es suficiente para asegurar el exceso de sustrato
y, de hecho, esta concentración es el valor de referencia recomendado por Monteggia
(1997), concluyeron que el uso de concentraciones iniciales de ácido acético en el intervalo de 2 a
4 g / l como resultado valores máximos de AME.
2,2 concentración inicial de inóculo
Suponiendo que el sustrato y los nutrientes están presentes en exceso durante el
Prueba de SMA, se espera que el conjunto concentración inicial de inóculo en la final
ejemplo, la duración del ensayo. Es decir, a partir de una mayor concentración de
la biomasa, habrá menos acerca de los alimentos / microorganismos (F / M), resultando en
una degradación más rápida del sustrato disponible, y el análisis inverso verdadero.
Como el resultado final de la SMA se expresa en forma normalizada, es decir, teniendo
en cuenta la masa de inóculo en el momento de la incubación, la concentración inicial de lodos
no debería afectar el valor de la SMA obtenido. Estos hechos fueron observados por Monteggia
(1997), se investigó el efecto de la concentración de microorganismos en el EB prueba
realiza bajo agitación, llegó a la conclusión de que el intervalo óptimo de valores de AME ocurrió
entre 2 y 5 g
VSS / L y que, para valores crecientes de VSS, una reducción significativa en la longitud
prueba, mientras que para valores inferiores a 2 g de VSS / l o mayor de 5 g / L fue
sólo ligera reducción en los valores de la AME. Pero cuando la prueba se lleva a cabo sin
agitar la concentración de fangos debe ser de aproximadamente 2,0 gSSV / L para reducir
problemas con la difusión del sustrato (Rocha et al, 2001).
Durante el procedimiento de laboratorio de incubación se recomienda añadir en el barro
Finalmente, el matraz de reacción, a continuación, conectarlo en lo que no hay degradación y
pérdida de biogás antes de las botellas entrar en la incubadora. Esta recomendación es
especialmente importante cuando el número de viales a incubadas es grande,
cuando la temperatura ambiente es elevada y cuando el lodo es muy activo. En orden
generalmente se recomienda que la prueba se "monta" rápidamente para evitar la degradación
el substrato (o biogás) antes de la adquisición de datos.
Como resultado de la prueba se expresa como la cantidad de biomasa
inicialmente presente, la cantidad de inóculo utilizado no necesita ser exactamente la
misma para diferentes pruebas. Lo importante es saber con exactitud la concentración
lodos utilizados en cada vial, de modo que una puede calcular con precisión el peso inicial
inóculo. Por lo tanto, es indispensable para realizar el análisis de sólidos suspendidos volátiles
(SSV) en el fango utilizado como inóculo.
Para los lodos con una actividad baja (<0,1 g DQOCH4/gSSV.d) se recomienda
pruebas que se utilizan en cantidades mayores que reacción 2L, para permitir
una medición más exacta del volumen de metano generado. Otro aspecto importante que
hay que tener en cuenta es el crecimiento de la biomasa durante la prueba, lo cual interfiere
directamente para determinar la actividad real, puesto que la concentración es de VSS
mide típicamente al comienzo y al final de la prueba no. Para minimizar este problema,
se debe utilizar en concentraciones relativamente altas y bajas concentraciones de lodos
sustrato (baja relación A / M), y fomentar aún más el contacto con la biomasa
sustrato mediante la aplicación de agitación.
2.-3 solución nutritiva
La solución ideal de nutrientes o agua de dilución debe contener macro (N-NH4
+, PO4-P
3 -Mg, Ca) y micronutrientes (Fe, Ni, Zn, Co ..) y alcalina (NaHCO3 o
KH2PO4 + K2HPO4) y un agente reductor (Na2S.7H2O). No hay consenso en la literatura
En cuanto a la solución para ser utilizado en la prueba de SMA nutricional. La composición de
diferentes soluciones recomendadas se presentan en la Tabla 2, fue propuesto originalmente
por Monteggia (1997), y esto se complementa con otras referencias.
La solución nutriente utilizado para Souza et al. (2005) es una adaptación del medio ambiente
nutricional se presenta en Chernicharo (1997) que incluye el calcio y macronutrientes
magnesio (CaCl2.2H2O y MgCl 2), el boro y micronutrientes níquel (y NiCl2.6H2O
H3BO3), y reduce la cantidad de fósforo (K2HPO4 y KH2PO4) debido a la sustitución
Este sistema tampón por el sistema de bicarbonato (NaHCO3).
A fin de armonizar, en términos de Brasil, la solución que se utiliza en nutrición
SMA prueba, se recomienda que la solución nutriente propuesto por la X de referencia (véase
Las Tablas 2 y 3) se utiliza, suplementado con extracto de levadura 50 ml / l
(Fuente de vitaminas).
2,4 tiempo de incubación antes de la adición de sustrato
Durante las pruebas, es común a incubar AME botellas de "blanco", es decir
con agua destilada en lugar de la solución de sustrato, para evaluar la producción
la descomposición de metano residual debido a la endógena y la endógena
producción menos observado en viales que contienen el sustrato. Este procedimiento
puede conducir a graves errores en el cálculo de la SMA, ya que la endógena observado
vial que contiene el sustrato debe ser mucho menor que la observada en la botella
"Blanca". Para eliminar la incertidumbre de metano a partir endógena al Fdz-Polanco et al.
(2005) sugirió que la incubación de los lodos durante 7 días a 35 ° C, antes de que el sustrato era
añadido para que el metano puede ser ignorado por la endógena
prueba. Otros autores (James et al, 1990;. Monteggia., 1997 y Silva et al, 2005) también
lodos sugerido incubación bajo agitación a 30 ° C en presencia de nutrientes y de amortiguamiento
antes de la adición de sustrato, pero para períodos más cortos de la 6-12 orden
hora.
Cabe señalar que, dependiendo de las condiciones de operación del reactor (por ejemplo, la carga
aplicada)
en el que el lodo anaeróbico fue muestreado, la producción endógena de metano puede tomar
horas o días. Una práctica segura para asegurar que la endogamia no afecta a los resultados
SMA es incubar los lodos en la presencia de nutrientes y la temperatura
pruebas hasta la producción de metano es estable. Sólo entonces el sustrato
Se añadió a iniciar la prueba.
2.5 La agitación y control de la temperatura
Se debe asegurar durante la prueba de SMA, existe un contacto suficiente con la biomasa
el sustrato y que ninguna limitación de transferencia de masa de nutrientes y el sustrato.
Así, es común a incubar los matraces de reacción bajo agitación constante, muy
aunque no hay resultados concluyentes en la literatura sobre la influencia de la agitación
intermitentemente, y el tipo de agitador empleado (agitación orbital frente a agitación magnética)
AME pruebas. Los resultados preliminares de la investigación en curso (Souto, 2006)
muestran que la agitación magnética resultó en una menor AME, cuando
en comparación con agitación orbital y agitación intermitente (agitando el frasco una
una vez por día). Estos resultados parecen demostrar que la agitación intensa con barras
magnéticas puede conducir a la rotura de los flóculos microbianos, lo que afecta el
transferencias entre los productos y sustratos del consorcio de microorganismos anaerobios.
Con respecto a la temperatura, existe un consenso en la literatura que la prueba de SMA debe ser
realizado en el intervalo 30-35 ° C, de modo que los metanógenos son
un mejor crecimiento. Algunos investigadores utilizan la temperatura de 30
° C (Chernicharo 1997, Souza et al. 2005) mientras que otros prefieren una temperatura de 35
º C (Alves et al, 2005;. Monteggia, 1997; Fdz-Pollanco, 2005). La prueba indica que el SMA
capacidad para formar metano. Por lo tanto, el valor de EB obtenido puede ser utilizado
para determinar la carga orgánica se puede aplicar al reactor anaerobio
contiene cierta masa de lodo. Sin embargo, debe estar en la evaluación del resultado
SMA prueba, puesto que los reactores anaeróbicos estaciones que funcionan
tratamiento están sujetos a variaciones estacionales en la temperatura, y el trabajo rara vez se
el rango de temperatura ideal para la actividad metanogénica. Así, el resultado
AME determinado en el laboratorio puede sobreestimar la capacidad de convertir
metanógenos en el reactor expuesto a diferentes condiciones ambientales.
Investigaciones en curso (Souto, 2006) para evaluar la influencia de la temperatura en
como resultado de la SMA, permitiendo la determinación del coeficiente empírico que permite
convertir los valores de EB obtenidos a 30 ° C o 35 ° C durante otras temperaturas.

MEDICIÓN DE BIOGAS
OxiTop ® System

La determinación de la DBO OxiTop ® sistema se basa en el hecho de que durante

respiración aeróbica será el consumo de oxígeno disuelto en la fase líquida con
sustitución posterior por el oxígeno presente en la fase gaseosa. Así, la presión parcial de oxígeno
en el espacio superior tiende a disminuir debido a la sustitución de oxígeno consumido por la
actividad microbiana. Puesto que existen durante la degradación aeróbica, producción de dióxido
de carbono, es necesario disponer de un dispositivo para su absorción antes de la presión se mide,
por lo que la caída de presión debido al consumo el oxígeno es bien entendida y cuantificados. En
OxiTop ® equipo, la absorción de dióxido de carbono es transportada y NaOH colocado en una
"cesta" suspendido, a través del cual los gases son forzados a pasar antes de llegar al transductor
presión.
Basado en lo anterior es posible adaptar el equipo OxiTop ® para su uso en Determinaciones de
AME, con la salvedad de que en este caso la máquina se registran acumulados presión debido a la
producción de metano, en lugar de la reducción de la presión debido a consumo de oxígeno.
Parece ser, entonces, una breve descripción del procedimiento experimental y
materiales para la determinación de la SMA método de ensayo ® OxiTop.
Los materiales básicos, reactivos y equipos:
• Botellas de la reacción con "cabezas de presión transductoras" (Figura 3a)
• Control (consola) para la adquisición (lectura de la presión) y el almacenamiento de datos
(Figura 3b)
• Bandeja con agitación magnética (Figura 3a) y las barras magnéticas (una por vial
reacción)
• incubadora, preferiblemente con agitación, para mantener la temperatura a 30 ° C
• solución de reserva de nutrientes (ver Tabla 1)
• Solución madre de sustrato (véase el punto 2.1)
• inerte1 cilindro de gas que contiene (nitrógeno, argón o helio) para purgar el
espacio de cabeza de los viales de reacción

Protocolo simplificado de análisis

• reacción de los fans de tres botellas de cada uno de los lodos para ser analizados, es decir, hacer
la prueba
triplicado.
• en cada vial de vidrio 500 ml:
225 ml del nutriente final.
25 ml de la solución madre de sustrato, de modo que la concentración de sustrato
en el vial es de 2 g / l, en un mínimo.
50 ml del lodo, que contiene 15-30 g / l (1,5 a 3%), a saber, 2-5 g / l de SSV
en el interior del matraz de reacción.
• Coloque una barra magnética en el interior de cada botella.
• Coloque 2 ó 3 y NaOH en el compartimiento correspondiente junto a la "cabeza"
trasdutora presión y cubrir la botella con cuidado de no dejar las pastillas
entran en contacto con la fase líquida.
• Después de estar debidamente cerrado vial (ver Figura 1) eliminar el oxígeno de la
purgar la botella con un gas inerte (nitrógeno, argón o helio).
Para ello, utiliza dos agujas de jeringa firmemente conectado a una línea de
mezcla de gases (aguja de inyección de gas inerte) introducido a través de la otra
tapón de goma (salida de la aguja de gas de la botella).
• Después de la purga, asegúrese de que la presión dentro de las botellas es igual a
atmósfera y, si es necesario, liberar la presión dentro del vial utilizando una
aguja.
• Colocar los frascos en la bandeja magnética, incubar el conjunto a 30 ° C, y verificar
el matraz se agita.
• Mantenga las botellas se incuban hasta que la producción acumulada de metano es
estabilizar.
• Ajuste de la consola "OxiTop" con el límite de tiempo de prueba y la presión y
programar las "cabezas" con la ayuda de la consola.
• Al final de la prueba para utilizar la consola para adquisición de datos, es decir
almacenar las lecturas de presión en cada matraz.

Cálculo de la AME
En el proceso, es necesario calibrar el equipo manométrica y determinar la constante
matraz (K, en unidades de unidad de volumen / presión), por lo que el volumen de
AB
biogás (V, en la unidad de volumen) puede estar relacionada con la presión medida
(P, la presión de la unidad) con la ecuación 1 (Chernicharo, 1997):
K.P = V (1)
La determinación experimental de la constante K se pueden hacer usando la calibración
viales de reacción que contienen un volumen de agua correspondiente al volumen de líquido
utilizado en la prueba con el lodo. Para reducir al mínimo durante la prueba de calibración, el
solubilidad de los gases en agua, principalmente de CO2, el agua debe ser utilizado
previamente saturada con NaCl. La simulación de la producción de gas injertándose hacerse,
cada 30 minutos o la frecuencia apropiada, las cantidades conocidas de
una mezcla estándar que contiene dióxido de carbono y las concentraciones de metano conocido.
la
presión adicional puede ser registrado por lo relacionado con la cantidad de metano
añadido, permitiendo la determinación de K gráficamente (Figura 4).