ESTERILIZACIN; MTODOS DE ESTILIZACIN

INTRODUCCIN

La esterilizacin del material de laboratorio es un proceso que permite eliminar la carga

microbiana patgena y no patgena, incluidas las esporas, de productos e instrumentos que lo
requieran como el instrumental mdico o los medios de cultivo. Para que sea eficaz debe
realizarse sobre materiales limpios y respetando los parmetros y procedimientos definidos para
cada mtodo.

La esterilizacin puede conseguirse usando calor, productos qumicos y radiacin. El mtodo a

elegir depender del material a esterilizar y del equipo e instalaciones disponibles. Con los objetos
de acero inoxidable y de vidrio podemos usar cualquier mtodo, pero en el caso de los materiales
plsticos debemos tener en cuenta su composicin para evitar deformaciones e incluso la
destruccin del material.

La esterilizacin puede conseguirse usando calor, productos qumicos y radiacin. El mtodo a

elegir depender del material a esterilizar y del equipo e instalaciones disponibles. Con los objetos
de acero inoxidable y de vidrio podemos usar cualquier mtodo, pero en el caso de los materiales
plsticos debemos tener en cuenta su composicin para evitar deformaciones e incluso la
destruccin del material.

OBJETIVOS:

El alumno aprender el procedimiento para empacar diversos materiales de uso en

microbiologa as como el procedimiento de la esterilizacin
Conocer y aplicar el procedimiento de esterilizacin por calor seco y hmedo, as como las
ventajas de los procedimientos.
Esterilizar material de laboratorio, para ser utilizados en prcticas futuras.

TRMINOS.

Estado absoluto:

Es la condicin de estar libre de microorganismos en cualquiera de sus formas puede realizarse

por mtodos fsicos y qumicos.
 Desinfeccin:

Es la destruccin, inactivacin o remocin de aquellos microorganismos que pueden causar

infeccin u ocasionar otros efectos indeseables; la desinfeccin no implica necesariamente
esterilizacin.

Antisepsia

Es el uso de sustancia qumica no txica (antisptico) sobre tejidos vivos, para prevenir o detener
el crecimiento o la accin de los m.o., ya sea inhibiendo su actividad o destruyndolos.

Asepsia

Estado libre de microorganismos.

MECANISMOS DE ACCIN

1. Alterando el DNA:
Radiaciones (UV, ionizantes)
alquilantes (glutaraldehdo, formaldehdo y xido de etileno)

2- Alterando protenas y enzimas

Oxidantes: perxido de hidrgeno, Iodo

Metales pesados: mercurio

3- Alterando la membrana celular

Alcoholes
Fenoles
Agentes tensioactivos (amonios cuaternarios, jabones, detergentes)

FACTORES QUE AFECTAN LA POTENCIA DESINFECTANTE

Tiempo
Temperatura
pH
Concentracin del agente
Presencia de materia orgnica
Caractersticas del microorganismo
 MTODOS DE ESTERILIZACIN

MTODO FSICO

1. EL CALOR

El calor se puede aplicar como agente esterilizarte de dos formas: el calor hmedo el cual destruye
a los microorganismos por desnaturalizacin de las protenas y el calor seco que destruye a los
microorganismos por oxidacin de sus componentes celulares. El calor es considerado como el
mtodo de esterilizacin por excelencia siempre y cuando el material a esterilizar soporte altas
temperaturas sin sufrir ningn tipo de dao.

Calor Hmedo:

El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Estos efectos se debe

principalmente a dos razones: El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas
estructuras biolgicas son producidas por reacciones que eliminan agua. El vapor de agua
posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms elevado que el aire.

Calor Seco:

El calor seco produce desecacin de la clula, es esto txicos por niveles elevados de
electrolitos, fusin de membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los
materiales a los microorganismos que estn en contacto con stos. La accin destructiva del
calor sobre protenas y lpidos requiere mayor temperatura cuando el material est seco o la
actividad de agua del medio es baja.

2. FILTRACIN.

La filtracin permite la remocin de todos los microorganismos presentes en un lquido o un gas

retenindolos sobre la superficie de un material.

3. RADIACIONES

La radiacin, o emisin y propagacin de la energa a travs de un medio, puede ser utilizada

como agente para la eliminacin de microorganismos. As tenemos:

Radiaciones Ionizantes

Se pueden utilizar para la esterilizacin de materiales termolbiles, como por ejemplo

materiales plsticos.

Radiaciones no Ionizantes

Como la luz ultravioleta, puede ser empleada en el control de reas cerradas.

MTODOS QUMICOS

Puede conseguirse desinfectar y/o esterilizar material de laboratorio usando diversos productos
qumicos tanto en fase gaseosa como en fase lquida y en fase de plasma, por su capacidad para
eliminar microorganismos. Los mtodos qumicos permiten la esterilizacin de materiales e
instrumentos a baja temperatura siempre que se disponga del equipamiento e instalaciones
adecuadas para controlar su peligrosidad.

PRINCIPIOS PARA EVITAR FALLAS

No utilizar textiles.
Tener todo bien calibrado.
Tener espacio suficiente.
Ponerlos en un empaque adecuado.
Controles qumicos biolgicos y fsicos.

APLICACIONES

1. AUTOCLAVE

Es el mtodo de referencia, utiliza calor hmedo en equipos que se denominan autoclaves,

formados por un recipiente o cmara de esterilizacin de paredes gruesas y cierre hermtico que
permite usar vapor a presin y temperatura elevada. El fundamento fsico es el de una olla a
presin. Se considera el mtodo ms efectivo porque acta coagulando las protenas de los
microorganismos, provocando su eliminacin. Los factores ms importantes en este proceso son:

La eficacia y rapidez del equipo para remover el aire de la cmara y sustituirlo por vapor
evitando fluctuaciones de la temperatura.
El vapor debe proceder de agua limpia, sin contaminantes y generarse con un porcentaje
de agua lquida muy bajo (menor del 3%).
El vapor debe estar en contacto directo con todo el material, el apilamiento excesivo o
incorrecto pueden disminuir la eficacia del proceso.
Las piezas deben estar limpias, el vapor no penetrar una costra de suciedad.

Pueden esterilizarse en autoclave los objetos de acero inoxidable, vidrio y plsticos como el PP
(polipropileno), PMP (polimetilpenteno) o PTFE/PFA (tefln).

ESTERILIZACIN A VAPOR

15 minutos 121 grados 1.5 atm

10 minutos 126 grados 2.0 atm
3 minutos 134 grados 2.9 atm
 2. ESTUFA

Todos los microorganismos son susceptibles en distinto grado, a la accin del calor. El calor
provoca en ellos coagulacin y desnaturalizacin de sus protenas.
La efectividad del calor como mtodo de esterilizacin depende de:
Temperatura
Tiempo de exposicin

La estufa de esterilizacin (Horno), es el artefacto utilizado en los laboratorios para esterilizar por
calor seco. Se requiere mayor temperatura y tiempo de exposicin que la autoclave. La
temperatura vara entre 120 y 180C, requirindose distintos tiempos de exposicin. A 140C se
necesitan por lo menos 5 horas de exposicin, mientras que a 160C se requieren al menos 2 horas
de exposicin.

Ventajas:

No es corrosivo para metales e instrumentos.

Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no
voltiles.

Desventaja:

Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la baja

penetracin del calor.

RELACIONES TIEMPO TEMPERATURA ADECUADA

TEMPERATURA TIEMPO
180 grados 30 minutos
170 grados 60 minutos
160 grados 120 minutos
150 grados 150 minutos
140 grados 180 minutos
121 grados 360 minutos

RECOMENDACIONES

Controlar el acceso a las reas de almacenamiento de materiales estriles.

Mantener el rea de almacenamiento limpia, libre de polvo, sucio e insectos.
Uso de una infraestructura adecuada.
Capacitacin constante.
Llevar un Monitoreo ambiental.
Controlar la temperatura y la humedad de las reas de almacenamiento.
 PRACTICA: ESTERILIZACIN POR ESTUFA.

Materiales:

Caja de petri
Vasos de precipitados
Probetas
Matraz
Papel
Algodn
Alcohol
Franela
Agua destilada

PROCEDIMIENTO

Luego de una previa induccin por parte de la docente, el cual present la forma correcta para el
empacado de los utensilios de trabajo; se procedi a:

1. Desinfectar con alcohol y algodn la caja de preti.

2. Lavar el material de laboratorio con agua destilada.
3. Secar el material utilizando papel absorbente para acelerar el secado.
4. Empaca el material correctamente (Colcalas en la parte central y Envulvelas, Se toman
los extremos de Papel y se unen, Se hace un nuevo doblez recargando ligeramente en la
caja para marcarlo, Los extremos se doblan en forma triangular .Ya en forma triangular se
doblan hacia atrs quedando listas para esterilizar).

Seguidamente se paso a llevar el material a la estufa donde se mantuvo a una temperatura de

180C durante media hora. El material se guard para ser utilizado en la siguiente sesin.

CONCLUSIN

Luego del lavado y esterilizado del material los utensilios quedaron sin presencia aparente
de impurezas y no se apreciaron manchas.
El material debe ser esterilizado para poder ser usado antes de cultivas microorganismos
porque de lo contrario podran crecer otros organismos que no son requeridos.
Por ltimo, se aprendi a envolver correctamente el material y el tiempo que es necesario
para que se logre la esterilizacin.
 CUESTIONARIO

Qu caractersticas de un material o sustancia se requieren para reconocer y elegir el mtodo

adecuado de esterilizacin?

El mtodo a elegir depender del material a esterilizar y del equipo e instalaciones disponibles.
Con los objetos de acero inoxidable y de vidrio podemos usar cualquier mtodo, pero en el caso
de los materiales plsticos debemos tener en cuenta su composicin para evitar deformaciones e
incluso la destruccin del material.

Cules son las 3 principales recomendaciones para el uso correcto de la estufa?

1. Para asegurar un calentamiento homogneo de todo el material colocado en la estufa o en

un horno de secado, se recomienda colocarlo en los estantes de forma que no impida la
circulacin del aire.
2. Una estufa no debe utilizarse para esterilizar material descartable.
3. Cuando un horno ha iniciado el proceso de secado de material, nunca introduzca material
mojado porque el que se encuentra ya seco, se quiebra por el cambio brusco de
temperatura.

En un laboratorio, Cul es el mtodo adecuado en radiaciones y describir el proceso?

La radiacin no ionizantes, como la luz ultravioleta; Radiacin con longitudes de onda entre 100 y
400 nm. Las de mayor actividad microbicida son las comprendidas entre 260-270 nm. Son
absorbidas por lo cidos nuclicos y aminocidos aromticos. Afectan a los cidos nucleicos
provocando errores en la duplicacin y prdida de viabilidad. Tienen bajo poder de penetracin:
solo se utilizan para la esterilizacin de superficies, (quirfanos, salas de envasado de
medicamentos). Producen daos en ojos y piel.

ANEXOS