INTRODUCCIN

Gran parte de las tcnicas utilizadas en el diagnstico clnico se basan en

pruebas serolgicas que identifican anticuerpos especficos frente a diversas
protenas antignicas. Sin embargo, existen circunstancias en las cuales son
necesarias pruebas que detecten precozmente la infeccin viral (tratamientos
especficos, medidas profilcticas, etc.). En algunas infecciones virales es
posible detectar la presencia de antgenos virales previamente al desarrollo de
la seroconversin, siendo esta prueba la nica evidencia de la exposicin al virus
cuando no existe aumento de los niveles de anticuerpos circulantes (1).

El gran desarrollo de las tcnicas de diagnstico virolgico ha permitido

ofrecer actualmente una ayuda directa al mdico clnico y ha facilitado la
investigacin en salud, posibilitado su aplicacin en muchos campos (2).

En el momento actual, la tendencia en el diagnstico virolgico consiste

en emplear nuevas y ms sensibles tecnologas de deteccin de antgenos y de
investigacin de cidos nucleicos con el propsito de lograr un diagnstico viral
ms rpido (1).

OBJETIVO

Conocer las muestras y tcnicas que se aplican en el estudio y

diagnostico virolgico.
MARCO TERICO

Toma de muestra:

El buen diagnstico empieza con una buena muestra. El momento, forma

de recoleccin, transporte y conservacin de la muestra son esenciales para el
resultado del estudio. La recoleccin de la muestra debe considerar inicialmente
dos factores: el sitio u rgano lesionado y el virus presuntamente responsable (1).

El tipo de muestra que es enviada al laboratorio depende regularmente

del tipo de infeccin viral a diagnosticar y el tipo de pruebas a realizar.
La sangre se utiliza para pruebas serolgicas donde, por medio
de anticuerpos y antgenos, se realiza la deteccin de diferentes infecciones. El
anlisis de Esputo, gargarismos y lavados bronquiales se utiliza para detectar
virus respiratorios como la Influenza. Las muestras fecales se usan para
determinar la presencia de agentes causantes de gastroenteritis viral. Existen
otras muestras que tambin se utilizan para realizar el diagnstico, como
biopsias, lquido cefalorraqudeo, sangre seca, entre otros. La tcnica apropiada
de muestreo es esencial para evitar posibles errores en el diagnstico virolgico
correspondiente (3).

Para aislamiento viral se precisa mantener la partcula viral viva, por lo

que la forma de obtencin y manejo de la muestra es fundamental;
frecuentemente se utilizan medios de transporte especiales y su traslado al
laboratorio debe hacerse en fro (en hielo). Otras tcnicas de diagnstico viral no
necesitan el virus vivo, pues se basan en la deteccin del virin o de sus
componentes estructurales, cuya mayor estabilidad facilita la realizacin del
estudio (1).

Muestras utilizadas para el estudio virolgico:

Aspirado nasofarngeo
Hisopado nasal y farngeo
Lavado nasales
Hisopado endotraqueal
Lavados broquioalveolar
Hisopado cutneo
 Fluido vesicular cutneo
Sangre
Material fecal
Hisopado rectal
Orina
Muestras genitales
Lquido cefalorraqudeo
Hisopado conjuntival y corneal
Biopsias
Muestra de necropsia

Tcnicas de laboratorio de virologa:

METODOS DIRECTOS

1. Aislamiento Viral - Cultivos Celulares

La base del diagnstico viral es la deteccin del virus o de sus componentes.

Los cultivos celulares se dividen en:

Cultivos Primarios: Se obtienen a partir de clulas, tejidos u rganos

tomados directamente del organismo y pueden subcultivarse una o dos
veces.
Lneas Celulares Diploides: Son aquellas que crecen en pasajes
sucesivos hasta aproximadamente 50 subcultivos y que conservan por lo
menos en un 75% el cariotipo correspondiente a la especie de que
provienen.
Lneas Celulares Continuas: Permite un nmero finito de subcultivos y son
heteroploides. Para considerar que se ha logrado establecer una lnea
continua, esta debe de haber sido subcultivada por lo menos 70 veces.

2. Deteccin de Antgenos - Tcnicas Inmunolgicas

Las siguientes tcnicas inmunolgicas pueden utilizarse tanto para la

deteccin de antgenos (mtodos directos), como de anticuerpos (mtodos
indirectos).
 INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA (ID)

Es una de las tcnicas ms antiguas y de uso ms difundido en el laboratorio

clnico

TEST DE AGLUTINACION

El test de aglutinacin es un mtodo simple, de un solo paso, que a veces se

usa para la deteccin de antgenos virales en muestras clnicas.

RADIOINMUNOENSAYO (RIA)

Fue originalmente aplicado para identificar el antgeno de superficie de la

Hepatitis B (HBsAg) y el anticuerpo anti-HBsAg.

ENZIMOINMUNOANALISIS (EIA)

Los EIA para la deteccin de antgeno se basan habitualmente en la captura

del antgeno por anticuerpos especficos unidos a una fase slida, en general el
pocillo de una microplaca o una pequea esfera de plstico.

3. Tcnicas de Biologa Molecular

Investigacin de cidos nucleicos virales. Las tcnicas de estudio y

diagnstico que a continuacin se presentan, constituyen una herramienta
ingeniosa desarrollada a partir de los estudios de la Biologa Molecular.

4. Microscopa Electrnica

Mediante el microscopio electrnico es posible observar la morfologa de

los viriones presentes en muestras clnicas.

METODOS INDIRECTOS

INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA (IFI)

La IFI, es un mtodo rpido y confiable para la determinacin de anticuerpos

antivirales en el suero del paciente. Se basa en la unin de anticuerpos
antivirales presentes en el suero del paciente a los antgenos virales expresados
en la superficie y citoplasma de clulas infectadas, que han sido fijadas a un
portaobjeto de vidrio.
 ENZIMOINMUNOANALISIS INDIRECTO (EIA)

Los EIA indirectos se han aplicado de forma amplia en los ltimos aos al
diagnstico de anticuerpos virales.

TEST DE AGLUTINACION

El fundamento y el procedimiento de esta tcnica ya fueron descripto para el

estudio de Ag viral (mtodo directo).

WESTERN BLOT (WB)

Las tcnicas inmunolgicas de Inmunoblot estn encontrando amplias

aplicaciones en el diagnstico virolgico. Son particularmente tiles para el
diagnstico del HIV.

REFERENCIAS
1. Sandin M. METODOS DE ESTUDIO Y DIAGNOSTICO VIRAL. [Online].; 2007
[cited 2017 setiembre 13. Available from:
http://www.biologia.edu.ar/viruslocal/diagnostico%20viral.htm.

2. DIAGNSTICO VIRAL. [Online].; 2013 [cited 2017 setiembre 13. Available from:
http://ecaths1.s3.amazonaws.com/catmicromed/Diagnostico%20virologico.pdf.

3. DIAGNSTICO VIRAL. [Online].; 2013 [cited 2017 setiembre 13. Available from:
http://ecaths1.s3.amazonaws.com/catmicromed/Diagnostico%20virologico.pdf.

4. J. L. Diagnstico virolgico. [Online].; 2016 [cited 2017 setiembre 13. Available

from: https://es.wikipedia.org/wiki/Diagn%C3%B3stico_virol%C3%B3gico.