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INTRODUCCIN
Log Io = abc
I
En donde:
En donde:
a = coeficiente de absorbancia (absortividad) las unidades dependen de las
unidades utilizadas para la determinacin de la concentracin.
b = longitud de la celda usualmente en centmetros.
c = concentracin de la muestra en las unidades apropiadas.
I
En esta prctica se emplear la tcnica colorimtrica de Nelson y Ting para
determinar glucosa, fructosa y sacarosa.
OBJETIVOS
El estudiante explicar por escrito el fundamento del mtodo empleado para
la determinacin de azcares en las muestras de frutas que se le asignarn.
El estudiante relacionar los contenidos de azcares determinados en las
muestras de diversos frutos.
El estudiante se concientizar del concepto y los instrumentos de medicin
utilizados en la espectrofotometra, y de la aplicacin de curvas estndar utilizando
el mtodo de Nelson y Ting.
MATERIAL
6 matraces volumtricos de 100 ml con tapn.
2 matraces volumtricos de 500 ml con tapn.
2 matraces volumtricos de 250 ml con tapn.
1 embudo de vidrio.
2 matraces Erlenmeyer de 125 ml.
6 pipetas de 10 ml.
2 pipetas de 1 ml.
2 pipetas de 5 ml.
2 vasos de precipitados de 250 ml.
1 bao Mara simple.
5 celdas de espectrofotmetro.
1 gradilla.
2 crculos de 10 cm de dimetro de papel filtro Whatman # 1.
Papel sanitario blanco (proporcionado por el estudiante).
Algodn o gasa .
1 cuchillo de cocina (proporcionado por el estudiante).
1 tabla para cortar la fruta (proporcionada por el estudiante).
Fruta: 3 ejemplares por especie por equipo. En el caso del meln con 1
ejemplar basta (proporcionados por el estudiante).
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EQUIPO:
1 extractor de jugos.
1 licuadora o mortero.
1 potencimetro.
1 bao Mara con control de temperatura y agitacin.
1 espectrofotmetro Spectronic 20' a 515 nm.
REACTIVOS
Solucin alcalina de Ferricianuro.
Solucin de Arsenomolibdato (25 g).
H2SO4 2N.
NaOH 10N, 1N y 0.1N.
HCl 1:1 (Vol/Vol).
Na2CO3 anhidro. (12.5 g)
Na2CO3 monohidratado. (14.3 g).
Tartrato de potasio (12.3 g).
NaHCO3 (10 g).
Na2SO4 anhidro disuelto en 35 ml de agua destilada.
CuSO4 5H2O disuelto en 50 ml. de H2O.
Glucosa (300 g/ml).
MTODO
PREPARACIN DE REACTIVOS
1.- Transfiera 1 ml. del jugo diluido a un matraz volumtrico aforado de 100ml. y
aada 5 ml. de reactivo de ferricianuro.
2.- Colque los matraces en un bao de agua hirviendo por 10 minutos.
3.- Enfre los matraces inmediatamente bajo el chorro de agua fra.
4.- Neutralice el contenido de los matraces con 10 ml. de solucin de cido
sulfrico 2N.
5.- Mezcle los contenidos de los matraces suavemente hasta que no emanen ms
gases.
6.- Aada 4 ml. de arsenomolibdato.
7.- Mezcle una vez ms el contenido de los matraces.
8.- Afore a 100 ml. con agua destilada.
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CLCULOS:
A partir de la curva estndar se calcula el valor k para la determinacin de
azcares reductores totales mediante la siguiente frmula:
k = c/a
En donde:
k = El factor por unidad de absorbancia o pendiente de la curva.
c = Concentracin de azcares reductores en gramos/100 ml.
a = Absorbancia de la solucin a esa concentracin.
S = K.A.D.
En donde:
DETERMINACIN DE FRUCTOSA
NOTA: Esta determinacin no se realizar en esta sesin de laboratorio).
G+F=S
G/Q + F = L
En donde:
G = Porcentaje de glucosa en la muestra.
F = Porcentaje de fructosa en la muestra.
S = Porcentaje de azcares reductores totales (Suma de G y F).
L = Porcentaje aparente de fructosa.
Q = Proporcin entre Kg y Kf (Kg/Kf)
G = (S - L) X Q
Q-1
El cociente q/(Q-1), se utiliza como una constante en los clculos del valor
real de la glucosa. El valor real de la fructosa se obtiene por diferencia.
1.- Se colocan 50ml. del jugo diluido en un vaso de precipitados de 150 ml. y se
aaden 10 ml. de cido clorhdrico (1:1).
2.- Se deja reposar esta mezcla durante 18 horas a temperatura ambiental.
3.- Se aaden 5 ml. de solucin de hidrxido de sodio 10N y los contenidos se
ajustan a un pH de entre 5 y 7 con una solucin de hidrxido de sodio 1N
mediante el uso de un potencimetro.
4.- Los contenidos se transfieren a un matraz volumtrico aforado de 100ml y se
afora con agua destilada.
5.- Se toma una alcuota de 1 ml de esta solucin y se pipetea en un matraz
volumtrico de 100 ml. y se sigue el procedimiento descrito para la determinacin
de azcares reductores totales.
6.- Se calcula la cantidad de sacarosa de la diferencia entre el contenido de
azcares reductores antes y despus de la inversin, multiplicada por el factor de
0.95.
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CUESTIONARIO:
BIBLIOGRAFIA: