UNIVERSIDAD DE SAN MARTIN DE PORRES

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

FILIAL NORTE

BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

LISOSOMAS, DEGRADACION Y
MUERTE CELULAR

USMP-FMH-FN-BCM-2016-II
2016
H. Lezama 1
H. LEZAMA
 LISOSOMAS
PROTEINAS DE MATRIZ LISOSOMAL
PROTEINAS DE MEMBRANA LISOSOMAL

DEGRADACION DE PROTEINAS
DEGRADACION LISOSOMAL
DEGRADACION EN PROTEOSOMAS
UBIQUITINACION
AGRESOMAS

MUERTE CELULAR
APOPTOSIS
NECROSIS
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II AUTOFAGIA
H. Lezama 2

OTROS MECANISMOS
 LISOSOMAS
ORGANELAS CITOPLASMTICAS
LIMITADAS POR UNA SOLA MEMBRANA.
DESCUBIERTAS POR CHRISTIAN DE
DUVE.
PRESENTES EN TODAS LAS CLULAS
EUCARIOTAS.
CONTIENEN 50-60 ENZIMAS
HIDROLTICAS.
SON LOS DEGRADADORES DE RESIDUOS
O DESECHOS DE LA CLULA.
SU FUNCION CATABLICA ES
COMPLEMENTADA POR ORGANELAS
3
ASOCIADAS A LOS LISOSOMAS (LROH.SLezama
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II ).
 LISOSOMAS

MATRIZ LISOSOMAL CIDA (PH

4,8) FAVORABLE PARA
ACTIVIDAD ENZIMTICA.
2 CLASES DE PROTENAS SON
ESENCIALES PARA SU
FUNCIONAMIENTO:
HIDROLASAS LISOSOMALES.
PROTENAS INTEGRALES DE
LA MEMBRANA LISOSOMAL
(LMPs)
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 4
 LISOSOMAS
ENZIMAS HIDROLTICAS SON
ELABORADAS EN EL RE Y MODIFICADAS
EN EL APARATO DE GOLGI.
50-60 ENZIMAS HIDROLTICAS.

DEGRADAN MATERIAL PROCEDENTE DE:

ENDOCITOSIS
FAGOCITOSIS
AUTOFAGIA
PARTICIPAN EN:
DEGRADACIN EN VOLUMEN
PROCESAMIENTO PRO-PROTENAS
PROCESAMIENTO DE ANTGENOS
DEGRADACIN DE LA MATRIZ
EXTRACELULAR
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 5

INICIACIN DE APOPTOSIS
 LISOSOMAS
PROTENAS INTEGRALES DE LA
MEMBRANA LISOSOMAL (LMPs), APROX. 25
EN LISOSOMAS DE MAMFERO.
CUMPLEN DIVERSAS FUNCIONES:
ACIDIFICACIN DEL LUMEN LISOSOMAL.
IMPORTACIN DE PROTENAS DESDE EL
CITOSOL.
FUSIN DE MEMBRANAS.
TRANSPORTE DE PRODUCTOS DE
DEGRADACIN AL CITOPLASMA.
LAS MS ABUNDANTES:
PROTENA DE MEMBRANA ASOCIADA AL
LISOSOMA 1 (LAMP1).
PROTENA DE MEMBRANA ASOCIADA AL
LISOSOMA 2 (LAMP2).
PROTENA INTEGRAL DE MEMBRANA
LISOSOMAL 2 (LIMP2).
TETRASPANIN CD63.
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II
BOMBA DE PROTONES TIPO VACUOLAR.
H. Lezama 6
CELULAS
ESPECIALIZADAS
EN FAGOCITOSIS
TIENEN GRAN
CANTIDAD DE
LISOSOMAS.
MACROFAGO DE
MEDULA OSEA

USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 7

EVENTOS DURANTE LA FAGOCITOSIS: FORMACION DEL

FAGOLISOSOMA (M.E.)
 ACTIVIDAD EN LOS FAGOLISOSOMAS

USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 8
 LAS ENZIMAS
DESTRUYEN EL
CONTENIDO DEL
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama FAGOLISOSOMA9
 LISOSOMAS
BIOGNESIS LISOSOMAL:

REQUIERE INTEGRACIN DE VAS

ENDOCTICA Y BIOSINTTICA.
FRECUENTEMENTE EMERGE DEL
APARATO DE GOLGI.
EN ALGUNOS CASOS SE
DESARROLLA GRADUALMENTE A
PARTIR DE ENDOSOMAS TARDOS
.

FOR AN ANIMATED LOOK AT LYSOSOMAL FUNCTION.

HTTP://HIGHERED.MCGRAW-
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 10
HILL.COM/SITES/0072507470/STUDENT_VIEW0/CHA
PTER3/ANIMATION__LYSOSOMES.HTML
LAS CLULAS CONTIENEN MLTIPLES
SISTEMA PARA
DEGRADAR PROTENAS.

l El Sistema Ubiquitin-proteasoma
l El Sistema Lisosomal
l El Sistema Intra-mitochondria
l Calpains (Ca2+-dependiente de proteases)
l Caspasas
l Proteasas de membranas
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 11

9
 DEGRADACIN DE
PROTEINAS MAL PLEGADAS

MAL PLEGADA = NO
FUNCIONAL.
DESNATURALIZACION.
ROMPE ENLACES COVALENTES,
NO COVALENTES, DISULFURO.
CHAPERONA-N GLUCANASA-
UBIQUITINA.
PROTEOSOMA.
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 12
 IMPORTANCIA CLINICA
Muchas enfermedades neurolgicas y otras son causadas por la
acumulacin, mas que por la degradacin de protenas con estructuras
anormales.

Enfermedad de Alzheimer (b-amyloid, tau)

Enfermedad de Huntington (Huntingtin)
Tau aggregates Enfermedad de Parkinson (a-synuclein)
(Azheimers disease)

Enfermedad de ALS Lou Gerhigs (SOD)

Enfermedad de la espina-Bulbar y atrofia
muscular (receptores de andrgenos).
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II
Lewy Bodies
(Parkinsons Disease)
EnfermedadH. Lezama
por Priones Mad Cow disease (prion)
13
ROL FISIOLGICO DE LA DEGRADACIN
INTRACELULAR DE PROTENAS

Control de calidad

Procesamiento antignico

Regulacin en funciones celulares

Adaptacin a estadios fisiolgicos

o patolgicos

USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 14
 EL MODELO UBIQUITIN-PROTEASOMA
PARA LA DEGRADACIN DE PROTENAS
TIENE DOS FASES.

Proteina

ATP Modificacin del substrato

ADP por ubiquitin

Ub
ATP Degradacin del substrato
ADP Por el proteasoma

Pptidos y
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 15
amino cidos
 UBIQUITINA

O 76 amino acids
=
Gly-C-OH
Carboxyl terminus
Mr = 8,000
(glycine 76)

Altamente conservada
Ampliamente distribuida

USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 16
(glycine 76)
 Protenas Ubiquitinadas son degradadas
Por el proteasoma.

Proteolisis

Peptides and
ATP ADP amino acids

Not degraded
Proteasome
Reconoce la cadena
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II
Poliubiquitin y no la proteina
H. Lezama Monoubiquitin
17
LA ESPECIFICIDAD PARA UBIQUITINACION SE LLEVA A
CABO CON MLTIPLES ENZIMAS DE CONJUGACIN.
degron
E3(n)

Ubiquitin E3(n)
O E1 E2(n)
E2(n)
=

-C-OH
ATP

G76
E1 E2(n)

PREMIO NOBEL 2004

USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 18
 ESTRUCTURA DE UN
PROTEOSOMA

a) Imagen de microscopa
electrnica del
proteosoma 26 S de
levadura S. cerevisae

b) Representacin
esquemtica de la
estructura y funcin del
proteosoma 26 S
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 19
 MUERTE CELULAR
APOPTOSIS
AUTOFAGIA
CORNIFICACIN

NECROSIS
MODALIDADES ATPICAS (EN ESTUDIO):
CATSTROFE MITTICA (MUERTE CELULAR
PRECEDIDA POR MULTINUCLEACIN O MUERTE
CELULAR DURANTE METAFASE)
ANOIKIS
EXCITOTOXICIDAD
DEGENERACIN WALLERIANA
PARAOPTOSIS
PIROPTOSIS
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 20
PIRONECROSIS
ENTOSIS
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 21

MUERTE CELULAR
Hotchkiss R et all. Cell death. N Engl J Med 2009; 361: 1570-83 .
 APOPTOSIS
PRIMERA DENOMINACIN: NECROSIS POR
CONTRACCIN (SHRINKAGE NECROSIS).
1972 KER LA DENOMIN APOPTOSIS.
CAER O MORIR COMO CAEN LOS PTALOS O LAS
HOJAS EN OTOO (GRIEGO).
OCURRE DURANTE TODA LA VIDA.
FUNDAMENTAL EN LA HOMEOSTASIS.
DE CRUCIAL IMPORTANCIA DURANTE EL
DESARROLLO.
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 22
 APOPTOSIS
H. ROBERT HORVITZ (1986) INVESTIGO EL MODELO GENTICO
IMPLICADO EN LA MUERTE CELULAR PROGRAMADA.
USANDO UN SISTEMA MODELO CONOCIDO Y CARACTERIZADO,
EL NEMATODO CAENORHABDITIS ELEGANS.

LA APOPTOSIS, A DIFERENCIA DE LA NECROSIS, CONSUME ATP, CUYA

ENERGA ES UTILIZADA PARA LA ACTIVACIN DE UNAS ENZIMAS

LLAMADOS CASPASAS, CUYA ACTIVACIN EN CASCADA

USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 23

PRODUCEN LOS EFECTOS QUE PODEMOS VER EN LA CLULA.

USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 24
 Mechanisms of caspase activation
a. Proteolytic cleavage e.g.
pro-caspase 3

b. Induced proximity, e.g.

pro-caspase 8

c. Oligomerization, e.g. cyt c,

Apaf-1 & caspase 9
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 25

Back
 APOPTOSIS
NO INDUCE RESPUESTA INFLAMATORIA.
CAMBIOS MORFOLGICOS:
PRDIDA DE ADHESIN CELULAR
CONTRACCIN CELULAR POR PRDIDA DE AGUA Y
Na+
CONDENSACIN DE CROMATINA A NIVEL NUCLEAR
(ESTRUCTURAS EN MEDIA LUNA)
NCLEO SE ROMPE EN MLTIPLES FRAGMENTOS
FRAGMENTACIN DEL DNA (PIEZAS DE 180-200 PB)
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 26
 APOPTOSIS
CAMBIOS MORFOLGICOS:
SE MANTIENE INTEGRIDAD DE LA MEMBRANA
PLASMTICA
FORMACIN DE CUERPOS APOPTTICOS QUE SON
RPIDAMENTE RECONOCIDOS Y FAGOCITADOS POR
MACRFAGOS O POR CLULAS VECINAS SIN PRDIDA
DE SU CONTENIDO.
MORFOLGICA: ENCOGIMIENTO NUCLEAR Y CELULAR,
CONDENSACIN DE CROMATINA (PICNOSIS), FORMACIN DE
YEMAS, FRAGMENTACIN NUCLEAR (CARIORREXIS) Y FORMACIN
DE CUERPOS APOPTTICOS.
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 27
BIOQUMICA: PERMEABILIZACIN DE LA MEMBRANA MITOCONDRIAL
(PMM) Y/O ACTIVACIN MASIVA DE LA CASPASAS.
PROCESOS EN LOS QUE INTERVIENE
LA APOPTOSIS

1.- En toda etapa del desarrollo o

reparacin tisular en donde se
produzcan clulas en exceso.
2.- Eliminacin de linfocitos.
3.- Eliminacin de clulas infectadas
y tumorales
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 28
ETAPAS DE LA APOPTOSIS:
1.- Activacin (induccin negativa/positiva)

*Receptores
a.- de muerte (Fas, TNF)
b.- normales (glutamato)
*Rutas de transduccin celular (mensajeros: Ca2+,
radicales libres, protenas codificadas por genes
supresores)

2.- Decisin (mitocondria)

3.- Ejecucin (degradacin de protenas y cidos nucleicos)
Caspasas
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 29
VAS QUE CONDUCEN A LA APOPTOSIS
VA INTRNSECA (MITOCONDRIAL)

VA EXTRNSECA (RECEPTOR DE MUERTE)

USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 30
 VAS QUE CONDUCEN A LA
APOPTOSIS
VA INTRNSECA (MITOCONDRIAL)
CONTROLADA POR LA INTERACCIN DE PROTENAS PRO-
APOPTTICAS Y ANTI-APOPTTICAS DE LA FAMILIA BCL2.
REGULADA POR LA CASPASA 9 (DAO CELULAR
ABRUMADOR).
INICIADORES DE LA VA:
INCREMENTO INTRACELULAR DE ROS
DNA DAADO
RESPUESTA DE PROTENAS NO PLEGADAS
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 31

DEPRIVACIN DE FACTORES DE CRECIMIENTO

 FAMILIA DE PROTENAS BCL2
ANTI-APOPTTICO PRO-APOPTTICO
BCL2 BAX
BCL-XL BAK
BCLW BIM
MCL1 BID
A1 PUMA
BOO/DIVA
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 32
 VAS QUE CONDUCEN A LA APOPTOSIS
VA EXTRNSECA (RECEPTOR MUERTE):

INICIA CUANDO MIEMBROS DE LA SUPERFAMILIA TNF SE UNEN A

RECEPTORES MUERTE DE LA SUPERFICIE CELULAR.
RECEPTORES DE MEMBRANA DE SUPERFAMILIA DE
RECEPTORES TNF (CD95, DR3 Y DR4), INDUCEN EL
RECLUTAMIENTO PROXIMAL DEL COMPLEJO ACTIVADOR DE
CASPASA.
SE ACTIVA LA CASPASA-8.

CASPASA 8 Y CASPASA 9 ACTIVADAS MOVILIZAN A SU VEZ A LAS

CASPASAS 3, 6 Y 7, PROTEASAS QUE INICIAN LA DEMOLICIN DE
LA USMP-FMH-FN-BCM-2016-II
CLULA A TRAVS DEH. Lezama
LA DEGRADACIN DE NUMEROSAS
33

PROTENAS Y LA ACTIVACIN DE DNASAS.

 VAS DE LA
APOPTOSIS

USMP-FMH-FN-BCM-2016-II
34
H. Lezama
 Apoptosis signal to kill infected cells
Cytolytic lymphocyte/CTL (& natural killer lymphocyte) presents
Fas ligand/CD178 on its surface to tell the infected cell to die

Fas ligand

Externally driven
Apoptotic signals
Cytochrome c

Initiator caspases
The immunological synapse
holds the cells much tighter
Execution caspases
together than shown here

USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 35
Apoptosis events
Fas/ CD95 is the
death receptor
 NECROSIS
CUANDO LAS CLULAS SUFREN DAOS TALES COMO
QUEMADURAS, ACCIDENTES, RADIACIONES, TRAUMAS,
INFECCIONES, ETC. SE PRODUCE NECROSIS.
LA MUERTE NO OCURRE DE FORMA ORDENADA, DE MANERA
GENERAL EL NCLEO NO PRESENTA CAMBIOS APARENTES,
LAS MITOCONDRIAS APARECEN DAADAS, EL AGUA Y IONES
FLUYEN HACIA EL CITOPLASMA Y LA CLULA SE HINCHA, CON
LO QUE TERMINA POR ROMPERSE LIBERANDO EL CONTENIDO
CELULAR QUEDANDO EN EL MEDIO PROTEASAS Y SEALES
QUE ATRAEN CLULAS DEL SISTEMA INMUNITARIO, POR LO
QUE TIENE LUGAR UNA REACCIN
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama
INFLAMATORIA EN LA 36
ZONA.
 NECROSIS
CARACTERSTICAS MORFOLGICAS:
EDEMA NUCLEAR Y MITOCONDRIAL.
FORMACIN DE PROLONGACIONES EN LA
SUPERFICIE CELULAR.
DESAGREGACIN DE RIBOSOMAS.
Caractersticas morfolgicas (si persiste la noxa):
Se acentan ms los cambios.
Burbujeo extremo en la superficie celular.
Gran dilatacin mitocondrial.
Ruptura de la membrana.
Disolucin de las organelas y ncleo.
Degeneracin lisosomal
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 37
 NECROSIS
CADAVER (GRIEGO).
RESPUESTA A UNA
NOXA.
EL ESTMULO DE LA
MUERTE ES LA CAUSA
DIRECTA DE LA
DEFUNCIN CELULAR.

USMP-FMH-FN-BCM-2016-II
38
H. Lezama
 NECROSIS
MUERTE CELULAR POR
AGRESIN EXTERNA
(FSICA, QUMICA O
BIOLGICA).
GRAN RESPUESTA
INFLAMATORIA EN EL
LUGAR DE LA INJURIA.
CAMBIOS
GENERALMENTE DESDE
PARTE EXTERNA HACIA
LA INTERNA.
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II
39
H. Lezama
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II
40
H. Lezama
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II
41
H. Lezama
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 42
 AUTOFAGIA
COMERSE UNO MISMO (GRIEGO).
PROCESO POR EL CUAL LA CLULA RECICLA SUS
PROPIAS ORGANELAS Y COMPONENTES
MACROMOLECULARES NO ESENCIALES, REDUNDANTES O
DAADOS.
RESPUESTA ADAPTATIVA AL STRESS SUB-LETAL.
PARTICIPA EN:
SUPRESIN DEL CRECIMIENTO DEL TUMOR.
SUPRESIN DE PROTENAS TXICAS MAL PLEGADAS.
ELIMINACIN
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II DE MICROORGANISMOS
H. Lezama INTRACELULARES. 43
PRESENTACIN DE ANTGENOS.
 A LO LARGO DEL DESARROLLO CUALQUIER
ORGANISMO NECESITA LA DESHACERSE DE CIERTAS
ESTRUCTURAS Y CREAR OTRAS
DURANTE UN PROCESO DE METAMORFOSIS.

USMP-FMH-FN-BCM-2016-II
44
H. Lezama
 AUTOFAGIA
TRES FORMAS:

1. MACROAUTOFAGIA
2. MICROAUTOFAGIA
3. AUTOFAGIA MEDIADA POR
CHAPERONAS

REGULA FORMACIN DE AUTOFAGOSOMA:

FOSFATIDILINOSITOL 3 KINASA (PI3K)

BECLIN-1 (BECN1)
MTOR (SIROLIMUS)
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 45
 ASPECTOS FISIOLGICOS Y
MOLECULARES
ESTADIOS:

1. VESCULAS NUCLEARES
2. ELONGACIN
VESICULAR
3. FUSIN DE UNA DOBLE
MEMBRANA (AUTO-
FAGOSOMA/LISOSOMA)
FORMACIN DEL AUTO-
LYSOSOMA.
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 46