PRACTICA N 4

INVERSION ENZIMATICA DE LA SACAROSA

I. OBJETIVOS
Estudiar la cintica de la reaccin de inversin de la sacarosa
catalizada por enzima invertasa.
Determinar la constante de Michaelis-Menten(Km) para el substrato
Aplicar la ecuacin de Linear Burk para determinar los parmetros.

II. FUNDAMENTO TEORICO

El estudio de las reacciones enzimticas constituye un punto clave para la

investigacin de la bioqumica de fenmenos de inters en una aplicacin
de la biotecnologa prctica. En un proceso practico y enzimtico se puede
estudiar la velocidad mxima alcanzada en presencia de un substrato a la
temperatura y pH de ensayo. La contante de Michaelis Menten se define
como la concentracin de substrato que se requiere para mantener la mitad
de la velocidad mxima. Segn Lechinger el valor de Km para la invertasa
se encuentra en el valor de Km=2.33x10-3, se puede obtener en forma
prctica en la que la velocidad inicial de la solucin se mide a diferentes
concentraciones iniciales de substrato a una concentracin de enzima
constante. Luego con otros datos se puede resumir a la accin de Linear
Burk obteniendo al tomar los recprocos de ambos miembros de la ecuacin
de Michaelis Menten.

1/V = 1 _ + Km * 1
Vmax Vmax S

III. MATERIALES Y METODO

6 Matraz de 500 ml.

2 vasos de precipitado de 250 ml.
1 pipeta de 10 ml.
1 probeta de 50 ml.
1 probeta de 100 ml.
1 bureta de 50 ml.
1 soporte universal y su respectivo pinza.
1 bao mara.
1 termmetro
1 pH chimetro

Reactivos:
cido ctrico
 Fheling A
Fheling B
Azul de metileno
Azcar 100 g.
Invertasa

IV. PROCEDIMIENTO

Preparar 100 ml de solucin de sacarosa de las siguientes

concentraciones: 1M, 0,6M, 0,4M, 0,2M y 0,1M, ajuste el pH de estas
soluciones a 4,5 con cido ctrico, coloque todas estas soluciones en bao
a 45C, pero a cada solucin antes de colocar a bao aada 10 ml de
solucin de invertasa a continuacin deje que transcurra 45 minutos en
bao todas las soluciones y enfre para luego titular con felhing A y fheling
B, colocando 5ml de solucin de azcar y 45 ml de agua en la bureta y en
un vaso 2,5 ml de felhing A y fheling B ms 3 gotas de azul de metileno y
45 ml de agua en el vaso, luego el vaso coloque en la plancha y cuando
empiece a ebullir titule con solucin de azcar en la bureta, luego calcule
el volumen gastado para cada solucin, calcule el porcentaje de conversin
haciendo uso de la tabla de Pearson.

V. CALCULOS:
5.1. Calcular el % de azcar invertido en cada matraz.
5.2. Determine la velocidad en cada caso.
V=C M/tiempo
T
5.3. Graficar 1/V vs 1/(S)
5.4. Hallar Km y Vmax

VI. BIBLIOGRAFIA

CHEFTEL, J. C. 1999 Introduccin Bioqumica Alimentos Editorial Acribia,

Espaa. Pag.150-153

PEARSON. 1993 Tcnicas de laboratorio para el anlisis Alimentos

Editorial Revert S.A.

LEVENSPIEL. 1987 Ingeniera de las reacciones qumicas edit. Reverte.

Mxico.