Espectrofotometria Uv Visible:

Aplicaciones en el analisis qumico

Curso: Quimica Analtica II

2012
Profesor: Juan Carlos Sturm
Fotmetro o espectrofotmetro ?

emisor LED Microprocesador Display

525nm Fotodiodo
detector LCD

Muestra

No faltan algunos componentes en este instrumento?

 Fuentes de radiacion electromagnetica para
espectroscopia

Fuente region usos

Lamp. H2 D2 continua, 160-380 nm absorcin molecular UV
L. Tungsteno, continua 320 -2400 nm absorcin molecular visible
L. Arco de Xe continua 200 1000 nm e. molecular fluorescente
Alambre de nicron continua 0,75 20 m e. absorcin IR
L. Ctodo hueco lneas Uv-Vis. E Absorcin atmica
Laser lnea , UV-Vis Abs atmica , molecular, fluoresc.
L. vapor de Hg lneas fluorescencia molecular
diodo lnea -vis Abs. Molec vis.

Fuente Fuente
continua de
lineas
 Transductores para espectroscopia optica

Detector clase rango seal

fototubo foton 200-1000 nm corriente
Fotomultiplicador foton 110 1000nm corriente
Fotodiodo de Si foton 250 1100 nm corriente
Fotoconductor foton 750 6000 nm carga- resistencia
celda fotovoltaica foton 400- 5000 nm voltaje o corriente
termocupla termico 0.8- 40 m voltaje
Termistor termico 0.8- 40 m variacion resistencia
 Monocromador

Filtros pticos
Prismas
Rejillas de difraccin

Ancho de
banda :
 Caractersticas de la espectroscopia
molecular

Aplicacin en sistemas orgnicos e inorgnicos

Lmites de deteccin bajos ( 10-4 a 10-5 M)
Selectividad moderada a alta
Buena exactitud ( incertidumbres relativas < 2% )
Medicin y adquisicin de datos simple
 Aplicaciones

Determinacin de iones metlicos y complejos de

elementos de transicin ( Ni+2, Cu+2, Co+2, Cr2O7 -2 )

Complejos de transferencia de carga

ej: Fe(II 1,10 Fenantrolina , Fe(III) tiocianato

Compuestos orgnicos con enlaces conjugados,

heterociclos

Campos: industrial, clnico, forense, medio

ambiente
Espectros de absorcin molecular
Espectro de absorcin de cido acetil saliclico en HCl 0,05 M

2,5 a)
a) AAS = 25 mg/l
b) AAS = 12,5 mg/l
2,0
Absorbacia

1,5

1,0 b)

0,5

0,0
200 220 240 260 280 300 320 340 360
( nm )
La concentracin de la solucin no modifica la forma del espectro
 Anlisis Cuantitativo, procedimiento:
Seleccin de la longitud de onda
de medicin: ( si se
desea la mas alta sensibilidad se elige una
longitud de onda correspondiente a un
pico mximo)

Verificar cumplimiento de la ley de

Beer
A=abC
T = P/P0 -log T = a b C
existen variables que influyen en la
absorbancia como: tipo de disolvente, pH de la
solucin , temperatura , sustancias interferentes

Seleccin del rango de concentraciones para la medicin con

menor error
Ley de Beer - ideal : A = abC ,
Seal = constante * conc. de analito
Ambas ecuaciones
representan rectas
Ley de Beer - real : A = abC + n A vs C
n= intercepto seal de fondo (blanco)
1,2
Pendiente = sensibilidad
1,2

1,0 1,0

Absorbancia
0,8 0,8
Absorbancia

0,6 0,6

0,4 0,4 rango lineal

0,2 0,2

intercepto
0,0 0,0
0 2 4 6 8 10 0 2 4 6 8 10
Concentracin Concentracion
 Otras tcnicas espectroscpicas sin intercambio de
energa
Nefelometra scattering
Turbidimetra
Refractometra refraccin
Difraccion difraccin de rayos x
Dispersin dispersin ptica rotatoria

Ver tambien : Modern Analytical Chemistry

D. Harvey , Mc Graw Hill , cap 10
 Mtodos de cuantificacin

Curva de calibracin con estndares externos

Mtodo de adicin estndar:

- a volumen final constante
- a volumen variable
Curva de calibracin con estndares externos
Los estndares de calibracin deben aproximarse en lo
posible a la composicin general de las muestras

muestra
blanco

A0 A1 A2 A3 A4 A5 A6 Ax
 Curva de calibracin
Concentracion Absorbancia 0,6

mg/L
0,5
0 0,010
2 0,100

Absorbancia (A)
0,4
4 0,200
0,3
6 0,300
8 0,405 0,2 A = 0,0066 +0,0490*C
10 0,500
r = 0,9997
12 0,590 0,1

muestra 0,340
0,0
0 2 4 6 8 10 12

Cx = 6,80 mg/L Concentracin ( mg/L)

 Mtodo de adicin de estndar:
a volumen final constante y varias adiciones
Las dificultades de contar con un patron con una composicin general que se
asemeje a la de las muestras hace recomendable este mtodo. Requisito: se
cumple la ley de Beer

blanco

Ajuste 0 Vx Vx Vx Vx Vx
Vst1 Vst2 Vst3 Vst4

A TOTAL = Ax + Ast
Graficar A vs Vst :
Cx Vx a b Cst Vst
AT = a b + recta con pendiente e
VT VT intercepto

 Cx Vx a b Cst Vst
AT = a b +
VT VT

Entonces: A T = + Vst

Dividiendo Cx Vx Vt
= a b
Vt a b Cst
Despejando
Cst
Cx =
Vx
 Mtodo de adicin de estndar:
a volumen final variable y una adicin

Vx Vx + Vst

A1 A2

VxCx + VstCst
A1 = abCx A2 = ab
Vx + Vst
A1 abCx (Vx + Vst )
=
A2 ab(VxCx + VstCst )
 A1 CxVx + CxVst
=
A2 VxCx + VstCst
A2CxVx + A2CxVst = A1VxCx + A1VstCst
A2CxVx + A2CxVst A1VxCx = A1VstCst

factorizando Cx[( A2 A1 )Vx + A2Vst ] = A1VstCst

A1VstCst
Cx =
( A2 A1 )Vx + A2Vst
 Ejercicio 1
Se desea determinar el manganeso en un acero. Se disolvi una muestra de acero
de 0,4895 g , el manganeso se oxid a MnO4- y la solucin se diluy a 100 ml en
un matraz aforado. La absorbancia a 525 nm en una celda de 1 cm fue 0,396 .
Una solucin de MnO4- de 3x 10-4 M presenta una absorbancia de 0,672

Ast = a b Cst 0,672= a1 3x10-4 a = 2240

Ax = a b Cx 0,396 = 22401Cx Cx = 1,77 x 10-4M

Otra forma de clculo:

Ast abCst 0,672 3 104

= =
Ax abCx 0,396 Cx
 Clculo del porcentaje de Mn en acero :
ver en versin internet

Ejercicio 2: Ver en versin internet

Curva de calibracion con patrones independientes
Interpolacion de una muestra tratada de la misma
forma que los patrones

Ejercicio 3 : Ver en versin internet

Clculo de concentracin mediante adicin estndar y
volumen constante

Ejercicio 4: Ver en version internet

Adicin de estndar con un punto e incremento de volumen
 Calcular el porcentaje de Mn en el acero
En el matraz de 100 ml encontramos una concentracin 1,77 10 -4
M de MnO4- .
Calculemos los mg de Mn en 100ml
El PA Mn = 54,94; 1,7710-4 54,94 = 9,7 10-3 g/L Mn
0,97mgMn X
=
0,4895 100 9,7 mg/1000mL Mn
0,97 mg /100 ml Mn
Calculemos los mg de Mn por 100 g de muestra ( porcentaje)
En los 100ml se disolvieron 0,4895 g de acero y hay 0,97 mg
de Mn. Cuantos mg de Mn hay en 100g de acero ?)

X = 198,2 mg Mn / 100g muestra

% = 0,2 g Mn /100g muestra
X = 0,2 %
 Ejercicio 2
El hierro forma un complejo con 1,10 fenantrolina el cual
presenta un mximo de absorcin a 510 nm.
A partir de una solucin patrn de 1000 mg/l de hierro se
prepar una curva de calibracin , obtenindose los siguientes
datos:
25,0 ml de una muestra de agua subterrnea se
conc A colocaron en un matraz de 50,0 ml despus de ser
tratada para formar el complejo coloreado , al igual
( mg/L)
que la curva de calibracin , fue aforada. La
2 0.160 absorbancia fue de 0,203 .
4 0.313 Calcular la concentracin de Fe de la muestra de
agua en mg/L
6 0.460
8 0.619 La ecuacin de la recta es : A = 0,007 + 0,0762Cx
muestra 0,203 r = 0,9998
Interpolando el valor de A de la muestra :Cx = 2,57 mg/L (conc en el matraz de 50)
Conc. real de la muestra : 2 x 2,57 = 5,14 mg/L ( por la dilucin de 25 ml a 50ml )
 Ejercicio 3
Basado en el ejercicio anterior plantearemos la siguiente metodologa :
25,0 ml de una muestra de agua subterrnea se colocaron en un matraz de
50,0 ml despus de ser tratada para formar el complejo coloreado Fe/1-10
fenantrolina , fue aforada. La absorbancia fue de 0,203 .
En otros matraces iguales fueron colocados 25 ml de la muestra , el reactivo
complejante y respectivamente : 0, 1 ; 0,2 y 0,3 ml de solucin patrn de Fe de
una concentracin de 1000 mg/L. Calcule la concentracin de Fe en la muestra
Estamos aqu frente a un mtodo de adicin estndar con volumen final fijo :

DATOS: 0 0.203

0.1 0.363

0.2 0.516

0.3 0.663
 Cst = 1000 mg/L 0,7 A = 0,2063 + 1,533 Vst
Vx = 25 ml 0,6

= 0.2063 0,5

Absorbancia
-----------------
A 0,2063
= 1,533 0,4 B 1,533
-----------------

0,3 R

Cst ---------------

Cx =
0,99982
0,2 ---------------
Vx 0,00 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30
ml de estandar agregado
0.2063 * 1000 206.3
Cx = = = 5.30
1.533 * 25 38.32

Concentracin de la muestra = 5,30 mg/L; Ojo : no hay factor de dilucin

ya que tanto muestra como Patrones se sometieron a la misma dilucin.
 Ejercicio 4
Una solucin cida de in cprico tiene una absorbancia de 0,062 a la
longitud de onda de mxima absorcin.
A 5,0 ml de esta solucin se le agreg 1,0 ml de solucin 0,01 M de in
cprico y se determin que la absorbancia fue de 0,102 a la misma
longitud de onda : Cual es la concentracin de la muestra ?

R: La muestra con un volumen de 5 ml fue enriquecida con patrn aumentando

el volumen a 6 ml ( adicin std. con un punto y con incremento de volumen)

A1 = abCx 0,062 Cx6

=
CxVx + CstVst 0,102 Cx5 + 0,011
A2 = ab
Vx + Vst 0,612Cx = 0,31Cx + 0,00062
Cx = 2,1x10 3 M
A1 Cx(Vx + Vst )
=
A2 CxVx + CstVst Tarea : verifique el
resultado usando la
formula deducida
anteriormente
 Limitaciones de la ley de Beer

Solo es aplicable a soluciones diludas (<10-2M)

(Interacciones entre iones o molculas afectan la absorcin de
radiacin, variacin del ndice de refraccin)
Desviaciones qumicas debido a la asociacin o
disociacin del analito ( se forman productos con caractersticas
absorbentes distintas al analito. Ej : indicadores acido base)( desv.
positiva o negativa )

Desviaciones por radiacin policromtica y radiacin

parsita ( limitacines instrumentales ) (desviacion negativa )
Fluorescencia y Turbidez ( disminucin de absorbancia por
radiacin emitida o aumento de absorbancia por partculas en
suspensin )
 Desviaciones qumicas
Cuando un analito se disocia , se asocia o reacciona con el disolvente
para dar un producto con espectro de absorcin diferente al del
analito se producen desviaciones de la ley de Beer.

HIn H + + In
Ka = 1,34 x 10-5
Color 1 Color 2
La siguiente tabla * muestra el desplazamiento del equilibrio motivado
por la dilucin ( solucion no tamponada)

HIn, M [HIn] [In-] % A 430 A570

X 105 X 105 disociado
2,00 x 10-5 0.88 1.12 56 % 0.236 0.073
4,00 x 10-5 2.22 1.78 44.5% 0.381 0.175
8,00 x 10-5 5.27 2.73 43.1% 0.596 0.401
12,00 x 10-5 8.52 3.48 29 % 0.771 0.640
16,00 x 10-5 11.9 4.11 25.7 % 0.922 0.887

* Skoog, West, Holler, QUIMICA ANALITICA, VI Ed. Pag 407-408

Desviaciones quimicas

A medida que la concentracin

aumenta la disociacin es
menor dando una curvatura
positiva a 570 nm

Skoog, West, Holler, QUIMICA ANALITICA, VI Ed. Pag 407-408

Desviaciones instrumentales por radiacin policromtica

En el espectro (grafico superior) la

absortividad del analito es casi
constante en la banda A.
En la grafica de la ley de Beer, al
usar la banda A hay una relacin
lineal.
En el espectro la banda B muestra
cambios notables de la absortividad
resultando en una marcada
desviacin de la ley de Beer

Skoog, West, Holler, QUIMICA ANALITICA, VI Ed. Pag 409

 Cuando la medicin de
absorbancia se efecta con
radiacin compuesta por
diversas longitudes de onda , la
absorbancia es una combinacin
dada por las absortividades
diferentes a cada longitud de
onda .

* Skoog, West, Holler, QUIMICA ANALITICA, VI Ed. Pag 410

Desviacin aparente de la ley de Beer por diversas
cantidades de radiacin parsita ( o difusa)
Radiacin parsita o difusa:
Cualquier radiacin que llega
al detector pero que no
sigue la va ptica entre la
fuente y el detector

La radiacin parsita limita la

absorbancia mxima de
respuesta lineal ya que cuando
la absorbancia es alta la
potencia radiante que llega al
detector se vuelve pequea,
similar o menor al nivel de luz
parsita.

Skoog, West, Holler, QUIMICA ANALITICA, VI Ed. Pag 411

Error instrumental en funcin de la transmitancia

Se ha visto que la incertidumbre en la medida

espectrofotomtrica de la concentracin vara en forma
no lineal con la magnitud de la transmitancia
x xt C
error relativo = x 100 % x 100
xt C

El error relativo en la concentracin para una medida

espectrofotomtrica esta dada por la siguiente expresin :

C 0,434 T T = error fotomtrico

= (incertidumbre absoluta para la
C T log T transmitancia)
Por ejemplo 0,005 = 0,5%T
Ejercicio
Calcular el error relativo en concentracin porcentual para
mediciones con absorbacias de ; 0,125 ; 0,434 y 0,900
suponiendo que existe una incertidumbre fotomtrica instrumental
de un 1 %
0,125 = 74,9 %T
A 0,434 = 36,8 %T
0,900 = 12,5%T
C 0,4343 0,01
= = 0,046 = 4,6%
C 0,749 log 0,749
C 0,4343 0,01
=
C 0,368 log 0,368 = -0,027 ; = 2,7%

C 0,4343 0,01
= = -0,038 ; = 3,8%
C 0,125 log 0,125
 C 0,434 T
=
C T log T

Conclusin: se eligir un rango de concentraciones de trabajo tal que la

transmitancia se mantenga en el rango 20%T 70%T (0,7A -0,15A)
 Determinacin de mezclas
Se basa en que, a una determinada longitud de onda la absorbancia
observada es igual a la suma de las absorbancias de cada
componente
2,0 1
AAS 25 ppm
CAF 10 ppm
Mezcla
1,5

2
1,0
A

0,5

0,0
200 220 240 260 280 300 320

/nm
 ATOTAL 1= aAAS,1bCAAS + aCAF1bCCAF
ATOTAL 2= aAAS,2bCAAS + aCAF2bCCAF

Resolver este sistema de ecuaciones simultneas para las

incgnitas CAAS y CCAF

Para que la exactitud y precisin de los resultados sean buenas es necesario

seleccionar ambas longitudes de onda de forma que aAAS < aCAF a una de las
longitudes de onda y lo inverso a la otra longitud de onda . La precisin
optima se logra cuando la diferencia de absortividades sea lo mas grande
posible . Se deben fijar las condiciones de pH para evitar la presencia de
especies en equilibrio variable.
Ejercicio
Se pueden determinar las concentraciones de una mezcla de Fe+3
y Cu +2 formando el complejo con hexacianorutenato (II) ,
Ru(CN)6-4, que forma un complejo de color azul- violceo con el
Fe+3 ( max = 550 nm) y un complejo gris plido con el Cobre
(max = 396 nm) Las absortividades molares de los complejos de
metal se resumen en la tabla siguiente:

550 396
Fe +3 9970 84 Cuando una muestra que contiene
Cu+2 34 856 Fe+3 y Cu+2 se analiza en una cubeta
de 1 cm de paso ptico la
absorbancia a 550 nm fue de 0,183 y
la absorbancia a 396 nm fue de
0,109. Cul es la concentracin molar
de Fe +3 y Cu+2 en la muestra ?
 a 550 nm : 0,183 = 9970 CFe + 34 CCu
a 396 nm : 0,109 = 84 CFe + 856 CCu

Despejamos C Cu en la primera ecuacin

0,183 9970CFe
C Cu =
34
y sustituimos en la segunda

0,183 9970CFe
0,109 = 84C Fe +856
34
= 4,607 ( 251x105 )CFe
Despejando : CFe = 1,80 x 10 -5M
C Cu = 1,26 x 10-4 M

Ref: D:Harvey, Qumica Analtica Moderna , pag. 281

 Otras aplicaciones
Determinacin de constantes de equilibrio
( p.ej. La constante de acidez de un indicador acido-
base)

Caracterizacin de la estequiometra de un
complejo metal-ligando
( p. ej. ML; ML2, ML3 etc.)

. Titulaciones espectrofotomtricas
(usa graficas de absorbancia vs volumen de titulante,
formacin de un producto absorbente o decoloracin
de un reactivo titulante coloreado)
http://en.wikipedia.org/wiki/Beer%E2%80%93Lambert_law