BIOTECNOLOGIA DE ALIMENTOS

PRACTICA: CURVA DE CRECIMIENTO MICROBIANO POR

ESPECTROFOTOMETRIA

a) Reanimacin de los microorganismos.

Para la reanimacin de los microorganismos se toma un vial con los

microorganismos seleccionados y conservados en congelacin con glicerol

para luego pasarlos a medio BYPO LIQUIDO CON SUSTRATO, agregar

todo el contenido del vial y dejarlo en agitacin en el agitador a 160 rpm

durante 24 horas.

b) Preparacin de la muestra para la curva de crecimiento.

Una vez pasada las 24 horas desde el inicio de la reanimacin se prosigue

a la preparacin del MEDIO BYPO CON SUSTRATO. Una vez realizado

este procedimiento, con la ayuda de un aza de siembra inoculamos en

matraces de 250ml y con 50ml de medio para empezar a hacer las lecturas

en el espectrofotmetro.

c) Curva de crecimiento microbiano.

Para trazar la curva se sigue con el siguiente protocolo:

1. Calibracin del equipo. Se calibro el equipo a 550nm (bacterias) y

660nm (levaduras) con MEDIO BYPO estril.

2. Una vez realizada la siembra en matraces de 250ml y con 50ml de

medio, instantneamente se toma 1ml de la muestra de cada uno de

los matraces para pasarles a cubetas de plstico para realizar la

lectura a 550nm para bacterias y 660nm para levaduras. Siendo esta

la lectura a la hora cero.

1 Profesor Dr. Pedro P. Pelez Snchez, e-mail: pedro.pelaez@unas.edu.pe

 3. Esta primera lectura dar inicio a una serie de repeticiones del mismo

procedimiento por cada hora hasta que la lectura sea constante y se

produzca un descenso en la lectura de absorbancia.

4. Cuando la lectura de la absorbancia supera los 0.6 se empieza a

hacer las primeras diluciones 1:1; 1:2; etc.
5. La cantidad de cel/ml se determina mediante la ecuacin:
Levadura
Cel/ml = (Ab+0.0023)/0.011 x 106
Bacterias
cel/ml = (Ab/O.5)*10 x 106

6. Ejemplo de Historial

Tiempo (hrs) Ab Observacin

0 0.01
1 0.09
2 0.18
3 0.3
4 0.6 Lmite
5 0.3 Diluir 1:1 H2O
6 0.4 Diluir 1:1 H2O
7 0.6 Diluir 1:2 H2O
8 0.28 Diluir 1:2 H20

n-1
N

2 Profesor Dr. Pedro P. Pelez Snchez, e-mail: pedro.pelaez@unas.edu.pe