UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

FACULTAD DE INGENIERIA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

CURSO: BIOTECNOLOGIA DE ALIMENTOS

PRACTICA No 01: Muestreo, Aislamiento

1. Muestreo de materiales que contienen microorganismos

Las muestras en las cuales se pueden encontrar microorganismos se

recolectaron, en lugares y zonas apropiadas, ejemplo: la fbrica, rea agrcola
y zona de desechos de empresas.
Ejemplo: Muestras tomadas en el casero de Monterrico, distrito de
Rupa Rupa, provincia de Leoncio Prado, departamento de Hunuco. Las
muestras fueron: fruto en deterioro de aguaje expuesto en el suelo. Casero
Monterrico Altitud = 650 msnm; Latitud = 91818,11S; Longitud =
75,5716.44O.

2. Aislamiento de microorganismos

El proceso de aislamiento de microorganismos se realizo siguiendo la

metodologa descrita por CARDENAS (2001 a, b); que consisti en extraer
porciones o alcuotas de materiales muestreadas, (10 g de aguaje o 10 mL si la
muestra es lquida) y una vez molida, diluirlo en 90mL de agua estril (JAY,
1981 y MONZON, 2001) y sembrarlos por mtodo de estra en medios slidos
diferenciales YED y LB (Cuadro 1). La incubacin se realiz en posicin
invertida a 30 C por 24, 48 72 horas, dependiendo del desarrollo microbiano
(JAWETZ et al., 1983).

Despus de incubarlos se procede a discriminar los microorganismos

aislados y a purificar por resiembra.

Finalmente los microorganismos se cultivan en medio BYPO slido

(Cuadro 1), a fin de adaptarlas al medio de seleccin. La incubacin se realiza
en placas en posicin invertida a 30 C promedio por 48 h (JAWETZ et al.,
1983).

3. Recomendaciones

Se deben preparar inicialmente 2 placas mnimo por cada tipo de medio

(4 placas por muestra).
Luego de la primera siembra, se determinan cuantos microorganismos
pueden ser aislados por resiembra, de acuerdo a ello se deben preparar 2
placas por medio y por cada microorganismo (Ejemplo: si han desarrollado 3
cepas de microrganismos, 1 en YED y 2 en LB, entonces deben prepararse 6
placas, 2 para YED y 4 para LB), luego proceder a la resiembra.

Profesor Dr. Pedro Pelez Snchez.

E-mail: pedropps@hotmail.com. Web personal: www.pelaez-sanchez.com
 El clculo de la cantidad de medios se realiza teniendo en cuenta los
criterios indicados, se debe preparar con un ligero exceso, para evitar que falte
por error de medicin de los compuestos que forman el medio.

Cuadro1. Composicin de medios slidos para aislar microorganismos.

Medio Composicin (% v/p) Utilizado para aislar

Glucosa, 2%; Extracto de carne,

Levaduras
YED 1%; Agar, 1.5 %.

Peptona 1%; Extracto de

levadura, 0,5%; cloruro de sodio Bacteria

LB 0,5%, Agar 1,5%

Peptona, 1%; Extracto de carne,

0.8 %; NaCl, 0.5 %; K2HPO4, 0.7 Colonias puras

BYPO %; Agar, 1.5 %.

Fuente: HOLMES Y CUNDLIFFE, (1991) y FRENKEN et al., (1992)

Profesor Dr. Pedro Pelez Snchez.

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 ENSAYOS

MUESTREO AISLAMIENTOS

Muestra 10gr
Obtenido del casero de

Monterrico (Altitud =
Agua estril
650m; Latitud =

91818,11S; Longitud

= 75,5716.44O YED LB

Incubacin Incubacin
Discriminar Discriminar
Resiembra Resiembra

BYPO solido BYPO solido

Incubacin Incubacin

CEPAS CEPAS

GLICEROL GLICEROL

CONGELACION CONGELACION

Profesor Dr. Pedro Pelez Snchez.

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Referencias Bibliogrficas

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origen microbiano. Tesis Doctoral. Facultad de Farmacia Universidad Complutense de
Madrid.
2. JAY J.M. 1981. Microbiologa Moderna de los Alimentos. 2da ed. Edit. Acribia.
Espaa. pp 441.
3. JAWETZ, E; MELNICK, J; ADELBERG, E. 1983. Manual de Microbiologa Mdica.
Novena edicin. Editorial El Manual Moderno S.A. Mxico. 595 pp.
4. MONZON, Arnulfo. 2001. Produccin, uso y control de calidad de hongos
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integrado de plagas. 63: 95 103.
5. CRDENAS F. 1999. Bsqueda, seleccin y caracterizacin de nuevas lipasas de
origen microbiano. Tesis Doctoral. Facultad de Farmacia Universidad Complutense de
Madrid.
6. CRUEGER, 1993. Biotecnologa. Manual de Microbiologa Industrial. Trad. por
Paloma Liras Padn. 3 ed. Zaragoza Espaa, Acribia S.A. 413 p.
7. HOLMES, D.J. AND . CUNDLIFFE, E. 1991. Analysis of a ribosomal RNA methylase
gene from streptomyces tenebrarius which confers resistence to gentamicin. Journal
Mol. Gen.( Genetic ). 229 (2): 229 -237.
8. ARIAS, EDINSON, LASTRA, JORGE 1997. Biotecnologa, cintica de crecimiento,
Mxico, Sinexi S.A. [En lnea] Biotecnologa. www.monogra
fias.com/trabajos10/10cincrec/10cincrec,cineticadecrecimiento,20 mayo 2005).
9. TORTORA, J. 1993. Introduccin a la Microbiologa. 3 ed. Zaragoza Espaa.
Editorial Acribia. 289 p.

Profesor Dr. Pedro Pelez Snchez.

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