Los problemas en Ingeniera Bioqumica

Estos problemas se proporcionan como una herramienta de estudio para estudiantes de

pregrado o postgrado

A diferencia de la mayora de los problemas encontrados en los libros de texto, muchos de

estos problemas estn diseados para ser hecho de forma relativamente rpida (10-20
minutos)

Cintica enzimtica
1. Considerar una enzima industrialmente importante, que cataliza la conversin de un
sustrato para formar un producto mucho ms valioso. La enzima sigue el mecanismo de
Briggs-Haldane:

Un anlisis de la reaccin en solucin arroja los siguientes parmetros de

Michaelis-Menten: con E 0 = 0,10 M y diversas concentraciones de sustrato S 0,
V max = 0.60 micras / s; K M = 80 M.
Un tipo diferente de experimento indica que la tasa constante de asociacin, k 1, es
k 1 = 2,0 x 10 6 M -1 s -1 (2,0 M -1 s -1).
a. Estimar los valores de k 2 y k -1.

En promedio, qu fraccin de enzima-sustrato vinculante dan lugar a la formacin de

producto?

2. Las propiedades cinticas de la enzima ATPasa, aislado a partir de levadura, que cataliza
la hidrlisis de ATP para formar ADP y P i, se evalan mediante la medicin de las velocidades iniciales en solucin, con
diversas concentraciones de ATP S 0 y una ATPasa concentracin total E 0 = 0,60 m. A partir de estos
experimentos, se determina que
V max = 1.20 micras / s; K M = 40 M.
a. Calcular los valores de k gato y la eficiencia cataltica para la ATPasa bajo estas
condiciones.
segundo. Una molcula de inhibidor se aade a una concentracin de 0,1 mM, y los
experimentos se repiten. La aparente V max y K M ahora se encuentran para ser 0,6 micras / s,
y 20 mM, respectivamente. Especular sobre el funcionamiento de este inhibidor (es decir,
especificar qu especies estn comprometidos por el inhibidor).
3. La enzima luciferasa en lucirnagas cataliza la modificacin de luciferina, consumiendo
tanto luciferina y ATP, y la produccin de luz (probablemente se puede adivinar la funcin
de esta reaccin). Suponiendo ATP est en exceso, la reaccin sigue el mecanismo de
Briggs-Haldane, con la luciferina como sustrato limitante.
Se llevan a cabo una serie de experimentos en los que 5 mM enzima luciferasa se mezcla
con diversas concentraciones de sustrato S 0, y las velocidades de reaccin relativas se mide en trminos de las tasas de
emisin de luz, medida usando un tubo fotomultiplicador:

S 0 (M) Unidades relativas de luz

(RLU)

5 3554

10 6262

20 10115

40 14611

80 18786

200 22672

500 24718

1000 25484
a. A partir de los datos, estimar la V max (en RLU) y K M (en M).
segundo. Cuando la concentracin de sustrato es de 1000 m, y la produccin de luz se
controla durante un periodo de tiempo, la velocidad de reaccin se mantiene relativamente
constante durante aproximadamente 5,0 minutos (300 segundos), despus de lo cual
disminuye rpidamente a casi cero.
Estimar el k gato (en s -1) y la eficiencia cataltica.

4. Considere una enzima incrustada uniformemente dentro de las partculas. Experimentos

tasa inicial se realizan utilizando una concentracin de sustrato S 0 en el intervalo lineal de
la saturacin de la enzima, dando
V 0 / S 0 = 1,85 min. -1
En una segunda preparacin, las partculas se cargan con 3 veces la cantidad de enzima
activa, produciendo
V 0 / S 0 = 3,20 min. -1
Para este sistema, le clasificar la resistencia a la difusin intrapartcula como mnimo,
fuerte, o intermedio? Explicar la base para su respuesta.

5. Una enzima est incrustado uniformemente dentro de partculas esfricas (0,1 mm de

dimetro) a una concentracin E 0 = 10 mM. Cuando estas partculas se mezclan con
diferentes concentraciones de sustrato S 0, y la velocidad de reaccin inicial V 0 se mide, se encontr que
la velocidad es proporcional a la concentracin de sustrato para probaron las condiciones,
con
V 0 / S 0 = 0,65 s -1.
En una segunda preparacin utilizando las mismas partculas, se determina que hay el
doble de la cantidad de enzima activa por partcula (E 0 = 20 mM), y esta vez
V 0 / S 0 = 1,00 s -1.
a. Calcular la relacin de los dos factores de eficacia,
(E 0 = 20 M) / (E 0 = 10 M).
segundo. Calcular la relacin entre los dos mdulos de Thiele,
(E 0 = 20 M) / (E 0 = 10 M).

6. Una enzima industrialmente importante est incrustado uniformemente dentro,

permeables esfricas partculas con concentracin efectiva E 0 = 0,1 mM. Las partculas se
incuban con diferentes concentraciones de sustrato S 0, y la tasa de formacin de producto V 0 (moles
reaccionaron / volumen pellet / tiempo) se mide para cada uno. El experimento se repite
para una serie de dimetros de partcula promedio d (d = 2 R), manteniendo la misma
composicin y la masa total de partculas en cada caso. La velocidad de reaccin es
proporcional a S 0 para todas las condiciones ensayadas, y los resultados son como sigue:
d (m) V0/S0
(s-1)

3 0,138

10 0,137

30 0,127

100 0,080

300 0,033

1000 0,010
a. Despreciando la resistencia a la transferencia de masa externa, muestran que la enzima
exhibe una cintica de reaccin (limitado) intrnsecos cuando d <10 micras, y estimar la
eficiencia cataltica k cat / K M (M -1 s -1) para la enzima incrustada.
segundo. Demostrar que hay una fuerte resistencia a la difusin intrapartculas cuando d>
300 micras y estimar el coeficiente de difusin del sustrato en la partcula D p (m 2 / s).

7. Una enzima est incrustado uniformemente dentro de una membrana permeable (espesor
de 2 L = 180 m). La membrana se incuba con diferentes concentraciones de sustrato S 0, y de
la formacin de producto tasa de V 0 se mide en cada caso. Este experimento se repite para diferentes
cargas de enzimas. La velocidad de reaccin es proporcional a S 0 para todas las
condiciones ensayadas, y los resultados son como sigue:
E 0 (M) V0/S0
(s-1)

0.1 0.0012

0.2 0.0023

0.4 0.0041

0.8 0.0069

16 0.0108

3.2 0.0158

6.4 0.0226
a. Demostrar que la velocidad de reaccin refleja la cintica de enzimas intrnsecas cuando
E 0 = 0,1 M, mientras que es sometida a una fuerte resistencia a la difusin intrapartculas
cuando E 0 = 6,4 mM.
segundo. Basndose en la informacin, en parte, y despreciando la resistencia a la
transferencia de masa externa, estimar la k cat / K M ratio (M -1 s -1) y el coeficiente de difusin sustrato D p
(m 2 / s) en la membrana.

8. Una proteasa inmovilizada se va a utilizar para descomponer las protenas en un proceso

industrial. En solucin, esta enzima exhibe una eficiencia cataltica de 5,4 x 10 5 M -1 s -1
para la escisin de un polipptido estndar. Cuando la proteasa se inserta dentro de
partculas permeables, a una concentracin de 10 mM (base de volumen de partculas) con
relacin de rea promedio de volumen / superficie de 30 m, el observado eficiencia
cataltica (en concentraciones de sustrato "bajos") se determina que es 1,3 x 10 5 M -1 s -1.
La difusividad sustrato eficaz es D p = 2,5 x 10 -6 cm 2 / s.
a. D dos posibles explicaciones para la aparente reduccin en la eficiencia cataltica.
segundo. Estimar la eficiencia cataltica real de la enzima inmovilizada.

9. Considere una enzima industrialmente relevante, que acta sobre una pequea molcula
sustrato con las siguientes propiedades catalticas (medido en solucin):
k cat = 5 s -1
KM=2M
La enzima se incrusta de manera uniforme en partculas esfricas (0,5 mm de dimetro), a
una concentracin de 10 mM en funcin del volumen de las partculas, y procesa sustrato
con mayor concentracin de 100 mM. En estas condiciones, la velocidad de reaccin
inicial se encontr que 5 micras / s (base de volumen de partculas).
a. Demostrar que la tasa observada es mucho menor de lo que cabra esperar sobre la base
de la cintica de solucin.
segundo. Qu dos efectos distintos podran contribuir a la tasa ms baja observada?
do. Usando razonamiento cuantitativo, especular sobre lo importante que cada uno de estos
efectos es en la contribucin a la tasa ms baja observada.

10. Una enzima es inmovilizada en pocillos de microtitulacin-superficie. Los pozos se

cargan con diferentes cantidades de enzima E 0 y se incubaron con diferentes
concentraciones de sustrato S 0, y velocidades de reaccin son evaluados por la medicin precisa de acumulacin de producto. El
experimento se repite para diferentes velocidades de agitacin, con los siguientes
resultados:
Velocidades de reaccin promedio en (nmol / cm
2
/ min.)

E 0 = 0,05 nmol / cm 2 E 0 = 0,1 nmol / cm 2

Velocidad de S 0 (M) = 1 10 1 10
agitacin (rpm)

10 0,054 0.33 0,062 0.53

30 0,076 0.35 0,097 0.64

100 0.10 0.36 0.14 0.70

300 0.12 0.37 0.19 0.72

1000 0.13 0.37 0.23 0.74

a. Usted decide que los dos puntos de datos recogidos con E 0 = 0,05 nmol / cm 2 a la
mxima velocidad de agitacin reflejan con precisin la cintica intrnsecas de la enzima.
Dos motivacin por qu estn tan seguros.
segundo. Estimar el valor de k gato (min -1) y K M (M) para esta enzima inmovilizada.
do. Tambin decide que el punto de datos recogidos con E 0 = 0,1 nmol / cm 2, S 0 = 1 M a
la velocidad de agitacin ms baja es de cerca a la tasa limitada de transferencia de masa.
Estado, al menos, una de las razones por las que puede tener confianza en esto.

11. Considrese una enzima incrustada de manera uniforme dentro bien caracterizados,
partculas permeables con una relacin volumen / rea superficial de 0,050 cm (500
micras) y un coeficiente de difusin eficaz de sustrato 2x10 -7 cm 2 / s. Estos datos de
velocidad iniciales fueron tomadas para iniciales, a granel concentraciones de sustrato S
(0); las tasas iniciales, V 0, se expresan sobre una base de volumen por partculas:
S (0), M V 0 (M / min,)
10 2.0
30 5.9
500 33.0
a. Para cada uno de los tres puntos de datos anteriores, caracterizara el grado de resistencia
a la difusin intrapartcula como mnimo, intermedio o fuerte?
segundo. Estimar los valores de V max y K M para esta enzima inmovilizada (el grfico de
factor de eficacia vs. mdulo observable puede ser til aqu, aunque puede que no sea
necesario).

12. Una enzima inmovilizada, incrustado dentro de partculas esfricas de 3,0 mm de

dimetro medio, se caracteriza a travs de una serie de experimentos de velocidad inicial
(resultados representan grficamente a continuacin), donde la velocidad inicial V 0 se
expresa sobre una base de volumen de la partcula. El sustrato, aadi en varias
concentraciones S 0, penetra las partculas con una difusin efectiva de 1,0 x 10 -6 cm 2 / s. Sobre una base de
volumen de la partcula, la carga de la enzima se sabe que es 1,5 mM.

a. A concentraciones "bajas" de sustrato (<0,1 M), no afecta a la difusin intrapartcula tasa

significativamente? Justifica tu respuesta.
segundo. A concentraciones "altas" de sustrato (> 100 m), no afecta a la difusin
intrapartcula tasa significativamente? Justifica tu respuesta.
do. Estimar los valores de k cat (s -1) y K M (M).

13. Lea el siguiente artculo:

Lee et al. Multienzimticos catlisis en biochips de microfluidos. Biotechnol. . Y Bioeng,
83: 20-28 (2003).
Su objetivo es estimar el valor aproximado (orden de magnitud) del nmero Damkhler,
Da = V max / k L S 0,
para la peroxidasa de soja inmovilizado a la superficie (SBP) en condiciones de carga
mxima de la enzima (6 g / cm 2) y un sustrato inicial (H 2 O 2) concentracin de 0,125 mM (Figura 5).
A los efectos de este problema, asumimos una expresin que es vlida para desarrollado
completamente, el flujo laminar entre placas paralelas, con flujo constante (velocidad de
reaccin) a tan slo la superficie inferior:
Sh = k L d / D S 2.692 (un valor de ~ 3 basta como una estimacin);
donde d es la altura del canal, y D S es el coeficiente de difusin de H 2 O 2 (una molcula
pequea).
Sobre la base de los valores indicados anteriormente y otros que se encuentran en el
documento, estimar el valor de Da (ver sus unidades con cuidado, esta es una cantidad sin
dimensiones!).
Los autores afirman en la p. 26 que, bajo las condiciones utilizadas, la velocidad de esta
reaccin no est influenciada significativamente por las limitaciones de transferencia de
masa. Aceptas?

El metabolismo celular y el crecimiento

1. Considere un cultivo de bacterias con la frmula emprica biomasa
CH 1.7 O 0,46 N 0,18 (MW B = 23,6 g / mol)
crecer aerbicamente en glucosa (C 6 H 12 O 6).
Usted decide para medir los coeficientes de rendimiento para la glucosa y el oxgeno y
encontrar que
Y X / S = 85 g de biomasa / glucosa en moles;
Y X / O2 = 39 g biomasa / mol O 2.
Este organismo segrega no hay cantidades apreciables de producto en estas condiciones.
a. Muestran que los valores medidos de Y X / S y S X / O2 son estequiomtricamente coherentes
entre s, indicando todos los supuestos.
segundo. Un cultivo discontinuo de este organismo contiene inicialmente 0,01 g de inculo
de biomasa y 20 mmol de glucosa. El cultivo se incub durante la noche, y las mediciones
de densidad ptica posteriores sugieren que las clulas ya no estn creciendo. La biomasa
total en la cultura se calcula que es 1,0 g. Estimar la cantidad final de glucosa en el medio
(mmol), y especular sobre la causa de la meseta en la cantidad de biomasa.

2. Considere una fermentacin anaerbica utilizando levadura, con la frmula emprica

biomasa
CH 1.7 O 0,45 N 0,15 (MW B = 23,0 g DCW / mol)
Las fuentes de carbono y nitrgeno son glucosa (C 6 H 12 O 6 sales) y de amonio,
respectivamente. Los productos posibles son la biomasa y etanol (C 2 H 6 O), junto con el
dixido de carbono y agua.
a. Cul es el mximo coeficiente de rendimiento posible de la biomasa (g DCW / glucosa
mol), y bajo qu condiciones se realiz?
segundo. Cul es el mximo coeficiente de rendimiento posible de etanol (EtOH moles /
mol de glucosa), y bajo qu condiciones se realiz?
3. Considere una cultura lote de bacterias con la frmula emprica biomasa
CH 1.6 O 0,55 N 0,20 (MW B = 25,2 g / mol).
El biorreactor es un recipiente cerrado, rgido en el que medio lquido que contiene 10
mmol de glucosa (C 6 H 12 O 6) y se aade un exceso de sulfato de amonio. El espacio de cabeza contena aire
humidificado inicialmente. Despus de algn tiempo, durante el cual se logr un
crecimiento neto de 0,3 g de peso celular seco, se analiz el gas del espacio de cabeza. Tras
considerar la concentracin de lquido apropiado de O 2 en equilibrio con el espacio de
cabeza, se encontr que un total de 15 mmol O 2 se consuma.
Este organismo segrega no hay cantidades apreciables de producto en estas condiciones.
a. Estimar el coeficiente de rendimiento de sustrato, Y X / S (g DCW / glucosa moles) y la
cantidad final de glucosa en el medio (mmol).
segundo. Estimar la cantidad de CO 2 fue producido (mmol).

4. Un cultivo bacteriano se lleva a cabo utilizando piruvato (C 3 H 4 O 3) como el sustrato de crecimiento.

La fuente de nitrgeno se compone de sales de amonio. La frmula emprica biomasa es
CH 1,8 O 0,5 N 0,17 (MW B = 24,2 g DCW / mol).
a. Basndose en esta informacin solamente, estimar el rendimiento terico mximo de
biomasa por mol de piruvato (g DCW / mol).
El cultivo se ha descrito anteriormente se lleva a cabo en condiciones aerbicas, y no hay
productos secretados se detectan. Basado en las mediciones de CO 2 concentraciones en el
espacio de cabeza y disuelto en el medio, se determina que el 45 mmol CO 2 se libera para
cada biomasa g DCW producido.
segundo. Estimar el rendimiento de biomasa real por mol de piruvato (g DCW / mol).
do. Explicar la diferencia entre las respuestas de las partes a & b.

5. Aerobacter aerogenes es para ser cultivado aerbicamente, con glucosa (C 6 H 12 O 6) o

piruvato (C 3 H 4 O 3) como el sustrato de crecimiento. La siguiente informacin fue tomada de Bailey y Ollis:
Frmula emprica biomasa: CH 1,78 N 0,24 O 0,33 (MW B = 22,5 g / mol); grado biomasa de
reductancia = 4.4
Y X/S Y X / O2
------------------------------------------ --- -------------------------
Sustrato g / g g / mol g / GC g / g g / mol
Glucosa 0,40 72,7 1,01 1,11 35,5
piruvato 0,20 17,9 0,49 0,48 15,4
a. Comparar los rendimientos de biomasa reales por mol de glucosa o de piruvato a sus
respectivos rendimientos mximos tericos. Qu sustrato de crecimiento es ms eficiente
con respecto a la biosntesis?
segundo. D dos breves explicaciones de por qu la respuesta a parte de un sentido (o,
hacer una conjetura en cuanto a que el sustrato es ms eficiente y justifique su respuesta).
do. Teniendo en cuenta el caso de crecimiento en glucosa, evaluar si o no se puede esperar
grandes cantidades de producto (s) secretada.
6. Considere un lote, cultivo bacteriano aerbico con los siguientes parmetros:
Emprica frmula biomasa: CH 2 O 0,5 N 0,2 (MW B = 24,8 g DCW / mol)
Volumen de medio en el reactor: 100 L
Densidad de inoculacin: 0,01 g DCW / L.
Caudal volumtrico de gas rociador: 40 L / min.
(El gas del espacio de cabeza por encima de la cultura se le permite escapar hacia el medio
ambiente al mismo volumtrico, es decir, molar, caudal)
Composicin del gas Sparge: 20% en moles de O 2 (8,6 mM), 0,5% en moles de CO 2
M O2 (constante de equilibrio de fase): 40
Fuente de carbono: glucosa (C 6 H 12 O 6; PM = 180 g / mol)
La concentracin de glucosa inicial: 20 g / L
Las bacterias secretan hay productos detectables distintos del CO 2 y agua.
En un tiempo de 10 horas despus de la hora de retraso, las clulas se siguen creciendo de
manera exponencial, y se tomaron los siguientes datos:
mol% de O 2 en el espacio superior: 4,9%
mol% de CO 2 en el espacio superior: 16,8%
densidad de la biomasa: 5,0 g DCW / L
a. Estimar la tasa de crecimiento especfico mxima, max.
segundo. Estimar la concentracin de glucosa que queda en el medio cuando anteriormente
se tomaron los datos.

7. Este problema se ocupa del anlisis de butrico bacterias del cido de fermentacin,
como se considera en ms detalle por Papoutsakis (Biotechnol Bioeng.., 26: 174-187
(1984)). Se supone que estas bacterias consumen glucosa y sales que contienen nitrgeno
anaerbicamente para formar: biomasa, expresada como un reducido frmula emprica CH
p O n N q, butirato de (C 4 H 8 O 2), acetato de (C 2 H 4 O 2 ), CO 2, H 2 y H 2 O. Otros productos que o bien
no se acumulan o se producen en cantidades insignificantes.
La va metablica, teniendo en cuenta slo las especies que contienen carbono, se puede
simplificar y se escribe como sigue:
C 6 H 12 O 6 ---> 6 CH p O n N q
C 6 H 12 O 6 ---> 2 AcCoA + 2 CO 2
AcCoA ---> C 2 H 4 O 2
AcCoA + C 2 H 4 O 2 ---> C 4 H 8 O 2
Un anlisis ms detallado se basa en las siguientes observaciones:
1) La biomasa es generalmente 46,2% de carbono en peso.
2) El grado de reductancia de la biomasa es generalmente igual a 4,29.
3) El coeficiente de rendimiento para la biomasa es 40,0 g de glucosa DCW / mol.
4) La relacin molar de H 2 / CO 2 producido se encuentra que es 1,20.
a. Determinar el peso molecular emprica de la biomasa, MW B (g DCW / mol).
segundo. Dar a los grados de reductancia para todas las especies distintas de la biomasa.
do. Estimar los coeficientes de rendimiento de acetato y butirato (mol / mol de glucosa) en
estas condiciones.

Biorreactores
1. Un microorganismo se cultiva en un biorreactor lote 10 L, que contena inicialmente 100
sustrato g / L de crecimiento (considerado como una concentracin de "alto") y 0,2 g / L de
biomasa. Le dicen por un colega que el tiempo de duplicacin para este cultivo (en fase
exponencial) es muy reproducible, con
t d = 1,25 horas.
Despus de 6 horas en total en la cultura, se mide la densidad celular y la concentracin de
sustrato:
t = 6 h: x = 1,24 g / L; S = 73 g / L.
Estimar:
a. La tasa de crecimiento especfica mxima, max (h -1).
segundo. El coeficiente de rendimiento, Y X / S (g biomasa / g de sustrato).
do. La densidad celular en la fase estacionaria (g / L).
re. El tiempo total de cultivo requerido para alcanzar la fase estacionaria (h).
mi. El tiempo de retraso aparente, t lag (h).

2. Considerar el crecimiento de un microorganismo en cultivo discontinuo, se inocularon a

una densidad de 0,1 g / L, que crece en glucosa como sustrato limitando con concentracin
inicial S 0 = 10 g / L. Despus de un tiempo de retraso de aproximadamente 3 h, la cultura
crece exponencialmente, con un tiempo de duplicacin de 2 h. Fase estacionaria se alcanza
despus de un tiempo total de 14 h.
Estimar:
a. max (h -1)
b. Y X / S (g / g)
do. El tiempo total en cultivo para alcanzar la fase estacionaria si S 0 eran 2 g / L,
suponiendo que esta concentracin es tambin suficiente para apoyar el crecimiento
mximo.

3. Considere un cultivo bacteriano continuo, aerbica en un chemostat con pienso estril.

Tres diferentes tasas de dilucin D se ponen a prueba para una alimentacin de glucosa
concentracin S f = 10 mM, y la concentracin de biomasa x y glucosa concentracin S en
la corriente de salida se miden. Los resultados son los siguientes:
D (h -1) x (g / L) S (mM)

0.05 0,248 0,067

0.5 0,208 1,667

5 0 10
a. Estimar la glucosa coeficiente de rendimiento Y X / S (g biomasa / glucosa moles).
segundo. Suponiendo que la cintica de crecimiento Monod, estimar la tasa de crecimiento
especfico mxima max (h -1) y la Monod constante K S (mM).

4. En las condiciones del sustrato limitada, un microorganismo exhibe la siguiente tasa de

crecimiento especfico neta, mu neta, y el coeficiente de rendimiento, Y X / S:
neta (h -1) = 0,70 S /(0.1 + S), con S en g / l;
Y X / S (g DCW / g) = 0,40
El medio de crecimiento disponible contiene 10 g de sustrato / L.
a. Cuando un biorreactor de proceso por lotes que contiene 100 L del medio de crecimiento
se inocula con 1,0 g DCW de la biomasa, estimar la densidad celular mxima alcanzada y
el tiempo aproximado requerido para alcanzar, despus se inicia un crecimiento
exponencial.
segundo. Usted decide en cambio el cultivo del microorganismo en un quimiostato,
utilizando el mismo medio de crecimiento como el de alimentacin (estril). Estimar la
tasa de dilucin (h -1) en la que el quimiostato ser lograr la mxima productividad de estado estacionario de la biomasa.
do. Calcular y comparar las productividades de biomasa en general (g DCW / L / h) de los
dos escenarios en partes a & b. Qu otra consideracin har que el proceso por lotes,
incluso menos productivo en comparacin con el chemostat?

5. Considere un cultivo de bacterias que hacen un producto valioso en un quimiostato

operado en estado estacionario. La alimentacin de lquido es estril y contiene glucosa 50
mM (limitando el crecimiento sustrato S). En una serie de carreras de estado estacionario,
la tasa de dilucin D se incrementa gradualmente, y la densidad celular que sale el
quimiostato se mide para cada uno:
 D (h -1) x (g / L)

0.05 1.58

0.10 2.17

0.15 2.47

0.20 2.65

0.25 2.76

0.30 2.83

0.35 2.86

0.40 2.84

0.45 2.74

0.50 2.25

0.52 1.32

0.53 0
a. Explica por qu la densidad celular puede aumentar a medida que aumenta la velocidad
de flujo, como se muestra aqu con D <0,35 h -1.
segundo. A qu tasa de dilucin en caso de que opere el chemostat para optimizar la
productividad de un estricto crecimiento asociada producto? Explicar la base para su
respuesta.
do. A qu tasa de dilucin en caso de que opere el chemostat para optimizar la
productividad de una estricta no-crecimiento asociada producto? Explicar la base para su
respuesta.

6. Considere el crecimiento celular en un quimiostato en el estado estacionario, con el

pienso estril. En los experimentos a escala de laboratorio, se encontr que la tasa de
crecimiento especfico se inhibe a altas concentraciones de glucosa S, modelada segn la
expresin fenomenolgica
(h -1) = 0,6 S /(0.2 + S + 0,1 S 2), con S en g / L.
a. Si la concentracin de glucosa en la alimentacin es 10 g / L, estimar la tasa de dilucin
mnima a la que se producira de lavado celular.
segundo. Es la tasa de dilucin estimado parcialmente un ms alto que apoyar el
crecimiento celular en el biorreactor? Justificar y explicar brevemente su respuesta.

7. Etanol (C 2 H 5 OH) es producida por un microorganismo cultivado en condiciones

anaerobias en un quimiostato. La frmula emprica de la biomasa es CH 2 O 0,45 N 0,19 en
estas condiciones. La alimentacin estril contiene una concentracin "alta" (20 mM) de la
glucosa, un exceso de sales de amonio, y sin etanol. Cuando la tasa de dilucin se fij en
0,1 h -1, la corriente de salida contiene glucosa 2 mM y 0,45 g / L de biomasa. Es seguro asumir que el etanol es el
nico producto secretado.
a. Determinar la concentracin esperada de etanol (mM) en la corriente de salida.
segundo. La tasa de dilucin elegido probablemente no optimizar la productividad de
biomasa. Explique brevemente cmo sabes que este es el caso y especular sobre por qu se
pudo haber elegido este tipo de dilucin.

8. Considere un cultivo de bacterias que secretan un producto en un quimiostato operado

en estado estacionario. La tasa de crecimiento especfico de la biomasa se describe
adecuadamente mediante la ecuacin de Monod, y la tasa de formacin de producto est
dada por la ecuacin Leudeking y Piret:
r P = ( + ) x
Este sistema est bien caracterizado, de tal manera que las siguientes constantes son
conocidos:
Y X / S = 0,4 g / g
max = 0,7 h -1
K S = 0,2 g / L
= 0,2 g / g
= 0,3 g / gh
La alimentacin de lquido a la quimiostato es estril y contiene 10 g / L del sustrato
limitante del crecimiento.
a. Qu tasa de dilucin optimizar la productividad de la quimiostato (g de producto / h)?
Una respuesta aproximada es suficiente.
segundo. Tengamos en cuenta que una alta concentracin de producto (g / L) es tambin
deseable. Con esto en mente, cmo puede usted ajustar la velocidad de dilucin del valor
indicado en el inciso a? Elija una nueva tasa de dilucin y dar el razonamiento detrs de su
respuesta.

9. Considere el crecimiento de un microorganismo en cultivo discontinuo. Cuando la

concentracin de sustrato es alta, la densidad celular se duplica cada 0,75 h, el coeficiente
de rendimiento sustrato observado es 0,3 g DCW / g, y as como la formacin de producto
consumo de sustrato se asigna hacia la biosntesis de (60%), mantenimiento (10%), (30%).
La formacin de producto es estrictamente asociada al crecimiento.
El reactor batch se inocula con 0,01 g DCW / L y 10 g de sustrato / L.
a. Estimar la densidad celular mxima y el tiempo (despus de fase de retardo) necesario
para lograrlo.
segundo. Determinar el valor del coeficiente de mantenimiento (g sustrato / g DCW-h).
do. Cuando la densidad celular alcanza su valor de pico, la concentracin de sustrato se
mide y se encontr que 0,05 g / L. Estimar el valor de la constante de saturacin, K S (g /
L).
Oxgeno Transferencia de Masa / biorreactor Escala-up
1. Considere una, biorreactor de tanque agitado aire rociado. Es un proceso de gran
volumen, y usted tiene los datos sugieren que el oxgeno disuelto es inaceptablemente
heterognea dentro del reactor. En un intento de acortar el tiempo de mezcla, se aumenta la
velocidad de agitacin del impulsor en un factor de 2.
a. Estimar el factor por el cual la energa impartida por los cambios del impulsor.
segundo. Estimar el factor por el cual el valor de k L a cambios.
do. D dos buenas razones por las que este cambio puede ser perjudicial.

2. Un cultivo aerbico debe ser llevado a cabo en un reactor discontinuo de tanque agitado
100 L. El reactor se roci con aire enriquecido [C g (O 2) = 20 mM] a un caudal F g = 20 L / min., Y
de la constante de la Ley de Henry modificado para O 2 es M = 40. Los microorganismos
consumen 20 mmol O 2 / g DCW / h, y se le dijo que la tasa de transferencia de masa
constante, medido bajo condiciones de proceso, es k L un '= 0,02 s -1.
a. Calcular la densidad celular mxima (g DCW / L) que se lograr antes de oxgeno se
hace limitante para el crecimiento.
segundo. Ahora desea ampliar el proceso para 10.000 L, manteniendo el mismo k L un 'y F
g / V. Estimar las siguientes relaciones, donde II se refiere a la escala de 10.000 L e I se
refiere a la escala de 100 L:
d t, II / d t, I
N i, II / N i, I
(P / V) II / (P / V) I
Re i, II / Re i, I

3. Considere un cultivo discontinuo aerbico 20 litros. El coeficiente de rendimiento

basado en el consumo de oxgeno, Y X / O2, es conocido por ser 30 g de biomasa / mol O 2.
El medio contiene suficiente glucosa para producir el mximo crecimiento y la biomasa
celular se duplica cada 2 horas en condiciones totalmente aireados. La concentracin
deseada de biomasa al final de la carrera es 1 g / L.
La aireacin se logra mediante burbujeo de aire a travs del tanque con agitacin. A partir
de la ley de gas ideal, la concentracin de oxgeno que entra se calcula para ser
C g, 0 = 8,30 mM.
Expresin de la ley de Henry modificado la descripcin de equilibrio lquido-vapor para el
oxgeno es
C g = MC L *,
con M = 40 para las condiciones de cultivo descritas aqu.
a. Estimar el valor mnimo de k L un '(s -1) requerida para lograr el mximo crecimiento para toda la duracin del cultivo.
segundo. La misma cultura ha de ser reducido hasta 8.000 litros, y con el fin de mantener
las tasas de transferencia de masa consistentes a disear el sistema de tal manera que el
impulsor de encendido / volumen (P / V) relacin es la misma en ambas escalas. Si la
mezcla est en el rgimen turbulento, por lo que el factor cambia la velocidad del
impulsor? En otras palabras, estimar la relacin N i (8000L) / N i (20L). Para el crdito
parcial, al menos indique si aumenta la velocidad del impulsor requeridos o disminuciones.
do. Discuta dos inconvenientes potenciales de la estrategia de ampliacin se describe en la
parte b.

4. Despus de la graduacin que aceptar un puesto en una empresa de biotecnologa, donde

su primera tarea es ampliar una cultura microbiana aerbica de la escala piloto 50 L bien
caracterizado a la escala de proceso de 1.500 L. Usted discute el problema con otro
ingeniero qumico recientemente contratado, quien recibi su ttulo de {indicar el nombre
de la escuela rival aqu}.
l: ". Eso es fcil Simplemente mantener el mismo nmero de Reynolds."
T: "Quieres decir que el nmero de Reynolds impulsor, Re i?"
l: ". Uh ... s"
Usted decide llevar a cabo un anlisis de esta estrategia. Calcula las siguientes relaciones,
donde la escala II es 1,500 L y la escala que es 50 L. Si usted no es capaz de responder a
una o ms partes, al menos indique si la relacin ser mayor que, menor que, o igual a
uno.
a. Velocidad de agitacin, N II / N I.
segundo. Potencia impartida por volumen de lquido, (P / V) II / (P / V) I.
do. (K L a ') II / (k L a') I, asumiendo el mismo caudal de gas por unidad de volumen de fluido (F g / V) en ambas escalas.
re. Estado dos razones por las que la ampliacin de esta manera es una muy mala idea.

5. An, biorreactor de tanque agitado con aire burbujeado se opera en modo por lotes. Tras
una fase inicial de retraso, las clulas en el reactor crecen exponencialmente. Las
condiciones son tales que el oxgeno disuelto en ltima instancia, limitar el crecimiento
celular, pero la muerte celular y el mantenimiento en condiciones limitadas de oxgeno son
despreciables.
Verdadero o Falso (debe justificar su respuesta):
Cuando la concentracin de oxgeno disuelto cae por debajo de los niveles crticos, la tasa
de crecimiento absoluto de las clulas (r x) se reducir, y poco despus, la densidad celular se mantendr constante.

6. Considere un cultivo discontinuo rociado con aire (F g / V = 0,50 min -1; C g = 8,0 mM;
C L * = 0,20 mM). En un momento durante el crecimiento exponencial, el flujo de gas se
apaga durante 60 segundos, y la concentracin de oxgeno disuelto (C L) se monitoriza como una funcin
del tiempo:
Despus de que el aire se vuelve a encender, la concentracin de oxgeno disuelto es encaja
bien por
C L (mM) = 0.173 - 0.133exp (-0.083 t), donde t es el tiempo en segundos.
a. En el momento de este experimento, la densidad celular se determina que es 0,50 g
DCW / L. Estimar la densidad celular en el que la cultura dejar de crecer de forma
exponencial.
segundo. La velocidad de agitacin, N i, se incrementa en un factor de 3. Por qu factor
estar el k L un 'cambio? Cambiar la mxima velocidad de transferencia de oxgeno en
aproximadamente el mismo factor? Justifica tu respuesta.
do. El proceso debe ser reducido por un factor de 10 en trminos de volumen. Usted decide
mantener el mismo tiempo de circulacin (determinado por N i) y k L a "valores. Qu
variable del proceso tendr que ser ajustado, y aproximadamente en qu factor? Por qu
esto no es una buena estrategia?

7. Un biorreactor lotes agitada se airea con O 2 -Con un contenido de gas (C g = 10 mM, M

= 40). En un momento dado durante la fase exponencial, la concentracin de oxgeno
disuelto es C L = 0,2 mM; cuando el burbujeo se apaga brevemente, C L cae a 0,1 mM en
30 segundos.
a. Estimar el valor de k L a '(s -1).
segundo. Desde el momento en que se tom la medida, las clulas continan creciendo
exponencialmente durante 4,0 horas, despus de lo cual dejan de hacerlo. Estimar la tasa de
crecimiento (h especfica -1) durante este perodo.
do. Usted desea elegir entre dos propulsores diferentes de este biorreactor. Impulsor # 1
tiene media el dimetro del tanque (d i / d t = 1/2) y un nmero de potencia de 1 (gaseosos).
Impulsor # 2 tiene un tercio del dimetro del tanque y un nmero de potencia de 2
(gaseosos). Suponiendo que la misma F g y V se van a mantener, lo que es la relacin de
velocidades de agitacin para los dos impulsores (N i, 2 / N i, 1) que produce el mismo k L un 'valor?

Celular Animal Cultura / Sealizacin Celular

1. Despus de su graduacin, que van a trabajar para una compaa farmacutica de
tamao mediano en su grupo Cultura fabricacin de clulas, que est a cargo del diseo de
procesos a gran escala el cultivo de clulas animales. El proceso es un tanque agitado con
burbujeo de aire, pero las clulas demanda de oxgeno es baja, por lo que el caudales de
gas (F g / V ~ 0.03 min -1) y k L a "valores (~ 20 h -1, tpicamente) son mucho menores que
los que se utilizan tpicamente en cultivo microbiano. En consecuencia, se descubre que la
tasa de transferencia mxima de oxgeno (OTR) para el proceso de las escalas de manera
muy diferente que para los procesos de fermentacin "tradicionales", con OTR mximo de
escala como
(P / V) 0,25 u s 0,85
a. Sobre la base de los valores tpicos citados anteriormente, es el agotamiento del oxgeno
de las burbujas significativo?
segundo. El volumen de proceso ha de ser reducido por un factor de 100, y desea mantener
el k L un 'y F g / V constante (como se hace normalmente para consideraciones de
transferencia de masa). Qu variable de proceso tendr que ser ajustado y por qu factor?
(Crdito parcial para la identificacin de la variable y si debe aumentar o disminuir).
do. Evaluar si la estrategia descrita anteriormente es sonido.

2. La interleucina-2 (IL-2) estimula las clulas T durante la respuesta inmune, a travs de

un receptor multi-subunidad expresado en las clulas T. En realidad, las subunidades se
preacopladas, de tal manera que la asuncin de 1: 1 estequiometra ligando / receptor es
razonable en este caso. La concentracin de IL-2 requerida para provocar mitad de la
mxima unin a las clulas en estado estacionario es extremadamente baja, con un valor
medido de
K D, App = 22:00 (1,0 x 10 -11 M)
El nmero de estado estacionario de los complejos IL-2 / receptor es algo menor que para
la mayora de los factores de crecimiento, con un valor mximo de 1.000 molculas /
clula, y la constante de velocidad endoctica, k e, se sabe que es 0,1 min -1. Suponemos aqu que
todos los internalizados IL-2 molculas se degradan.
Usted desea determinar la frecuencia con la que tendr que cambiar el medio con el fin de
mantener la concentracin de IL-2.
Para una densidad celular de 10 5 clulas / ml (10 8 clulas / l) y una concentracin inicial
de IL-2 de 100 pM, estimar la tasa de agotamiento ligando, en (pM IL-2 consumida) / da.
Opina sobre si volver a la alimentacin diaria se justifica.

3. La lnea celular HT-2 es una lnea de clulas T de ratn que prolifera en respuesta a la
citocina, interleucina 2 (IL-2). Un matraz de clulas se inocul en 3x10 4 clulas / ml, y el
medio contena inicialmente una dosis saturante (100 pM) de IL-2. En varias ocasiones,
una parte alcuota de la suspensin celular fue sacado y la densidad celular se cuantific.
Los datos del curso de tiempo se muestran a continuacin en parcelas semi-log lineales y:
La constante de velocidad de internalizacin de IL-2 / IL-2 complejos de receptores se ha
medido (0,1 min -1), y se supone que todas las molculas de ligando internalizados se degradan. Tambin puede
presumirse que el crecimiento celular est limitado por IL-2 de concentracin.
a. Estimar el valor de max (h -1) en estas condiciones.
segundo. Estimar el nmero mximo, en estado estacionario de IL-2 / IL-2 complejos de
receptores por clula para esta lnea celular.

Recuperacin del producto

1. Slidos se sedimentan efectivamente de una muestra en 5 minutos utilizando una
centrfuga que funciona a 1000 rpm. Estimar la cantidad de tiempo que tomar si la
centrfuga se hace funcionar a 2.000 rpm.

2. Una separacin cromatogrfica produce dos picos. Para una columna de 5 cm de largo,
los picos presentan las siguientes caractersticas:
Pico 1 Pico 2
 Tiempo medio de residencia 15 40
(min.):

La desviacin estndar 5 10
(min.):
a. Calcular el valor de la resolucin, R s, de estos dos picos, y hacer comentarios sobre la posibilidad de lograr tanto un alto
rendimiento y alta pureza.
segundo. Para la separacin cromatogrfica se describe en la Parte A, estimar el nuevo
valor de la resolucin si la longitud de la columna se extiende a 10 cm, mientras se
mantiene la misma velocidad de flujo.

3. Una columna de afinidad se utiliza para separar una protena llamada protena X
especfica del medio de cultivo gastado. Una protena contaminante, Protena Y, tambin se
encuentra en el medio. Las perlas esfricas para ser utilizados en la columna son
impermeables, lo que significa que ni la protena X ni Y Protein puede penetrar las
partculas. En experimentos piloto, se aaden pulsos de la protena X o Protena Y a la
columna, que est lleno de perlas que son o bien no conjugado (sin unirse a la protena X o
Protena Y) o ligando conjugado (se unen especficamente a la protena X). Se obtienen los
siguientes resultados:
No conjugada -Ligando conjugado

Protein X Protena Y Protein X Protena Y

Tiempo medio de residencia (min.) 5.0 5.0 12.0 5.0

Anchura del pico (min.) 2.0 2.0 6.4 2.0

(Tenga en cuenta que la anchura del pico w = 4 t asumir picos de Gauss).
a. Para la columna cargada con perlas de ligando conjugado, protena X se recoge entre 10
y 15 minutos. Estimar el rendimiento% de protena X en el producto.
segundo. Se puede aumentar el rendimiento de la protena X mediante la recopilacin
durante un perodo de tiempo ms largo. Enumere dos inconvenientes potenciales
asociados con esta estrategia.
do. Qu causa el ensanchamiento de los picos de protenas Y? Qu factor adicional (s),
en su caso, contribuir a la ampliacin de la X pico de protena en la columna-ligando
conjugado?
4. Una separacin cromatogrfica produce dos picos con las siguientes caractersticas:
t r, avg (min.) t (min.)
Pico 1 5 20
Pico 2 45 10
En un esfuerzo por recoger la protena en Pico 1, recoja el material que sale de la columna
entre 15 y 22 minutos.
a. Estimar la recuperacin fraccional (rendimiento) de la protena en el pico 1.
segundo. No es posible estimar con precisin la pureza del producto sin conocer las
concentraciones mximas. Usando razonamiento cuantitativo, especular sobre si se lograr
alta pureza.
(ver ms arriba para erf (x) vs. x parcela).

5. Una columna de afinidad (100 ml de volumen total) se utiliza para separar una protena
especfica llamada protena B del medio de cultivo gastado. Una protena contaminante, la
protena A, tambin se encuentra en el medio. Los cromatogramas se adquieren en dos
caudales diferentes:
Q = 2 mL / min. Q = 10 ml / min.

Protena Protena Protena Protena

A B A B

Tiempo medio de residencia (min.) 22 37 4.4 7.4

Anchura del pico (min.) 4.6 11.2 16 6.1

(Tenga en cuenta que la anchura del pico w = 4 t asumir picos de Gauss).
a. Calcular los valores de la resolucin, R s, para cada caudal. Comentarios sobre la capacidad para
lograr tanto un alto rendimiento y alta pureza en cada caso.
segundo. En el caso de Q. = 2 ml / min, suponga que recoja dos fracciones del flujo
continuo: de 35 a 40 minutos, y de 40 a 45 minutos. Usted desea que decidir entre
mantener slo la primera fraccin (que contar con la mayor concentracin de B, C B), o la
puesta en comn de las dos fracciones en conjunto (como si que busc desde 35-45 minutos). Estimar las siguientes relaciones:
Rendimiento B (35-45 ') / Rendimiento B (35-40')
C B (35-45 ') / C B (35-40')
(ver ms arriba para erf (x) vs. x parcela).