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Cultivo de Parasitos PCribb 15-05 PDF
Cultivo de Parasitos PCribb 15-05 PDF
Comensales
No es anormal tenerlos.
Reflejan contaminacin fecal del medio.
Se deben informar en el examen de laboratorio.
No requieren terapia farmacolgica
Algae
Slime molds Flagelata
Protista
Protozoo Sarcodina
Ciliata
Esporozoa
Cestodes
Plathelmintos
Helmintos Trematodes
X Nematoda
Animalia
X Acanthocephala
Arthropoda
X
Cuando se requiere un nmero importante de
parsitos libre de contaminantes bacterianos o de
materiales del hospedador
Para estudiar la bioqumica, morfologa, fisiologa y metabolismo de los
parsitos
Para obtener informacin acerca del desarrollo y las necesidades
nutricionales del parsito
Para estudios de infeccin controlados
Para el diagnstico de algunas parasitosis: como complemento de otros
mtodos, para la produccin de antgenos / anticuerpos usados en
ensayos inmunolgicos.
Para el screening de drogas, para diferenciar aislamientos resistentes o
susceptibles a determinado agente quimioteraputico
Para estudios epidemiolgicos, para diferenciar distintos aislamientos
Para la produccin de vacunas
En general el cultivo de estos organismos se utiliza ms en
investigacin y docencia y no tanto con fines diagnsticos.
axnico: el parsito crece en ausencia de ninguna otro
tipo de clula
xnicos: el parsito se crece en presencia de una
microbiota indefinida (ej: cultivo primario de parsitos a
partir de muestras de MF)
monoxnicos: el parsito crece en presencia de una
nica especie adicional (ej. aislamiento Acanthamoeba
de biopsias de crnea en presencia de E. coli)
polixnicos: el parsito crece junto a otros organismos,
pero todos ellos de identidad conocida
in vitro
in vivo
Caractersticas Numerosas variables
propias a considerar para
de los parsitos el cultivo
Cultivos Axnicos:
Primera vez logrado por Diamond en 1961 en un medio bifsico complejo
1968: Medio monofsico TP-S-1 (Diamond
1978: Medio monfsico TYI-S-33* (Diamond et al.)
Medio de cultivo axnico casero PEHPS, con extractos de hgado y
pncreas, es una alternativa a los medios comerciales (Said-Fernandez et
al.1988)
Cultivos Clonales:
Obtencin de colonias clonales en agar (Gillin y Diamond,1978; Mueller y
Petri, 1995)
Micromanipulacin para obtener clonar cultivos xnicos (Farri 1978) y
axnicos (Diamond et al. 1976)
* Medios ms usados actualmente
La axenizacin de cultivos de E. histolytica es un proceso largo y
demandante, donde un cultivo xenico es primeramente
adaptado al crecimiento monoxnico, generalmente con un
kinetoplstido como organismo aociado, y luego es llevado de
un estilo de vida fagoctico a uno donde los nutrientes son
obtenidos por pinocitosis. Todo el proceso suele durar meses
Protocolos disponibles:
Diamond, L. S. (1995) "Cryopreservation and storage of
parasitic protozoa in liquid nitrogen. J Euk Microbiol 42(5):
585-590"
Samarawickrema, N. A., et al. (2001) "A rapid-cooling
method for cryopreserving Entamoeba histolytica. Ann.
Trop. Med. Parasitol. 95(8): 853-855.
http://entamoeba.lshtm.ac.uk/maintain.htm
QUISTE: forma infectante Estudio del enquistamiento
es importante para el control de infecciones y como
blanco para el diseo de drogas
Dobell y Laidlaw 1926: describen aumento en el nmero de quistes al
cultivar sin almidn por algunas generaciones y luego crecidos con
almidn. Sin embargo los resultados eran muy aleatorios y poco
reproducibles.
A diferencia de otros protozoos parasitos como Giardia y otras amebas
que son inducidos a enquistar bajo condiciones definidas in vitro, para
E. histolytica no se conocen las seales que gatillan el enquistamiento
Solo se han obtenido in vitro algunas estructuras similares a quistes (CLS)
exponiendo trofozoitos axnicos a diversos estmulos:
CO2 y Glc
mezcla de suero bovino, Glc, tetraborato de Na,vitaminas, PO4, CaCl2, extractos de
higado y pncreas
combinacin de cofactores de quitina sintasa (Mg++, Mn++, Co++)
H2O2 y cationes divalentes
1920: Nace en Philadelphia, Pensylvania
1957: TYM, The most widely used medium for
the axenic cultivation of trichomonads
1961: First axenic cultivation of Entamoeba histolytica
1964: Cryopreservation and recovery of protozoa from liquid
nitrogen
1968: TPS-1, First monophasic medium for the axenic cultivation
of Entamoeba histolytica
1972: Viruses of Entamoeba histolytica
1978 - TYI-S-33: The most widely used medium for the axenic
cultivation of Entamoeba histolytica
1989: Description of ribosomal DNA plasmids in Entamoeba
histolytica
1993: Redescription of Entamoeba histolytica to distinguish it from E.
dispar
Protozoo flagelado
(Diplomonadida)
Ciclo de vida simple: forma
replicativa (trofozoto) y
forma de resistencia
(quiste).
Forma infectante: QUISTE
Transmisin por ingestion de
quistes en agua o alimentos
contaminados con materia
fecal (MF)
Tratamiento: metronidazol
(Flagyl)
1960,Karapetyan: Primera vez crecido en un cultivo con Candida
guilliermondi y fibroblastos
1962,1970,1976: Cultivos monoxnicos
1979, Bingham y Meyer: cultivo axnico directo a partir del
desenquistamiento inducido por HCl (pH2)
1980,Visvesvara: cultivo axnico de Giardia en medio de
Diamond TP-S-1. Crece mejor en medio filtrado que atoclavado.
1983, Keister: Cultivo en TYI-S-33 modificado con el doble de
contenido de Cys y bilis*
Tb se han descripto medios sin suero (Wieder et al. 1983)
Medio casero PEHPS modificado (Vargas-Villarreal et al. 2014)
Gullin y Diamond (1980):Mtodo p obtencin de clones como
colonias en agar.
Medios enquistamiento y desenquistamiento en cultivos axnicos