Tema 8. Aplicaciones analticas. Biosensores.

1. Introduccin

Los biosensores son dispositivos que permiten detectar y cuantificar una molcula biolgica en un
entorno determinado. Pueden basarse en actividad enzimtica o en las propiedades de unin
especfica (analito-protena). Son
pequeos aparatos donde hay presente un
sensor que va a interaccionar de alguna
forma con algn sustrato o molcula que
queramos detectar y esa deteccin la va a
realizar normalmente un elemento
biolgico (clula, enzima...). Lo
importante es que podamos conectar ese
elemento con un dispositivo electrnico
que nos de una lectura cuantificable y en
tiempo real de lo que est sucediendo.
Pueden clasificarse:

Por tipo de receptor: Por tecnologa del transductor:

Enzimticos Calorimtricos
Afinidad pticos
Anticuerpos Colorimtricos
Interaccin protena Fluorimtricos
Interaccin cidos nucleicos Resonancia plasmones
Interaccin lpidos Piezoelctricos
Clulas completas Electroqumicos
Microorganismos Potencimetros
Tejidos Ampermetros
Impedancia

2. Biosensor calorimtrico y enzimtico

A: muestra G. termistor
B: recipiente aislado H: salida
C: intercambiador de calor I: dispositivo electrnico
D: bloque de aluminio mide la diferencia de
E: termistor de referencia resistencia entre los termistores
F: biorreactor empaquetado 1 mL

a) Sensor para pesticidas basado en inhibicin enzimtica

Acetilcolinesterasa: Acetilcolina + H2O Colina + acetato

Un ejemplo clsico es un sensor basado en la enzima acetilcolinesterasa. Es una enzima fcil de

aislar, resistente y su reaccin emite calor. Nuestro reactor es capaz de detectar un cambio de
temperatura. La enzima est inmovilizada en una columna a travs de la cual se pasa la mezcla que
se quiere analizar. Si se produce la reaccin, que es exotrmica, puede medirse.

Apuntes descargados de wuolah.com

Biosensores basados en la inhibicin de la acetilcolinesterasa detectan insecticidas fosforados y
otros inhibidores. Estos insecticidas matan a los insectos inhibiendo a dicha enzima, causando un
bloqueo del impulso nervioso y parlisis.

Para ver si se produce la reaccin, se inyecta la muestra (insecticida) junto con acetilcolina como
sustrato y se ve si se produce o no la reaccin. Si esta no tiene lugar, querr decir que hay pesticidas
presentes que estn inhibiendo la reaccin. Si se produce, veremos un aumento del calor.

El cambio de temperatura es siempre proporcional a la actividad enzimtica

producida, por lo que nos aportar un dato casi cuantitativo de la cantidad de
inhibidor de la muestra. Se mide la resistencia elctrica teniendo en cuenta la
siguiente frmula:

Para construir el sistema necesitamos que est aislado del exterior para que la temperatura no se vea
influida. El lector permitir medir las diferencias que nos dar un dato numrico que nos aportar la
informacin que buscamos. Con una columna de 1 mL sera suficiente.

3. Biosensores pticos

a) Biosensores FRET: basados en el cambio conformacional (protena, DNA, RNA) tras la unin
de una molcula diana. Puede utilizarse protenas unidas a fluorforos, metaloprotenas, protenas
con grupos indicadores internos... Se harn medidas que permitan asociar la unin del ligado al
cambio conformacional.

Protena unida a fluorforos: protena de unin a maltosa (periplasma de bacterias). No tiene

actividad enzimtica, se trata de una protena de transporte. Al unir la maltosa experimenta un
cambio conformacional, con la consiguiente compactacin de la protena. Si colocamos dos
molculas fluorescentes una en N-t y otra en C-t, al unirse a la maltosa la distancia cambia, y
cambia la fluorescencia observada.

Se ilumina a la luz de excitacin y se registra la luz de emisin de la muestra, mostrando la

transferencia de energa de la muestra. Esa emisin de fluorescencia es proporcional a
la concentracin de maltosa en el medio.

Metaloprotenas: se puede hacer con estructuras de tipo dedo de zinc. Al introducir

calcio la configuracin de la protena cambia. Tambin se podra hacer un biosensor de
calcio con una estructura calmodulina.

b) Resonancia superficial de plasmones (Surface plasmon resonance)

Ms utilizado a nivel de laboratorio aunque empieza a utilizarse en

biosensores industriales (equipo delicado y costoso). Estos sistemas se
basan en una propiedad de los metales por la cual, si iluminas una placa
de metal (ej, oro) con luz polarizada, se refleja. Si unimos a la lamina
metlica por el lado no iluminado una molcula que incremente su
masa, el ngulo con el que se
refleja la luz polarizada vara.
Ese cambio en la luz reflejada
se debe al cambio en el estado de la materia (plasmones). A
ms masa unida, ms cambio se produce en el ngulo
reflejado de la luz polarizada. Ej: se fijan anticuerpos a la
superficie y se pasa una muestra. Si esta tiene un virus, el
virus se une, cambia la masa y se detecta la interaccin.
4. Biosensores piezoelctricos

En lugar de utilizar un metal y su propiedad de reflexin de la luz polarizada, se emplean cristales

con propiedades piezoelctricas. A dichos cristales si se les pasa una intensidad de electricidad
sobre l vibran con una frecuencia determinada, muy constante. Los cristales piezoelctricos vibran
con una frecuencia de resonancia (f, Hz) proporcional a la masa que est unida a ese cristal y de
forma inversamente proporcional al rea al que est unida la masa, y por lo tanto vara cuando se
adsorben o separan molculas a la superficie del cristal.

f: variacin en la frecuencia de resonancia (Hz)

m: variacin de la masa del material adsorbido
f: frecuencia del cristal (para un cristal de cuarzo de 1 mm de grosor= 1,66 MHz)
K: constante dependiente del tipo de cristal
A: rea del electrodo (cm2)

Aplicacin: deteccin de antgenos en suero.

5. Biosensores electroqumicos

Medida de seal elctrica directa del elemento biolgico al transductor. Suelen llevar electrodos que
se unen a la parte biolgica. Clasificacin:

Por tipo de electrodo: potenciomtricos, amperomtricos

Por clase de interaccin: enzimticos, de afinidad (Ab, unin a protena, aptmeros).

a) Potenciomtricos: miden potencial elctrico entre dos electrodos. Cambio en la concentracin

de protones en el medio. Se recubre la sonda del electrodo con una membrana semipermeable y
poner la enzima entre ambas, de forma que quede atrapada. Tipos:

Electrodos de vidrio para cationes: el elemento sensor

es una membrana de vidrio que genera un potencial
elctrico debido a la competicin entre cationes por los
sitios de unin especficos.
Electrodos de vidrio recubiertos por membrana
permeable a gases selectiva para CO2, NH3 o H2S. La
difusin del gas produce un cambio de pH que detecta
el electrodo
Electrodos slidos donde la membrana de vidrio es
reemplazada por un conductor especfico hecho de una mezcla de sulfuro de plata y haluro
de plata. Sensible a I- en la reaccin de la peroxidasa y a iones cianuro
Potencimetros de primera generacin

Son muy rudimentarios y suelen ir coplados a un pHmetro, que es bsicamente un dispositivo que
mide diferencias de potencial entre nuestro electrodo sonda y nuestro electrodo de referencia.
Miden reacciones que implican la liberacin o absorcin de iones, que pueden ser utilizados por
biosensores potenciomtricos. Correlacin de la concentracin de sustrato o producto con la
cantidad de protones en el medio.

b) Amperomtricos: miden el cambio de intensidad de corriente al aplicar un potencial constante

entre dos electrodos.

Electrodos de oxgeno (1 generacin)

Este sera un electrodo primitivo para medir glucosa usando

glucosa oxidasa que cataliza la reaccin: D-glucosa + O2
gluconolactona + perxido de H. Si colocamos la reaccin en un
medio en el que tenemos dos electrodos y hacemos pasar una
corriente elctrica se cumplen dos reacciones, una en el ctodo y
otra en el nodo. Al mirar la reaccin global, vemos que el oxgeno se
consume durante la reaccin, por lo que se ve una reduccin de la intensidad.
Al aadir glucosa se ve una bajada en la
corriente elctrica registrada. A mayor
concentracin de glucosa, habr mayor bajada
de la intensidad de corriente. Los electrones que
se producen con el consumo de glucosa son los
que se proporcionan al electrodo.

Transferencia de electrones desde H2O2

Es otro tipo de biosensor amperomtrico. Los electrones pasan directamente al electrodo, a partir de
un dador de electrones con una alto potencial de oxidacin. Hacen falta unos electrodos que
capturen esos electrones muy eficientemente de forma directa (de platino, caro).
En el caso de la glucosa oxidasa, la oxidacin de
la glucosa reduce el FAD a FADH2, que puede
reducir el O2 dando lugar a H2O2. De esta forma,
se produce un mol de H2O2 por cada mol de
glucosa, por lo que si medimos la cantidad de
H2O2 sabemos la cantidad de glucosa. El agua
oxigenasa puede oxidarse a 2H+ y O2,
transfiriendo los electrones generados
directamente al electrodo.
 Detectores amperomtricos de 2 geneneracin

No requieren electrodos de platino. Actualmente se acopla la reaccin con un aceptor redox que si
permita dar electrones a otros materiales ms econmicos (Au, Ag, grafito), permitiendo registrar el
consumo de glucosa en el electrodo. Como dador de electrones se emplea ferroceno (con alto
potencial de oxidacin) o nitrosoanilina.

Ejemplo: Sensor de glucosa subcutneo para su empleo por personas diabticas basado en un
sensor de glucosa oxidasa. Pequeo tubo que tiene en uno de los extremos varias capas de material
y una de ellas tiene glucosa oxidasa. El sensor est
en el interior y funciona como un electrodo y
manda una seal a un receptor que est fuera del
cuerpo.