Degradacin en los lisosomas

(Pollard T., Earnshaw W., Lippincott-Schwartz J., Johnson G., 2017. Cell Biology, Third edition. Elsevier, Inc.)

Los lisosomas, los principales orgnulos digestivos, contienen por lo menos 60 enzimas hidrolticas distintas,
incluyendo proteasas, peptidasas, fosfatasas, lipasas, fosfolipasas, glicosidasas, sulfatasas y nucleasas. Las
hidrolasas lisosmicas son marcadas en el aparato Golgi con grupos de manosa-6-fosfato en sus
oligosacridos ligados al extremo N. Los receptores de manosa-6-fosfato de la red trans-Golgi desvan
entonces las hidrolasas marcadas a los endosomas y lisosomas. La mayora de las hidrolasas lisosomales se
sintetizan como precursores inactivos y se activan mediante protelisis al llegar a los lisosomas. El pH bajo de
los lisosomas, mantenido por la bomba de protones v-ATPase (ver Fig. 14.6), es esencial para una degradacin
eficiente.

FIGURA 14.6 ESTRUCTURA DE LA TRIFOSFATASA DE ADENOSINA TIPO V DE LEVADURA

La mayora de las enzimas lisosmicas tienen una actividad hidroltica mxima con un pH de 4 a 5 en lugar de
un pH citoplasmtico de 6,5 a 7,0. En estas condiciones, algunas de las hidrolasas llevan una carga positiva y
se adhieren a las bicapas lipdicas de las membranas lisosomales. Esto los hace ms resistentes que la
mayora de las macromolculas no lisosomales al ambiente hostil. Las hidrolasas lisosmicas degradan las
protenas, lpidos y cidos nucleicos a aminocidos, lpidos, azcares y nucletidos que son transportados a
travs de la membrana lisosomal hasta el citoplasma, donde son reutilizados para sintetizar nuevas
macromolculas.
Los lisosomas degradan los sustratos que se originan tanto en el exterior como en el interior de la clula. Los
sustratos extracelulares introducidos en la clula por endocitosis se trasladan a los lisosomas a travs de la
va endoctica. Los lisosomas tambin degradan los constituyentes celulares, lo que representa entre el 50% y
el 70% del volumen de recambio de protenas celulares. Los sustratos citoplasmticos se transportan a los
lisosomas mediante autofagosomas especficos y por captacin directa del citoplasma en un proceso
denominado autofagia. En ciertas lneas celulares hematopoyticas, los lisosomas tambin pueden actuar
como organelas secretoras.
El rol esencial de los lisosomas como sitio primario para la degradacin constitutiva es evidenciado por las ms
de 50 enfermedades humanas distintas de almacenamiento lisosmico (Apndice 23.1). Los pacientes con
estas enfermedades carecen de la funcin de uno o ms hidrolasas lisosmicas, protenas de membrana u
otros factores involucrados en la funcin lisosmica. En consecuencia, el material no digerido se acumula en
los lisosomas (Fig. 23,4). Esto interrumpe la homeostasis y puede matar a la clula. Las manifestaciones de
las enfermedades de almacenamiento lisosomal son extremadamente complejas, y aunque aproximadamente
dos tercios de los pacientes sufren de una serie de sntomas neurolgicos, cualquier sistema orgnico puede
verse afectado por estas enfermedades.
FIGURA 23.4 MICROGRAFA ELECTRNICA DE LOS LISOSOMAS ABNORMALES EN LAS NEURONAS DE UN PACIENTE CON
GANGLIOSIDOSIS GM1. Lisosomas similares, llamados cuerpos citoplasmticos membranosos, se acumulan en las neuronas de los
pacientes con gangliosidosis GM2. (Enfermedad de Tay-Sachs).

El suministro de lisosomas a travs de la va endoctica

La degradacin lisosomal de las protenas de la membrana plasmtica internalizadas por endocitosis
desempea un papel importante en la remodelacin de la membrana plasmtica en respuesta a diversos
estmulos. Por ejemplo, la vida media del receptor para el factor de crecimiento epidrmico (EGF) es
normalmente de aproximadamente 10 horas. Sin embargo, cuando el EGF circulante se une, el receptor
activado es internalizado y degradado ms eficientemente en lisosomas con un tiempo de vida media inferior
a 1 hora. Esto subregula la respuesta biolgica (Fig. 23.5; vase tambin la Fig. 27,6).
La degradacin de los lpidos y protenas de membrana en los lisosomas plantea un problema topolgico, ya
que la fusin de los lisosomas con otros compartimentos de membrana simplemente fusionara las dos
membranas. Este problema se resuelve mediante la segregacin de los componentes a degradar en regiones
de membrana que se convierten en endosomas, formando las vesculas o tbulos intraluminales de los cuerpos
multivesiculares (ver Fig. 22.13). La fusin de un cuerpo multivesicular con un lisosoma suministra las vesculas
intraluminales al lumen del lisosoma para su digestin (figura 23,5).
Los cuerpos multivesiculares se forman mediante un proceso de clasificacin en endosomas. Las protenas
destinadas a la degradacin se marcan con molculas de ubiquitina nica, un proceso distinto de la reaccin
de poliubiquitinacin requerida para dirigir a los proteasomas. Estas protenas no-ubiquitinadas se juntan en
endosomas mediante protenas ubiquitinizantes, que se localizan mediante la interaccin con fosfatidilinositol
3-fosfato (PI3-P) formado por PI3-quinasa (ver Fig. 26.7). Una secuencia de complejos ESCRT multiprotenas
(complejo endosmico requerido para el transporte [Fig. 22.13]) concentra an ms las protenas
monoubiquitinadas en las regiones membranas que se adhieren al interior de la vescula. Los complejos de
ESCRT se unen inicialmente a la monoubiquitina, pero posteriormente reclutan enzimas que eliminan y reciclan
la ubiquitina. La constriccin de los cuellos de las yemas impulsadas por el ensamblaje de filamentos
helicoidales del complejo ESCRT-III libera las vesculas intraluminales en el interior del endosoma, creando un
cuerpo multivesicular. Curiosamente, el brote de un nmero de virus, incluyendo el bola y el VIH-1, el virus
que causa el SIDA, se asemeja al proceso de formacin del cuerpo multivesicular. De hecho, el VIH secuestra
dos de los complejos de ESCRT para este propsito.
FIGURA 22.13 CLASIFICACIN DE PROTENAS EN CUERPOS MULTIVESICULARES. A, los MVBs acumulan pequeas vesculas y
tbulos dirigidos a la degradacin lisosmica por invaginacin de la membrana limitante. La formacin y clasificacin de MVB requiere
interacciones entre varias protenas. Las interacciones con Vps/Hrs clasifican los receptores ubiquitinados que se clasifican en MVBs. A
continuacin, el receptor ubiquitinizado es trasladado a ESCRT-I mediante una interaccin entre Hrs y la subunidad Vps23 de ESCRT-I.
El receptor se reenva entonces a ESCRT-II y luego a ESCRT-III. La invaginacin de una vescula intraluminal que contiene el receptor es
mediada a travs de la polimerizacin de los complejos ESCRT-III, que son protenas pequeas y altamente cargadas en forma de espiral.
Un AAA ATPase, Vps4, desmonta las subunidades ESCRT multimricas, permitiendo su reutilizacin.

FIGURA 23.5 REGULACIN DEL RECEPTOR. A, Para limitar el curso temporal de la estimulacin del factor de crecimiento epidrmico
(EGF), los receptores EGF activados son internalizados y entregados a los endosomas y secuestrados con otras protenas de la membrana
para ser destruidos dentro de vesculas intraluminales que se acumulan para formar cuerpos multivesiculares. Las protenas destinadas a
la internalizacin y destruccin estn marcadas con molculas de ubiquitina nica. La clasificacin de las protenas ubiquitinizadas y la
invaginacin de la membrana endosmica tarda son impulsadas por los tres complejos ESCRT (complejos de clasificacin endosomal
requeridos para el transporte). Las ubiquitinas son recicladas antes de su brotacin en el interior del cuerpo multivesicular despus de su
fusin con lisosomas, proteasas lisosmicas y lipasas aseguran que tanto los dominios extracelulares como citoplasmticos del receptor
EGF se degraden junto con las vesculas intraluminales. Las protenas citoslicas tambin se incorporan en las vesculas internas de los
endosomas tardos multivesiculares y se degradan en un proceso constitutivo denominado microautofagia. B. Micrografa electrnica del
receptor EGF etiquetados con anticuerpos marcados con oro en endosomas multivesicular fusionndose con un lisosoma.

Autofagia
La macroautofagia, la microautofagia y la autofagia mediada por chaperona son procesos que conducen a la
descomposicin de los componentes citoplasmticos dentro de los lisosomas.
La autofagia evolucion primero como una defensa de los organismos unicelulares contra el hambre, pero
ahora tiene funciones clave en la homeostasis celular.
La macroautofagia (generalmente llamada autofagia) involucra el envolvimiento de grandes regiones de
citoplasma. Una seal de iniciacin conduce a la formacin de una membrana especializada en asociacin
con una carga especfica. Esta membrana se expande, se riza y se sella, encerrando la carga y formando un
autofagosoma de doble capa, que luego se fusiona con un lisosoma, dando lugar a la degradacin y al
reciclaje final de todos los contenidos internos (Fig. 23.6). La carga puede incluir grnulos de glucgeno,
ribosomas e incluso organelas como mitocondrias y peroxisomas.
FIGURA 23.6 MICROGRAFA ELECTRNICA DE UN AUTFAGOSOMA.
Del hgado de rata desnutrida se desprende un autofagosoma que contiene una mitocondria en el proceso de fusin directa con un lisosoma
secundario.

Las pruebas genticas en levaduras en brotacin han identificado 36 genes llamados Atg requeridos para la
formacin y desarrollo de autofagosomas. Aunque an se estn determinando los detalles, parece que el
proceso puede iniciarse en ms de un sitio en el citoplasma, incluyendo los sitios de salida de ER, ER,
mitocondria o trans-golgi. All, numerosas vesculas pequeas que contienen la protena de membrana Atg9,
interactan con el complejo de andamios multiprotenas Atg1/ULK para fusionarse, formando una lmina de
membrana aplanada. Esta membrana se riza para formar una estructura parecida a una copa, el fagforo,
que crece y finalmente se sella para formar un autofagosoma de doble membrana (Fig. 23.7).
Dos sistemas similares a la ubiquitina reclutan componentes para el fagforo en crecimiento. Uno conjuga Atg8
con fosfatidiletanolamina,
anclndolo a la superficie de la membrana, donde recluta otras vesculas de membrana al fagforo. El otro
forma un conjugado de dos protenas Atg que reclutan otros componentes de la va al fagforo. Ambas
reacciones de conjugacin utilizan una cadena de enzimas anlogas a las que se asocian con la ubiquitina a
sus protenas diana (vea ms adelante).
La fusin de una vacuola autofgica naciente con endosomas y lisosomas tardos involucra una protena
SNARE (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor [NSF] attachment protein receptor) (ver la Fig. 21.15) y forma
un autolisosoma con hidrolasas cidas en el lumen. Estos degradan el contenido, incluyendo la membrana
internalizada, liberando aminocidos, lpidos, azcares y nucletidos de nuevo al citoplasma (Fig. 23.7). La
etapa final de un autolisosoma es un cuerpo residual con un ncleo denso de material no degradado. El proceso
de formacin y degradacin de vacuolas autofgicas en el hgado requiere menos de 15 minutos.

FIGURA 23.7 LAS CUATRO ETAPAS DE LA AUTOFAGIA. A, Se forma una membrana fagofrica que envuelve una regin de citoplasma
que contiene protenas diana y orgnulos. B, la fusin de membrana resulta en la formacin de un autofagosoma naciente. C, El
autofagosoma naciente se fusiona con un lisosoma primario o secundario, el cual suministra enzimas hidrolticas que degradan el contenido
del autofagosoma. D. Materiales no digeridos que permanecen en los cuerpos residuales

La macroautofagia est regulada por mTor, que fosforila tanto el regulador transcripcional maestro, TFEB,
como los componentes clave de Atg. Las seales intracelulares que desencadenan la macroautofagia estn
ligadas a los niveles intracelulares de determinados aminocidos. Los aminocidos y algunas hormonas
peptdicas circulantes son potentes inhibidores de la autofagia, promoviendo tanto el secuestro citoplasmtico
de TFEB como la fosforilacin (y la inactivacin) de Atg1. La inanicin aumenta los niveles circulantes de la
hormona glucagn, que libera TFEB y tambin conduce a la defosforilacin de Atg1 y estimula la autofagia en
las clulas hepticas. La alimentacin produce la reaccin opuesta debido a la accin de la insulina (ver Fig.
27.7), y en ltima instancia reduce la autofagia.
La levadura en ciernes utiliza la autofagia como va de supervivencia celular durante el hambre, pero la
autofagia puede matar algunas clulas. Por ejemplo, la autofagia puede llevar a la muerte cuando una clula
recibe un insulto letal en condiciones en las que las vas apoptticas (ver Captulo 46) no son funcionales.
La autofagia tambin ha estado implicada en los programas de desarrollo de una serie de organismos
superiores y en la destruccin de agregados proteicos intracelulares. Los agregados protenicos y los orgnulos
daados, como las mitocondrias, son marcados con ubiquitina y reconocidos por uno de los dos receptores de
la autofagia que unen las vesculas que contienen ubiquitina y Atg8. Esto produce una envoltura por crecimiento
membranas fagforas, y la liberacin hacia los autolisosomas a travs de la autofagia.
La microautofagia es un subproducto de la formacin del cuerpo multivesicular (Fig. 23.5; vase tambin la
Fig. 22.13). Se capturan pequeos volmenes de citoplasma en las vesculas y tbulos intraluminales que
invaginan dentro de las membranas endosomales o lisosmicas. Los componentes citoplasmticos son
degradados a medida que las vesculas que los rodean son consumidas.
No todas las protenas de las vesculas intraluminales se eligen al azar; algunas protenas citoslicas se
seleccionan, empaquetan y suministran a los lisosomas por esta va.
Cuando est hambriento de glucosa, Saccharomyces cerevisiae expresa varias enzimas citoplasmticas y
transportadores de membranas que se requieren para procesar azcares ms complejos.
Cuando la glucosa est disponible, la levadura cambia las vas metablicas y degrada las enzimas que ya no
necesita. Los transportadores en la membrana plasmtica son internalizados y entregados a la vacuola (el
equivalente de lisosoma de levadura) a travs de la formacin de cuerpos multivesiculares y microautofagia.
Las enzimas citoplasmticas innecesarias son empaquetadas selectivamente en pequeas vesculas que
entregan su contenido a la vacuola por fusin.
La autofagia mediada por chaperonas (CMA) es un mecanismo de control de calidad para eliminar las protenas
citoplasmticas solubles que se doblan o ensamblan incorrectamente. El proceso selecciona para su
degradacin el 20% a 30% de las protenas citoplasmticas con la secuencia lineal objetivo KFERQ.
El acompaante molecular Hsc70 reconoce KFERQ cuando la protena se despliega o -si la protena es parte
de un complejo- no est asociada con sus socios normales.
Hsc70 une y escolta la protena a los lisosomas donde una protena de membrana integral la transfiere a travs
de la membrana ayudada por un segundo chapern que funciona dentro del lisosoma. La inanicin prolongada
tambin activa el CMA, aparentemente para suministrar a las clulas aminocidos para la sntesis de protenas
esenciales. Tanto en la enfermedad de Parkinson como en la de Alzheimer, las neuronas acumulan protenas
con secuencias KFERQ, por lo que los defectos en la AMC pueden contribuir a estas enfermedades
neurodegenerativas. La CMA es incapaz de combatir esas enfermedades una vez que comienzan, ya que el
proceso funciona slo con protenas solubles y no con protenas en complejos o agregados citoplasmticos.