Cabrera Rendn Citlalli Odaliz y Plata Ortiz Mario Alberto

Grupo: 4QM2 Seccin:4

Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas
Laboratorio de Bioqumica General
Prctica: Efecto de la temperatura sobre la velocidad de reaccin

Objetivos

Se demostr el efecto de la temperatura sobre la velocidad de reaccin de la enzima invertasa por mtodo
colorimtrico.
Se determin la Q10 de la enzima Invertasa.
Se calcul la velocidad inicial de la enzima invertasa.
Se determin la energa de activacin de la invertasa teniendo como sustrato la sacarosa.
Se determin de la temperatura optima de la enzima invertasa.
Resultados:
Como parte experimental se obtuvieron los siguientes clculos para determinar la velocidad inicial de la reaccin
enzimtica, con ayuda de los valores de la curva tipo de azucares reductores, tomando los valores de a y b
de la ecuacin de la recta Y= a+bx. Tambin tomando en cuenta la tabla de absorbancia siguiente (Fig.1).

Problema 1 Problema 2 Problema 3 Problema 4 Problema 5 Problema 6

Absorvancia 0.062 0.094 0.118 0.388 0.037 0.003
Azucar 1.03257 1.36429 1.61308 4.412 0.77345 0.42095
reductor(moles)
Fig. 1. Tabla de resultado de absorbancia y azcar reductor (moles).

a= -0.037608247 b= 0.096465979 r= 0.99264532

Calculo de moles:
Abs = a+b(moles)
Absa
moles =

Problema 1 Problema 2
0.062(0.037608247) 0.094(0.037608247)
moles = 0.096465979
= 1.03257 moles moles = 0.096465979
= 1.36429 moles

Problema 3 Problema 4
0.118(0.037608247) 0.388(0.037608247)
moles = 0.096465979
= 1.61308 moles moles = 0.096465979
= 4.412 moles
Problema 5 Problema 2
0.037(0.037608247) 0.003(0.037608247)
moles = 0.096465979
= 0.77345 moles moles = 0.096465979
= 0.42095 moles

Calculo de velocidad inicial Vo:

moles
Vo=

Problema 1 Problema 2
1.03257 1.36429
Vo= = 0.103257 Vo= = 0.136429
25 25
 Problema 3 Problema 4
1.62308 4.412
Vo= = 0.16308 Vo= = 0.4412
25 25
Problema 5 Problema 6
0.77545 0.42095
Vo= 25 = 0.0.077545 Vo= 25 = 0.042095

Teniendo estos datos se determin el grafico del efecto de la temperatura sobre la velocidad de reaccin (Fig.
2) mostrando el incremento de actividad hasta 37C que es su temperatura optima de la enzima, despus de
esta temperatura inicia un descenso en la actividad, reconociendo la desnaturalizacin de esta protena.

Efecto de la temperatura sobre la velocidad de reaccin

0.5
0.45 Velocidad optima
0.4
0.35
0.3
Vo

0.25
0.2 Efecto de la temperatura sobre la
velocidad de reaccin
0.15
0.1
0.05 Desnaturalizacin
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Temperatura

Fig. 2. Grafica del efecto de la temperatura en la velocidad de reaccin denotando la temperatura optima de la invertasa y
la zona de desnaturalizacin.

Siguiendo con el contenido de resultados experimentales se determin la Energa de activacin de la

invertasa, as como su grfico (Fig. 4). Representando
Datos:
a= -0.037608247 b= 0.096465979 r= 0.99264532

Calculo de moles de acuerdo a la interpolacin de diferentes temperaturas:

Valores de la interpolacin:

0C 5C 10C 15C 20C 25C 30C 35C 40C 45 50C

0.062 0.075 0.080 0.085 0.90 0.094 0.110 0.120 0.150 0.310 0.388

Abs = a+b(moles)
Absa
moles =

A 5C A 30C
0.075(0.037608247) 0.110(0.037608247)
moles = = 1.16733moles moles = = 1.53015 moles
0.096465979 0.096465979

A 10 C A 35C
0.080(0.037608247) 0.120(0.037608247)
moles = 0.096465979
= 1.21916 moles moles = 0.096465979
= 1.63382 moles
A 15C A 40 C
0.085(0.037608247) 0.150(0.037608247)
moles = 0.096465979
= 1.27099 moles moles = 0.096465979
= 1.94481 moles
A 20C A 45C
0.090(0.037608247) 0.310(0.037608247)
moles = 0.096465979
= 1.32283 moles moles = 0.096465979
= 3.60342 moles

A 25C A 50C
0.094(0.037608247) 0.388(0.037608247)
moles = 0.096465979
= 1.36429 moles moles = 0.096465979
= 4.412003 moles

Calculo de velocidad inicial Vo:

moles
Vo=

A 5C A 30C
1.16733 1.53015
Vo= = 0.116733 Vo= = 0.153015
25 25
A 10C A 35C
1.21916 1.63382
Vo= =0.121916 Vo= =0.163382
25 25
A 15C A 40C
1.27099 1.94481
Vo= = 0.127099 A Vo= =0.194481
25 25

A 20C A 45C
1.32283 3.60342
Vo= = 0.132283 Vo= =0.360342
25 25

A 25C A 50C
1.36429 4.412003
Vo= =0.136429 Vo= =0.4412003
25 25

Temp. C T (K) 1/T (K) Vo Ln Vo

0 273 0.003663 0.103257 -2.27053425
5 278.15 0.00359518 0.116733 -2.147866
10 283.15 0.0035317 0.121916 -2.104423
15 288.15 0.00347041 0.127099 -2.06278897
20 293.15 0.00341122 0.132283 -2.02281171
25 298.15 0.00335402 0.136429 -1.99195095
30 303.15 0.0032987 0.153015 -1.87721932
35 308.15 0.00324517 0.163382 -1.81166426
40 313.15 0.00319336 0.194481 -1.63742081
45 318.15 0.00314317 0.360342 -1.0207017
50 323.15 0.00309454 0.4412003 -0.81825631
Fig. 3. Tabla del clculo de datos de la velocidad inicial y la temperatura con su respectiva conversin en
grados kelvin.
 Grafica de Arrhenius
0
-0.20.003 0.0031 0.0032 0.0033 0.0034 0.0035 0.0036 0.0037
-0.4
-0.6
-0.8
ln Vo

-1
-1.2
-1.4
-1.6
y = -2296.2x + 6.6044
-1.8
R = 0.8011
-2
1/T (K)

Series1 Linear (Series1)

Fig. 4 Grafica de Arrhenius ln (Vo) vs 1/T.

Calculo de la energa de activacin:

b=
Ea= - (b)(R) Ea= -(-2296.2)(1.987 )

Ea= 4562.5494

Determinacin de la Q10

15 0.241689 25 0.276429
Q10= 5
= 0.216733 = 1.115146286 Q10= 15 = 0.241689 = 1.143738441
35 0.323382
Q10= 25 = 0.276429 = 1.169855551

Discusin:
De acuerdo a los resultados obtenidos se pudo observar en primera instancia el comportamiento de la grfica
con base a la temperatura y a la velocidad inicial ; pudindonos percatar de que al aumentar la temperatura de
la reaccin catalizada por la enzima invertasa se observa un incremento de la velocidad de reaccin hasta
llegar a los 50C donde se observa su mxima actividad, sin embargo al sobre pasar esta temperatura sta
decae abruptamente, debindose a que, las enzimas son protenas y estas a cierta temperatura se
desnaturalizan y perdiendo su funcin. Esta dependencia de que dicha velocidad aumenta con la temperatura
se ve ligada a la constante de velocidad y una de las ecuaciones ms representativas de la variacin de dicha
constante con la temperatura es la ecuacin cintica emprica de Arrhenius:

Por otro lado es s importante mencionar que la invertasa es una enzima que cataliza la reaccin de hidrolisis
en un disacrido llamado sacarosa produciendo dos monmeros llamados glucosa que es una aldosa y una
cetosa llamada fructosa (Fig. 5), en el laboratorio se evalu su eficiencia de acuerdo a un mtodo colorimtrico
usando cido 3,5-Dinitrosalicilico; Este compuesto lleva a cabo una reaccin de tipo oxido reduccin en donde
la glucosa reduce al 3,5-DNS y este se oxida, provocando una coloracin roja emitida por el 3,5-DNS. (Fig. 6).
 Fig. 5. Reaccin de hidrolisis de sacarosa con la enzima invertasa (Contreras H. 2014).

Fig. 6. Reaccin de oxido reduccin entre glucosa y 3,5-DNS, en donde se reduce uno de los grupos nitro del 3,5-DNS
por un grupo amino y el aldehdo de la glucosa se oxida a cido carboxlico. (Manual de prcticas de bioqumica general
2017).

Esta tiene una temperatura ptima en la cual podemos observar su mayor eficiencia. Como pudimos observar
al evaluar la temperatura sobre la velocidad de reaccin, logramos obtener que la temperatura ptima que es
a 50C, esto comparado con la bibliografa (Methods in Enzymology 1955).
El Q10 ms adecuado que presentamos fue el de 5-15 C, grficamente, en esa zona en donde se visualiz que
se comportaba la grfica en una tendencia exponencial similar a la de una recta. Por tanto, es muy probable
que su Q10 sea mayor a esta temperatura.
Conclusiones:
La energa de activacin de la invertasa hace referencia a 11000 cal/mol (Galogaza, 1967).
Las enzimas aumentan su actividad al aumentar la temperatura hasta llegar a su temperatura optima, al
sobrepasar dicha temperatura comienzan a desnaturalizarse y pierden actividad.
La velocidad de reaccin es directamente proporcional a la concentracin de la enzima.

Bibliografa:
Contreras H. (2014) Qumica biolgica disponible en http://slideplayer.es/slide/27899/ Visitado el 11 de
Octubre del 2017.

Manual de experimentos de laboratorio para bioqumica, Quesada S., Editorial EUNED, Costa Rica, 2007,
pgs. 40-42.

Fundamentos de bioqumica (2 edicin), Voet P., Voet J., Pratt C., Editorial medica panamericana,
Argentina, 2009, pgs. 100-103.