TEMA: HEMAGLUTINACION PASIVA

La hemaglutinacin es la aglutinacin de los hemates o glbulos rojos. Se trata

de una respuesta biolgica comn frente determinados microorganismos, como
los virus, y se emplea rutinariamente en tcnicas de determinacin de grupos
sanguneos o en la determinacin de cargas virales. La hemaglutinacin se
debe a la presencia de antgenos en los eritrocitos, antgenos capaces de
reaccionar con anticuerpos o bien con protenas especficas de algunos
microorganismos (entre las que destacan las hemaglutininas).

Un ejemplo de sus aplicaciones se encuentra en la deteccin del grupo

sanguneo (sistema ABO). Para ello, se aade un antisuero anti- A, anti-B o
anti-AB a sangre tratada con heparina o EDTA tripotasico
(dos anticoagulantes). Cuando los glbulos rojos poseen el antgeno especfico
para el antisuero empleado, se produce la aglutinacin.

FUNDAMENTOS DEL METODO La hemaglutinacin indirecta (HAI), tambin

llamada hemaglutinacin reversa pasiva, se basa en la propiedad que tienen
los anticuerpos (que en este caso son anti-T. cruzi) de producir aglutinacin
especfica en presencia de glbulos rojos sensibilizados con los
correspondientes antgenos. En el suero existen anticuerpos inespecficos
(heterfilos) que son capaces de aglutinar glbulos rojos de distintas especies.
Su presencia se investiga enfrentando el suero con GR no sensibilizados. Los
anticuerpos interferentes se eliminan mediante tratamiento con 2-
mercaptoetanol.

UTILIDAD CLINICA

Permiten diagnosticar si eres portador de algn virus, bacteria, parasito, si

tienes algncncer o cualquier enfermedad cuyo diagnstico se pueda hacer
mediante el uso de antgenosespecficos aislados de estos organismos o de
clulastumorales en el caso del cncer que se unirn a los anticuerpos que tu
sistema inmune a producido para contrarrestar el mal.

Las ventajas de emplear eritrocitos para recubrirlos con antgeno son su

disponibilidad inmediata, la sensibilidad como indicadores y la posibilidad de
almacenamiento prolongado a 4C. Capacidad de deteccin La inhibicin de la
hemaglutinacin empleando reacciones de hemaglutinacin pasiva mediante
placas de micro titulacin es sensible para medir antgenos a concentraciones
de 0.2- 9 g/ml. La hemaglutinacin indirecta o pasiva con clulas
sensibilizadas a las protenas puede identificar anticuerpos a concentraciones
tan bajas como 0.03 g/ml. En los antisueros con ttulos muy altos de
aglutinacin un fenmeno de prozona puede obscurecer los resultados. El
fenmeno de pro zona produce reacciones falsas negativas de aglutinacin a
concentraciones elevadas de anticuerpo como resultante de la mala formacin
de estructuras de enrejado molecular y por el bloqueo estrico por el exceso de
anticuerpo, el uso de diluciones seriadas estndar elimina esta dificultad.
Debido a que el anticuerpo IgM es aproximadamente 750 veces ms eficiente
que la IgG en la aglutinacin, la presencia de altas cantidades de IgM puede
influir notoriamente sobre los resultados de la prueba. En el banco de sangre la
Hemaglutinacin indirecta es comnmente usada para la deteccin de
anticuerpos Anti-Tripanosoma cruz.

TECNICA

Materiales:
Reactivos:
micropipetas automticas (25
ul) Antgeno HAI
microgoteros (25 ul) GR no sensibilizados
policubeta Buffer HAI
Puntas descartables esteriles Solucin Proteica
Marcador permanente Control Positivo
Guantes Control Negativo
Mandil
Gafas

PROCEDIMIENTO:
TECNICA POR TITULACION:

1. Con microgotero de 25 ul, colocar una gota de Diluyente de Sueros HAI en

todos los pocillos a usar de la policubeta.
2. Tomar una alcuota de cada suero a ensayar con micropipeta de 25 uL (uno
para cada muestra). Rotarlo por lo menos 5 veces para asegurar una
correcta dilucin de la muestra.
3. Realizar diluciones seriadas a partir del primer pocillo (dilucin 1/2), pasando
las micropipetas al pocillo siguiente (dilucin 1/4) y as sucesivamente hasta
la dilucin que se desea investigar. Homogenizar en cada dilucin por lo
menos 5 veces para asegurar una correcta dilucin de la muestra. Descartar
los ltimos 25 uL.
4. Colocar en los pocillos conteniendo las diluciones y 1/4, una gota (25 uL)
de GR no sensibilizados para control de heterofilia.
5. En el resto de los pocillos, agregar una gota (25 uL) de Antgeno HAI.
6. Mezclar aplicando suaves golpes en los laterales de la policubeta.
7. Dejar en reposo, a resguardo de vibraciones, durante 90 minutos.
8. Leer a partir de los 90 minutos.

TECNICA SCREENING O DESCARTE POR 1 TITULO

1. Con microgotero de 25 ul, colocar una gota de Diluyente de Sueros HAI en
todos los pocillos a utilizar de la policubeta (un pocillo por cada muestra).
2. Sumergir un ansa limpia (provista) en la muestra.
3. Colocar el ansa cargada en el pocillo que contiene el Diluyente de Sueros
HAI, rotando la misma para obtener un buen mezclado y distribuir la gota
sobre todo el fondo del pocillo. Retirar el ansa y secarla con papel de filtro,
lavar en dos recipientes con agua destilada. Secar nuevamente con papel de
filtro. Proceder de la misma manera para cada nueva muestra.
4. Agregar con microgotero de 25 ul, una gota de Antgeno HAI reconstituido y
homogeneizado a cada pocillo.
5. Agitar la policubeta golpeando con los dedos en las paredes laterales,
durante 30 segundos por lo menos, para asegurar un buen mezclado.
6. Dejar reposar, al resguardo de vibraciones durante 2 horas.
7. Efectuar la lectura. En caso de que la lectura de los resultados se efecte en
un plazo mayor de 2 horas, la policubeta deber taparse con una cinta
adhesiva transparente para evitar evaporaciones.

INTERPRETACION DE RESULTADOS

No reactivo: presencia de un sedimento en forma de botn.

Reactivo: formacin de una pelcula o manto en el fondo de los pocillos. En
caso de observar la presencia de un pequeo anillo de bordes regulares, la
muestra se considerar dudosa y deber ser ensayada por otro mtodo.

INTERVALOS DE REFERENCIA:

Tcnica por titulacin

Punto de corte mayores o iguales a 1/32 se consideran reactivos
Tcnica por Screening
Punto de corte mayores o iguales a 1/12 se consideran reactivos.

CASO CLINICO:

Introduccin
La enfermedad de Chagas, tambin conocida como tripanosomiasis americana,
es una parasitosis producida por Trypanosoma cruzi. La infeccin se transmite
de forma natural por triatominos (Hemiptera: Reduviidae), los cuales son
insectos hematfagos, conocidos comnmente como chinche besucona o
chinche de campo. Esta enfermedad se asocia a la pobreza y a las malas
condiciones de la vivienda; se encuentra ampliamente distribuida,
principalmente en las reas rurales de todo el continente latinoamericano y en
zonas marginadas de las grandes ciudades.

DATOS DE AFILIACION
SEXO: MASCULINO
EDAD: 7 AOS
ESTADO CIVIL: SOLTERO
RELIGION: CATOLICO
OCUPACION: GANADO VACUNO, PORCINO, Y AVES.

MOTIVO DE CONSULTA
Acude con cuadro clnico de 15 das de evolucin caracterizado por fiebre
cuantificada hasta 39.5 C de predominio vespertino, edema palpebral derecho,
dolor en hemicara derecha, mialgias en extremidades inferiores, cefalea frontal
nicamente asociada con la fiebre, malestar general e hiporexia

ANTECEDENTES
Picadura de insecto tres das antes en regin supraciliar derecha, la cual fue
vista por la madre y se refiere a ella como chinche. El paciente fue valorado
por un mdico particular en su comunidad y recibi tratamiento con nimesulida,
dicloxacilina y dexametasona durante tres das sin mejora.

PRUEBAS DE LABORATORIO
BIOMETRIA
hemoglobina, 12.5 g/dL;
hematocrito, 35%;
VCM 82.3.
CMHbC: 28.7 q/dl.
leucocitos, 10,700 cel/uL;
linfocitos, 69%;
neutrfilos, 25%;
monolitos, 3%;
eosinfilos, 0%;
plaquetas, 253,000 cel/uL;
VSG: 34 mm/h
PCR <0.302 mg/mL.
PRUEBAS QUE SE REALIZO
Se realizo la tcnica inmuno-absorbente ligado a enzimas como Elisa para la
deteccin de anticuerpos IgM y hemaglutinacin pasiva la cual se report
reactiva; adems se realiz el frotis de sangre perifrica analizada en el
departamento de investigacin en parasitologa mostr la presencia de
trypomastigotes, motivo por el cual se inicia estudio para la deteccin de este
agente en la familia. Se realiza diagnstico de tripanosomiasis americana en
fase aguda,
Discusiones
La hemaglutinacin Pasiva se basa en la propiedad que tienen los
anticuerpos de producir aglutinacin especfica en presencia de glbulos
rojos sensibilizados con los correspondientes antgenos.
La tcnica de Hemaglutinacin pasiva es un mtodo muy confiable; sin
embargo es una prueba que necesita mucha concentracin para
 realizarla ya que si no se toma en cuenta esto se puede cometer errores
importantes.
En el caso de la enfermedad de Chagas causada por T.cruzi se toma en
cuenta la tcnica de Eliza y la hemaglutinacin pasiva, ya que ambas
pruebas son confirmatorias.
Por el tiempo que requiere esta tcnica la mayora de laboratorios a nivel
nacional no cuentan con esta prueba por los reactivos que utiliza y
adems por el tiempo que toma para llegar a un resultado.

BIBLIOGRAFIA
1 Aguilar Garca V, Reacciones de Aglutinacin. Gac. Md. Mex. 2004;
140(3): 50-52.

2 Grispan S, Grupo sanguneo ABO y Rh Rev. Mdica Hondur 1983;
1983: 103-114.

3 Arbelez Garca CA, Sistema de Grupo Sanguneo ABO. Medicina y
Laboratorio 2009: 15(3): 329-347.
Wiener Laboratorios, 2000, Chagatest Hai.