ANALISIS Y CUANTIFICACION DE LAS MEZCLAS POR ESPECTROFOMETRIA

ANALYSIS AND QUANTIFICATION OF MIXTURES BY ESPECTROFOMETRIA

Autores: Beltrn M, Vargas J
Corporacin tecnolgica de Bogot, Tecnologa en qumica industria
Bogot, Colombia
Fecha 01 /04/2016
mbeltran04@ctb.edu.co

muestra problema se representa varios

RESUMEN
En la prctica se cuantifico por medio de UV-
VIS, la cafena y el paracetamol con
concentracin de 100ppm en la cual se
prepararon dos muestras de 50 mg y 100mg de
una pastilla llamada analper que contena
500mg paracetamol y 40 mg de cafena, en la
muestra stock observamos una absorbancia
para la cafena de 273nm y para paracetamol
255nm, de igual manera se hizo un barrido
para ambas sustancias que es la variacin,
necesaria para la bsqueda del punto mximo
de la longitud de onda.
En la curva de calibracin se obtuvo las
concentraciones despejando su respectiva
formula, se hall Cca273 ( 50 mg que fue de
13,25 ppm y a 100 mg 25.9 ppm) y Cpa255 (a
50 mg a 10.17ppm y a 100mg 20.07ppm) , de
esta forma se obtiene un comportamiento
lineal; y en el mtodo de adicin estndar se
realiz para analizar muestras complejas, y se
evidencio la muestra a dos longitudes de onda
, para hallar la concentracin en ppm de la
mtodos para sacar la concentracin en la
tabla 10,11 y 12
Para ambos mtodos se midi la sensibilidad
para diferenciar pequeas variaciones del
analito
Palabras Clave:
Sensibilidad, curva de calibracin y adicin
estndar
ABSTRACT
In practice I was quantified by means of UV-
VIS radiation, caffeine and paracetamol
concentration of 100 ppm in which two
samples of 50 mg were prepared and 100 mg
A Call pill analper containing 500 mg of
paracetamol and 40 mg of caffeine, in the
sample stock observe an absorbance for
caffeine of 273nm and 255nm for
paracetamol, just as bECAME UN swept
paragraph Both substances Que es la
variation, required for search Point Maximum
length wave.
The calibration curve in the respective
formula Do Concentrations Despejando was
obtained, Cca273 (50 mg It was 13.25 ppm
and 25.9 ppm 100 mg) and Cpa255 (about 50
mg to 100 mg 10.17ppm and 20.07ppm) was
found , esta -form of UN linear behavior is
obtained; and the addition method Standard
was conducted to analyze v Complex
Samples, and Sample A two wavelengths was
evident, para find the concentration in ppm of
test portion Various methods are repre To
remove the concentration in the table and 10,
December 11
For both methods MIDIO yes Sensitivity to
differentiate small changes in analyte
Keywords:
Sensitivity, calibration curve and Standard
Addition
INTRODUCCIN
El paracetamol (acetaminofn) es un
analgsico y antipirtico derivado
paraaminofenol;
Figura 1. Estructura del paracetamol
La cafena por su parte, es una metilxantina.
Figura2. Estructura de la cafeina
La combinacin de acetaminofn con cafena
tiene un rpido inicio de accin y se ha
demostrado que la cafena acelera la absorcin
del acetaminofn. Adicionalmente, estudios
han evidenciado que la cafena aumenta y
prolonga la actividad analgsica del
acetaminofn. La cafena tambin puede tener
efectos estimulantes del sistema nervioso
central. (laboratorio la sante)
Espectrofotometra UV
La espectrofotometria UV es el conjunto de
procedimiento que utiliza la luz en la zona UV
del espectro electromagntico, para medir
concentraciones qumicas de distintas
sustancias.
El clculo de concentraciones de la regin
UV- visibles lleva a cabo mediante la
ecuacin ley de Lambert-Beer (skoog, holler,
& Nieman, 2001, pg. 322)
Utilizando la tcnica espectrofotomtrica se
puede cuantificar por diferentes metodologas
como la curva de calibracin, adicin patrn y
estndar interno, aditividad de absorbancias Donde los subndices se refieren a los
entre otras. Se conocen como mtodos componentes absorbentes 1, 2,..., n. (skoog,
espectrofotomtricos y segn sea la radiacin holler, & Nieman, 2001, pg. 325)
utilizada como espectrofotometra de
absorcin visible (colorimetra), ultravioleta, Desviaciones qumicas
infrarroja. Se incluyen en este apartado toda una serie de
La espectrofotometra se refiere a los desviaciones aparentes de la ley de Beer
mtodos, cuantitativos, de anlisis qumico producidas como consecuencia de procesos
que utilizan la luz para medir la concentracin qumicos en los que participan las especies
de las sustancias qumicas. Se conocen como absorbentes
mtodos espectrofotomtricos y segn sea la
radiacin utilizada Influencia del disolvente.
como espectrofotometra de absorcin visible Como consecuencia de las interacciones
(colorimetra), ultravioleta, infrarroja. soluto disolvente se originan con frecuencia
La Radiacin Electromagntica es una forma desplazamientos espectrales,
de Energa radiante que se propaga en forma ensanchamientos de bandas y otros
ondas. fenmenos que pueden provocar
desviaciones en la ley de Beer. En este
Ley de aditividad. sentido, no es posible hacer predicciones de
La ley de Beer tambin se puede aplicar a un forma general. nicamente mencionar
medio que contenga ms de una clase de algunos trminos relacionados con los
sustancias absorbentes. Siempre que no haya desplazamientos espectrales: desplazamiento
interaccin entre las distintas especies (es batocrmico o desplazamiento hacia el rojo,
decir que no reaccionen entre si), la consiste en un desplazamiento del mximo de
absorbancia total para un sistema absorcin hacia longitudes de onda mayores
multicomponentes viene dado por (este efecto suele producirse en disolventes de
alta constante dielctrica). Desplazamiento
(1) hipsocrmico o desplazamiento hacia el azul,
es el desplazamiento hacia longitudes de onda
ms cortas. (Gonzlez , pg. 10)
Influencia del equilibrio. Desviaciones instrumentales originadas
Cuando la sustancia problema interviene o por la radiacin policroomatica
forma parte de un sistema en equilibrio con El cumplimiento estricto de la ley de beer solo
otras especies, el desplazamiento del se observa icuando la radiacin es realmente
equilibrio implica una modificacin en la monocromtica; esta observacin es otra
concentracin, y, en consecuencia, en la manifestacin aun del carcter limite de la ley.
absorbancia. Algunas situaciones que pueden Desafortunadamente, en la practica es raro el
producirse son las siguientes: uso restringido a una sola longitud de onda
Dimerizaciones: Cuando una disolucin no debido a que os dispositivos que aslan
tamponada se diluye, ocurre una porciones de la seal de salida de una fuente
transformacin parcial en cromato, como continua generan una banda de longitudes de
consecuencia del equilibrio dmero- onda mas o menos simtricas en torno a la
monmero deseada (skoog, holler, & Nieman, 2001, pg.
329)
Acidobase:

Figura 3. Efecto de la radiacin policromica

sobre la ley de beer
Figura 3. Influencia en el
MATERIALES Y MTODOS
equilibrio Acido Base

Preparacin de soluciones stock

Complejos: Cuando se mide la absorbancia
de un complejo, por ejemplo Fe(SCN)6 3,
para que se cumpla la ley de Beer hay que
mantener constante la concentracin de
ligando libre, lo cual se
frecuentemente operando en gran exceso de
ligando respecto al metal. (Gonzlez , pg. 9)
Solucin stock de paracetamol y cafena
Se calcul la cantidad necesaria de
paracetamol y cafena para preparar una
solucin de 100 ppm (100 mL), se disolvi en
un vaso de precipitados con agua.
consigue Finalmente se transfiri el contenido del vaso
al baln de manera cuantitativa y lleve a
volumen con agua.
Solucin stock de cafena
Se marc los balones para evitar errores
 Se Midio la absorbancia de los patrones y de
Solucin buffer las muestras en el espectrofotmetro, para
Se Preparo una solucin buffer HCO3-/CO32- a esto primero tomo el espectro de la cafena y
pH de 10,5, para ello se pes una cantidad del paracetamol utilizando las soluciones
de bicarbonato de sodio cercana a 2,100 g, se patrn que tengan una concentracin entre 4
disuelve con agua en un vaso de precipitados y 8 ppm, posteriormente se tomo el espectro
y transfiera a un matraz de 250 mL y lleve a de las muestras problema y compare.
volumen con agua, homogenice bien la Se Realizo una cuantificacin por adicin
solucin y posteriormente con adiciones estndar tanto para la cafena como para el
pequeas de hidrxido de sodio lleve hasta un acetaminofn utilizando una de las soluciones
pH cercano a 10,5. patrn asignadas por el docente segn sea el
caso.
Preparacin de patrones (curva de
calibracin)
Patrones de cafena
En los balones de 50 mL, se transfiri el
material adecuado alcuotas de la solucin
stock de cafena de 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; y 5,0
mL, se adiciono 10 mL de la solucin buffer
de carbonato y se completo a volumen con
agua cada uno de los balones.

Patrones de paracetamol
Se Prepar los patrones de paracetamol de la
misma manera que los patrones de cafena
con la solucin stock de paracetamol, se
adiciono los 10 mL de solucin buffer y se
complet a volumen con agua.

Preparacin de las muestras

Solucin stock de la muestra
Se Peso una cantidad cercana a 50 mg y 100
mg en una balanza analtica, preferiblemente
de 4 cifras decimales, se transfiere la muestra
a un vaso de precipitados, se disuelvio con
agua y finalmente transfiri de manera
cuantitativa a un baln de 100 mL.

Soluciones de muestra problema

En 3 balones de 50 mL se adiciono 2 mL de
la solucin stock de la muestra y 10 mL de la
solucin buffer, se complet a volumen con
agua y homogenice las soluciones, se marc
las soluciones como muestra 1, muestra 2 y
muestra 3.

Medicin en el espectrofotmetro UV-Vis

RESULTADOS

Patrn externo cafena y paracetamol

Figura 1 .longitud de onda de la cafena

Figura 2. Longitud de onda del paracetamol

Figura 3. Barrido de la cafena y el paracetamol
longitud de
onda cafeina paracetamol
200 2,756 2,753
210 2,339 2,073
220 1,031 0,947
230 0,424 0,541
240 0,218 0,665
250 0,206 0,856
260 0,368 0,867
270 0,528 0,715
280 0,465 0,509
290 0,186 0,358
300 0,031 0,246
Tabla 1. Datos del barrido del patrn externo
absorbancia absorbancia
solucion cafeina paracetamol
concentracion estandar en solucion de aforo con longitud de longitud de
en (ppm) (ml) buffer agua (ml) onda 273 onda 255
2 1 10 50 0,122 0,174
4 2 10 50 0,203 0,356
6 3 10 50 0,289 0,51
8 4 10 50 0,4 0,69
10 5 10 50 0,524 0,867

Tabla.2 datos de absorbancia frente a los ml tomados de la solucin estndar

Figura 4 .curva de calibracin de la cafena a una longitud de onda de 273 nm

Figura5. Curva de calibracin del paracetamol a una longitud de onda de 255 nm

absorbancia absorbancia
solucion stock solucion
muestra aforo(ml) a longiud a longiud
(ml) buffer(ml)
de onda 273 de onda 255

1 2 10 50 0,672 0,88
2 2 10 50 0,67 0,874
3 2 10 50 0,68 0,881
Tabla3. 50mg de muestra problema
 absorbancia absorbancia
solucion stock solucion
muestra aforo(ml) a longitud a longitud
(ml) buffer(ml)
de onda 273 de onda 255

1 2 10 50 1,317 1,758
2 2 10 50 1,285 1,68
3 2 10 50 1,339 1,754
Tabla 4. 100 mg de la muestra problema

Figura 6. Barrido de la muestra a 50mg

 longitud de muestra
onda cafeina paracetamol 50mg
200 2,756 2,753 2,863
210 2,339 2,073 2,148
220 1,031 0,947 0,968
230 0,424 0,541 0,555
240 0,218 0,665 0,678
250 0,206 0,856 0,867
260 0,368 0,867 0,893
270 0,528 0,715 0,758
280 0,465 0,509 0,546
290 0,186 0,358 0,372
300 0,031 0,246 0,245
Tabla 5. Barrido de la cafena, paracetamol y muestra en 50mg

Figura 7. Barrido total de la cafena, paracetamol y la muestra problema a 50mg

Los resultados se obtuvieron por mecanismo de Excel por ende no se pudo simplificar las cifras
significativas
 muestra analper 50 mg muestra analper 100mg
longitud de longitud de longitud de longitud de
onda 273 onda 255 onda 273 onda 255
peso de la
0,662 0,51 1,296 1,005
muestra en mg
concentracion
13,25543119 10,17111683 25,9220728 20,07596985
en ppm
promedio 0,674 0,878333333 1,313666667 1,730666667
desviacion
0,005291503 0,003785939 0,027153882 0,043924177
estandar
Tabla 6. Obtencin de la concentracin con la ecuacin y: mx+b dada en la Figura (4 y 5)
muestra analper 50 mg muestra analper 100mg
longitud de longitud de longitud de longitud de
onda 273 onda 255 onda 273 onda 255
sensibilidad 0,074 0,098 0,038 0,05

Tabla 7.sensibilidad del analito

Adicin estndar

absorbancia absorbancia
concentracion solucion stock solucion Muestra en
aforo(ml) a longiud a longiud
en (ppm) (ml) buffer(ml) (ml )
de onda 273 de onda 255

2 1 10 2 50 0,751 0,899
4 2 10 2 50 0,842 0,93
6 3 10 2 50 0,921 0,95
8 4 10 2 50 1,07 1,065
10 5 10 2 50 1,192 1,137
Tabla 8 .concentraciones estndar de la cafena y absorbancia de la misma
Figura 8. Curva de calibracin de la cafena a una longitud de onda de 273

Figura 9. Curva de calibracin de la cafena a una longitud de onda de 255

absorbancia absorbancia
concentracion solucion stock solucion Muestra en
aforo(ml) a longiud a longiud
en (ppm) (ml) buffer(ml) (ml )
de onda 273 de onda 255
2 1 10 2 50 0,779 1,027
4 2 10 2 50 0,9 1,191
6 3 10 2 50 1,035 1,373
8 4 10 2 50 1,153 1,537
10 5 10 2 50 1,282 1,715
Tabla 9 .concentraciones estndar del paracetamol y absorbancia de la misma
Figura 10. Curva de calibracin de la paracetamol a una longitud de onda de 273

Figura 11. Curva de calibracin de la paracetamol a una longitud de onda de 255

Clculos anexo 1
muestra analper
paracetamol cafeina
63,27 ppm 62,71 ppm
3,16 mg 3,13 mg
Tabla 10. Porcentaje en ppm de cafena y paracetamol en la muestra mtodo de la adictividad
Clculos anexo 2
 muestra analper

cafeina a cafeina a paracetamol

paracetamol a
una una a una
una longitude
longitude longitude longitude de
de onda 255
de onda 273 de onda 255 onda 273
560,5ppm 1332,6ppm 517.5 ppm 494,7 ppm
28,02mg 66,63mg 25,87 mg 24,7 mg
Tabla 11. Porcentaje en ppm de cafena y paracetamol a unas longitudes de onda de 273nm y
255 nm en la muestra mtodo adicin estndar
muestra analper

cafeina a cafeina a paracetamol

paracetamol a
una una a una
una longitude
longitude longitude longitude de
de onda 255
de onda 273 de onda 255 onda 273
560,5 ppm 133,5 ppm 517,5 ppm 494,5 ppm
28,02mg 66,62 mg 25,87 mg 24,7 mg
Tabla 12. Porcentaje en ppm de cafena y paracetamol a unas longitudes de onda de 273nm y
255 nm en la muestra mtodo adicin estndar por extrapolacin
muestra analper

cafeina a paracetamo
cafeina a una paracetamol a
una l a una
longitude de una longitude
longitude longitude
onda 255 de onda 273
de onda 273 de onda 255
sensibilidad 0,08 0,03 0,093 0,098
Tabla 13. Sensibilidad del analito

DISCUSIN DE RESULTADOS Para llevar a cabo el anlisis es necesario

conocer la longitud de onda y realizar una
En la prctica de anlisis y cuantificacin de etapa de calibracin, se representa una
mezclas se pretende adquirir los longitud de onda en la figura 1 y figura 2 y se
conocimientos necesarios acerca de la evidencia as, ya que hay una influencia en el
relacin existente entre la absorbancia y la equilibrio, ocurre cuando las especies
concentracin en las soluciones empleadas.
absorbentes estn implicadas en un equilibrio segn la ley de Beer debe mostrar un
cido-base. comportamiento lineal.
Por otro lado se mide la absorbancia de varias En el mtodo de adicin estndar se utiliza
muestras de concentracin conocida, las para analizar muestras complejas, en
cuales sern de gran utilidad para comparar y ocasiones la interaccin del analito con otros
calcular la concentracin de una muestra componentes de la muestra puede producir un
problema, como podemos observar en la aumento o una disminucin de la sensibilidad
Tabla 5 la diferencia de la muestra 1(50mg) a del analito ,donde se empleo la adicin de
la muestra 2 (100mg) es que una se encuentra diferentes volmenes (1 , 2 , 3 , 4 , 5)ml de una
mas concentrada que la otra, ya que si la disolucin patrn y la muestra (2ml), y se
solucin preparada le agregamos ms soluto o evidencio la muestra a dos longitudes de onda
le agregamos ms solvente, la concentracin , para hallar la concentracin se despejo la
de la solucin s se modifica. En este caso en ecuacin de la ley de adictividad con las 2
la primera muestra se agrega 50 mg (soluto) a longitudes de onda y as hallar la
un baln aforado de 100ml (solvente) ,la concentracin en ppm de la muestra
segunda muestra se hace ms concentrada problema, igualmente se utilizo la ecuacin de
(aumenta la cantidad al doble de soluto), adicin estndar por dos mtodos y se
donde se agrega 100mg (soluto) a un baln encontr que su comportamiento utilizando
aforado de 100 ml (solvente). Se observo que las dos ecuaciones era igual.
el volumen de solucin es el mismo, lo que Para todos los casos se utilizo el mtodo de
est cambiando es la cantidad de soluto sensibilidad para diferenciar pequeas
disuelto, se puede concluir que su variaciones del analito, una de las ventajas de
concentracin tambin va a hacer el doble este mtodo es la independencia de las
Para la obtencin de la curva de calibracin, unidades de medida de S
se representan grficamente las absorbancias
de las muestras de concentracin conocida a
la longitud de onda de mxima absorbancia
para cafena 273nm y paracetamol 255nm, Conclusiones
frente a la concentracin de (2, 4, 6 , 8 y Se logra cuantificar mediante
10)ppm, de esta forma se obtiene la curva, que diferentes mtodos, una mezcla que
 contena cafena y paracetamol
mediante el equipo de UV-VIS.
Se logra identificar las longitudes de
onda con mayor absorbancia para cada
sustancia especfica.
Es importante la adecuada preparacin
y manejo de las celdas, equipo y
soluciones en los procedimientos para
evitar al mximo las interferencias que
pueden afectar cada resultado debido a
que es una tcnica muy sensible.
Utilizando la curva de calibracin,
patrn interno y adicin estndar se
logra cuantificar las sustancias
correspondientes, aclarando que
ciertas tcnicas son ms precisas que
otras.
Los procedimientos realizados por los
dems compaeros en la prctica no
fueron claramente reportados para la
realizacin satisfactoria de los
clculos.
Se obtuvo gran conocimiento en la
prctica, ya que ahora se conoce la
manera adecuada de utilizar un
espectrofotmetro, as como tambin
se adquiri la nocin sobre conceptos
bsicos, como lo es la absorbancia,
espectro de absorcin, y mtodos
espectrofotomtricos para analizar
mezclas.
Se dice que absorbancia es la
capacidad que tiene algunos
compuestos para absorber la radiacin
electromagntica, cuando se realiz
esta prctica pudimos observar cmo,
dependiendo de la concentracin y la
longitud a la cual se le aplique un rayo,
puede alcanzar un punto mximo de
absorcin.
Bibliografa
Gonzlez , C. (s.f.). scribd. Obtenido de
http://ocw.usal.es/ciencias-
experimentales/analisis-aplicado-a-la-
ingenieria-
quimica/contenidos/course_files/Tem
a_3.pdf
laboratorio la sante. (s.f.). gestarpharma.
Obtenido de
http://www.gestarpharma.com.co/dic
cionario/PLM/productos/18578_210.
htm
skoog, d., holler, j., & Nieman, t. (2001).
principios de analisis instrumental
(Vol. 5). Espaa: Mc graw-hill.
ANEXO 1

ECUACION 1
A(273)= A cafena +A paracetamol= (E ca(273nm) *bca*Cca ) + (Epa(273)*bpa*Cpa)
ECUACION 2
A(255)= A cafena +A paracetamol= (E ca(255nm) *bca*Cca ) + (Epa(255)*bpa*Cpa)

Se despeja C Cafena en la Ecuacin 1 y se obtiene la ECUACIN 3

(273) [(273) ]
=
(273)
Sustituyendo la ECUACIN 3 en la ECUACIN 2 tenemos la ECUACIN 4
(255) = +
(273) [(273) ]
= ((255) ) + [(255)
(273)

De la ecuacin 4 despejamos Cpa

255 [(273) ] + (273)

=
[(255) (255) 273]
0.878 [0.0555 1] + 0.063
=
[0.0861 1 0.0305 1 1 0.674]
0.112
=
[0.00177]
= 63.27
Para encontrar Ccafeina se sustituye Cpa en la ECUACIN 3

255 [(273) ] + (273)

=
[(255) (255) 273]

0.878 [0.063 1] + 0.0555

=
[0.0305 1 0.0861 1 1 0.674]
 0.111
=
[0.00177]
= 62.71

ANEXO 2

Ecuacin 1
Para que el mtodo adicin estndar sea aplicable se debe escribir que

= + de igual forma puede representarse como esta otra ecuacin

Donde K es la constante de proporcionalidad, la representacin de S,

en funcin de Vs, es una lnea recta de la forma

Donde la pendiente m y la ordenada en el origen b viene dadas por

Y
Para determinar m y b puede utilizarse un tratamiento por mnimo de cuadros; Cx se puede
obtener a partir de la relacin entre estas dos cantidades y valores conocidos de Cs, Vx y Vs ,
as

o (skoog, holler, & Nieman, 2001, pg. 17)

=

Concentracin de cafena a una longitud de onda 273

 0,6222 100
=
0,0555 2

= 560,5
Concentracin de cafena a una longitud de onda 255
0.8129 100
=
0.0305 2

= ,

Concentracin de paracetamol a una longitud de onda 273

,
=
,

= .
Concentracin de paracetamol a una longitud de onda 255

,
=
,
= .

Otro mtodo que se puede utilizar es por la extrapolacin de la recta

Ecuacin 2
()
=

En la cafena a una longitud de onda 273
11.21 100
=
2

= 560.5
En la cafena a una longitud de onda 255

26.65 100
=
2

= 1332.5

En la paracetamol a una longitud de onda 273

10.35 100
=
2

= 517,5
En la paracetamol a una longitud de onda 255
4.89 100
=
2
= 494,5