El jugo de pitaya (Hylocereus undatus) atena la resistencia a la insulina y la

esteatosis heptica Los ratones obesos inducidos por la dieta

Haizhao Song1,2, Zihuan Zheng1, Jianan Wu1, Jia Lai1, Qiang Chu1, Xiaodong
Zheng1,2*
1 College of Biosystems Engineering and Food Science, Zhejiang University,
Hangzhou, P. R. China, 2 Fuli Institute of Food Science, Zhejiang University,
Hangzhou, P. R. China
Abstracto
La resistencia a la insulina y la esteatosis heptica son las complicaciones ms
comunes de la obesidad. Pitaya es una fuente importante de fitoqumicos como los
polifenoles, flavonoides y vitamina C que estn relacionados con su actividad
antioxidante. El presente estudio se realiz para evaluar la influencia del jugo de
pitaya blanco (WPJ) en trastornos metablicos relacionados con la obesidad (por
ejemplo, resistencia a la insulina y esteatosis heptica) en ratones con alto
contenido de grasa alimentados con dieta. Cuarenta y ocho machos C57BL / 6J
ratones fueron asignados en cuatro grupos y alimentados con dieta baja en grasa
con acceso libre al agua o WPJ, o alimentados con alto contenido de grasa dieta
con libre acceso al agua o WPJ durante 14 semanas. Nuestros resultados mostraron
que la administracin de WPJ mejor la resistencia a la insulina inducida por la dieta
alta en grasa, la esteatosis heptica y la hipertrofia adiposa, pero no ejerci ninguna
influencia en el aumento de peso corporal en ratones. El anlisis heptico de la
expresin gnica indic que el suplemento de WPJ no slo cambi el perfil de
expresin de los genes implicados en el metabolismo de lpidos y colesterol
(Srebp1, HMGCoR, Cpt1b, HL, Insig1 e Insig2) sino que tambin aument
significativamente los niveles de expresin de genes relacionados con FGF21 (Klb,
FGFR2, Egr1 y cFos). En conclusin, WPJ protegido de la dieta inducida por la
estepa heptica y la resistencia a la insulina, que se asoci con el FGF21 mejora la
resistencia y el metabolismo de los lpidos
Introduccin
La diabetes tipo 2 y la enfermedad heptica grasa no alcohlica (NAFLD) son
consecuencias comunes de una combinacin de trastornos metablicos como la
dislipidemia, la esteatosis heptica, la intolerancia a la glucosa y la resistencia a la
insulina [1]. La evidencia creciente sugiere que la resistencia a la insulina y la
esteatosis heptica, las complicaciones ms comunes de la obesidad, se
caracterizan por un metabolismo energtico daado y atribuido por interacciones
complejas entre antecedentes genticos e impactos ambientales como hbitos
dietticos y sedentarios. Adems, la resistencia a la insulina suele ir acompaada
de esteatosis heptica [7]. Las farmacoterapias tradicionales para la diabetes tipo 2
y NAFLD a menudo se acompaan de efectos secundarios. Recientemente, la
creciente evidencia ha sugerido que los compuestos bioactivos naturales en los
alimentos ejerce muchos efectos beneficiosos sobre la obesidad y sus
consecuencias metablicas [8 - 10].
Pitaya, tambin conocida como la fruta del dragn, est entre las frutas tropicales
comerciales ms importantes alrededor del mundo, y tres variedades se han
clasificado como Hylocereu polyrhizus (pitaya rojo), Hylocereus undatus (pitaya
blanca) y Hylocereus megalanthus (pitaya amarillo) . Pitaya es una fuente
importante de fitoqumicos como los polifenoles, flavonoides y vitamina C que estn
relacionados con su actividad antioxidante [12, 13]. Especialmente el pitaya rojo y
el blanco han atrado recientemente la creciente atencin en todo el mundo no slo
debido a sus valores econmicos, sino tambin sus beneficios para la salud [14]. El
consumo de pitaya roja disminuy los niveles de colesterol total (TC), triglicridos
(TG) y colesterol de lipoprotenas de baja densidad (LDL-C), al tiempo que aument
los niveles de colesterol de lipoprotenas de alta densidad (HDL-C) en sujetos
diabticos de tipo 2. El efecto similar de mejora de los lpidos de su extracto de
mentol se encontr en ratas con alto contenido de grasa alimentados con dieta [15,
16]. Adems, tambin se ha demostrado recientemente el efecto antidiabtico del
pitaya rojo. Por ejemplo, la pitaya roja mejor significativamente la resistencia a la
insulina en ratas y 600 g de cantidad de consumo de fruta pitaya roja cada da
disminuy el nivel de glucosa en la sangre en sujetos diabticos de tipo II [15, 17].
Ramli et al. tambin informaron de que la suplementacin de jugo de pitaya roja
podra inducir una tendencia a la normalizacin de la glucosa y el cido rico
asociada con ALP y ALT reducidos, pero un aumento de los niveles de AST en ratas
con alto contenido de carbohidratos y ratas alimentadas en grasas [18]. rojo y blanco
de pitaya se informa que es rica, natural y rentable fuente de nutrientes bioactivos,
pocos estudios se centraron en los efectos beneficiosos de la pitaya blanca en la
diabetes y NAFLD. El objetivo del presente estudio fue investigar la influencia del
jugo de pitaya blanca (WPJ) sobre la esteatosis heptica relacionada con la
obesidad y la resistencia a la insulina en ratones obesos inducidos por la dieta rica
en grasas y explorar el mecanismo subyacente por el cual el jugo pitaya ejerci sus
efectos beneficiosos. Hasta donde sabemos, este es el primer estudio para evaluar
el efecto de la pitaya blanca en la diabetes tipo II y NAFLD.
Materiales y Mtodos Reactivos qumicos y preparacin de jugo
Los disolventes y reactivos se obtuvieron de Aladdin (Shanghai, China). Se
adquirieron pitayas blancos frescos (Hylocereus undulatus) en el centro mayorista
de productos agrcolas y marginales, que se encuentra en 183 Yisheng Road,
Distrito de Yuhangtang, Hangzhou. Las cscaras se eliminaron y el jugo fue
exprimido de las frutas con un fabricante de zumo. El jugo extrado se centrifug
entonces a 10.000 g durante 40 minutos a 4 C. Despus de eso, el sobrenadante
se filtr, se recogi y se almacen a -80C. El contenido de compuestos bioactivos
(por ejemplo, polifenol total y flavonoides totales) en jugo de pitaya se determinaron
utilizando los mtodos descritos anteriormente [19, 20].
Animales y dietas
Todos los protocolos en este estudio fueron aprobados por el Comit de tica de
Experimentos Animales de la Universidad de Zhejiang (Nmero de Permiso:
ZJU201550501) y los procedimientos experimentales fueron realizados de acuerdo
con los Institutos Nacionales de Salud reglamentos para el cuidado y uso de
animales en investigacin. Adems, se hicieron todos los esfuerzos para minimizar
el sufrimiento. Los ratones C57BL / 6J de cuatro semanas de edad (macho, n = 48)
fueron suministrados por el Centro Nacional de Criadores de Roedores (Shanghai,
China) y alojados en un ambiente de luz / oscuridad de 12 horas con libre acceso al
agua y alimentos y la temperatura se mantuvo a 23 3 C con una humedad relativa
del 50% 10%. Despus de una semana de aclimatacin, los ratones fueron
asignados aleatoriamente a los cuatro grupos siguientes (n = 12): LFD, ratones
alimentados con dieta baja en grasa con acceso libre al agua, LFDJ, ratones
alimentados con dieta baja en grasa con acceso gratuito a WPJ; HFD, ratones
alimentados con alto contenido de grasa dieta con libre acceso al agua y HFDJ,
ratones alimentados con alto contenido de grasa dieta con libre acceso a WPJ. Los
ingredientes y la densidad energtica de las dietas bajas en grasas y altas en grasas
se enumeran en la Tabla S1. El jugo y el agua fueron reemplazados cada dos das
y los volmenes consumidos fueron registrados. La monitorizacin del peso corporal
y el consumo de alimentos comenz en la primera semana y continu a lo largo de
todo el experimento. El consumo de alimentos de cada grupo diettico se determin
pesando la cantidad total de alimento que se dio el lunes y luego restando por la
cantidad de comida restante el mircoles. La ingesta media de alimentos de cada
ratn se obtuvo dividiendo el nmero total de ratones en el grupo. La dieta baja en
grasa (LFD) contena 3,85 kcal en cada gramo de alimento, y la dieta rica en grasas
(HFD) contena 4,73 kcal en cada gramo de alimento. Sobre la base de la densidad
energtica y la cantidad de alimentos consumidos diariamente, se calcul la ingesta
calrica diaria. Despus de 14 semanas de tratamiento, los ratones se mantuvieron
en ayunas durante la noche y se sacrificaron por decapitacin. Se recogieron
muestras de sangre para la preparacin de suero por centrifugacin a 2000 g
durante 15 minutos. Los hgados, corazones, riones, bazos, grasa epididimaria y
perirrenal y grasa marrn interscapular se recogieron, se pesaron y se almacenaron
a -80C antes de su uso.
Anlisis bioqumico
Las concentraciones sricas de glucosa, TG, TC, ALT, AST, HDL-C y LDL-C se
midieron usando un analizador bioqumico automtico (ACCUTE TBA-40FR, Japn)
de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los kits de ensayo ELISA
comerciales se usaron para determinar los niveles sricos de leptina (Cat #:
MOB00), insulina (N de cat.: E-EL-M2614c), adiponectina (Cat #: MRP300), LPS
0025c), FGF21 (n de cat.: MF2100) y NPY (N de cat.: E-EL-M0820c).
Anlisis HOMA-IR y HOMA-IS
Se aplic la evaluacin del modelo de homeostasis (HOMA) para calcular la
resistencia a la insulina (HOMA-IR) y el ndice de sensibilidad a la insulina (HOMA-
IS) de acuerdo con las siguientes frmulas:
HOMA? IR glucosa en suero mmol = L? Insulina en suero mU = 22: 5
HOMA? IS 1 = glucosa en suero mmol = L? Insulina en suero mU?
Anlisis del perfil lipdico heptico
Lpidos totales del hgado se extrajeron utilizando el mtodo de Folch con
modificaciones menores [21]. Brevemente, los tejidos del hgado se
homogeneizaron con una mezcla de cloroformo / metanol hasta un volumen final 15
veces el volumen de la muestra (0,2 g en 3 ml de mezcla disolvente). Despus de
la dispersin, la mezcla se agit durante 20 min. A continuacin, el homogeneizado
se centrifug para recuperar la fase lquida. Despus de esto, el disolvente se lav
con 0,2 ml (0,2 ml por 1 ml) de solucin de NaCl al 0,9%. Despus de agitar en
vrtex durante algunos segundos, la mezcla se centrifug a 2000 rpm / min para
separar las dos fases. Despus de la centrifugacin y eliminacin de la fase
superior, la fase de cloroformo inferior que contena lpidos totales se evapor bajo
una corriente de nitrgeno y los lpidos se resuspendieron usando Triton X-100 al
1% en cloroformo. Los contenidos de extraccin de TG y TC en hgados se
determinaron usando kits comercialmente disponibles (Elabscience, N de catlogo:
E-EL-M2603c y E-EL-M2608c) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Anlisis histolgico
Se cortaron muestras de hgado, epiddimo y perirrenal adiposo blanco e
interscapular marrn adiposo y se fijaron en formalina tamponada al 10%. Para la
tincin con tincin de aceite rojo O, los tejidos del hgado se incrustaron en el gel de
temperatura ptima de corte y las secciones secadas al aire de 6 m de espesor se
sumergieron en formalina y se lavaron con solucin de 0,5% de aceite de color rojo
O. Para la tincin con H & amp; E, el hgado y los tejidos adiposos se embebieron
en parafina, se cortaron a 6 \ mu m y se tieron con hematoxilina y eosina (H & E).
Las imgenes fueron capturadas por la cmara Olympus CX41 (Japn). Para
evaluar la esteatosis heptica y el tamao de los adipocitos, el anlisis morfomtrico
se realiz en 3 secciones seleccionadas aleatoriamente a diferentes profundidades
para cada ratn y las secciones representativas fueron de seis ratones de cada
grupo diettico individual. Los dos softwares ImageJ y Photoshop se utilizaron para
el recuento de clulas y la cuantificacin del tamao de los adipocitos. La evaluacin
inicial del tamao de los adipocitos se realiz con un aumento menor (40 , con>
300 clulas) y se confirm con mayor aumento (100 , con> 300 clulas o 400 ,
con> 50 clulas). La esteatosis heptica se puntu de la siguiente manera: 0,
esteatosis con <5% de hepatocitos grasos; 1, esteatosis que implica 5-33% de
hepatocitos grasos; 2, esteatosis con 34-66% de hepatocitos grasos; 3, esteatosis
con> 66% de los hepatocitos grasos [22].
Extraccin de ARN y anlisis cuantitativo de PCR en tiempo real
Se extrajo ARN total del hgado con Trizol (Invitrogen Technologies, EE.UU.) de
acuerdo con las instrucciones del fabricante. A continuacin, las concentraciones
totales de ARN se midieron mediante NanoDrop 2000 (Thermo Scientific,
Wilmington, EE.UU.). 1 \ mu g de ARN total se convirti en cDNA utilizando un kit
de transcripcin inversa (Takara, Cat # RR047A). 3 muestras de ARN agrupadas
procedan de las muestras n = 12 totales en las que se combinaron 4 ratones para
generar una muestra individual en cada grupo diettico. Las mezclas de reaccin
de PCR de 20 \ mu l consistieron en 1 \ mu l de cDNA, cebadores emparejados (300
nM) y 10 \ mu l de SYBR1 Green QPCR Master Mix (Roche). El programa de
amplificacin realizado en el sistema Applied Biosystems 7500 fue el siguiente: 3
min a 50 C, 10 min a 95 C, luego 31 ciclos de 15 s a 95 C y luego 60 s a 60
C seguido por la curva de fusin durante 60 s a 95 C, luego disminucin gradual a
50 C, 20 s a 50 C, luego aumentar gradualmente a 95 C, y los ltimos 20 s. Los
cebadores se presentan en la Tabla S2. La expresin relativa de ARNm se
normaliz usando la media geomtrica de 5 genes de mantenimiento, incluyendo -
actina, RPS18, B2M, TBP y ARBP y el cambio de pliegue relativo se calcul usando
el mtodo de 2-44Ct.
anlisis estadstico
Los valores se expresaron como media SEM. Los anlisis estadsticos se
realizaron utilizando software estadstico SPSS 19.0 y las diferencias entre los
grupos mltiples se evaluaron mediante un anlisis de varianza unidireccional
(ANOVA) seguido por la prueba post-hoc de Duncan. p <0,05 se consider
estadsticamente significativo.
Resultados Caracterizacin del jugo de pitaya blanco
Los compuestos bioactivos contenidos en WPJ se enumeran en la Tabla 1.
Tabla 1. Caracterizacin qumica del jugo blanco de pitaya.
Componente Cantidad (g / L) Protena 8,26 \ pm 0,25 Azcar total 60,42 \ pm 4,16
Fibra 2,03 \ pm 0,05 Polifenoles totales 0,32 \ pm 0,02 GAE Flavonoides totales 0,27
\ pm 0,03 RE Vitamina C 0,08 \ pm 0,004
GAE, cido glico; RE, rutina.
doi: 10.1371 / journal.pone.0149670.t001

835/5000
Efecto de WPJ en la ganancia de peso corporal, el peso de los tejidos, la ingesta de
alimentos, la ingesta de lquidos y el perfil lipdico srico
Como se muestra en la Tabla 2, la alimentacin con alto contenido de grasa indujo
una gran ganancia de peso corporal en ratones, pero no se observaron diferencias
significativas en el peso corporal final o en el aumento acumulativo de peso entre el
grupo HFDJ y HFD. Los resultados similares se encontraron entre LFD y LFDJ
grupo. Adems, los ratones en LFD y LFDJ grupo consumido ms alimentos que
los de HFD y HFDJ grupo, y los ratones en LFDJ y HFDJ grupo ingesta ms lquido
que los de LFD y HFD grupo. Pero no hubo diferencias en el consumo de caloras
entre todos los grupos dietticos. Adems, de acuerdo con la proporcin de
conversin de la FDA, la dosis equivalente humana para el jugo de pitaya basada
en el rea de superficie corporal es de aproximadamente 440 ml para un humano
de 60 Kg. Dieta alta en grasa inducida por disminucin en el peso relativo de
corazn, hgado y rin, pero un aumento significativo en el peso relativo de adiposo
blanco perirrenal y epiddimo y ninguna influencia en el bazo y el adiposo marrn
interescapular en comparacin con los ratones alimentados con una dieta baja en
grasas (Tabla 2). No hubo diferencias en los pesos de los rganos entre el LFD y
LFDJ grupo. Los mismos resultados tambin se encontraron entre el grupo HFD y
HFDJ, excepto una disminucin en el peso del epiddimo blanco adiposo en el grupo
HFDJ. Por otra parte, los niveles sricos de TG, TC, HDL-C, LDL-C, ALT y AST
aumentaron significativamente en ratones alimentados con una dieta rica en grasas,
mientras que la administracin de WPJ redujo significativamente los niveles de TG
, TC, LDL-C, ALT y AST pero no HDL-C. Adems, WPJ tambin tendi a disminuir
TG y ALT en ratones alimentados con dieta baja en grasas (Tabla 2).
Tabla 2. Pesos corporales, ganancias de peso acumuladas, pesos de tejido y
parmetros de suero en ratones C57BL / 6J machos.
Elementos LFD LFDJ HFD HFDJ BW inicial (g) 19,18 0,47 19,48 0,38 19,74
0,64 18,76 0,51 BW final (g) 27,31 0,73a 26,92 0,57a 46,32 0,85b 44,69
0,87b Aumento de peso acumulativo (g) 8,14 0.91a 7.44 0.68a 26.58 0.99b
25.93 0.66b Ingesta de alimentos (g / ratn / da) 3.09 0.08a 3.19 0.08a 2.54
0.09b 2.53 0.07b Ingesta calrica (kcal / ratn / da) 11.9 \ Pm 0,31 12,28 \ pm
0,29 12 \ pm 0,44 11,98 \ pm 0,33 Ingesta de lquido (ml / ratn / da) 2,99 \ pm 0,08a
3,3 \ pm 0,07b 2,61 \ pm 0,06c 2,98 \ pm 0,07a Peso del tejido (g) Corazn 0,15
0,01 0,16 0,01 0,16 \ 0,01 0,17 \ pm 0,02 Hgado 1,04 \ pm 0,06a 0,97 \ pm 0,05a
1,44 \ pm 0,06b 1,16 \ pm 0,05a Bazo 0,06 \ pm 0,004a 0,05 \ pm 0,003a 0,08 \ pm
0,004b 0,07 \ pm 0,003c Rin 0,33 \ pm 0,01a 0,33 \ pm 0,01a 0,44 \ pm 0,02 b
0.38 0.02a WAT Perirrenal 0.18 0.03a 0.2 0.02a 1.9 0.11b 1.67 0.09c
Epiddimo WAT 0.41 0.07a 0.39 0.08a 2.67 0.15b 2.08 0.1c BAT
Interscapular 0.15 0.01 0.15 0.02 0.22 0,04 0,18 0,02 ndice de tejidos (%
BW) Corazn 0,57 0,03a 0,6 0,04a 0,34 0,01b 0,38 0,02b Hgado 3,8 0,21a
3,64 0,24ab 3,13 0,16b 2,6 0,14c Bazo 0,21 0,01a 0,2 0,01ab 0,18 0,01bc
0,16 0,01c Rin 1,23 0,06a 1,22 0,06a 0,96 0,05b 0,84 0,04b WAT
Perirrenal 0,65 0,1a 0,72 0,08a 4,1 0,21b 3,75 0.23b Epiddimo WAT 1.46
0.23a 1.41 0.25a 5.75 0.29b 4.46 0.23c BAT Interscapular 0.56 0.04 0.56
0.08 0.48 0.09 0.41 0.05 Parmetros sricos TG (mmol / L) 0.89 0.08a 0.68
0.06b 1,44 0,08c 1 0,07a TC (mmol / L) 3,09 0,29a 3,35 0,23a 5,77 0,31b
3,79 0,23a HDL-C (mmol / L) 2,61 0,18a 2,78 0,2a 5,01 0,3b 4,58 0,13b
LDL-C (mmol / L) 0,41 0,02a 0,37 0,03a 0,76 0,04b 0,28 0,03c AST (U / L)
139,8 8,94a 137,7 10,19a 185,4 8,19b 156,7 8,17a ALT (U / L) 39 \ pm 2,93a
27,3 \ pm 2,18a 109,5 \ pm 5,08b 57,8 \ pm 7,71c
LFD, ratones alimentados con dieta baja en grasa; LFDJ, ratones alimentados con
dieta baja en grasa con suplementacin de WPJ; HFD, ratones alimentados con una
dieta alta en grasa; HFDJ, ratones alimentados con dieta rica en grasas con
suplementacin de WPJ. Peso corporal; WAT, adiposo blanco; BAT, adiposo caf;
TG, triglicrido; TC, colesterol total; ALT, Alanina aminotransferasa; AST, aspartato
aminotransferasa; HDL-C, colesterol de lipoprotenas de alta densidad; LDL-C,
colesterol de lipoprotenas de baja densidad. Los valores se presentan como media
SEM (n = 10). Los datos que no comparten una letra de sobrescritura comn
difieren signi
entre los grupos (p <0,05, ANOVA).
doi: 10.1371 / journal.pone.0149670.t00
Efecto del WPJ sobre las citocinas sricas
La suplementacin de WPJ redujo significativamente el aumento de los niveles
sricos de FGF21 y LPS inducido por la dieta con alto contenido de grasa y tambin
tiende a disminuir el nivel de leptina, aunque no significativo (Fig. 1B, 1C y 1D).
Aunque no hay un aumento significativo en el nivel srico de adiponectina en el
grupo LFDJ comparado con el grupo LFD, el nivel de adiponectina srica en el grupo
HFDJ fue significativamente mayor que en el grupo HFD (Figura 1A). Adems, ni la
alimentacin de dieta con alto contenido de grasa ni la administracin de WPJ
influyeron en los niveles sricos de y NPY (Fig. 1E).
WPJ alivia la esteatosis heptica relacionada con la obesidad y la hipertrofia del
tejido adiposo
El H & E y la tincin con tintura de aceite rojo de hgados revel una acumulacin
de gotas de lpidos hepticos obvias en ratones alimentados con una dieta alta en
grasa y los ratones desarrollaron un alto grado de esteatosis heptica con hinchazn
de hepatocitos y vacuolas citoplasmticas severas, mientras que la suplementacin
de WPJ alivi significativamente la acumulacin de lpidos en el hgado y la
esteatosis heptica mejorada (Fig. 2A y 2B). los grados de esteatosis heptica
fueron significativamente ms bajos en el grupo HFDJ que en el grupo HFD (Fig.
2F). En consonancia con estos resultados, la suplementacin con WPJ tambin
disminuy significativamente la elevacin de la dieta alta en grasas en los niveles
de TG y TC hepticos (Fig. 2G y 2H). El anlisis histolgico tambin demostr que
WPJ redujo el tamao celular de tejido adipocito blanco (WAT) (Fig. 2C, 2D y 2I) y
tejido adipocito marrn (BAT) (Fig. 2E). No se observaron anormalidades
significativas en el grupo LFD y LFDJ.
WPJ mejora la resistencia a la insulina inducida por la dieta
La dieta rica en grasas indujo un aumento en los niveles sricos de glucosa e
insulina en ayunas, acompaado por un aumento de HOMA-IR y disminucin del
ndice HOMA-IS, mientras que los ratones en el grupo HFDJ revelaron una
disminucin significativa en la glucosa e insulina en ayunas y el ndice HOMA-IR,
pero un aumento distinto del ndice HOMA-IS en comparacin con los ratones en el
grupo HFD (Fig. 3), sugiriendo que WPJ mejor significativamente la hiperglucemia
inducida por la dieta y la resistencia a la insulina en ratones. No se observaron
diferencias significativas entre el grupo LFD y LFDJ.
WPJ altera los perfiles de expresin gnica heptica
Para los genes implicados en el metabolismo de los cidos grasos, la
suplementacin con WPJ aument significativamente los niveles de expresin de
Cpt1b (carnitina palmitoiltransferasa 1b) y HL (lipasa heptica) (Fig. 4A). De forma
similar, los niveles de expresin de los genes implicados en la biosntesis del
colesterol, incluyendo el gen 1, 2 (Insig1 e Insig2) inducido por la insulina, se
redujeron mediante una alimentacin rica en grasas, pero aumentaron
significativamente con el tratamiento con WPJ (Figura 4B). Adems, el tratamiento
con WPJ suprimi la expresin de HMGCoR (Hydroxy-3-Methylglutaryl-Coenzyme
A Reductase) y Srebp-1 (Factor de transcripcin de unin a elemento regulador de
Sterol 1), pero no hubo cambios significativos en la expresin de Ppar (Peroxisome
proliferator (alfa activado por el receptor alfa), Ppar (gamma del receptor activado
por proliferador de peroxisoma) y LDFR (el receptor de lipoprotenas de baja
densidad) (S1 Fig.). Adems, la dieta con alto contenido de grasa aument el nivel
de expresin de FGF21 y suprimi la expresin de sus receptores, Klb (-Klotho) y
FGFR2 (receptor del factor de crecimiento de fibroblastos 2), as como sus genes
diana, incluyendo Egr1 y cFos . Sin embargo, el tratamiento con WPJ disminuy el
nivel de expresin del factor de crecimiento de fibroblastos 21 (FGF21), pero
aument significativamente los niveles de expresin de Klb, FGFR2, Egr1 y cFos
(Fig. 4C).
Discusin
La creciente evidencia indica que el consumo de hortalizas y frutas est
inversamente relacionado con muchos trastornos metablicos, disminuyendo as el
riesgo de diabetes tipo II, NAFLD y obesidad, y los efectos benficos para la salud
de estos alimentos vegetales se deben a su alto contenido de polifenoles ,
flavonoides, vitaminas, fibras dietticas y minerales [23 - 26]. Pitaya, que se cultiva
principalmente en Asia oriental y sudoriental, Amrica Central y del Sur y el norte
de Australia, es una fuente natural de nutrientes bioactivos, pero pocos estudios se
centraron en sus efectos beneficiosos sobre los sndromes metablicos. El presente
estudio se llev a cabo para investigar los efectos de WPJ en la diabetes tipo 2 y
NAFLD en ricos en grasa dieta inducida por los ratones obesos. Nuestros resultados
demostraron claramente que la suplementacin de WPJ atenu significativamente
la estereotoma heptica inducida por la dieta, tal como se revel por la reduccin
de la acumulacin de lpidos hepticos, y el efecto beneficioso fue acompaado por
la mejor resistencia a la insulina y la sensibilidad a la insulina, y un ndice HOMA-IR
ms bajo pero un ndice HOMA-IS ms alto. Por otra parte, la administracin de
WPJ no afect la ganancia de peso corporal y la ingesta calrica de ratones, pero
disminuy el peso relativo de la adiposa blanca epididimal y atenu la hipertrofia
adiposa inducida por la dieta alta en grasa, como revel el adipocito blanco y marrn
reducido. Estudios humanos y animales han demostrado la mejora de los lpidos y
el efecto antidiabtico de pitaya rojo [15 - 17]. Teniendo en cuenta la diferencia de
constituyentes en el pitaya blanco y rojo, especialmente la ausencia de betacianinas
en el pitaya blanco, el efecto beneficioso del pitaya blanco necesita ser clarificado.
Y de acuerdo con los estudios centrados en pitaya roja, nuestros resultados
indicaron que la suplementacin con WPJ disminuy significativamente los niveles
sricos de TG, TC y LDL-C en ratones alimentados con dieta rica en grasas, lo que
sugiere el efecto reductor de lpidos de WPJ. Adems, se observ que la
suplementacin con WPJ no indujo una prdida de peso en ratones con alto
contenido de grasa alimentados con dieta, lo cual fue consistente con los resultados
previos, y se postul que esta condicin podra ser debido al alto contenido de
azcar y grasa en WPJ que contrarrest el efecto de prdida de peso. A pesar de
no influir en el aumento de peso corporal, la administracin de WPJ redujo
significativamente el tamao de los adipocitos blancos y pardos, como lo revela el
anlisis histolgico de los adipos, lo que sugiere que WPJ podra atenuar la
hipertrofia de tejido adiposo inducida por la dieta alta en grasa, . Adems, no hubo
diferencia en la ingesta calrica diaria entre todos los grupos dietticos. De acuerdo
con estos resultados, los niveles sricos de NPY, que podra regular la ingesta de
alimentos y el almacenamiento de energa [27], no fueron afectados por la
alimentacin de HFD o intervencin WPJ, lo que sugiere que WPJ ejerci sus
efectos beneficiosos sobre el metabolismo de los lpidos sin afectar la ingesta de
energa de ratones. La leptina juega un papel importante en la regulacin de la
homeostasis energtica y el metabolismo de los lpidos, y la mayora de los animales
obesos muestran un estado resistente a la leptina [28]. De forma consistente, el
nivel de leptina de ratones alimentados con HFD ha sido elevado y el tratamiento
con WPJ indujo una clara disminucin, aunque no significativa, en el nivel srico de
leptina, lo que implica que la administracin de WPJ podra mejorar la resistencia a
la leptina inducida por HFD directa o indirectamente . Adems, tambin se
identificaron niveles sricos elevados de adiponectina en los ratones HFD tratados
con WPJ. Adiponectin se ha demostrado para regular el metabolismo de los lpidos
y la glucosa [29]. Estos resultados implicaron que los efectos beneficiosos de WPJ
en estos sndromes metablicos podran estar asociados con el metabolismo
mejorado de los lpidos. Acumulacin de lpidos hepticos El anlisis heptico de la
expresin gnica indic que el tratamiento con WPJ cambi el perfil de expresin
de los genes (Cpt1b, LPL y Srepb1) implicados en el metabolismo de los cidos
grasos y los genes (Insig1, Insig2 y HMGCoR) implicados en la biosntesis del
colesterol. Estos genes han sido plenamente dilucidados para desempear papeles
cruciales en la modulacin de la biosntesis de colesterol, la biosntesis de cidos
grasos o beta-oxidacin [31 - 35]. Lipopolisacridos (LPS), tambin conocidos como
lipoglicanos y endotoxinas. Se ha demostrado que una dieta rica en grasa induce
niveles elevados de LPS en suero, una condicin denominada endotoxemia. Los
niveles elevados de LPS en suero desencadenan varios marcadores inflamatorios
que son un precursor de la progresin hacia el sndrome metablico, lo que resulta
en inflamacin significativa, ganancia de peso corporal, resistencia a la insulina, y
en ltima instancia la diabetes tipo 2 [36, 37]. Por consiguiente, la bioactividad del
jugo de pitaya blanco para contener los niveles de LPS en circulacin puede
explicarse por la reduccin de la acumulacin de lpidos en los hgados y la
proteccin contra el NAFLD y la resistencia a la insulina en ratones con alto
contenido de grasa alimentados con dieta. Con respecto a estas consideraciones,
decidimos examinar los niveles sricos de LPS. De acuerdo con los estudios
previos, 14 semanas de alimentacin de HFD indujeron un aumento significativo en
el nivel circulante de LPS, que fue completamente prevenido por la suplementacin
de WPJ. Este hallazgo se asoci con la reduccin de los niveles sricos y hepticos
de TG mediante el tratamiento con WPJ. La obesidad y la esteatosis heptica suelen
estar acompaadas de resistencia a la insulina, por lo tanto aumentando el riesgo
de diabetes tipo II [7, 38], y la resistencia a la insulina en sujetos obesos diabticos
II es peor que en los sujetos no obesos diabticos. Los efectos de mejora de glucosa
en la sangre y la hiperinsulinemia de mejorar pitaya rojo han sido reportados,
respectivamente, en pacientes diabticos y ratas [15, 17]. Sin embargo, Ramli et al.
recientemente inform que el jugo de pitaya roja no ejercen ninguna influencia en
los niveles de glucosa en la sangre en ratas con alto contenido de carbohidratos y
ricos en grasas alimentadas [18]. As que el efecto antidiabtico del pitaya rojo
parece controvertido. En este estudio, se encontr que la administracin de WPJ no
slo disminuy significativamente los niveles sricos de glucosa e insulina sino que
tambin disminuy el ndice HOMA-IR, lo que sugiere que WPJ mejor la resistencia
a la insulina inducida por la dieta alta en grasas en ratones. Adems, el aumento
del ndice HOMA-IS en ratones tratados con WPJ tambin implicaba el efecto
sensibilizador de insulina de WPJ. Estos resultados indicaron una fuerte actividad
antidiabtica de la pitaya blanca. FGF21, como un nuevo miembro de la familia
FGFs, se expresa principalmente en el hgado [40]. Un creciente cuerpo de
literaturas muestran que la administracin exgena FGF21 mejorar la glucosa y la
homeostasis lipdica, la sensibilidad a la insulina y la esteatosis heptica [41, 42].
Sin embargo, los estudios de montaje tambin apoyan que los niveles plasmticos
de FGF21 estn marcadamente aumentados en obesidad, insulinorresistencia,
hipertrigliceridemia, hepatosteatosis y estados de lesin heptica [43, 44], lo que
sugiere que FGF21 no ejercen sus efectos beneficiosos sobre la homeostasis de
lpidos y glucosa. El fracaso del FGF21 endgeno para mejorar estos sndromes
metablicos implic un estado resistente a FGF21 debido a la accin deteriorada
del FGF21. De acuerdo con los hallazgos anteriores, nuestros resultados mostraron
que la dieta con alto contenido de grasa indujo un aumento del nivel srico de
FGF21, lo que implic que el estado obeso podra resultar en una sobreproduccin
compensatoria de FGF21. Numerosos estudios han demostrado que la actividad
FGF21 depende de la unin a su cofactor, -Klotho, (Klb) y sus receptores (FGFRs)
[45]. Nuestros resultados mostraron que la dieta con alto contenido de grasa
aument el nivel de expresin heptica de FGF21, pero suprimi significativamente
la expresin de FGFR2 y Klb. La dieta rica en grasas tambin result
significativamente en la induccin alterada de Egr1 y cFos que son los genes diana
de FGF21. Aunque el tratamiento con WPJ disminuy la expresin FGF21, aument
significativamente los niveles de expresin de Klb, FGFR2, Egr1 y cFos. Estos datos
sugirieron que WPJ podra mejorar el perfil de expresin del receptor y cofactor
FGF21, atenuando as la resistencia a FGF21. Por lo tanto, un sitio de accin
potencial para que WPJ pueda ejercer su efecto antidiabtico y anti-hepatosteatosis
podra restaurar la funcin del FGF21. En resumen, nuestros resultados
demostraron que la administracin de WPJ mejor la resistencia a la insulina
inducida por la dieta y la esteatosis heptica en ratones. Los efectos beneficiosos
de WPJ en estos los sndromes metablicos se asociaron con la mejor resistencia
a FGF21 y el metabolismo lipdico. Estos hallazgos sugieren una eleccin diettica
en el manejo de la diabetes tipo II y NAFLD.
Informacin de apoyo
S1 Fig. La influencia del jugo de pitaya blanca (WPJ) en los perfiles de expresin de
Ppar, Ppar, LDLR, HMGCoR y Srebp-1. HMGCoR, hidroxi - 3 - metil - glutaril -
coenzima A reductasa); Srebp - 1, factor de transcripcin de unin a elemento
regulador de esterol 1; Ppar, receptor alfa activado por proliferador de peroxina;
Ppar \ gamma; receptor gamma activado por proliferador de peroxisoma; LDFR,
Receptor de Lipoprotena de Baja Densidad; LFD, ratones alimentados con dieta
baja en grasa; LFDJ, ratones alimentados con dieta baja en grasa con
suplementacin de WPJ; HFD, ratones alimentados con una dieta alta en grasa;
HFDJ, ratones alimentados con dieta rica en grasas con suplementacin de WPJ.
Los valores se presentan como media SEM. Los datos que no comparten un
superndice comn difieren significativamente entre los grupos (p <0,05, ANOVA).
(TIF)
Archivo S1. Datos brutos. (XLSX)
Archivo S2. Datos brutos. (CREMALLERA)
Tabla S1. Ingredientes de las dietas purificadas. (DOCX)
Tabla S2. Primers utilizados para la PCR cuantitativa en tiempo real. (DOCX)
Contribuciones de autor
Concebido y diseado los experimentos: HZS XDZ. Realiz los experimentos: HZS
ZHZ. Analizamos los datos: JNW. Reactivos / materiales / herramientas de anlisis
aportados: JL QC. Escribi el trabajo: HZS XDZ.