CUESTIONARIO DE CROMATOGRAFA 1.

A qu grupo de compuestos pertenecen los pigmentos? R= Carotenoides y xantofilas.

2.
A qu se debe que estos compuestos sean coloridos? R= Carotenoides: son los responsables
de la gran mayora de los colores amarillos, anaranjados y rojos presentes en los alimentos
vegetales. Entre mayor sea la intensidad del color, mayor ser el contenido de carotenoides.
Xantofilas: son compuestos qumicos pertenecientes al grupo de los carotenoides que poseen
uno o ms tomos de oxgeno en su estructura. Se encuentran de forma natural en muchas
plantas y presentan tambin accin fotosinttica. Estos pigmentos, ms resistentes a la
oxidacin que las clorofilas, proporcionan sus tonos amarillentos y parduzcos a las hojas secas.
3.
Explique la diferencia entre cromatografa de adsorcin y particin. R= Cromatografa de
particin: La mayora de las sustancias tendrn distinta solubilidad en diferentes solventes. Si
una sustancia se pone en contacto con dos solventes que no se mezclan entre s, se distribuir
entre los dos solventes en relacin a su solubilidad en cada uno. Se llama efecto de particin a
la distribucin de un soluto entre dos o ms solventes que no se mezclan. El solvente o el
lquido que es atrapado por el medio del sostn sea este papel, gel, slice o almina, se llama
fase estacionaria. Al solvente revelador se le llama fase mvil. Cromatografa de adsorcin:
La cromatografa de adsorcin o liquido-slido, es la forma clsica de cromatografa de lquidos.
La adsorcin se lleva a cabo cuando hay una concentracin ms alta en la superficie de un
slido que en la solucin circundante. La adsorcin se refiere al enlace de una sustancia a la
superficie de otra. Generalmente los adsorbentes usados en cromatografa son el carbn
mineral, el gel de slice, y la almina.
4.
Cules son las ventajas y desventajas de la cromatografa en capa fina en comparacin con la
cromatografa en columna? R= Cromatografa en columna: Las separaciones en la
cromatografa en columna pueden realizarse por reparto, adsorcin o intercambio inico. El
estado fsico del adsorbente ha de ser de tal manera que permita el empaquetamiento uniforme
de la columna y el flujo libre de disolvente a travs de ella. Cromatografa en capa fina:
Cromatografa en papel y electro cromatografa. En todos los casos se emplea una capa plana
y relativamente delgada de una materia que a la vez es el soporte o bien que recubre una
superficie de vidrio, plstico o metlica. La fase mvil se mueve a travs de la fase estacionaria
por capilaridad, a veces ayudada por gravedad o por aplicacin de un potencial elctrico. En la
actualidad la cromatografa en plano se centra en la tcnica de la capa fina, que es ms rpida,
tiene mejor resolucin y es ms sensible que su alternativa en papel.
5.
Explique la diferencia que existe entre el adsorbente utilizado en cromatografa en capa delgada
y el de columna. Hacer una lista en orden creciente de actividad. R= En columna: Puede usarse
cualquier medio adsorbente siendo los ms generales la celulosa, gel de slice, almina oxido
de magnesio, oxido de clcico y carbn activo (para separaciones por adsorcin y de
intercambio inico). Se emplea para la separacin de mezclas o purificacin de sustancias a
escala preparativa. Como fase estacionaria se usa, generalmente, gel de slice o almina dentro
de una columna. La
eleccin del disolvente es crucial para una buena separacin. Dicho disolvente pasa a travs de
la columna por efecto de la gravedad o bien por aplicacin de presin (cromatografa flash). La
columna se prepara mezclando el soporte con disolvente. Capa delgada:
Slica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones)

xido de Aluminio o Almina (cida, neutra o bsica)

Celulosa (Nativa o micro-cristalina)

Poliamidas Estos adsorbentes deben tener las siguientes caractersticas:

Tamao de partcula pequeo

Dimetro de poro grande

rea superficial grande

Homogeneidad

Alta pureza
6.
Hacer una lista de los eluyentes usados comnmente en cromatografa en columna y capa
delgada en orden creciente de polaridad.

Hexano

ter de petrleo

Benceno

Tolueno

ter etlico

Cloroformo

Acetato de etilo

Cloruro de metilo

Dicloroetano

Acetona

Etanol

Metanol
7.
Lista de la capacidad de adsorcin de los grps. funcionales de los compuestos orgnicos. R=
7.1.
 Qu compuesto es ms retenido una amina o un alqueno, ejemplifique en una capa
cromatogrfica? R= Un alqueno, por su polaridad.
8.
Cmo se prepara el capilar para aplicar la muestra en la cromatoplaca? R= Se le aplica calor
para as poder romperlo cuidando que quede un orificio no muy grande.
9.
Por qu es necesario que la cmara de elusin est saturada con los vapores del eluyente?
R= Por que as ser ms fcil el arrastre de los pigmentos y no se secar la placa.
10.
Explique cada uno de los siguientes trminos:

Eluyente: solvente que se usa en tcnicas de cromatografa para extraer un compuesto que se
quiere separar de otra fase.

Eluato: la sustancia que se separa o sale de la columna despus de cada extraccin.

Elucin fraccionada: Aparato de elucin fraccionada electrofortico tiene una columna con una
rotacin conjunta de sello en el que un delgado chorro de elucin bfer es dirigido a travs de la
luz de la columna electrofortica en una direccin perpendicular a la de migracin
electrofortica. El contenido

de la columna se gira en relacin con el jet estacionario o se gira el jet con respecto a la
columna. El sistema puede emplear electroforesis en solucin libre o en columnas
empaquetadas.

Adsorcin: Es un proceso por el cual tomos, iones o molculas son atrapados o retenidos en
la superficie de otra sustancia o material.

Particin: La separacin se basa en las diferencias de solubilidad de los componentes de la

mezcla en las fases estacionaria y mvil.

Elucin: se produce por el flujo de una fase mvil a travs de la fase estacionaria.

Adsorbente: es un slido que tiene la capacidad de retener sobre su superficie un componente

presente en corrientes lquidas o gaseosas. Se caracteriza por una alta superficie especfica y
por su inercia qumica frente al medio en el que se va a utilizar.

Actividad del adsorbente: El nivel de actividad de la adsorcin depende de la concentracin de

la sustancia en la solucin, la temperatura y la polaridad de la sustancia.

Afinidad por el adsorbente: es que la sustancia ceda a la capacidad de capilaridad del

adsorbente y eluya a travs de l.
11.
Cmo se clasifica la cromatografa en funcin de su fase estacionaria?
Naturaleza de fase estacionaria

Clasificacin Naturaleza de fase mvil

 Lquido Lquido-lquido: particin Lquido-slido: adsorcin, cambio inico, exclusin, afinidad.
Gas Gas-lquido (CGL) Gas-slido (CGS)
12.
Cul es la funcin de la fase mvil y como se lleva a cabo la separacin en la cromatografa de
adsorcin? R= Su funcin es eluir los componentes de la mezcla a separar a travs de la fase
estacionaria. La cromatografa de adsorcin se lleva a cabo mediante el uso de una fase
estacionaria donde se observar la elucin de los componentes de la mezcla, los cuales sern
eluidos por el disolvente, que es la fase mvil.
13.
Cmo se prepara la papilla para la cromatografa en capa fina?, por lo menos dos mtodos.
R= Se machaca con ayuda de un mortero y pistilo hasta hacer polvo la slica, luego se aade el
disolvente. Tambin se puede hacer en un vaso de precipitados y con una varilla de vidrio,
agitando constantemente hasta formar la papilla.
14.
Cundo es conveniente activar una placa y cmo se activa? R= Antes de que se puedan usar
las placas generalmente deben ser calentadas para retirar el agua que acta como una
impureza y evita una buena separacin. La magnitud de calor depende del tipo de separacin
que se requiere para compuestos hidrfilos o polares, el secado al aire o con un secador de
pelo son generalmente suficiente; para los compuestos hidrofbicos o no polares es necesario
un calentamiento ms intenso. Las placas de xido de aluminio y de gel de slice con adhesivo
requieren ser secadas al aire durante aproximadamente 30 min. Y despus ser activadas en un
horno a 100C alrededor de 30 min. Las placas de celulosa debern secarse al aire libre
durante 30 min. y activarse al horno durante 10 min. a 105C.

15.
Qu espesor debe tener la fase estacionaria en una C.C.D.? R= No debe ser espesa ni muy
aguada, debe deslizarse solo por la placa al momento de prepararla.
16.
Al comparar los R
F
de dos componentes se encontr que eran iguales, podra pensarse que se trata del mismo
compuesto? Explique brevemente. R= Si, esto se concluye debido a que si ambos
componentes eluyen de la misma manera, significa que tienen una polaridad muy semejante,
por lo tanto podra inferirse que se trata del mismo componente.
17.
Explique brevemente si existe una relacin entre la cantidad de adsorbente y las dimensiones
de la columna para una mezcla. R= Entre ms grande sea una columna, ms adsorbente se
necesitar, esto para observar mejor la separacin de los componentes; adems de necesitar
ms disolvente para continuar la elucin y evitar la sequedad del sistema.
18.
Cmo debe de ser la polaridad del eluyente al empacar una columna? R= La polaridad del
eluyente debe ser mayor
19.
Con relacin al R
x
:
19.1
Cundo se usa el R
x
en cromatografa en capa delgada? R= Cuando no se cuenta con un compuesto con polaridad
conocida, y por lo tanto elusin conocida, que se pueda usar como referencia en la C.C.D.
19.2
Qu significa la obtencin de R
x
igual a uno? R= Que el compuesto y el eluyente tienen la misma polaridad, incluso hasta
mayor la de este ltimo.
19.
Cul es el orden de polaridad en que salen los compuestos de una cromatografa en
columna? R= En la cromatografa de columna las molculas de una mezcla son separadas en
base a la afinidad de las molculas por la fase estacionaria o por la fase mvil. Si una molcula
A tiene ms afinidad por la fase estacionaria que la B, B bajar ms rpido que A.

Hexano

ter de petrleo

Benceno

Tolueno

ter etlico

Cloroformo

Acetato de etilo

Cloruro de metilo

Dicloroetano

Acetona
Etanol

Metanol
20.
A qu se le llama frente del eluyente en cromatografa en capa delgada? Demustrelo en una
placa. R= Es la lnea donde acaba la elusin, si se rebasa dicha lnea se corre el riesgo de que
los componentes separados se esparzan a lo largo de la parte posterior de la placa.

21.
Cmo se controla la salida de los componentes en una cromatografa en columna? R= Se
controla con la llave de la bureta, se va colocando los distintos pigmentos en tubos de ensayo, a
los que se les denominar como fracciones.
22.
Por qu no debe dejarse secar la columna cromatografa? En caso de que se fracture qu
se recomienda hacer? R= Porque de no ser as la fase estacionaria se contraera y agrietara.
Se debe rehidratar con ms eluyente si esto ocurre.
23.
Por qu es importante que las muestras a separar por cromatografa deban estar lo ms
secas posible? R= Para que no interfiera el agua con la elucin, por medio del disolvente, de los
componentes de la muestra.
24.
Por qu al cargar una columna se recomienda que la muestra lleve la mnima cantidad de
disolvente? R= Las cantidades altas de flujo dan malas separaciones, el promedio es de 3 a
4mL/min. en una columna de 40 cm de altura aprox.
25.
Qu pH presenta la almina? Mencione los tres casos. R= Presenta tres pH: almina cida
pH de 4.5, almina bsica pH de 10.0 y almina neutra pH de 8.0.
26.
Por qu cuando se usa almina como adsorbente no se recomienda usar acetona como
eluyente? R= Porque se desnaturaliza y queda pegada en las paredes de la columna.
27.
Cules son los pasos a seguir para la preparacin de una placa preparativa? R= Las
separaciones en capa fina caractersticas se realizan en placas de vidrio o plstico que se
recubren con una capa delgada y adherente de partculas finamente divididas, esta capa
constituye Ia fase estacionaria. Las partculas son semejantes a Ias de Ia cromatografa en
columna. Las capas finas preparadas sobre vidrio se denominan cromatoplacas o placas
simplemente.
28.
Cul es la aplicacin de la cromatografa en placa preparativa? R= La eleccin de un eluyente
ideal para cromatografa en columna.
29.
Qu diferencia existe entre cromatografa en capa delgada analtica y cromatografa en placa
preparativa? R= La preparativa se emplea generalmente para elegir un eluyente o mezcla de
eluyentes ideal para cromatografa en columna. La analtica ya cuenta con un eluyente ideal y
registra R
x
, es decir, se analiza la elusin de los componentes para arrojar un valor numrico final.
30.
Cmo se clasifican los reveladores en forma general? R= Qumicos y fsicos.
31.
Cuando una sustancia orgnica no se revela con I
2
o luz UV, qu otros reveladores pueden usarse para observar la sustancia? R= Con
reveladores qumicos especficos para los componentes separados.

CUESTIONARIO DE CROMATOGRAFIA
1.

Explique la diferencia entre cromatografa de particin y adsorcin

Los mtodos cromatogrficos se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de
las fasesestacionarias y mviles.Cromatografa de adsorcin: Cuando la fase
estacionaria es un slidoCromatografa de reparto: Cuando la fase estacionaria es
un lquido
2.

Cules son las ventajas y desventajas de cromatografa en capa delgada y

columna?
La cromatografa en capa fina presenta una serie de ventajas frente a otros
mtodoscromatogrficos (en columna, en papel, en fase gaseosa, ...) ya que el
utillaje que precisa es mssimple. El tiempo que se necesita para conseguir las
separaciones es mucho menor y la separacines generalmente mejor. Pueden
usarse reveladores corrosivos, que sobre papel destruiran elcromatograma. El
mtodo es simple y los resultados son fcilmente reproducibles, lo que hace
quesea un mtodo adecuado para fines analticos.En la cromatografa en
columna, se pueden obtener las separaciones de los compuestos coloridos,las
cuales pueden concentrarse y as obtenerse cada uno de los componentes por
separados, esdecir es un proceso de purificacin y aislamiento total de la
sustancia.La desventaja de este mtodo es que solo es para sustancias coloridas,
para que puedanobservarse las separaciones
3.

Hacer una lista de capacidad de adsorcin de los grupos funcionales de los

compuestosorgnicos
De mayor a menor capacidad de adsorcin:
4.

Cmo se prepara el capilar para aplicar la muestra cromatogrfica?

Se toma un capilar y se calienta por el centro con la flama de un encendedor,
posteriormente se jala de los extremos hasta que se separe en 2 partes el capilar.
Despus de esto tendr un extremoms delgado que el otro. Para la aplicacin de
la muestra se coloca cerca del extremo de menordimetro del capilar hasta q suba
el disolvente con la muestra para despus colocarla en la placa.
5.

Hacer una lista de eluyentes usados en cromatografa en columna y capa

delgada enorden creciente de polaridad

Hexano, teres de petrleo

Heptano

Ciclohexano

Tetracloruro de carbono

Benceno

Tolueno

Cloroformo

ter dietlico

Acetato de etilo
Piridina

Acetona

Propanol

Etanol

Metanol

Agua
6.

Cmo se controla la salida de los componentes en una cromatografa en

columna?
A la columna se le coloca en la punta un poco de sal y algodn para que las
separaciones seangota a gota, aunque tambin se puede controlar con ayuda de
una llave adaptada a la columnacromatogrfica.
7.

Qu diferencia existe entre la cromatografa en capa delgada analtica y

cromatografaen placa preparativa?
La cromatografa en capa delgada analtica se emplea para fines analticos
cualitativos. Para lasplacas preparativas se utiliza para separar cerca de 100mg de
mezcla dependiendo de sucomplejidadA diferencia de la analtica, de la placa
preparativa se pueden extraer los componentes.
8.

Cuando una sustancia orgnica no se revela con I

2
o luz ultravioleta, qu otrosreveladores pueden usarse para observar la
sustancia?

cido sulfrico

2,4-dinitrofenilhidracina ( para aldehdos y cetonas)

Verde de bromocresol (para cidos carboxlicos)

Paradimetil aminobenzaldehido (para aminas)

Ninhidrina (para aminocidos)

9.

Por qu es necesario que la cmara de elusin este saturada con los

vapores deleluyente?
Porque al estar saturada la cmara con los vapores del eluyente, ya que se
consumen menosdisolventes y es ms rpida la separacin de los compuestos.

10.

Cundo es conveniente activar una placa y como se activa?

Es conveniente activar las placas cuando se va a realizar una cromatografa de
adsorcin, para locual se calientan las placas en una estufa de 100C a 150C
durante un par de horas.
11.

Cmo se clasifica la cromatografa en funcin de su fase estacionaria?

Adsorcin (fase estacionaria slida)

Particin (fase estacionaria lquida)

12.

Cmo se prepara la papilla para la cromatografa en capa fina?

En un vaso de precipitados se coloca el adsorbente elegido y se disuelve con el
eluyente, o en casode ser una mezcla, con el eluyente menos polar.
13.Cundo es conveniente activar una placa y como se activa?
Es conveniente activar a placa poco antes de usarla y esto se logra al eliminar
todo el disolventeocupado para la papilla.
14. Al comparar los RF de dos compuestos se encontr que eran iguales
Podrapensarse que se trata del mismo compuesto? explique brevemente.
Si, se puede pensar que es el mismo compuesto pero no se puede asegurar al
100% pues puedeser algo con polaridad similar.
15. Cmo debe ser la polaridad del eluyente al empacar la columna?
De baja polaridad
16.

Cul es el orden de polaridad en que salen los compuestos de una

cromatografa en

columna?
Del menos polar al ms polar
17. A qu se llama frente del eluyente en CCF?
Es la medicin de la distancia recorrida desde el origen por el compuesto de
referencia x.
18. Cmo se controla la salida de los eluyentes en cromatografa en
columna?
Por la llave de la columna para cromatografa.

19. Cmo se clasifican los reveladores en forma general?

Fsicos y Qumicos
20. Qu revelador especifico utilizara cuando se tiene un?:
Aminocido: ninhidrinaFenol: Hierro IIICetona: 2,4
dinitrofenilhidracinaHidrocarburo insaturado: hidroquinona