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UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA

FACULTAD DE CIENCIAS

INTRODUCCIÓN A LA
CROMATOGRAFÍA

QUÍMCA ANALÍTICA
INSTRUMENTAL

MSc. CHRISTIAN JACINTO H.


Objetivos
 Describir el proceso de elución
cromatográfico.
 Identificar las condiciones para la
separación de bandas del cromatograma.
 Realizar los cálculos de análisis
cuantitativo por cromatografía.
Descripción General
 La cromatografía permite separar compuestos
estrechamente relacionados en mezclas
complejas, lo que en muchas ocasiones resulta
imposible separar por otros medios.
 En toda separación cromatográfica existen dos
componentes:
 Fase móvil: que puede ser gas, líquido o fluido
supercrítico
 Fase estacionaria: inmiscible a la fase móvil que se
fija a una columna o superficie sólida.
Descripción General
 Los componentes a separar se hacen pasar por
medio de la fase móvil a través de la fase
estacionaria, los componentes fuertemente
unidos a esta se mueven lentamente con el flujo
de la fase móvil. Los componentes unidos
débilmente a la fase estacionaria se mueven
con rapidez.
 Como consecuencia de las distintas
movilidades, se separan los componentes en
bandas o zonas distintas que pueden analizarse
cualitativa y cuantitativamente.
Clasificación de los Métodos
Cromatográficos
Cromatografía de Elución en
Columna La elución cromatográfica consiste
en hacer fluir la muestra a través de
la columna por adición continua de
la fase móvil (eluente). Debido a
que el movimiento del soluto solo
ocurre en la fase móvil, la velocidad
de migración depende del tiempo de
residencia en la fase móvil
Separación de las Bandas
 El movimiento de avance por la columna
aumenta la distancia entre las dos bandas pero
también aumenta el ensanchamiento de la
banda. Se puede encontrar condiciones en las
que ocurre la separación de las bandas
(aumentar la resolución) y esta ocurre con una
columna bastante larga.
 Las bandas no separadas pueden ser resueltas
por:
 Ajustando de la Velocidad de Migración
 Ajustando el ensanchamiento de la banda
Separación de las Bandas
Velocidad de Migración
La velocidad está determinado por la constante de
equilibrio que distribuye el analito A en las dos fases:
Amóvil Aestacionaria
C estacionaria C s
K 
C móvil Cm

Donde K es la constante de distribución, razón de


distribución o coeficiente de distribución. K es
constante en un amplio rango de concentraciones de
Cs. Cuando se aplica esta ecuación, entonces la
cromatografía es lineal y los picos son gaussianos y
simétricos.
Velocidad de Migración

tR: tiempo de retención para especies retenidas.


tM: tiempo para especies no retenidas (tiempo muerto).

L L
v u
tR tM
Velocidad de Migración
 Factor de Retención o de capacidad (velocidad de
migración del soluto)
Se utiliza para describir las velocidades de migración de
los solutos en las columnas:
tR  tM Si: k’A<1 , la separación es pobre
k 
'
A k’A>30, la separación es muy lenta
tM k’A 2-10, la separación es óptima

 Velocidad de migración relativa (factor de


selectividad, a)
K B k'B t R ( B )  t M
a  '  a > 1,0 mejor separación
K A kA tR ( A )  tM
ENSANCHAMIENTO DE LA
BANDA
 Forma de los Picos
Los picos cromatográficos deben ser semejantes a las
curvas de error normal o gaussianos. La forma
gaussiana de una banda cromatográfica ideal se puede
atribuir a la combinación aditiva de los movimientos
aleatorios de las numerosas moléculas del soluto en la
banda cromatográfica. El ancho de la zona es
proporcional al tiempo de permanencia en la columna e
inversamente proporcional a la velocidad a la que fluye
la fase móvil.
Es importante que podamos medir la eficiencia de la
columna en base al ensanchamiento de las bandas.
Número de Platos Teóricos
 Teoría de los Platos Teóricos Cromatográficos:
El número de platos teóricos de una columna está dado
por: L
N
H
N = número de platos teóricos
L = longitud de la columna
H = altura de un plato teórico
 La eficiencia de la columna aumenta con el número de
platos teóricos N.
 El término “plato teórico” proviene de las columnas de
destilación, y en cada plato se encuentra la especie en
equilibrio entre la fase móvil y la fase estacionaria.
Número de Platos Teóricos
Número de Platos Teóricos

2
 tR 
N  16  
 WB 
RELACIÓN ENTRE H Y LA
VELOCIDAD DE FLUJO
Ecuación de Van Deemter:
B B
H  A  Cu  A   (C S  C M )u
u u

A: variable que representa los


caminos múltiples de flujo
B: difusión longitudinal
C: transferencia de masa entre
la fase
Gráfico de Van Deemter
Ecuación de Van Deemter
•Término de Camino Múltiple (A):
El ensanchamiento de la banda
surge en parte a que las
moléculas se mueven en
múltiples caminos.
Este ensanchamiento depende
del tamaño de partícula del
relleno, la regularidad del relleno
y en menor grado del diámetro
de la columna.
Para minimizar A se usa
partículas pequeñas de tamaño
uniforme y columnas de
diámetro pequeño.
Ecuación de Van Deemter
 Término de difusión longitudinal (B)
Los solutos al difundirse de la zona central
concentrada a las zonas mas diluidas que son
adelante y atrás de la banda, ocasiona también
un ensanchamiento de la banda.
Este valor es directamente proporcional a la
densidad, al coeficiente difusional en la fase
móvil DM, e inversamente proporcional a la
velocidad de flujo.
Para disminuir B incluye, velocidad de flujo mas
rápidos, gas portador mas densos (N2 o Ar) y
presión elevada para inhibir la difusión.
Ecuación de Van Deemter
 Coeficiente de transferencia de masa (C)
El ensanchamiento de banda por los efectos de
transferencia de masa se debe a que las velocidades de
adsorción y desorción del analito en las fases
estacionarias tienen valores finitos, por lo que no
asegura condiciones de equilibrio. A mayor velocidad
de la fase móvil, menos tiempo a que alcance el
equilibrio, mayor H y menor eficiencia de la columna.
Depende del espesor de la película, la difusibilidad del
analito en la película líquida, el factor de capacidad y la
velocidad de flujo.
Relación entre H y la
Velocidad de Flujo
Optimización de la Eficacia de la
Columna
 Una separación cromatográfica se optimiza
variando las condiciones experimentales hasta
que los componentes de una mezcla se separen
completamente en el menor tiempo posible.
 Los experimentos de optimización tienen como
objetivo:
 reducirel ensanchamiento de banda,
 modificar las velocidades relativas de migración de
los componentes.
Resolución de la Columna
 La resolución R, de la columna constituye una medida
cuantitativa de su capacidad para separar dos analitos.
 La resolución R se define como:
z 2z
Rs  
W A 2  WB 2 W A  WB
 La resolución se puede relacionar con los factores de
selectividad y retención:
k B'  k A' N  a  1   k B'   k' 
Rs  
N
   
  
' 

N
a  1 
1  kB '
4 4  a  1  kB  4 1  k' 

t R ( B) 
NH (1  k ) 16 R H  a  1  k
'
B

2
S
 
2
 ' 3
B 
u u  a  1 k  
' 2
B
Variables que Afectan la Eficacia
de la Columna
 Observamos que R depende de N, a y k’.
 Para modificar a y k’ se varía la temperatura o la
composición de la fase móvil. Menos
conveniente es cambiar el relleno de la
columna.
 N (o H) es posible modificarlo alterando el
caudal de la fase móvil, el tamaño de la
partícula de relleno, la viscosidad de la fase
móvil (y así DM o DS) y el espesor del líquido
adsorbido de la fase estacionaria.
Problema
 Las sustancia A y B tienen los tiempos de retención de
16,40 y 17,63 minutos respectivamente, en una columna
de 30 cm. Una especie que no se retiene pasa a través de
la columna en 1,30 minutos. Las anchuras de picos para
A y B son 1,11 y 1,21 minutos respectivamente. Calcular:
a) la resolución de la columna, b) el número de platos
promedio de la columna, c) la altura del plato, d) la
longitud de la columna necesaria para conseguir una
resolución de 1,5, e) el tiempo necesario para que la
sustancia B eluya en la columna mas larga y f) la altura de
plato necesaria para obtener una resolución de 1,5
utilizando la columna original de 30 cm y en el tiempo
dado originalmente.
Problema General de la
Elución
Aplicaciones de la Cromatografía
 Análisis Cualitativo:
 La información cualitativa se obtiene a través de su
tiempo de retención a las mismas condiciones
experimentales.
 Pero esta información es pequeña en comparación
con lo que proporciona un espectro de IR, RMN, de
masas o espectrales.
 Aún así es una herramienta que se utiliza para
reconocer la presencia o ausencia de componentes
en mezclas que contengan un número limitado de
posibles especies de la que se conozca su identidad.
Aplicaciones de la Cromatografía

 Análisis Cuantitativo:
 En cromatografía de columna se basa en la
comparación de la altura, el área, del pico del analito
con la de uno o mas patrones.
 En cromatografía en plano, el área ocupada en las
especies separadas sirve como parámetro analítico.
 Si se controlan las condiciones adecuadamente,
estos parámetros varían linealmente con la
concentración.
Aplicaciones de la Cromatografía
 Análisis Cuantitativo:
 Análisis basado en la altura del pico. Depende de la
variables experimentales y de la velocidad de
inyección de la muestra. Se mide uniendo las líneas
bases a cada lado del pico por una línea recta y
midiendo la distancia vertical desde esta línea al pico.
 Análisis basados en las áreas de los picos. Es
independiente de los efectos de ensanchamiento del
pico. Los instrumentos modernos poseen
integradores electrónicos que hallan las áreas de los
picos.
Aplicaciones de la Cromatografía
 Análisis Cuantitativo:
 Método del patrón interno. Evita las incertidumbres
asociadas a la inyección de la muestra. Se introduce
en cada estándar y en la muestra una cantidad
conocida del patrón interno, y la relación de las áreas
o alturas o áreas sirven como parámetro analítico.
 Método de la Normalización de las áreas. Se
produce la elución completa de todos los
componentes, la concentración del analito se calcula
por la relación de su área con el área total de los
picos. Hay que corregir las áreas debido a las
diferencias en la respuesta del detector a los distintos
tipos de compuestos.
Problema
 El método de la normalización de las áreas se aplicó
para la determinación de una mezcla de alcoholes: n-
butílico, iso-butílico, sec-butílico y terc butílico:
Alcohol Patrones Muestra
Peso, g Área, cm2 Área, cm2
n-butílico 0,1731 3,023 1,731
iso-butílico 0,1964 3,074 3,753
sec-butílico 0,1514 3,112 2,845
terc-butílico 0,1826 3,004 1,117

 Calcular el porcentaje en peso de cada alcohol en la


citada muestra.
Problema
 Un analista obtiene los siguientes datos para
una muestra que contiene metilisobutilcetona 10
% m/m (pico 1) y p-xileno al 1 % m/m (pico 2):
No Pico Área del pico Área del pico
(estándar) (muestra)
1 49,075 27,016
2 78,112 52,289

 Admitiendo que el p-xileno es el analito, calcular


el porcentaje en masa de p-xileno utilizando el
método del estándar interno.
Problema