UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN

MARCOS
(UNIVERSIDAD DEL PER, DECANA DE AMRICA)
FACULTAD DE INGENIERIA GEOLGICA, MINERA. METALRGICA
Y GEOGRFICA
E.A.P. DE INGENIERIA AMBIENTAL
PROFESOR:
TEMA DE INVESTIGACIN: EFECTOS GENOTOXICOS MEDIANTE EL TEST DE
ALLIUM CEPA L
INTEGRANTES:
POMIANO EDWIN PAUL
TORPOCO ERICK RENZO
VALENTIN CAYCHO DANIEL
MOLINA ABRIL FRANCISCO
INGA HUACHILLO MARIO
TIRACCAYA GARCIA ERICK
RESUMEN
El Allium Test es un bioensayo para detectar contaminantes y sustancias
potencialmente txicas para la salud. Diversos estudios han demostrado su
potencialidad diagnstica significativa. Este trabajo tiene como objetivo
general, evaluar el efecto genotxico de agentes qumicos generados de la
industria minera y agrcola a diferentes concentraciones, sobre el crecimiento
de meristemos radiculares, ndice mittico, micro ncleos, roturas
cromosmicas de la cebolla (Allium cepa). Se seleccion la cebolla como
indicador biolgico para realizar los estudios de genotoxicidad por presentar
cualidades que nos ayuden a apreciar las alteraciones cromosmicas. Los dos
agentes qumicos con los que trabajamos fueron el cianuro de potasio y el
sulfato de hierro a concentraciones de 40 y 200 mg/L para ambos; porque son
considerados txicos a elevadas concentraciones. Para el desarrollo del
bioensayo, era necesario tener en claro que se evaluaran efectos txicos y
genotoxicos del Allium cepa expuesto al contacto directo con el agente
toxico. Los materiales utilizados para este trabajo de investigacin sern
presentados posteriormente. Respecto al procedimiento, se comenz el trabajo
con la preparacin de los agentes txicos a diferentes concentraciones,
seguidamente la preparacin de los bulbos de Allium cepa, continuando con el
bioensayo que consista en la toma de muestras de las races sometidas a
diferentes procesos para su final lectura en el microscopio ptico. En lo que
respecta a lectura de genotoxicidad, los parmetros evaluados fueron el ndice
mittico, la variacin del crecimiento de las races y caracterizacin de
mitosis.
Palabras clave: Allium cepa, bioensayo, genotoxicidad
OBJETIVO GENERAL
Evaluar el efecto genotxico de efluentes generados en la industria minera y
agrcola; sobre la dinmica de crecimiento de meristemos radiculares, ndice
mittico, micro ncleos, roturas cromosmicas de cebolla (Allium cepa).

OBJETIVO ESPECFICO
Evaluar el efecto genotxico del Cianuro de Potasio (KCN) y del Sulfato de
Hierro, a dos concentraciones diferentes; los cuales son generados en la
industria minera y agrcola respectivamente. El efecto genotxico tiene que
ver en la alteracin sobre la dinmica del crecimiento de meristemos
radiculares, ndice mittico, micro ncleos, roturas cromosmicas de nuestro
indicador biolgico (Allium cepa).
INTRODUCCION
El proceso utilizado para extraer oro usando cianuro se desarroll en Escocia
en 1887, y fue utilizado por primera vez en la minera a gran escala comercial
por la Nueva Zelanda Corona Mines Company en Karangahake en 1889. El
proceso de lixiviacin con cianuro es una alternativa mucho ms segura a la
extraccin con mercurio lquido que anteriormente era el principal mtodo de
separacin de oro del mineral. (Barrick, 2012)

En el proceso de extraccin de oro por parte de la industria minera, se usa

cantidades significativas de cianuro a concentraciones de entre 200 a 600 ppm,
por lo cual predomina en los efluentes de este tipo de industria, por lo que se
constituye como un elemento altamente nocivo para la flora y fauna en
grandes concentraciones. (Barrick, 2012)

El cianuro es txico en grandes dosis y est estrictamente regulado. El cianuro

en grandes cantidades impide que el cuerpo pueda aprovechar el oxgeno,
causando una asfixia que puede ser mortal para los seres humanos y animales
sin un rpido tratamiento de primeros auxilios. Sin embargo, las personas y
animales pueden desintoxicarse rpidamente si consumen cantidades no
letales de cianuro sin efectos negativos. De hecho, todos nosotros excretamos
pequeas dosis de cianuro de manera natural al orinar pues consumimos frutas
y alimentos que contienen cianuro.
En el presente trabajo, se investig el efecto txico, agudo y genotxico en un
indicador biolgico. La evaluacin estuvo referida al efecto txico de dos
concentraciones distintas de cianuro de potasio (KCN) y el posible uso de la
prueba Allium test en programas de monitoreo de efluentes industriales.
HIPOTESIS
El problema trabajado en este problema de investigacin son las alteraciones
genotoxicas que generan

OBJETIVO GENERAL
Evaluar el efecto genotxico del Cianuro de Potasio (KCN), del Sulfato de
Hierro y del Sulfato de Cobre, a dos concentraciones diferentes; los cuales son
generado en la industria minera y agrcola respectivamente. El efecto
genotxico tiene que ver en la alteracin sobre la dinmica del crecimiento de
meristemos radiculares, ndice mittico, micro ncleos, roturas cromosmicas
de nuestro indicador biolgico (Allium cepa).
Evaluar el efecto genotxico de efluentes generados en la industria minera y
agrcola; sobre la dinmica de crecimiento de meristemos radiculares, ndice
mittico, micro ncleos, roturas cromosmicas de cebolla (Allium cepa).
OBJETIVOS ESPECFICOS
1. Evaluar los efectos txicos de los efluentes a diferentes
concentraciones.

Indicador biolgico
Se seleccion la macrophyta Allium cepa L. cebolla recomendada por la
experta en estudios biolgicos, Olga Bracamonte, para realizar estudios de
genotoxicidad (Fiskejo, 1994; Shandu, 1991; Grand, 1982).
En la prueba se usaron bulbos de Allium cepa L por presentar un crecimiento
rpido de la raz, por tener una tasa cclica de reproduccin celular constante y
porque sus clulas meristemticas presentan cromosomas de gran tamao que
permiten apreciar fcilmente las alteraciones cromosmicas, lo cual favorece
la observacin de los efectos genotxicos.
Agente qumico
En las pruebas se us sulfato de hierro(FeSO4) y cianuro de potasio (KCN;
para anlisis) como agentes qumicos txicos. Las concentraciones de cianuro
usadas en las pruebas simularon las concentraciones que se presentan en los
efluentes de minera, y fueron los siguientes: 40 y 200mg/L. Las
concentraciones de sulfato de hierro usadas en la prueba, simulaban las
concentraciones presentes en el uso agrcola para abonacin.

Desarrollo del bioensayo

El Allium test consiste en exponer los bulbos de cebolla frente a las
concentraciones evaluadas de los agentes qumicos. Los efectos que se
producen en las races del Allium cepa L, son dos tipos:
- Efectos txicos que impiden el crecimiento o producen la muerte de las
clulas meristemticas. Para observar el efecto txico macroscpico se
us como indicador el crecimiento de la raz, comparndolo con las
races de las pruebas de control.
- Efectos genotxicos, que pueden producir efectos dainos en las
siguientes generaciones de clulas. Para estimar el grado y tipo de dao
genotxico se estudi el ndice mittico adems se observ el nmero y
tipo de aberraciones cromosmicas; comparndolos con los valores
obtenidos en las pruebas de control. Para observar el efecto genotxico
se us microscopio ptico.

MATERIALES

7 cebollas con races largas

3 litros de agua destilada
Balanza elctrica
Luna de reloj
Esptula, pizeta
Fiola de 250 mL
7 frascos gerber de 250 mL
 Microscopio ptico
Lminas y laminillas
Papel filtro
Gillette

Procedimiento
a- Preparacin del agente qumico a diferentes concentraciones
Iniciamos con el respectivo pesado del sulfato de hierro y cianuro de
potasio a diferentes medidas (0.01 y 0.05 g) para cada uno, con
ayuda de la balanza electrnica. Seguidamente, con ayuda de la fiola
de 250 mL, se procedi a diluir estas cantidades en agua destilada.
Se procedi con el llenado hasta la capacidad mxima de 150 mL de
los frascos con las diluciones.
b- Preparacin de los bulbos de Allium cepa L
Usamos bulbos de 5 a 6 cm de dimetro, bajo una temperatura
aproximada de entre 18 a 20C.
Con ayuda de una cuchilla retiramos varias capas de la cebolla,
limpiamos la zona del aro situada en el primordio de la raz.
Antes de sumergir los bulbos limpios de Allium cepa en las
diluciones del agente qumico se homogeniz el crecimiento de las
races en agua destilada por un periodo de 48 horas, de manera que
se pueda evidenciar de forma confiable el efecto inhibitorio del
crecimiento del meristemo radicular de Allium cepa a diferentes
concentraciones de los compuestos.
c- Bioensayo
Los tubos de prueba fueron separados con las concentraciones de los
contaminantes seleccionadas para la prueba (40 y 200 mg/L).
Se hicieron 6 pruebas por cada concentracin de los agentes
contaminantes.
Los bulbos de Allium cepa L se colocaron en los frascos prueba que
previamente fueron llenados con el agente qumico; un bulbo en
cada frasco.
Los frascos con los bulbos lo dejamos a temperatura ambiente
(aproximadamente 20C) durante 72 horas.
Despus de las 72 horas de incubacin se midi el crecimiento
longitudinal de las races.
 Para la pruebas de genotoxicidad se cort la porcin distal
(aproximadamente 2-3 mm) de todas las races de cada cebolla. Por
recomendacin, cortamos las mayores cantidades de races.
Dejamos reposar la parte cortada de la raz durante 10 minutos en
Carnoy. Seguidamente se pasaron las races, con ayuda de una pinza,
a Targa. Finalmente las races fueron colocadas en lminas de vidrio
de contenan 2 gotas de orceina acetoclorhdrica durante 20 minutos
con la finalidad de que este colorante penetre al tejido.
Las lminas fueron cubiertas con una laminilla portaobjeto.
Con la punta de un lpiz se aplic golpes suaves, siguiendo una lnea
en espiral.
Posteriormente se aplic un squash suave sobre la laminilla.
Las preparaciones fueron selladas con esmalte de uas.
d- Lectura de la prueba de genotoxicidad
Se observaron los siguientes parmetros:
ndice mittico: n de divisiones celulares por 1000 clulas
observadas
Caracterizacin de la mitosis
Para observar el efecto genotoxico se cont el nmero de clulas que
presentaba aberraciones cromosmicas (metafase anormal con
formacin de anillos cromosmicos, clula en anafase con
desprendimiento de un brazo cromosmico, celula en anafase con
formacin de puente, clula binucleada, puente anafasico, entre
otros)

*Crecimiento de la muestra control en 72 horas reposando en agua

potable: 5 cm
* Para obtener el porcentaje de efecto de inhibicin se debe realizar
la siguiente operacin:
(Longitud del control longitud de la muestra) x 100/longitud del
control.
N celulas mitosis ( P+ M + A +T )
*(%) ndice mittico: X 100
N TOTAL DE CECULAS
 Concentracin de Crecimiento Crecimiento de la
KCN mg/L longitudinal de la raz
raz % de control
(cm)
40 4.00 0.2 80
200 0.5 0.1 10

*Datos promedio a partir de seis pruebas distintas

Concentracin de Crecimiento Crecimiento de la
FeSO4 mg/L longitudinal de la raz
raz % de control
(cm)
40 2 0.2 40
200 0.3 0.1 6

*Datos promedios a partir de seis pruebas distintas

Efectos del CN en el ndice mittico de las clulas meristemticas de Allium

cepa
Concentracin cianuro (CN) Crecimiento de (%) ndice
M mg/L la raz % de mittico
control
1.54 x 10-3 40 20 45
7.69 x 10-3 200 90 30

Concentracin de Sulfato de Crecimiento de la (%)ndice

hierro(FeSO4) raz %control mittico
M mg/L

2.63 x 10-4 40 60 53

1.32 x 10-3 200 94 25