Exposicin: PFENEX INC.

Parametros:

1. Que tipo de bioproceso(s) realizan la industria:

Produccin de vacunas7

Pfenex Inc. es una compaa de produccin de protenas que aprovecha la nica y poderosa
plataforma Pfenex Expression Technology basada en el microorganismo Pseudomonas
fluorescens, para la produccin de protenas de investigacin, protenas reactivas, biosimilares e
innovadores biofarmacuticos

Tenemos la ms alta calidad de produccin de protenas y bioanlisis enfoque de la plataforma de

tecnologa que nos permite crear biosimilares de una manera altamente eficiente desde el
concepto de comercializacin.

Somos una de las nicas empresas enfocadas en biosimilares no glicosilados, creando un enfoque
de plataforma diferenciada y una ventaja competitiva. Este enfoque nos permite asegurar una
tubera robusta de productos teraputicos de alta calidad.

Adems, nuestra plataforma nica de produccin de protenas es muy adecuada para el desarrollo
de vacunas. Al capitalizar nuestra capacidad para identificar rpidamente cepas de produccin de
protenas que no pueden ser producidas fcilmente en otros sistemas, somos capaces de conducir
la investigacin de enfermedades infecciosas y el desarrollo de vacunas anteriormente no era
posible.

2. Que tipo de celula o componente biologico participa en el proceso.

Ej: Celula vegetal

Enzimas

Pfenex ha desarrollado una plataforma de produccin de protenas basada en Pseudomonas

fluorescens que puede utilizarse para una produccin ms alta de protenas funcionales con xito.
Se ha creado una gran biblioteca de cepas nuevas y modificadas genticamente de Pseudomonas
fluorescens para el cribado de alto rendimiento y la produccin de fragmentos de anticuerpos
recombinantes. La biblioteca contiene miles de cepas de expresin modificadas de P. fluorescens
construidas a partir de un gran nmero de elementos genticos incorporados en las cepas
husped.

Los extensos experimentos de cribado y exploracin en las cepas elegidas permiten identificar una
cepa final para la fermentacin y produccin de una protena teraputica funcional.

Pseudomonas fluorescens (Bacteria, clula eucariota ) es un bacilo Gram-negativo, recto o

ligeramente curvado pero no vibrioide, es saprfito, (todo lo que ingiere pasa a travs de la pared de
su citoplasma)
3. Caracteristicas macro y micro del organismo y/o celulas utilizadas

2.4.1. Pseudomonas fluorescens Esta bacteria es un cocobacilo Gram negativo, que se encuentra
como saprfito en el suelo y es ampliamente conocido por ser una PGPR. Abundan en la superficie
de las races, ya que son verstiles en su metabolismo y pueden utilizar varios sustratos producidos
por las mismas, pero no establecen una relacin simbitica con la planta. Entre sus mecanismos de
accin se encuentran el aumento de la toma de agua y nutrientes por la planta, la solubilizacin de
fosfatos, la produccin de reguladores del crecimiento vegetal y el control biolgico de patgenos,
dado fundamentalmente por la produccin de siderforos, la antibiosis y la induccin de
resistencia a la planta, mediante la produccin de cido saliclico, el cual acta como una molcula
de sealizacin que activa la resistencia sistmica inducida (RSI) que es muy similar a la
resistencia sistmica adquirida (RSA) (Zhang et al., 2002).

4. Condiciones para favorecer su crecimiento/ actividad (medio de cultivo).

Pseudomonas son mviles (uno o ms flagelos polares), en forma de bastn y aerobios bacterias
Gram-negativas. Se encuentran en casi todas partes, en el suelo, el agua, las plantas y los
animales. En la mayora de los casos no es patgena y de hecho puede ser beneficioso. Por
ejemplo, P. putida se utiliza como un bio-lavador para ayudar en la biodegradacin de los diversos
compuestos orgnicos en el aire contaminado y las aguas residuales. Sin embargo, P.
aeruginosa es un patgeno humano oportunista infame ms comnmente afecta a pacientes
inmunocomprometidos. Junto con P. maltophilia , que representa la mayora de las infecciones
humanas. Patgenos Pseudomonas se encuentran en todo el cuerpo, ms comnmente en el
tracto urinario, el tracto respiratorio, la sangre y las heridas 1 .
Resistente y oportunista, Pseudomonas utilizar una amplia gama de fuentes nutricionales, incluso
entornos nutricionales muy simples sin compuestos orgnicos. Ellos pueden permanecer viables
durante largos perodos de tiempo en muchos hbitats diferentes y bajo condiciones muy
adversas. Tambin estn muy extendidas, siendo encontrados en el agua, soluciones salinas,
utensilios e incluso en productos cosmticos, farmacuticos y desinfectantes, y muchos alimentos
naturales y manufacturados. Psychrotrophic (tolerantes al fro) Pseudomonas especies son un
problema significativo deterioro de los alimentos en carne refrigerada, pescado, mariscos y
productos lcteos. Debido a Pseudomonas prosperar en los sistemas de agua, que pueden ser el
origen de la contaminacin en la industria de alimentos y bebidas 2 .
Pseudomonas no son generalmente microorganismos exigentes. Pueden crecer en medios muy
simples como Kind Agar, por ejemplo, que contiene un hidrolizado de protena, cloruro de
magnesio, sulfato de potasio y agar. Microbiologa analtica aprovecha la bioqumica nica de un
microbio para ayudar en su identificacin. Por ejemplo, selectivo Pseudomonas uso de los medios
cetrimida, cido nalidxico, cefaloridina, penicilina G, pimaricina, agentes inhibidores de verde de
malaquita y otros.La actividad proteoltica, actividad lipoltica, la formacin de pigmento
fluorescente, la utilizacin de nitrato, la utilizacin de glutamato, reaccin hemoltica y otras
reacciones bioqumicas se utilizan en los medios para la identificacin y diferenciacin de las
especies de Pseudomonas.
Pseudomonas da negativo Voges Proskauer, indol y pruebas de rojo de metilo, pero una prueba de
catalasa positiva. Mientras que algunas especies muestran una reaccin negativa en la prueba de
oxidasa, la mayora de las especies, incluyendo P. fluorescens , dan un resultado positivo
(ver Figura 2 ). Otra caracterstica asociada con Pseudomonas es la secrecin de pioverdina
(fluorescena, un siderforo), un pigmento de color amarillo-verde fluorescente en condiciones de
hierro limitante 3 .Ciertos Pseudomonas especies tambin pueden producir pigmentos adicionales,
tales como piocianina (pigmento azul, un siderforo) por P. aeruginosa 4 , quinolobactin (amarillo,
verde oscuro en presencia de hierro, un siderforo) por P. fluorescens5 , un pigmento rojizo llamado
pyorubrin y pyomelanin (pigmento marrn). En agar sangre se puede observar una reaccin
hemoltica.

La Figura 2 . prueba de oxidasa

Clasificacin cientfica de Pseudomonas :

Unido: Bacterias Orden: Pseudomonadales

Filo: Proteobacteria Familia: pseudomonadaceae

Clase: Gamma Proteobacteria Gnero: Pseudomonas

Pseudomonas utiliza azcares como fuente de energa mediante el uso de la va de Entner-

Doudoroff con piruvato como el producto final (dissimilation). La reaccin utiliza un conjunto
diferente de enzimas de los utilizados en la gluclisis y de la va de las pentosas
fosfato. Catabolismo de fermentacin no se observa en Pseudomonas , pero algunas especies,
como P. aeruginosa , P. stutzeri y P. denitrificans , son capaces de utilizar nitrato como aceptor de
electrones en lugar de oxgeno. El crecimiento tambin se puede producir en condiciones
anaerobias, cuando se utiliza la va de la desnitrificacin. Sigma-Aldrich suministra una amplia
gama de productos para la deteccin, la identificacin, la diferenciacin, la enumeracin y el cultivo
dePseudomonas , por sus caractersticas bioqumicas, incluyendo kit de tincin de Gram, y muchos
tipos de medios de crecimiento selectiva ( Tabla 1 ) y pruebas de diagnstico ( Tabla 2 ).

http://www.sigmaaldrich.com/technical-
documents/articles/analytix/pseudomonas-media.html

5. Factores claves dentro del proceso de produccin y Bosquejo de las fases del bioproceso

La Figura 2 describe los pasos implementados en un laboratorio para crecer y expresin

ensayo de cepas para determinar el ttulo y (si es posible) una configuracin adecuada de un
antgeno o antgenos expresados. Como un organismo estrictamente aerbico, P.
fluorescensinsustituible para el crecimiento mediante agitacin simple en una cmara de aire
con temperatura controlada y sin suplemento de oxgeno. Carece de la aparato fisiolgico
para cambiar al crecimiento anaerbico, que produce cidos orgnicos (como Escherichia
colihace) en condiciones microaerfilas y limita el crecimiento de un cultivo bacteriano. A P.
fluorescens organismo contina creciendo siempre que los nutrientes y el oxgeno estn
disponibles. El resultado es la acumulacin de una cantidad significativa de la biomasa: 30-50
A 595 unidades. Esto permite la produccin de AA cantidad significativa de protena expresada
con el que realizar ensayos bioanalticos
incluso a pequea escala.

Figura 2: ()

Por lo general se realiza un esquema de

ensayo de dos niveles. La primera ronda de
ensayos son mtodos HTP (a esta escala que normalmente examinamos ~ 3.000 muestras)
diseados para proporcionar informacin sobre el ttulo de protena diana se expresa en la
fraccin celular soluble (electroforesis en gel de sulfato de capilar de dodecilo de sodio, SDS-
CGE), y posiblemente alguna informacin sobre su actividad, si un ensayo de interaccin
protena-protena se puede implementar utilizando interferometra capa biolgica. Los pasos
en caja de la Figura 2 se llevan a cabo mediante una preparacin y anlisis de muestras robot
estado de la tcnica. Con muestras seleccionadas, el segundo nivel de anlisis puede incluir
mtodos como la cromatografa lquida con espectrometra de masas (LC-MS) para evaluar la
calidad de una protena diana expresada. Debido a que muchas protenas que expresamos se
fusionan a la secrecin de pptidos-lder, el ensayo LC-MS puede proporcionar informacin
sobre la fidelidad de la escisin por la peptidasa lder de la seal. Todos estos pasos - desde
la recepcin de un gen mediante la realizacin de anlisis y seleccin de cepas para poner a
prueba en experimentos de fermentacin - toman alrededor de cinco semanas en
completarse.

http://www.bioprocessintl.com/upstream-processing/expression-platforms/pseudomonas-
fluorescens-expression-technology-for-subunit-vaccine-production-and-development-320982/

6. Producto comercializado o metabolito de interes comercial o biotecnologico.

http://www.smbb.com.mx/revista/Revista_2004_2/Metabolitos.pdf

buscar metabolitos de pseudomonas fluorescens

La cartera de productos Pfenex actualmente contiene ocho biosimilares y un

candidato equivalente teraputico. El mercado de productos biolgicos globales
2014 represent ms de $ 230 millones de dlares en ventas de productos con
prcticamente todo el mercado compuesto por productos innovadores de
marca. Creemos que el mercado biosimilar emergente ser impulsado por el gran
nmero de productos de gran xito cuyas patentes expiraron en los prximos aos,
abreviado vas reguladoras para la aprobacin de los biosimilares, y un mandato
para reducir los costos de los medicamentos por parte de gobiernos y pagadores
privados.

Nuestro candidato biosimilar plomo es PF582, un candidato biosimilar de Lucentis

(ranibizumab).Lucentis, comercializado por F. Hoffmann-La Roche y Novartis AG,
para el tratamiento de enfermedades de la retina, alcanz aproximadamente $ 3.6
mil millones en 2015 las ventas mundiales.

Nuestros candidatos propiedad absoluta incluyen PF530, un candidato biosimilar

de Betaseron (interfern beta-1b) comercializado por Bayer AG para el tratamiento
de la esclerosis mltiple, que alcanz unas ventas totales de $ 0,9 mil millones en
2015. Tambin estamos desarrollando PF708, un equivalente teraputico de Forteo
( teriparatida), para el tratamiento de los pacientes con fractura de alto
riesgo. Adems, PF529, un candidato biosimilar de Neulasta (pegfilgrastim), y
PF688, un candidato biosimilar de Cimzia (certolizumab pegol-) tambin estn en
desarrollo.

Tambin tenemos una asociacin de productos con pasos Acrolab, una compaa
farmacutica de especialidad se encuentra en Bangalore, India. Esto incluye PF444,
un candidato biosimilar a la hormona del crecimiento humano, PF694, un candidato
biosimilar de Pegasys (peginterfern alfa-2a), y PF690, un candidato biosimilar a
Oncaspar (pegaspargasa).

8. Mercados (cifras de venta anuales), otros.

http://sci-hub.cc/10.3109/07388551.2015.1084264