TURBIDIMETRIA

Es la medida del grado de turbiedad de una suspensin y se puede conocer, debido a

un sistema ptico llamado espectrmetro, que este mide las variaciones de un rayo
luminoso, dichas variaciones son provocadas por la absorbencia.5
La turbidimetra mide la absorbancia, que en soluciones diluidas, esta presenta una
relacin proporcional al peso seco, donde no importa el tamao de la partcula u
organismo.3 Se emplea generalmente en microbiologa, cuya finalidad es cuantificar a
la poblacin bacteriana que se tiene en estudio, esto se hace por medio de la
determinacin de la biomasa de una muestra, la difusin de la luz por las bacterias del
medio se descuida. Por esta razn, se le considera esta medida como una medida de
absorbencia. Posteriormente se descuida la intensidad de la luz reflexionada y
difundida, aqu podemos decir que la absorbencia es directamente proporcional a la
masa bacteriana.
Para determinar la concentracin del analito, se aplica la siguiente relacin:
It
T=
Io
Donde T es la transmitancia, It es la intensidad de la radiacin de la fuente
transmitida, Io es la intensidad de la radiacin de la fuente transmitida por un blanco.
Esta relacin es similar a la proporcionada por la ley de Beer:
T = KbC
log
C es la concentracin es expresada en unidades de masa por unidad de
volumen y la concentracin es de las partculas que dispersan la radiacin, b es la
longitud del camino ptico y k es la constante que est en funcin de diversos factores
como el tamao, longitud de onda y otros mas.4
VENTAJAS:
Son mtodos rpidos.
puede realizarse en espectrofotmetros de radiacin visible o UV.

La fuente de radiacin ms frecuentemente usada es la lmpara de wolframio, pero

pueden utilizarse otras fuentes de radiacin visible.

DESVENTAJAS:
 til para densidades microbianas bajas de microorganismos unicelulares y tamaos de
unos cuantos micrmetros.
Para microorganismos ms grandes y productores de polisacridos esta metodologa
no es adecuada.

NEFELOMETRA
Es un mtodo que se emplea en la medicin de una radiacin dispersa en un ngulo de
90 grados con respecto a la fuente. Para determinar la concentracin del analito en
este mtodo, se aplica la siguiente relacin:
I =K S I 0 C
Donde tenemos que Ks es una constante emprica del sistema, Io es la
intensidad de la fuente de radiacin y C es la concentracin, pero en porcentaje. El
valor de la constante esta en funcin de una curva de calibracin, empleando una serie
de patrones de concentracin conocidos.4
La nefelometra constituye un mtodo ms exacto para la medida de la opacidad, es la
adicin de luz en ngulos rectos con el haz incidente, permitiendo una mayor
sensibilidad con concentraciones menores de partculas suspendidas. Se considera este
mtodo que es ms complejo que el mtodo de los tubos de Brown.7
La dispersin solo es afectada la direccin de la propagacin, porque la
intensidad de la radiacin es la misma en cualquier direccin. La intensidad depende
de: el nmero de partculas suspendidas, su tamao, su forma, los ndices refractivos
de la partcula y del medio dispersante, y la longitud de onda de la radiacin
dispersada. La relacin entre variables y es ms factible un tratamiento terico, pero
debido a su complejidad raras veces se aplica a problemas analticos especficos. 8 Este
mtodo es prcticamente emprico y solamente se toman en cuenta tres factores:
1. La concentracin: Mayor sea el nmero de partculas, mayor es la dispersin.
2. Tamao de la partcula: Factores como el pH, la velocidad y orden de la
mezcla, concentracin de los reactivos, duracin del estado de reposo y la fuerza
inica.
3. Longitud de onda: Generalmente las muestras se iluminan con luz blanca,
pero si estn coloreadas, se debe escoger una porcin del espectro electromagntico
en la que la absorcin del medio se reduzca al mnimo.8

Qu podemos tomar en cuenta para seleccionar al mejor mtodo?

La eleccin entre ambos mtodos, esta en funcin de dos factores:
La intensidad de la radiacin que se transmite o que es dispersada con la
intensidad de la radiacin que procede de la fuente. Cuando se tiene una
concentracin de partculas que dispersan presentes en la solucin es pequea,
It sera similar a Io. Por lo tanto lo ideal sera utilizar la nefelometra, esto es,
debido a que la muestra presenta un numero relativamente pequeo de
partculas. Solo se puede aplicar la turbidimetria, cuando se tienen grandes
concentraciones de partculas dispersantes en la solucin.4
Tamao de las partculas dispersantes. En la nefelometra, la intensidad de la
radiacin es dispersada a 90 o es mayor, si las partculas son lo bastante
pequeas como para que se aprecie una dispersin Rayleigh. Pero, si las
partculas son grandes, entonces la intensidad de la dispersin disminuir en

esas condiciones. Aplicaciones

A pesar de que los trminos nefelometra suele restringirse a aquellas aplicaciones en
las que se mide la concentracin de partculas en suspensin existen tambin otros
tipos de aplicaciones basados en las medidas de dispersin de la luz. Entre ellas
podemos citar la determinacin de la forma y tamao de las partculas as como la de
los pesos, moleculares (especialmente en el caso de polmeros) 4, asi mismo en la
determinacin de los iones sulfato y para determinar concentraciones especificas, de
colonias de bacterias y como la medicin de protenas empleando el mtodo de la
dispersin luminosa molecular.1

La nefelometra se ha empleado para el anlisis y la identificacin de fibrongeno,

trombota, triglicridos, complejos antgeno anticuerpo y otras sustancias. 7 Por ejemplo
para conocer el nivel de la inmunoglobulina en la sangre, se realiza un examen para
buscar las protenas IgM, IgG e IgA.10
DETERMINACION DE CONTENIDO DE NITROGENO:

El mtodo ms comnmente utilizado para la determinacin de nitrgeno orgnico es el

llamado mtodo Kjeldahl, que se basa en una volumetra cido-base. El procedimiento es
directo, el material necesario es muy simple (aparato de destilacin Kjeldahl), y es fcilmente
adaptable al anlisis rutinario de un gran nmero de muestras. Es el mtodo estndar para la
determinacin del contenido proteico en grano, harinas, carnes, y en general, en materiales
biolgicos.

En el mtodo Kjeldahl, la muestra se descompone en caliente medio sulfrico, en presencia de

un agente reductor catalizador (mercurio, cobre o selenio). Tambin suele adicionarse una sal
neutra para aumentar el punto de ebullicin de la disolucin de cido sulfrico. De esta forma
que aumenta temperatura de trabajo, con lo cual se favorece la descomposicin. El tratamiento
transforma el nitrgeno de la muestra en NH 4+. La posterior adicin de una base fuerte libera el
NH3, que es arrastrado hasta un frasco colector por destilacin en corriente de vapor.

El frasco colector contiene un volumen medido de una disolucin estndar de cido, de forma
que una fraccin de cido es neutralizada por el NH 3. El cido es parcialmente Al finalizar la
destilacin se procede a valorar el cido no consumido con una disolucin de base patrn. El
volumen de disolucin bsica consumido hasta llegar al punto de equivalencia permite conocer
la cantidad de NH3, y de esta forma, la cantidad de nitrgeno en la muestra, que puede
transformarse en contenido proteico en funcin del tipo de muestra ya que la mayora de las
protenas contienen aproximadamente el mismo porcentaje de nitrgeno.

Ventajas del mtodo de Kjeldhal

Apropiado para varios tipos de productos.

Alta fiabilidad.

Usado como mtodo de referencia.

Desventajas del mtodo de Kjeldhal

Interfieren compuestos nitrogenados no proteicos.

Uso de catalizadores txicos o caros.

Eleccin del factor de conversin.

MTODO DE BREED:

Es una tcnica de laboratorio que se utiliza para el recuento de microorganismos en la leche.

Fue presentado en 1910 por los bilogos estadounidenses Samuel Cate Prescot y Robert
Stanley Breed.

Se trata de un mtodo para el "recuento de totales", dado que se contabilizan los

microorganismos vivos y muertos. Cuando el mtodo solamente recuenta organismos vivos se
denomina "recuento de viables"

PREPARACIN DE LAS MUESTRAS:

Primeramente se debe homogeneizar la leche calentndola en un bao de agua a 40 C para

que las clulas somticas asciendan a la superficie junto con la grasa. El instrumental de
laboratorio debe estar limpio pero no necesariamente estril dado que el mtodo se basa en
recuento de clulas y para el mismo no es precisa la asepsia. Si posteriormente se van a realizar
anlisis microbiolgicos detallados con la misma muestra, s es necesario que sea obtenida y
manipulada con material estril.

Luego de extrada la muestra, es transportada al laboratorio en conservadoras a 4 C. Puede

conservarse en estas condiciones hasta veinticuatro horas.

Para la toma de muestras existen dos condiciones bsicas a tener en cuenta:

La primera es representar el volumen total de leche de donde fue extrada y la segunda es ser
conservada y transportada a la temperatura correcta de manera de que no se vean modificadas
sus propiedades de origen, previo al anlisis en el laboratorio. En caso de demora en la
consecucin del anlisis, debe agregarse a la leche algn conservante que no altere los
posteriores resultados analticos.

APLICACIN DE LA TECNICA:

Deben realizarse extendidos de 0,01 mL y de 1 cm2 sobre portaobjetos exentos de grasa (los
cuales se limpian con xilol).

Luego de dejar secar, se colorea y efecta el recuento. Para ello se realiza el promedio de
clulas existentes en el campo del microscopio, dividiendo el total de clulas somticas entre el
factor microscpico (FM) que corresponde al nmero de campos en 1 centmetro, es decir en
100 milmetros, obtenindose de esa manera el nmero de clulas somticas por mililitro de
leche.

Clculo del Factor Microscpico:

Obtencin del Promedio:

Los reactivos utilizados son soluciones de Azul de

metileno.

Examen Microscpico:
Contar en el microscopio los microorganismos por campo utilizando lente deinmersin. Se cuenta a lo
largo de toda la pelcula.
Se cuenta como mnimo 20 campos y un mximo 100 campos.
Cuando se cuentan los microorganismos se deben de contar como uno solo: aquellas
bacterias que estn solas, los agregados, los grupos, los cocos o bacilos en
cadenas.
VENTAJAS

Simple, facil ,eficaz

Se puede utilizar un microscopio de fluorescencia, en el cual se utilizara un
colorante distinto (fluorenscente) como el azul de anilina modificado.
Las clulas viables se pueden diferenciar de las no viables, para eso se puede
usar la naranja de acridina (0,01%).
No requiere de un equipo caro

DESVENTAJAS
Cuando las poblaciones son pequeas, el margen de error es grande
Es muy tedioso, no es prctico para un gran nmero de muestras

Fuentes Bibliograficas

1. htp://es.scribd.com/doc/56689304/PRACTICA-1-NEFELOMETRIA
2. htp://www.mitecnologico.com/iia/Main/TurbidimetriaYNefelometria
3. htp://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioRecuento.htm
4. htp://es.scribd.com/doc/54885577/Turbidimetria-y-Nefelometria
5. htp://www.multilingualarchive.com/ma/frwiki/es/Turbidim%C3%A9trie
6. htp://www.optek.com/es/Schematic_Dual_Lab_Turbidimeter.asp
7. htp://foro.deoaxaca.mx/index.php?topic=7157.0
8. htp://es.wikipedia.org/wiki/Nefelometr%C3%ADa
9. htp://patentados.com/invento/nefelometro.html
10. htp://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003545.htm