UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

Facultad de Ingeniera Ambiental

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERA
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA DE HIGIENE Y SEGURIDAD
INDUSTRIAL

SIEMBRA, AISLAMIENTO, TRASPLANTE Y OBTENCIN DE CULTIVOS PUROS

DE MICROORGANISMOS

QUINTO LABORATORIO DEL CURSO MICROBIOLOGA AMBIENTAL- BO-112

ALEXIS BERROCAL CORONEL 20162733H

KEVIN LEONARDO APOLINARIO 20162528E
GERSON TREJO SNCHEZ 20161037H

DOCENTE: MSc. Blgo. LVARO MARTN MARTNEZ VILA

Lima, Per
23 de mayo de 2017
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INDICE

1 RESUMEN..3

2 INTRODUCCION...3

3 OBJETIVOS4

3.1. OBJETIVOS GENERAL....4

3.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS4

4 MARCO TEORICO5

5 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL..........................5

5.1. MATERIALES..5

5.2. PROCEDIMIENTO..6

6 RESULTADOS...7

7 DISCUSION DE RESULTADOS.7

8 CONCLUSIONES..7

9 RECOMENDACIONES.8

10 ANEXOS9

RESUMEN:
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En esta quinta prctica de laboratorio se har la siembra de microorganismo puros,
para esto observaremos nuestra siembra en la que hay varios tipos de
microorganismos, seleccionados por sus caractersticas y procederemos a sembrarlos.

Cuando se realiza una siembra en medios slidos es deseable obtener las bacterias
en forma aisladas. Sin embargo, generalmente las muestras tienen una flora mixta,
que se manifiesta por el desarrollo de distintas especies bacterianas: algunas son
saprfitas (flora normal) o contaminantes del proceso de muestreo y otras son las que
tienen un rol patgeno.

Para realizar diagnsticos microbiolgicos el organismo debe ser primero aislado y

mantenido puro en condiciones de laboratorio.

Si en la placa de agar ha crecido ms de un tipo de bacterias, se debe realizar el

aislamiento de 1 colonia a otro medio de cultivo semejante o a medios selectivos.

Si fuese necesario las colonias se sometern a uno o ms re-aislamientos, hasta

obtener cultivos puros; es decir, presenten la misma morfologa y microscpicamente
correspondan a un solo tipo de bacteria.

INTRODUCCIN:

En los ambientes naturales los microorganismos se encuentran usualmente como

poblaciones mixtas, pero si queremos estudiarlos, caracterizarlos e identificarlos,
necesitamos tenerlos como cultivos puros. Un cultivo puro es aquel en el que todos los
microorganismos provienen de una sola clula. La obtencin de un cultivo puro, a
partir de una poblacin mixta, se lleva a cabo en dos etapas:. La muestra debe
diseminarse de manera tal que los diferentes microorganismos queden lo
suficientemente separados sobre la superficie de un medio de cultivo slido, de
manera que luego de la incubacin ellos formen colonias visibles aisladas. Este
proceso se conoce como aislamiento. En esta placa tendremos diferentes tipos de
colonias correspondientes a los diferentes microorganismos presentes en la poblacin
original. Luego de tener las colonias aisladas, stas deben transferirse con el filamento
a un tubo que contenga agar nutritivo estril para cultivar esa colonia aislada; este
procedimiento se conoce como trasplante. Para garantizar la pureza del cultivo
obtenido, es conveniente, a partir de cada tipo de colonia aislada, repetir el proceso de
aislamiento antes descrito. Se considerar que se ha obtenido un cultivo puro, cuando
al realizar este proceso, todas las colonias obtenidas presenten las mismas
caractersticas. El medio de cultivo utilizado en el proceso de aislamiento depender,
entre otros factores, de los requerimientos nutricionales de los microorganismos que
se espera aislar y de la presencia de microorganismos que, por sus caractersticas y/o
por la cantidad en que se encuentren en la muestra, dificulten la obtencin del
microorganismo objeto del aislamiento. En este ltimo caso, se deben utilizar medios
de enriquecimiento y medios selectivos que inhiban el desarrollo de grmenes
contaminantes. La temperatura y otras condiciones de incubacin, variarn segn los
microorganismos, usualmente la temperatura ptima de los microorganismos
patgenos para el hombre oscila entre 30 y 40C. Cuando el microorganismo que se
intenta aislar es anaerbico, deben tomarse las precauciones necesarias a fin de
eliminar la presencia de oxgeno en el ambiente donde se desarrollar el mismo.
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Basndose en el origen y naturaleza de la muestra se pueden inferir los posibles
microorganismos que se encuentran presentes en la misma, y ese conocimiento
ayudar en la seleccin del medio y las condiciones de cultivo adecuadas. Para
iguales fines, es de gran utilidad el conocimiento de los sntomas de la enfermedad
que padece la persona de quien se obtuvo la muestra analizada.

OBJETIVOS:

OBJETIVO GENERALES:
- Ejecutar las tcnicas bsicas para la siembra y el estriado de microorganismos en
cultivo puro.
- Obtener colonias de bacterias, separadas, a partir de cultivos concentrados de clulas.

OBJETIVOS ESPECFICOS:

- Practicar la siembra en medios de cultivo previamente esterilizados y adecuados

para el microorganismo que se desea aislar.
- Emplear instrumentos estriles.
- No contaminar ni destruir los microorganismos.
- Depositar los microorganismos aspticamente en los medios de cultivos a usar.

Marco terico:

Trasplante:
Consiste en colocar al microorganismo ya aislado (en cultivo puro) en un nuevo
medio de cultivo a fin de conservarlo a travs del tiempo, lo que permitir
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realizar diferentes estudios, tales como pruebas bioqumicas, morfologa,
coloracin, anlisis genticos, identificacin taxonmica, etc.

Siembra:
En trminos microbiolgicos es el proceso mediante el cual se lleva una
porcin de una poblacin de microorganismos (inculo) a un medio nutritivo
adecuado, elegido de acuerdo a las exigencias vitales del microorganismo, de
tal manera que permita su desarrollo y manipulacin, colocndolo a una
temperatura adecuada, y durante un tiempo conveniente.

Cuando el cultivo solamente contiene una sola clase de microorganismos, es

decir que pertenecen a una misma poblacin, se obtiene un cultivo puro. Este
tipo de cultivo se requiere para el estudio intensivo de un microorganismo
(morfologa, fisiologa, identificacin). Como en la naturaleza no es corriente
encontrar microorganismos de una sola especie sino mezcladas, y como dos
especies distintas que crecen juntas pueden dar reacciones muy diferentes de
las de cada una por separado, es necesario conocer como separarlas.

Formas de crecimiento bacteriano

- Enturbamiento: opacidad ms o menos densa y homognea en todo el
cultivo.
- Formacin de velo: una pequea masa de clulas flotan en la parte
superior del cultivo.
- Sedimento: un depsito de clulas que permanecen en la parte inferior
del cultivo pero que se pone nuevamente en suspensin si el tubo se
sacude.

Aislamiento:
Consiste en separar de una poblacin heterognea (muestra de agua o leche,
suspensin de suelo, etc.) al microorganismo que se desea estudiar para
obtenerlo al estado puro. En la naturaleza, los microorganismos se encuentran
formando poblaciones mixtas de una gran variedad de tipos diferentes entre s.
Cuando se hacen cultivos de estos materiales (tierra, leche, aire, materia fecal,
alimentos, etc.) pueden desarrollar muchas especies de grmenes. Este cultivo
recibe el nombre de "cultivo mixto".

Cultivo puro:

Se denomina cultivo puro (axnico) al que contiene solo un tipo de microorganismos.

Los cultivos puros se inician a partir de colonias aisladas, de manera que todos los
individuos del mismo tengan la misma composicin gentica. Los cultivos puros son
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esenciales para poder estudiar las caractersticas de los microorganismos y para
poder identificarlos con seguridad.

Sin embargo, cada vez se va conociendo ms sobre el funcionamiento de las

comunidades bacterianas lo que debe hacernos reflexionar sobre el hecho de que un
cultivo puro supone unas condiciones no naturales y que por consiguiente, la fisiologa
de los microorganismos en ambientes naturales pueden ser diferente a la que
presenta en condiciones de cultivos puros

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

MATERIALES:

Asas de siembra
Mechero Bunsen
Cultivos lquidos preparados anteriormente en los laboratorios anteriores
Placas Petri con agares
- Agar nutritivo
- Agar EMB
- Agar ENDO
- Agar M.S

PROCEDIMIENTO

a Observar crecimiento en caldo BHI y nutritivo, anotar comportamiento de cultivo.

b Sembrar inculo de cada uno de los cultivos lquidos (caldos), por estriado en
placas con diferentes tipos de agar.
c segn el nmero de colonias a inocular, en este caso son 14 por grupo, realizar
el estriado y segn el nmero de placas con medio de cultivo solido disponible
se divide cada placa con agar en 3 o 4.
d Sembrar cultivos lquidos el agar TSA segn corresponda mediante el estriado
una vez realizado incubar a 35c y 48 horas
e Observar crecimiento de colonias en cada medio de cultivo y anotar
caractersticas de las colonias

RESULTADOS:

- En las placas Petri que contenan agar EMB:

Se encontr bastantes coliformes de colores rosados debido a que estos
fermentan la lactosa, hubo mucha contaminacin al momento de la siembra y
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tambin debido al ambiente de laboratorio, haba tambin algunas colonias
que fueron coliformes no tpicas en la tierra.

- En las placa Petri que contenan agar ENDO:

Se encontr un comportamiento parecido al ocurrido en las placas que
contenan agar EMB ya que tambin crecen colonias rosadas, en los nmeros
10 y 12 crecieron colonias que normalmente no deberan crecer en este tipo de
muestra que era de suelo..

- En las placa Petri que contenan Manitol salado:

Se encontr solo contaminantes, levaduras, no ha crecido colonias, pero en el
numero 8 si ha crecido perfectamente, en los dems hubo puro hongo y
levadura.

- En las placa Petri que contenan Agar nutritivo:

En todas las placas Petri crecieron colonias porque es un agar comn nutritivo.

DISCUSIN DE RESULTADOS:

En el proceso de la inoculacin, hubo algunas demoras y percances debido a la

inexperiencia en este tipo de procesos, sin embargo a medida que
practicbamos el estriado se haca ms fcil.

CONCLUSIONES

En esta prctica se reconoci las tcnicas de aislamiento para obtener cultivo

puros, mediante estriado simple y compuesto, puesto que las bacterias, hongos
y levaduras han sido microorganismos muy estudiados en las ltimas dcadas
por lo que se ha hecho necesario cultivarlos, resulta de forma indispensable
conocer cmo cultivarlos para de esta forma realizar un posterior anlisis de
acuerdo a las necesidades del investigador, por lo que en la presente prctica se
aprendi los diferentes mtodos de cultivo analizando la estra simple que es
una inoculacin en zig-zag tomada de la muestra patrn y que despus de ser
incubada permiti su posterior anlisis observando la formacin de colonias de la
misma forma en la que se sembr, mientras que en la inoculacin por estra
compuesta se diferencia una muestra con lneas perpendiculares que va
disminuyendo su concentracin en cuanto se fueron realizando las estras ya
que los organismos fueron tomados de la estra anterior y se siguieron
realizando las dems estras terminando con una estra simple ya que permiti
obtener la menor concentracin de los microorganismos, una de las
observaciones ms importantes que se analiz al momento de sembrar fueron
los cuidados y manejo de materiales de siembra puesto que el asa debi ser
enfriada correctamente y se desinfect el asa a cada momento para evitar
errores como contaminacin e incluso causar un rompimiento en el agar.

RECOMENDACIONES:
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- Al momento de sembrar los inculos en las placas Petri tener mucho cuidado y
evitar rajar y romper los agares solidos que estn en las placas Petri.
- Esterilizar bien el asa de siembra.
Evitar pasarse de las lneas delimitadas en las placas Petri al momento del
estriado

ANEXOS:
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