INSTITUTO TECNOLOGICO DE TORREON.

EQUIPO 1: AMAIRANI JUAREZ, ENRIQUE MEDINA, HATZIRI QUINTERO,

ELSY PACHECO, AMERICA OVALLE, REBECA TORRES, ERIKA RODRIGUEZ.

MATERIA: MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS.

PROF: GERARDO CHEW MADINEVEITIA.

CARRERA: ING. EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

4 SEMESTRE.

PRACTICA 1: DETERMINACION DE MICROORGANISMOS EN VEGETALES

TORREON COAHUILA, MEXICO.

6-FEB-2017

AGAR MACCONKEY PARA CULTIVO DE BACTERIAS:

Es un medio selectivo diferencial utilizado para el aislamiento y
diferenciacin de bacilos Gram-negativo fermentadores y no fermentadores
de lactosa. Se utiliza con frecuencia para el aislamiento de coliformes.
Colonias tpicas
Las colonias de los microorganismos fermentadores de lactosa (coliformes)
en agar MacConkey son de color rojo ladrillo, eventualmente rodeadas de
bilis precipitada.
El agar MacConkey es un tipo de gelatina que se produce de unas algas
rojas. Se usa ampliamente en microbiologa por sus propiedades al utilizarse
para el aislamiento y cultivo de bacilos Gram negativos de fcil desarrollo,
aerobios y anaerobios facultativos.

Adicionalmente sirve como selector de bacterias lactosafilas en muestras

clnicas, de agua y alimentos. La razn de la seleccin es que de bacterias
Gram positivas no admiten las lactosas que se encuentran en el medio. Por
fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto
produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorcin en
las colonias, y la precipitacin de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias
incoloras.

El Agar MacConkey es un medio selectivo y diferencial recomendado para el

cultivo y aislamiento de microorganismos Gram negativos a partir de
muestras clnicas, de alimentos, agua, productos lcteos y productos
farmacuticos. En este medio se aslan y diferencian bacilos entricos Gram
negativos fermentadores y no fermentadores de la lactosa.
El Agar MacConkey en su frmula original fue utilizado para diferenciar
cepas de Salmonella typhosa de otros miembros del grupo coliforme. La
frmula fue modificada para mejorar el crecimiento de cepas deSalmonella y
Shigella y con ello tambin se mejoraron las reacciones diferenciales entre
los microorganismos patgenos entricos y el grupo coliforme.
El Agar MacConkey contiene cristal violeta y sales biliares como inhibidores
de organismos Gram positivos. Las colonias aisladas de bacterias que
fermentan la lactosa son rosadas y pueden estar rodeadas de una zona de
precipitado de sales biliares el cual es debido a una cada en el pH por la
fermentacin de la Lactosa.

ESTERILIZACION:
Esterilizar material de vidrio, para eso utilizaremos:
Papel canela
Cinta masking tape
Tijeras
Algodn
gasas
MATERIAL A ESTERILIZAR:
Vidrios de reloj
Pipetas de 5 ml
Esptulas
Cajas Petri
Matraz Erlenmeyer 250 ml

Primero que nada antes de empezar cualquier procedimiento en el

laboratorio, se debe tener en cuenta que todo el material que vayamos a
utilizar tiene que estar perfectamente limpio y lavado con jabon y debe ser
enjuagado con agua destilada para as evitar cualquier alteracin en los
resultados.

PROCEDIMIENTO PARA ESTERILIZACION:

1.-recortar papel canela, calculando el que sea necesario o suficiente para
envolver cada material.
2.-Envolver cuidadosamente con papel canela los vidrios de reloj de la parte
de abajo hacia arriba, y enseguida sellar con cinta masking tape.
Enseguida envolver la o las pipetas de 5 ml de la parte de abajo hacia
arriba hasta cubrir perfectamente, pero antes, colocar en la boca de la
pipeta un pequeo trozo de algodn para que quede sellada y luego colocar
cinta masking tape, procurar sealar la pipeta con un marcador indicando
con una flecha donde quedara el orificio de la pipeta.
3.- Envolver las esptulas cuidadosamente y sellar con cinta masking tape.
4.- envolver las cajas Petri procurando que la parte de abajo sea la que
quede sellada con la cinta, para evitar confusiones.
5.- con la ayuda del papel canela se har un pequeo cono, que sea
suficiente para cubrir la boca del matraz Erlenmeyer, antes debemos
colocar un pedazo de algodn y envolverlo en una gasa y colocarlo en la
boca del matraz, ahora si se procede a colocar el cono de papel canela y
sellamos con cinta masking tape.

PREPARACION DE AGUA PEPTONADA:

MATERIAL:
 Matraz Erlenmeyer de 500 ml
Agua de peptona tamponada
Vidrio reloj
Esptula
Agua destilada
Balanza analtica

El agua de peptona tamponada nos indica en el frasco que por cada 20 gr de esta,
se debe diluir en 1000 ml o en un litro de agua, en este caso como se utilizaran 6
tubos de ensaye por cada uno de los 6 equipos y en cada tubo se deben colocar
9.3 ml, aproximadamente se calcul que se utilizaran 300 ml de agua para todos
los equipos, entonces se procedi a realizar una regla de 3 para saber la cantidad
de agua de peptona tamponada que se deba pesar y utilizar para conseguir estos
180 ml.
20gr-----------------1000ml X=6 gr de agua peptonada
X---------------300ml en un volumen de 300 ml

El resultado fue que para 300 ml de agua se deban utilizar 6 gr de agua de

peptona tamponada, obtenido este resultado, se procedi a pesar los 6 gr gr en un
vidrio reloj con la ayuda de una esptula, procurando que fuera lo ms exacto
posible, se colocaron los 6 gr en el matraz Erlenmeyer con los 300 ml de agua y
luego diluimos cuidadosamente con movimientos circulares, hasta que la mezcla
quedara perfectamente bien diluida.
PREPARACION DE AGAR MAC CONKEY:
MATERIAL:
Agar-MAC CONKEY
Vidrio reloj
Esptula
Balanza analtica
Matraz Erlenmeyer
Agua destilada
Mechero de bunsen

Al igual que el agua de peptona tamponada el agar- MAC CONKEY nos

dice que por cada 50 gr, este debe ser disuelto en 1000 ml o en un litro de
agua, para nuestros medios de cultivo se utilizaran 15-20 ml por equipo,
as que se procedi a realizar otra regla de tres para saber cunta cantidad
de agar se iba a utilizar para cada una de las cajas Petri.

50 gr-------------1000ml X=10 gr de agar para un

 X------------200ml volumen de 200 ml.

Se obtuvo que para 200 ml de agua se deben utilizar 10 gr de agar-MAC

CONKEY, se pesaron los 10 gr en el vidrio reloj con la ayuda de la balanza
analtica, procurando que los resultados fueran los ms precisos posibles, se
colocaron los 10 gr en los 200 ml de agua destilada y se mezcl perfectamente
bien.
El siguiente paso es poner a calentar la mezcla de agar-agar que est en el
matraz en el mechero de bunsen, ayudando tambin a terminar de disolver la
mezcla, un dato que se debe tomar en cuenta es que se debe retirar antes de que
llegue al punto de ebullicin, sea que no llegue a los 100c.
El siguiente paso que se realizo fue colocar los 9.3 ml de agua
peptonada en cada uno de los 3 tubos con la ayuda de una pipeta
esterilizada de 10 ml, sellarlos con la rosca perfectamente.

Se procedi a colocar todos los materiales que fueron envueltos con

papel canela (matraces, pipetas, esptulas, etc.), as como los tubos
con agua peptonada y el matraz con el agar-agar en un autoclave para
la esterilizacin, la esterilizacin es por 15 a 20 minutos a 119C ,
siempre estando al pendiente de que se mantenga a esa temperatura,
cuando est listo se debe esperar a que el autoclave se enfre, para
evitar sufrir quemaduras, un dato importante es que las manijas deben
estar contrarias, para que se pueda llevar acabo la esterilizacin, sacar
los materiales con la ayuda de un guante o esperar a que se enfren un
poco.
PESADO DE GRASA DE COCINA:
MATERIALES:
Balanza analtica
Esptula
Muestra de grasa
Vidrio reloj

Se procedi a pesar 1gr de grasa en el vidrio de reloj esterilizado, con

la ayuda de una esptula, pesar lo ms preciso posible.

DILUCIONES.
Ya que se retiraron todos los materiales de vidrio del autoclave, se toman
los 3 tubos de agua peptonada y se colocan en la gradilla, luego
encendemos el mechero de bunsen para poder esterilizar la asa punta
afilada y as poder colocar la grasa.

1.- esterilizar la asa y colocar el gramo de grasa en el primer tubo con agua
peptonada
2.-se procede a cerrar el tubo y a agitar de 3 a 4 veces cuidadosamente.
3.-se coloca nuevamente el tubo en la gradilla
4.-se destapa nuevamente, tomamos un mililitro de la dilucin con la ayuda
de la pipeta de 5 ml, pero antes debemos pasarla por el mechero de
bunsen para esterilizar, luego se pasa el mililitro al segundo tubo.
5.- al igual que el primer y segundo tubo se procede a agitar 3 o 4 veces
con cuidado y se coloca nuevamente en la gradilla.
6.- ahora del segundo tubo se toma un mililitro, esterilizando la pipeta y
colocndolo en el 3er tubo, se tapa el tubo con la rosca y se procede a
agitar 3 o 4 veces cuidadosamente, as se obtuvieron nuestras 3
diluciones(10^-1, 10^-2 y 10^-3)
SIEMBRA PROFUNDA.
Para la siembra profunda, se necesita 1 caja Petri ya esterilizada,
destaparla y colocar 1 mililitro del 3er tubo de 10^-3 con la ayuda de una
pipeta esterilizada, taparla nuevamente y enseguida se colocan de 10 a 15
ml de nuestro agar- Mac conkey que se encuentra en el matraz, pero
primero se debe pasar el matraz por el mechero de bunsen para que no
entren en contacto con el bacterias que puedan estar en el medio ambiente,
y taparlo inmediatamente con la gasa que contiene algodn, ya que se
coloc el agar, se tapa la caja Petri y se procede a hacer movimientos de
derecha a izquierda, de arriba hacia abajo, de izquierda a derecha, en
ochos, para que las bacterias puedan ser esparcidas por todo el medio de
cultivo, evitar hacer movimientos muy bruscos, ya que las bacterias podran
morir, esto se hace lentamente. Terminado este procedimiento el medio de
cultivo se somete a una serie de pasos que se muestran a continuacin:

HOMOGENIZACION.
El siguiente paso es la homogenizacin, que es un proceso que combina
diversas sustancias para producir una mezcla uniformemente consistente.
La homogenizacin se utiliza principalmente con componentes que no son
solubles uno en el otro, que apenas son miscibles o no son miscibles en absoluto.

INCUBACION.
Luego sigue la incubacin que se realiza a 35+- 2C por 72 horas o 3 das.
Una incubadora es un dispositivo que sirve para mantener y hacer
crecer cultivos microbiolgicos o cultivos celulares. La incubadora mantiene
la temperatura, la humedad y otras condiciones en grado ptimo, tales
como el contenido de dixido (CO2) y de oxgeno en su atmsfera interior.

LECTURA:
Ya que pasaron las 72 horas se procede a hacer la lectura de nuestro
medio de cultivo cuenta estndar de la gorda de harina, observando que
tipo de microorganismos crecieron en l (coliformes totales o fecales)

RESULTADOS:

Como se ve en la imagen el resultado fue de colonias rosadas, que

son coliformes totales, se contaron 2, y el resultado fueron 2000
unidades formadoras de colonia (UFC).

El mismo proceso de diluciones, siembra, incubacin, etc. se realiz

con un gramo de muestra de epazote y los resultados fueron los
siguientes:

El resultado fue un hongo verde metlico, sea 1000 UFC.