ORIGINAL BREVE

TXICIDAD DE LA APITOXINA EN UN
MODELO DE Artemia salina
Juan Manuel-Prez Agudelo1; Juan Felipe-Salazar Espinosa1,2; Jorge Hernn-Hernndez Guevara2
1
Mdico y Cirujano. MSc Ciencias Biomdicas Farmacologa. Docente e Investigador Universidad de Caldas, Manizales, Colombia. Director del
semillero de investigacin en farmacologa experimental.
2
Estudiantes V semestre de Medicina Universidad de Caldas. Semillero de Investigacin en Farmacologa Experimental (SEMFEX). Manizales, Co-
lombia.
3
Miembro activo de la Asociacin cientfica de estudiantes de medicina de la Universidad de Caldas (ACEMCAL).

CIMEL 2014; 19(2):75-78

RESUMEN
Objetivo:Determinar la toxicidad del extracto acuoso de Apitoxina mediante bioprospeccin en el modelo de Artemia salina. Materiales y mtodos: Previo mon-
taje de Biorreactor, un grupo fue expuesto al extracto acuoso de Apitoxina (n=20) y el grupo control fue expuesto a agua destilada (n=20) la toxicidad se defini
por la muerte de la Artemia salina a las 24 horas de administracin del extracto. Se realiz anlisis estadstico no paramtrico mediante la prueba de Chi cuadrado
de homogeneidad (Pearson) para determinar la diferencia en mortalidad de los grupos.Resultados:El Grupo Control no present mortalidad, en tanto el Grupo
Apitoxina present una mortalidad del 95%. Se demostr una asociacin estadsticamente significativa con un p<0,05(IC: 95%) entre la mortalidad de la Artemia
salina y la administracin de apitoxina.Conclusin:El extracto acuoso de apitoxina presenta toxicidad a una concentracin de 0.35 en el modelo de Artemia salina.
Palabras Clave: Apitoxina, Artemia salina, Toxicidad

TOXICITY OF APITOXIN IN AN ARTEMIA SALINA MODEL

ABSTRACT
Objective: To determine the toxicity of the aqueous extract of Apitoxin by bioprospecting in the model of Artemiasalina. Materials and methods: Previous assembly
bioreactor, one group was exposed to aqueous extract of Apitoxin (n = 20) and control group was exposed to distilled water (n = 20) toxicity was defined by the death
of the brine shrimp to 24 hours of administration of the extract. Non-parametric statistical analysis was performed using Chi-square test of homogeneity (Pearson)
to determine the difference in mortality among groups. Results: The Control Group did not show mortality, while the Apitoxin Group presented a mortality of
95%. Between mortality of Artemiasalina and the administration of bee venom: a statistically significant association with p <0.05 (95% CI) it was demonstrated.
Conclusion: The aqueous extract of bee venom toxicity presents a concentration of 0.35 in Artemiasalina model.
Keywords: Apitoxin, Brine shrimp, toxicity.

INTRODUCCIN analizar toxicidad de extractos de plantas y desde un punto de

La apitoxina es el veneno secretado por varias especies de
abejas; en su composicin se destacan: pptidos como me-
litina (40-50%), apamina (2-3%), fosfolipasa A2 (10-12%)
yhialuronidasa (1-1,5%)1, todas ellas desarrollan actividades
biolgicas, antiinflamatoria, antimicrobiana, antitumoral2 y
citotxica. El compuesto que ha mostrado mayor cantidad y
efectividad en sus funciones es la melitinaque inhibe los cana-
les de calcio, mejora la transfeccin de material gentico hasta
el ncleo celular, inhibe oncogenes, acta sobre cascadas de
sealizacin intracelular dependientes de protena G, activi-
dad antiparasitaria y antiviral3. Este veneno ha sido utilizado
como terapia para dolor crnico4,5, la esclerosis lateral amio-
trfica6 y las enfermedades reumticas como artritis reuma-
toide7.
vista farmacolgico, posible actividad antitumoral11,12.
La Artemia salina es un crustceo de fcil adquisicin en un
estado que le permite permanecer en un medio seco durante
aos, hasta que un agente externo lo estimule para salir de su
estado larvario y convertirse en adulto en 48 horas aproxima-
damente13. Tiene un amplio perfil de resistencia ante condi-
ciones como escasez de nutrientes, diversas concentraciones
de sal y cambios de temperatura13.
Debido al aumento del uso de apitoxina como terapia alter-
nativa, se viene incrementando la bsqueda de mtodos que
permitan una mejor comprensin de la misma. Es por eso
que el objetivo del presente estudio es evaluar la toxicidad de
la apitoxina en un modelo de Artemia salina.

Recientemente, se han incorporado el uso de Artemia salina MATERIALES Y MTODOS

un ensayo pre-clnico de gran utilidad y eficacia que requiere
pequeas cantidades de muestras y permiten la evaluacin
rpida de extractos crudos y fracciones, conduciendo con
seguridad a los principios activos y descartando todo lo que
no sea de inters8,9,10. Este biomodelo ha sido empleado para
Se realiz un estudio analtico, llevado a cabo en el laboratorio
de farmacologa experimental de la Facultad de Ciencias para
la Salud de la Universidad de Caldas, Colombia.

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Artemia salina: Se utilizaron 45g de huevos de Artemia salina mg de huevos (estado criptobitico) Fig 1.
en estado criptobitico con el objetivo de mantener el grado
de proporciones con respecto a la cantidad de agua y sal que Despus de 48 horas de montar el biorreactor, se llev a cabo la
se agreg en el biorreactor con el fin de incubar y mantener extraccin del preparado para agregarla a 40 tubos de ensayo
vivos las larvas o nauplios de Artemia. Esta proporcin va de mediante pipeta automtica. Estos se separaron en 2 grupos,
acuerdo a la cantidad de Artemia salina usada en los bioensa- Control y Grupo Apitoxina de 20 tubos de ensayo cada una y
yos realizados por Meyer y Cols. cada tubo de ensayo con 2 ml extrados del recipiente. Final-
mente, a cada tubo de ensayo del grupo control se le agreg
Apitoxina: Se utiliz extracto crudo acuoso de la apitoxina de 0,2 ml de agua destilada y cada tubo de ensayo del grupo Api-
abejas Apis mellifera al 35% o 0.35 el cual se mantuvo a tempe- toxina fue expuesto a 0,2 ml del extracto acuoso de apitoxina
ratura de 25-30C. Se emple el extracto proporcionado por la medidos mediante pipeta automtica Fig 2. Cada tubo estuvo
empresa Apis Health en un periodo de incubacin de 24 horas para su posterior
evaluacin de la mortalidad de la artemia frente al preparado
Procedimiento: Primero se llen con 2L de agua el biorreac- de apitoxina.
tor. Luego se le aadieron 500 mg de cloruro de sodio al 0.9 %,
gas de saturacin de aire (O2 al 21%) por sistema de bomba Toxicidad: Se determin la toxicidad por la mortalidad (no
de flujo continuo a una temperatura de 25 30 C controlada movimiento por ms de 10 minutos)inducida en la artemia
por 24 horas por una bombilla. Finalmente se aadieron 45 salina despus de la administracin de la apitoxina11

Fig 1. Montaje del Biorreactor posterior a las 48 horas de colocar
los huevos de artemia salina para su eclosin.
Anlisis estadstico: Se realiz el anlisis estadstico mediante
el software IBM SPSS 19 para determinar asociacin entre la
muerte de la poblacin de artemia salina, con respecto a la ex-
posicin a Apitoxina a travs de la prueba no paramtricachi
cuadrado.

Consideraciones ticas: De acuerdo a la clasificacin dela

Agencia de Proteccin Ambiental de Estados Unidos, este
crustceo es permitido para usarse en bioensayos sin restric-
ciones bioticas14.

RESULTADOS

El Grupo Control no present mortalidad (0/20), en tanto el

Grupo Apitoxinapresent una mortalidad del 95% (19/20)
(Grfico 1)

Fig 2. Poblacin control expuesta a agua destilada y poblacin muestra expuesta al extracto acuoso de la apitoxina al 35%
de izquierda a derecha respectivamente.

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Grfico 1. Se muestra cuantitativamente la mortalidad en los tubos de ensayo de las poblaciones control y expuesta a la apitoxina.

Se demostr una asociacin estadsticamente significativa con travs de la disminucin en la capacidad genotxica de este
un p<0,05(IC: 95%) entre la mortalidad de la Artemia salina y medicamento sobre tejido sano y a su vez disminuye la pre-
la administracin de apitoxina. sencia de malignidad secundaria19.

DISCUSIN Por otro lado la apitoxina tambin puede explicar su toxici-

dad por la capacidad antimicrobiana; en un estudio previo se
La muerte de la Artemia Salina se dio en el 95% de la mues- evidencidisminucin de la carga mictica sobre diferentes
tra a la cual se administr Apitoxina, lo que nos indica que tejidos de ratones,infectados con CandidaAlbicans, por inhi-
a una cantidad de 0,2 ml con una concentracin de 0.35 del bicin del dimorfismo de estos microorganismos e impedi-
extracto acuoso podemos encontrar la toxicidad de la Arte- mento en su proliferacin y crecimiento, actuando a favor de
mia Salina o tambin llamado Brine Shrimp. Esto nos indica la apoptosis de clulas del hongo20.
que la DL50 se encuentra a esta concentracin o por debajo
de esta. La toxicidad de la apitoxina se puede explicar por los Las limitaciones del presente estudio radican en que solo se
compuestos antitumorales que contiene; en un estudio rea- us una concentracin lo que no nos permite fijar el rango
lizado por Brand y Cols se menciona que la aplicacin de la de la DL50, sin embargo se realiz una aproximacin lo que
Saururuscernuuscon propiedades antitumorales sobre el Bri- contribuye a la escases de informacin con respecto a la Api-
ne Shrimp produce la mortalidad de las misma atribuyndole toxina.
la toxicidad de la planta que el estudio reporta11. Asimismo, la
apitoxina contiene en su composicin la melitinaque inhibe En conclusin, la capacidad de induccin de citotoxicidad en
el proceso de metstasis y crecimiento tumoral de diferentes poblaciones de artemia por parte de la apitoxina, junto con
lneas celulares cancergenas15,16. Tambin se ha encontrado la evidencia cientfica previa que demuestra la actividad an-
que la inhibicin de la metaloproteinasa 9 explica la capaci- tineoplsica a travs de apoptosis, inhibicin del crecimiento
dad de la apitoxina para inhibir la metstasis y colonizacin e impedimento en la diseminacin de clulas cancergenas,
neoplsica17, adems de tener accin sobre factores de trans- perfilan a la apitoxina como compuesto que puede ser im-
cripcin especficos de ciertos tumores, lo cual genera accin plementado en futuros tratamientos para enfermedades ma-
citotxica sobre dichas clulas, aunque an se necesitan ms lignas.
estudios para determinar qu tan especfica es18.
Recomendamos para futuras investigaciones la determina-
Un estudio previo realizado en linfocitos de ratones reporta cin de la Dosis Letal 50% y comprobar la efectividad en mor-
que la apitoxina puede ser usada como terapia coadyuvante talidad de lneas celulares cancergenas.
de quimioterapia con bleomicina para manejo de cncer, a

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