De la llave a la celula: las facetas cambiantes del agua
M. Picquart1 e I. Carrasco Morales2 .
1
Depto. de Fsica, UAM-I 2 Depto. de Atencion a la Salud, UAM-X
Recibido: 18 de junio de 2008
Aceptado:16 de julio de 2008
Seguramente, la caracterstica mas promi-
nente del agua es la decepci on, porque en
realidad es una sustancia de complejidad
infinita, de gran e inapreciable importan-
cia, dotada de una rareza y belleza suficien-
tes como para excitar y retar a cualquie-
ra que pretenda conocerla.
Owen R. Fennema
Resumen
El agua juega un papel capital en los procesos de
la vida. Es un lquido complejo cuyas propiedades
son objetos de investigaciones permanentes. Se en-
cuentra en celulas, confinada en cavidades dentro de
las protenas, ligada a su superficie, en capas entre
los tejidos, representa del 70 al 80 % de la masa celu-
lar. El agua interfacial (tambien llamada ligada o es-
tructurada) juega un papel fundamental en la esta-
bilidad y funcion de las protenas y de los acidos nu-
cleicos. Muchos trabajos han mostrado que las pro-
piedades estructurales y din amicas del agua interfa-
cial son muy diferentes del agua en bulto. Se ha mos-
trado tambien su papel en la relaci on din
amica
funcion de las protenas, que se traduce por una acti-
vacion del movimiento de las protenas. Hasta los se-
tentas, pocos fueron los biologos que pensaban que
el agua no era s olo un mero solvente con propieda-
des homogeneas (agua en bulto). Han sido los traba-
jos de bioqumicos, biofsicos y fsicos que han pues-
to a luz, la zona de interacci on entre las biomolecu-
las y las moleculas de agua vecinas.
Introducci on
El agua es una sustancia, un lquido, un gas, un s
oli-
do, una molecula, un cuerpo puro... todo a la vez
pero no obligatoriamente al mismo tiempo para el
mismo observador. Es tambien un elemento natu-
ral que en el estado lquido y s
olido recubre mas de
los dos tercios de la superficie de la tierra y es con-
tenida en poca cantidad en su atm osfera.
El agua (H2 0; M = 18 g/mol) que entra entre el 50
y 99 % en la composicion de los organismos vivien-
tes, es lquida entre 0 y 100 C, a presi
on atmosferi-
ca. Esta particularidad no es frecuente ya que las
moleculas con masa molar vecina son gases en las
mismas condiciones de temperatura y presi on. Es-
to se explica por la forma de la molecula y la asi-
metra de la carga electronica.
En primer analisis, todos los atomos est an consti-
tuidos de un n ucleo denso, cargado positivamente
alrededor del cual gravitan electrones de carga ne-
gativa. Desde el punto de vista electrico, un ato-
mo est a siempre neutro. El mas peque no de todos
es el atomo de hidrogeno que posee un solo electron.
Es frecuente representar a un atomo como un pla-
neta (el n ucleo) con satelites dando vueltas alrede-
dor (los electrones) ya que un tal modelo es facil-
mente comprensible. Pero esto supone implcitamen-
te que los electrones tienen trayectorias bien conoci-
das y casi circulares. No es el caso.
Los fsicos no conocen el movimiento de los elec-
trones alrededor de un n ucleo pero pueden calcu-
lar la probabilidad de encontrar un electron en un lu-
gar dado alrededor de este n ucleo (Fig. 1). La pre-
sencia de estos electrones es muy importante ya que
permiten a los atomos ligarse el uno al otro. El en-
lace qumico entre dos atomos se forma cuando pa-
res de atomos, comparten pares de electrones. Es-
tos electrones compartidos no pertenecen mas ni
al uno ni al otro sino a los dos. Una tal reparti-
cion no siempre es equitable ya que algunos ato-
mos pueden tener mas afinidades para los electro-
nes. Es lo que pasa en la molecula de agua en don-
de el oxgeno tiene tendencia a atrapar mas fuer-
temente los electrones que el hidrogeno. Entonces,
la asociacion de un atomo de oxgeno con dos ato-
mos de hidrogeno mucho mas peque nos en una con-
figuracion no lineal (como es el caso de la molecu-
la de agua) produce una asimetra de la estructu-
5
6 ContactoS 69, 515 (2008)
ra y la constituci
on de un dipolo electrico. Se di-
ce que una tal molecula es polar.
Figura 1. El atomo de hidr
ogeno con su nube electr
oni-
ca en el estado fundamental. La distribuci
on de la densi-
dad define la forma del atomo. La densidad decrece del
rojo al azul.
En la materia, cual sea su estado, los atomos o las
moleculas nunca est an inmoviles sino en movimien-
to continuo dependiendo de la temperatura: es la agi-
taci
on termica. En el vapor de agua, la agitacion
termica de las moleculas de agua es grande: se mue-
ven en todas las direcciones independientemente las
unas de las otras y aparentemente de manera desor-
denada. Este comportamiento es tpico de todos los
gases.
Si se enfra el vapor de agua, la energa de agita-
cion termica disminuye y las moleculas pueden li-
garse las unas a las otras. Se juntan en paquetes pa-
ra formar gotas de agua lquida que caen en el fon-
do del recipiente. Cuando el vapor se transforma
progresivamente en lquido, se pueden formar enla-
ces entre moleculas vecinas. Estos enlaces se deben
a la polaridad de la molecula y se establecen cuan-
do una molecula intercambia un electron de uno de
sus hidrogenos con un oxgeno de una molecula ve-
cina (formaci on de un puente de hidrogeno).
Las moleculas de agua suficientemente cercanas, es-
tablecen una red de enlaces intermoleculares local-
mente inestables y en permanente reconstruccion. La
libertad de cada molecula es limitada por el cam-
po de fuerzas de la poblaci on molecular, permitien-
do que el agua se quede en fase lquida a las tempera-
turas y presiones compatibles con la vida. Para cam-
biar este estado hacia una fase gaseosa, basta teori-
camente con romper los puentes de hidrogeno. A pre-
sion constante, esto se puede conseguir aumentan-
do la energa cinetica de las moleculas por calenta-
miento o cualquier otra forma de energa.
La transicion hacia un estado s olido es frecuente-
mente mas compleja que la vaporizacion. Es necesa-
rio reducir las vibraciones intermoleculares y cons-
truir uno o varios cristales por agregaci on de molecu-
las de agua. Esto se obtiene bajando a un mas la tem-
peratura. La construccion de una superficie cristali-
na solida, el desplazamiento de estas moleculas ha-
cia esta superficie, su orientaci on para integrarla y
la constituci on de nuevos enlaces en un sistema cris-
talino, necesita energa y tiempo. Si el enfriamien-
to es suficientemente r apido o la cohesion intermole-
cular est a reforzada por crioprotectores, se puede ob-
tener un estado vtreo (lquido infinitamente visco-
so) no cristalino. En los otros casos, la probabili-
dad de formar el primer cristal depende mucho de
la presencia de motivos moleculares adecuados pre-
sentes en la superficie de las moleculas en suspen-
sion en el agua, en sus impurezas o en la pared del re-
cipiente. La formacion de este primer cristal es de-
morada en el agua pura que puede quedarse teori-
camente en subenfriamiento hasta -49 C. Lo impor-
tante en la formacion del hielo (agua s olida) es que
los puentes de hidrogeno (que se pueden facilmen-
te doblar en el lquido) se endurecen y se vuelven ca-
si rectilneales. Las moleculas de agua forman enton-
ces una estructura muy rgida y organizada.
En las celulas, las monocapas moleculares de hidra-
taci
on adsorbidas sobre los constituyentes biol ogi-
cos tienen propiedades vecinas a las del hielo: po-
ca agitacion molecular, orientaci
on preferencial de
las moleculas y poder de solvataci
on debil [1].
El agua es un solvente para muchos cuerpos. Trans-
porta sustancias que provienen del medio externo
o formadas en los seres vivientes. Participa tam-
bien en numerosas reacciones qumicas en el orga-
nismo y permite la fabricacion de nuevas molecu-
las vitales.
Hace mas de 35 a nos, Tait and Franks [2] publica-
ron un artculo con el objetivo de llamar la atencion
sobre algunas areas de investigacion, sobre el esta-
do del agua en los sistemas bioqumicos y biologicos.
En dicho artculo, algunas deducciones a proposito
del papel del agua en tales sistemas, fueron en par-
te especulativas. Sera interesante realizar un balan-
ce y analizar los logros as como hacer una refle-
xion multidisciplinaria sobre estos problemas. Exis-
te evidencia de que el agua no es un simple solven-
te inerte para las reacciones bioqumicas y que jue-
ga un papel importante en la din amica de muchas
de ellas.
De la llave a la celula: las facetas cambiantes del agua. M. Picquart e I. Carrasco Morales. 7

En un artculo recientemente publicado en Nature

[3], Martn Chaplin pregunta No subestimamos la
importancia del agua en biologa celular? Contes-
ta considerando varios ejemplos: el efecto del agua
sobre las protenas como parte integrante de ellas y
su papel en los procesos de plegamiento, en su acti-
vidad y din amica; el papel de las moleculas ordena-
das del agua en la transferencia de protones y elec-
trones; el agua y la estructura de los acidos nuclei-
cos y finalmente el papel del agua celular en la ac-
tividad de la celula. Pero antes de abordar estos te-
mas haremos un peque no recordatorio de algunas de
las propiedades del agua.
Polimorfismo del agua
Las fuerzas responsables de la organizaci on del agua
son de naturaleza electrostatica. Las moleculas de
agua son dipolos electricos que pueden tambien for-
mar puentes de hidrogeno. En el agua en bulto es-
tos dipolos tienen orientaciones aleatorias y por eso
se considera como un medio isotropo. La molecu-
la posee dos hidrogenos electropositivos y un oxgeno
electronegativo. Generalmente se representa como
cuatro cargas colocadas en los cuatro vertices de
un tetraedro (Fig. 2-a). En promedio, cada molecu-
la est
a ligada por un puente de hidrogeno a cua-
tro moleculas vecinas (Fig. 2-b) dispuestas en tetrae-
dro alrededor de ella. El tiempo de vida de un puen-
te de hidrogeno en el agua en bulto es del orden de
1011 s y su energa es de 3-5 kcal mol1 . La intro-
duccion de una sustancia ajena en esta fase acuo-
sa homogenea crea un desequilibrio. A su contac-
to las moleculas de agua est an sometidas a esfuer-
zos que van a privilegiar ciertas orientaciones: se for-
ma una zona de agua interfacial pero, a diferencia del
agua en bulto; muy anis otropa. Se admite que es-
tos esfuerzos se ejercen dentro de un espesor de por
lo menos cuatro capas de agua (1.1 nm). La estruc-
tura y por lo tanto las propiedades del agua interfa-
cial son muy diversas y dependen de la hidrofobici-
dad o de la hidrofilicidad de la sustancia que se in-
troduce. Se ha mencionado tambien la posibilidad de
union con moleculas con puentes de hidrogeno pre-
sentando bifurcaciones [4].
Sustancia hidr ofoba
Esta sustancia posee grupos apolares que no atraen
al agua y por lo tanto, las moleculas de agua que Figura 2. Estructura del agua: a) Molecula aislada; b)
la rodean y que estaban unidas por puentes de La disposici
on tetraedrica; c) En el hielo.
hidrogeno se van a reorganizar y establecer entre
ellas nuevos puentes de hidrogeno. A esto se le llama
hidrataci
on hidrofoba. De esta manera las molecu-
las de agua compensan la ruptura del equilibrio que
8 ContactoS 69, 515 (2008)
tenan en el agua en bulto. La hidrataci on hidrofo-
ba es exotermica y se acompa na de una variacion
de entropa negativa (S < 0). La densidad de es-
ta agua es superior a uno. El tiempo de vida de los
puentes de hidrogeno es del orden de 106 s mucho
mas grande que en el agua en bulto y juega un pa-
pel importante en la estabilizacion de las biomolecu-
las [5-7]. Al encontrar una regi on apolar con un pe-
que no radio de curvatura (metano. . . , cadena late-
ral de protena. . . ) las moleculas de agua se reorien-
tan ya que no pueden formar puente de hidrogeno
hacia la superficie hidrofoba. Esta se encuentra en-
cerrada en una peque na jaula con caras pentagona-
les (clatratos, Fig. 3) cuyos vertices est an ocupados
por moleculas de agua y los lados formados por puen-
tes de hidrogeno tangentes a la superficie. Estas es-
tructuras presentan variaciones en funcion del radio
de curvatura [8]. Por otra parte, se han descubier-
tos puentes de hidrogeno entre el agua y el benceno
[9-12], con los atomos de hidrogeno de las molecu-
las de agua hacia la nube de electrones . Mas re-
cientemente se han encontrado el mismo tipo de in-
teraccion con otros n ucleos arom aticos [13-16].
Figura 3. Clatrato de agua.
Sustancia hidr ofila
Estas sustancias atraen al agua, contienen grupos io-
nizados o polares. Pueden ser mojadas (como el vi-
drio) y si sus fuerzas de cohesion interna son debi-
les, pueden solubilizarse. Al contacto con tal sus-
tancia, el agua forma una capa de solvataci on (hy-
dration shell) que constituye una pantalla que im-
pide su precipitacion. Los dipolos de agua se orga-
nizan radialmente alrededor de las regiones ioniza-
das formando multicapas ordenadas de agua [17-18].
Esta agua est a a muy alta presi on (hasta 34 kba-
ros) y su densidad puede llegar a 1.2 g cm3 . Las re-
giones polares se unen a las moleculas de agua por
puentes de hidrogeno jugando el papel de donado-
res o de aceptadores de hidrogeno.
El acido ribonucleco (ARN) y el acido desoxiribo-
nucleco (ADN) han sido estudiados por numerosos
metodos. En el estado cristalino, el ADN est a cubier-
to de una capa de agua estructurada, no congelable
e impermeable a los iones que representa mas o me-
nos 80 % de su masa. Se estima a veinte moleculas
de agua por nucle otido, fijadas sobre los oxgenos li-
bres de los grupos fosfato, de los fosfodiesters y de
los azucares y sobre las bases. Si se a
nade agua a es-
te ADN, se infla dejando espacio para moleculas de
agua mas libre. Esta agua interna depende de la es-
tructura A, Z o B del ADN [19-22].
El agua interfacial o ligada o estructurada
En su libro Qumica de los alimentos, O. R. Fenne-
ma [23], menciona que el agua ligada no es una can-
tidad facilmente identificable y homogenea, por lo
que la terminologa descriptiva es difcil, no existien-
do ninguna definicion generalmente aceptada. Ano-
ta como ejemplos siete definiciones diferentes, todas
validas: 1) El agua ligada es el contenido de agua
de equilibrio de una muestra a una temperatura y
humedad relativa (baja) apropiada; 2) El agua li-
gada no contribuye significativamente a la constan-
te dielectrica a altas frecuencias y por tanto tiene
su movilidad rotacional restringida por la sustancia
con la que est a asociada; 3) El agua ligada no con-
gela a una temperatura baja arbitraria (normalmen-
te -40 C o mas baja); 4) El agua ligada es inutilizable
como solvente para solutos adicionales; 5) El agua li-
gada produce un ensanchamiento de lnea en los ex-
perimentos de resonancia magnetica nuclear (RMN)
de protones; 6) El agua ligada se mueve con las ma-
cromoleculas en los experimentos de velocidades de
sedimentaci on, viscosidad o difusion; 7) El agua liga-
da se encuentra en la vecindad de solutos y otras sus-
tancias no acuosas y tiene propiedades que difieren
significativamente del resto de la masa de agua del
mismo sistema. Seg un el, la combinacion de las de-
finiciones 3 y 7 parece la mas satisfactoria ya que
produce una imagen conceptual y permite un proce-
der realista para cuantificarla.
En los sistemas biol
ogicos o macromoleculas esta
agua puede existir en varias formas. Hay molecu-
las de agua ligadas mas fuertemente a las macro-
moleculas y que forman parte integral de ellas. A
esta agua, Fennema la llama constitutiva [23].
No se puede eliminar con ning un procedimiento
De la llave a la celula: las facetas cambiantes del agua. M. Picquart e I. Carrasco Morales.
experimental. La capa que sigue es una monoca-
pa de moleculas de agua en contacto directo con
los grupos polares o cargados de la macromolecu-
la. Algunos autores llaman solamente a esta mono-
capa como agua ligada [1], otros como agua veci-
nal [23] o interfacial y esta ilustrada en la Fig. 4.
Detras vienen multicapas menos ligadas pero con
propiedades suficientemente alteradas con respecto
al agua en bulto, que Mentre por ejemplo, llama agua
estructurada [1].
Figura 4. Organizaci on del agua al contacto de una
molecula. La primera capa tiene moleculas fuertemen-
te orientadas. En las capas siguientes el agua es menos or-
ganizada. Adaptada de la ref. 1.
Se considera que en estas capas de agua (ligada y es-
tructurada), las moleculas tienen una movilidad dis-
minuida con respecto al agua en bulto. Cuando se
queda en su lugar durante los fenomenos de osmosis,
es llamada tambien osmoticamente inactiva. Se con-
gela difcilmente, tiene una masa y un calor especfi-
co diferentes del agua com un, tiene anomalas termi-
cas, una conductividad de protones mayor y un po-
der de exclusi on de los s
olutos mucho mayor que el
del agua en bulto.
Qu e tipo de agua se encuentra en
las c
elulas?
La respuesta es compleja ya que los diferentes ti-
pos de sustancias mencionadas anteriormente se en-
cuentran y se puede pensar que agua en bulto, en cla-
tratos y en capas mas o menos estructuradas coexis-
ten. Pero la composicion del citoplasma est a domi-
nada por un tipo de moleculas, las protenas. Por lo
tanto, el tipo de agua que rodea las protenas debe
de ser el que se encuentra en las celulas. En que pro-
porci
on y cual es su papel? Es aqu donde los cientfi-
cos divergen.
9
En un trabajo reciente, Tehei et al. [24] han estu-
diado por dispersion de neutrones, la din amica del
agua intracelular de Haloarcula marismortui, un or-
ganismo halofilo aislado del Mar Muerto. Los resul-
tados de los experimentos realizados sobre dos es-
pectrometros diferentes revelan una constante de di-
fusion traslacional de 1.3105 cm2 s1 (a 285 K),
cercana a la encontrada en otras celulas, a la del agua
en bulto, y tambien a la del agua a 3.5 M NaCl que
ba naba las celulas. Vale recordar que el Mar Muer-
to tiene una muy alta concentracion de NaCl, 275 g
l1 , mientras la del mar es de 35 g l1 y la del plas-
ma 9 g l1 . Pero los investigadores encontraron tam-
bien un componente muy lento correspondiendo a
una constante de difusion traslacional 250 veces mas
peque na que la del agua en bulto. Esta agua len-
ta, representa el 76 % del agua celular en H. ma-
rismortui. Los mismos experimentos realizados so-
bre Escherichia coli no muestran el segundo compo-
nente. El componente lento se debera a una estruc-
tura especfica del agua relacionada a la alta can-
tidad de iones potasio que se encuentra en estas
celulas.
Toda molecula posee una movilidad traslacional y
una movilidad rotacional. En el primer caso, la
molecula se desplaza de un punto a otro. Esta for-
ma de movilidad es elevada en los fluidos y muy re-
ducida en los s
olidos. En el segundo caso, la molecu-
la gira u oscila en su lugar. Los movimientos mo-
leculares no son solamente movimientos desordena-
dos debidos a la agitacion termica. Pueden ser orien-
tados por campos electricos o magneticos.
Muchos trabajos sobre el agua asociada a macro-
moleculas fueron realizados por difraccion de rayos
X, por resonancia magnetica nuclear (RMN) y mas
recientemente por difraccion de neutrones. El pri-
mer metodo s olo es aplicable a cristales. Las pro-
tenas y los acidos nucleicos en el estado cristalino
son muy hidratados salvo en algunos puntos de con-
tacto entre moleculas. Se encuentran en su forma tri-
dimensional nativa [25]. Esta hidrataci on es a la vez
una ventaja ya que permite el estudio del agua, y un
inconveniente porque turba al analisis. Se detecta so-
lamente las moleculas de agua encerradas en cavida-
des macromoleculares y a veces en contacto directo
con la superficie. Adem as el agua en bulto que se en-
cuentra lejos de las macromoleculas perturba mucho
los resultados. Esta tecnica solamente da una subes-
timacion de la organizaci on del agua [1].
10
Los trabajos por RMN han mostrado que el agua en
las estructuras ricas en macromoleculas tiene una
movilidad reducida y una viscosidad elevada. La
RMN de protones permite estimar la movilidad de
moleculas que contienen protones gracias a una can-
tidad llamada tiempo de correlacion que vara co-
mo el inverso de la movilidad. Fullerton et al. [26],
por ejemplo, han trabajado sobre la lisozima en pol-
vo. La protena fue totalmente deshidratada y pro-
gresivamente rehidratada. Se mostr o que pudo rete-
ner 25 % de agua, que es tambien la cantidad nece-
saria para cubrir toda su superficie. Una parte de es-
ta agua es estructurada (5.5 %) con una movilidad
rotacional debil muy poco diferente a la de la pro-
tena. Se tratara del agua atrada por los grupos Como el hielo, el agua ligada y hacia una cierta dis-
ionizados, o sea 42 moleculas de agua por macro-
molecula. Se comporta como un s olido. De all vie-
ne su nombre en la literatura de agua ice-like (pa-
recida al hielo). El agua ligada a los grupos pola-
res esta menos inmovilizada. Finalmente, encontra-
ron que la cantidad total de agua perturbada por la
presencia de las macromoleculas representaba un es-
pesor promedio de 2.6 capas de moleculas de agua, o
sea 0.8 nm. En trabajos recientes [27-29], encontra-
ron un espesor de moleculas de agua de 0.63 nm al-
rededor de la molecula de colagena de mamferos.
Largas o cortas distancias?
El espesor de agua modificada por la superficie es
uno de los objetos de trabajo del grupo de G.H. Po-
llack [30-32]. En un trabajo reciente [31], Zheng et al.
han realizado experimentos con suspensiones de mi-
cro esferas cerca de varias superficies: gel de acido
poliacrlico, m
usculo, monocapa hidroflica con gru-
pos carboxlicos, etc. En todos los casos aparece en
funcion del tiempo, una zona de exclusi on de las mi-
cro esferas que puede alcanzar 250m. Se piensa ge-
neralmente, que las moleculas de agua se adsorben
sobre las superficies hidrofilas y que el ordenamien-
to adicional por capas sucesivas de agua se ve r apida-
mente quebrado por el efecto de la agitacion termi-
ca. Cu ales podran ser entonces las razones de un tal
ordenamiento sobre largas distancias como lo mues-
tran varios experimentos? Dos posibilidades existen:
que la energa de los puentes de hidrogeno mante-
niendo las moleculas juntas es mayor que lo pre-
visto, o que la agitacion termica que tiende a se-
pararlas es necesariamente mas peque na que lo pre-
visto. Parece que la segunda posibilidad sera posi-
ble si uno considera las observaciones realizadas so-
bre soluciones acuosas de micro esferas coloidales. A
una relaci on vol
umica del orden del 1 %, las suspen-
ContactoS 69, 515 (2008)
siones de micro esferas presentan una coexistencia
de dos fases, una desordenada y la segunda ordena-
da, parecida a un cristal [33-35]. En la fase desorde-
nada, los movimientos debidos a la agitacion termi-
ca tienen la amplitud esperada, mientras que en la
fase ordenada, aunque las micros esferas esten se-
paradas las unas de las otras por varios micr ome-
tros, la trayectoria libre media disminuye de un or-
den de magnitud. Aparentemente, los efectos de la
agitacion termica en las regiones ordenadas puede
ser menor que lo que se piensa. Esto podra predis-
poner las moleculas a un ordenamiento a largas dis-
tancias que no violara los principios fsicos.
tancia, el agua estructurada tienen la propiedad de
excluir los solutos. En este caso no es tan absolu-
ta como en el caso del hielo: depende de la natu-
raleza de los solutos y para los iones sigue el or-
den de la serie de Hofmeister: Mg2+ > Ca2+ >
Sr2+ > Ba2+ > Li+ > Na+ > K+ > Rb+ > Cs+ >
citrato3 > tartrato2 > SO2 4 > CH3 COO >
Cl > NO3 > ClO3 > I > SCN . La causa de es-
te fenomeno reside en que la fuerza de atraccion con
la cual las moleculas de agua son atradas a la su-
perficie de los iones para formar el ion hidratado
es proporcional al inverso del cuadrado de su radio.
Por tanto, a carga igual, paradojicamente son los io-
nes que tienen la masa atomica mas peque na que son
los mas voluminosos en solucion ya que su accion so-
bre las moleculas de agua es mas fuerte. En parti-
cular, el ion sodio hidratado es mas grande (rN a =
0.180 nm) que el ion potasio hidratado (rK = 0.121
nm). As, Horowitz y Miller [36] observaron que el ci-
tosol de los ovocitos no se comporta como una sim-
ple soluci
on acuosa: puede excluir los solutos. Los au-
tores mostraron que solamente 35 % del agua del ci-
toplasma tena las mismas propiedades de solvata-
cion para el sodio que el agua en bulto, lo que sig-
nifica que el sodio esta excluido de mas o menos
65 % del agua citoplasmica. Para explicar esta exclu-
sion propusieron que la mayor parte del agua esta-
ba en contacto con puentes de hidrogeno con las ma-
cromoleculas y que eso le daba propiedades estericas
particulares.
Muchos trabajos sobre el agua ligada, estructura-
da, o confinada han sido desarrollados; que han mos-
trado sus caractersticas principales: viscosidad ma-
yor que el agua en bulto, densidad (como en el ca-
so del hielo) menor que la del agua en bulto, ex-
clusi
on y particion de los iones, etc. . . fuera o den-
tro de la celula [1, 37-40].
De la llave a la celula: las facetas cambiantes del agua. M. Picquart e I. Carrasco Morales.
Si las macromoleculas pueden cambiar las propieda-
des del agua, debe de haber una relaci
on tambien en-
tre el agua que rodea las macromoleculas y la estruc-
tura y funcion de las macromoleculas y de las pro-
tenas en particular.
Relaci on hidrataci onfunci on de una protena so a los detalles de la estructura de la protena y de
Una protena posee flexibilidad y su din
amica depen-
de de su estructura ya que los movimientos son esen-
ciales para que la protena cumpla su funcion biologi-
ca en la cual el agua juega un papel importante: se
trata de actividades catalticas, inmunologicas, regu-
ladoras y de transporte que se desarrollan en un en-
torno acuoso.
La influencia del agua de hidrataci on de una pro-
tena sobre sus propiedades termodin amicas ha si-
do seguida por diversas tecnicas experimentales: mo-
vimiento de una sonda en Resonancia Electr onica
de Espn (ESR), observaci on del espectro de absor-
cion infrarroja, medicion del calor especfico, medi-
cion de la actividad enzimatica, etc. usando protena
liofilizada e hidratada poco a poco. Por ejemplo, en
el caso de la lisozima, la actividad enzim atica em-
pieza cuando la tasa de hidrataci on llega a 0.22 gra-
mo de agua por gramo de protena para ser opera-
cional al valor de 0.32, o sea una monocapa de agua,
o 300 moleculas de agua a la superficie de la pro-
tena [41]. Simulaciones por dinamica molecular han
mostrado que la adici on de moleculas de agua lleva-
ba a una dilucion de la protena sin cambiar las pro-
piedades del sistema. A baja hidrataci on, solamente
algunos peque nos c
umulos (clusters) de moleculas
de agua ligadas por puentes de hidrogeno est an pre-
sentes en le sistema. A alta hidrataci on, la protena
esta cubierta de manera homogenea, de una red de
moleculas de agua ligadas por puentes de hidrogeno.
La transicion entre estos dos estados, es una transi-
cion de percolaci
on del agua de hidrataci on [42]. Pe-
ro se ha mostrado tambien que la adicion de molecu-
las de agua en cavidades que no podan ser com-
pletamente hidratadas desestabilizaba la estructu-
ra de la protena induciendo un desplegamiento de
la misma.
Para estudiar la estructura y la din amica del agua
cerca de protenas globulares solubles se puede usar
la difraccion de rayos X o de neutrones cuando esta
u
ltima es accesible ya que la longitud de onda de es-
tas radiaciones es del orden de la distancia inter-
at
omica. Pero estas dos tecnicas son complementa-
rias: la primera no ve los
atomos ligeros de hidrogeno
o de deuterio y la segunda s. Esto permitio determi-
11
nar la estructura de un cristal de carboximioglobi-
na con las 89 moleculas de agua que est an en su su-
perficie [43]. Estas tecnicas permiten obtener infor-
maciones a diferentes escalas espaciales: a baja reso-
lucion se tiene informacion sobre el tamano de la pro-
tena mientras que a alta resoluci on se tiene acce-
las moleculas de agua.
Los neutrones presentan adem as la ventaja de es-
tudiar la din
amica de un sistema ya que la energa
de los neutrones termicos es del orden de magni-
tud de la energa de agitacion termica de los siste-
mas moleculares.
La c-ficocianina es una protena globular soluble cu-
ya estructura fue determinada con una muy bue-
na resolucion por difraccion de rayos X [44]. Su
estructura secundaria contiene 83 % de helices al-
fa. Se encuentra en abundancia en las cianobacte-
rias en donde est a implicada en la fotosntesis, en la
cual la energa luminosa colectada por los cromofo-
ros es convertida en energa qumica. En una pro-
tena, 50 % de los atomos, son atomos de hidrogeno
por lo tanto es necesario poder separar los efectos de-
bidos a los atomos de hidrogeno de la protena y a
los del agua. Para esto se hacen crecer las ciano-
bacterias en agua pesada (D2 O) lo que hace que en
las cianobacterias no queden mas que el 1 % de ato-
mos de hidrogeno y de esta se extrae la c-ficocianina
deuteriada.
Cuando se hidrata esta u ltima con proporciones va-
riables de agua ligera, se puede seguir por difusion
inelastica de neutrones la dinamica del agua en la su-
perficie de la protena. A tiempos cortos, del orden de
los picosegundos, las moleculas de agua poseen movi-
mientos de difusion limitados a saltos sobre sitios ad-
yacentes a lo largo de la interfase. En el agua en bul-
to esta difusion se hace por saltos aleatorios y cua-
tro veces mas rapido. La comparacion de las propie-
dades din amicas del agua en bulto y las del agua in-
terfacial ha mostrado que est au
ltima a temperatu-
ra ambiente se comportaba como agua superenfria-
da (agua lquida debajo del punto de cristalizaci on)
a baja temperatura. El agua interfacial a 25o C se pa-
rece al agua s uper enfriada a 0o C [44].
Las interacciones entre el agua y una protena son
de dos tipos: hidrofobas cerca de los residuos apo-
lares, hidrofilas cerca de los residuos cargados y po-
lares. Esto conduce a una representaci on muy sen-
cilla de una protena globular en termino de un co-
razon hidrofobo y una superficie discontinua hidrofi-
12
la. Para separar las contribuciones hidrofobas de las
contribuciones hidrofilas se pueden estudiar sistemas
modelos. Varios autores han usados sistemas diferen-
tes. Por ejemplo, un vidrio poroso de slice, el Vycor,
que posee grupos cargados en la superficie, presenta
interacciones hidrofilas con el agua. Es un buen sis-
tema modelo ya que se puede controlar la tasa de hi-
dratacion de los poros. En condiciones de monocapa
de agua, los resultados de din amica molecular mues-
tran una similitud muy grande con la c-ficocianina
[44]. Adem as, la estructura del agua interfacial es-
tudiada por difraccion de neutrones a temperatu-
ra ambiente, es muy cercana a la del agua super-
enfriada a baja temperatura y el resultado mas es-
pectacular es que no se observa ninguna cristaliza-
cion del agua entre la temperatura ambiente y la del
nitrogeno lquido (-176o C). Por otra parte se ha des-
crito que la estructura del agua superenfriada es se-
mejante a la del hielo amorfo.
En un trabajo reciente, Gabel y Bellissent-Funel [45]
han mostrado que en el caso de la c-ficocianina con
trehalosa la movilidad del agua de hidrataci on es
reducida, de una orden de magnitud con respecto al
agua en bulto.
La parvalb umina que se extrae de los vertebrados su-
periores es una protena globular soluble que inter-
viene en el ciclo de contracci on relajacion de los te-
jidos musculares. Su afinidad diferente para los io-
nes calcio y magnesio permite regular la concentra-
cion relativa de estos dos iones en el medio celu-
lar. Su estructura ha sido determinada por difrac-
cion de rayos X. Se caracteriza por la presencia de
helices alfa y de iones calcio y magnesio. Se ha es-
tudiado la influencia del agua de hidrataci on sobre
los movimientos internos de la protena, hidratan-
do poco a poco el polvo de parvalbumina hidrogena-
da con agua pesada. A tiempos de observaci on de pi-
cosegundos, por difusion inelastica de neutrones se
ha detectado y observado el crecimiento de la movi-
lidad de ciertos residuos cargados de superficie, muy
hidrofilos, de la protena: lisina,
acido asp
artico y aci-
do glutamnico a partir de una cantidad de agua co-
rrespondiente a una monocapa para la cual la pro-
tena se vuelve funcional. Los resultados de RMN
del carbono 13 han permitido asociar a los movi-
mientos de las cadenas laterales, el de la cadena car-
bonada polipeptdica, ya que el tiempo de observa-
cion en este caso es del orden del nanosegundo [46].
ContactoS 69, 515 (2008)
Conclusi on
Numerosos progresos han sido realizados en el cono-
cimiento del agua interfacial y de su papel en la fun-
cion de las macromoleculas biol
ogicas. Si el agua jue-
ga un papel fundamental en la estabilidad y la fun-
cion de las protenas globulares, la protena misma
ejerce una influencia importante sobre la estructu-
ra y dinamica del agua cercana. Los dos efectos estan
estrechamente ligados. Los movimientos mas lentos
del agua de hidrataci on en la superficie de una pro-
tena parecen una condici on necesaria para que una
macromolecula biol ogica pueda cumplir plenamen-
te su funcion.
La celula es un medio altamente heterogeneo que
contiene numerosas especies qumicas en cantidades
numerables de ejemplares, pero cada uno de ellos
puede tener una orientaci on y una vecindad tan di-
ferente que pueden reaccionar de manera diferente y
parece difcil hacer cualquier predicci
on de naturale-
za estadstica. Se estima que una bacteria como Es-
cherichia coli contiene solamente una centena de pro-
tones alejados los unos de los otros por varias cente-
nas de nan ometros y por lo tanto no pueden ser res-
ponsable de un gradiente de concentracion. La mis-
ma cosa es para los iones de calcio cuya concentra-
cion celular se estima a 103 M pero con solamen-
te 108 M a 106 M libres es decir no acompleja-
dos por macromoleculas pero solvatados. Si se con-
sidera a esta bacteria como paralelepipedica (de vo-
lumen V = 2 1 1 m3 = 2 1015 L), una
concentracion de 106 M corresponde a un n ume-
ro de moleculas de calcio n = Na 106 V , sea
n = 6 1023 106 2 1015 = 1200 moleculas. Si
se supone cada molecula al centro de un cubo de la-
do a, la distancia entre dos moleculas es aproxima-
damente la raiz c ubica de V /n, sea a = 0.1m. Pa-
ra una concentracion de 108 M se encuentran 12
moleculas separadas de 0.6m. Para una celula su-
puestamente esferica se encuentra los mismos orde-
nes de magnitud. Como imaginar que una decena o
unos miles de iones, separados por numerosas macro-
moleculas puedan determinar un gradiente de con-
centracion a estas distancias?
Esta heterogeneidad de la celula repercute a su vez
sobre el agua en contacto con estas moleculas. En la
celula, existiran al menos los cuatro tipos de agua
descritos anteriormente: el agua de solvataci on so-
bre los grupos i onicos, el agua ligada por puentes de
hidrogeno a grupos polares de residuos hidrofilos o
a nubes de electrones rodeando n ucleos arom
aticos
y el agua en clatratos alrededor de residuos hidrofo-
De la llave a la celula: las facetas cambiantes del agua. M. Picquart e I. Carrasco Morales.
bos (Fig. 5). En estas condiciones el agua ya no sera
un solvente sino una interfase [1].
Figura 5. Macromolecula con los diferentes tipos de agua
que se pueden encontrar: A. Solvataci on; B. Puentes de
hidr
ogeno cerca de residuos donadores de hidr ogeno; C.
Puentes de hidr ogeno cerca de residuos aceptadores de
hidr
ogeno; D. Puentes de hidr ogeno con nubes de elec-
trones ; E. Clatratos en regiones hidrofobas.
Para concluir, citare P. Mentre [1]: Los grandes des-
cubrimientos de la bioqumica fueron hechos in vitro
en las condiciones de aplicaci on de la ley de accion
de masa, a diluciones muchas mas debiles que las
que existen en las celulas. Sus extraordinarias con-
secuencias en la comprension de la vida de la celu-
la, hicieron olvidar a los investigadores durante dece-
nas de a nos que las macromoleculas en la celula for-
man un mundo incomparablemente mas denso y he-
terogeneo que en el tubo de ensayo. Se producen in-
teracciones potentes, de naturaleza fsica, que dan
un nuevo enfoque a los fenomenos.
Estos fenomenos necesitan de un estudio multidisci-
plinario y espero que este artculo contribuya a lle-
varlo a cabo.
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