Universidad Autnoma de Zacatecas

Francisco Garca Salinas Siglo XXI rea de Ciencias de la Salud. Unidad Acadmica de
Ciencias Qumicas. Programa Acadmico: Q.F.B. Laboratorio de Inmunologa diagnostica
7A martes 13:00-16:00 horas. Reporte de Prctica Determinacion de Anticuerpos IgG
Helicobacter Pylori 28/Marzo/17 Segunda Parte Docente: Hugo Apolonio Sandoval Garca.
Equipo No. __ Mayorga Crdova Jonathan Jess, Prez Arechiga Kevin Alexis, Snchez
Berumen Daniel, Mercado Vargas Jos Luis. Zacatecas Zac., Semestre Enero-Junio

Resumen:
En esta prctica se determin la presencia de anticuerpos IgG contra Helicobacter
Pylori en una muestra sangunea por un mtodo Inmunoenzimatico(ELISA) en
varios de nuestros compaeros

Introduccin En cuanto a la forma de transmisin

actualmente no se conoce con
El Helicobacter pylori es una bacteria
certeza aunque se supone pudiera
gram negativa del gnero
ser de persona a persona y a travs
Campylobacter que coloniza la
de la va respiratoria o por va fecal /
mucosa gstrica, siendo ms
oral como lo indicaran algunos
frecuente con la edad. Es el agente
estudios.
etiolgico de gastritis idioptica tipo
Incluso en algunos de ellos se habra
B, tiene alta prevalencia en lcera
puesto de manifiesto el fenmeno de
pptica y dispepsia no ulcerosa.
transmisin dentro del grupo familiar.
Tambin se la relaciona con
Existiran varios mecanismos
carcinoma gstrico.
patognicos que explicaran el
Desde el punto de vista
fenmeno de relacin entre la
epidemiolgico se ha observado una
infeccin por el germen y la aparicin
mayor prevalencia de infeccin en
de la lcera pptica:
individuos de edad avanzada,
Todos estos factores coadyuvan en el
pudiendo sealarse que en mayores
desarrollo de la enfermedad ulcerosa,
de 60 aos aproximadamente el 50%
adems el incremento de los niveles
presenta colonizacin. Sin embargo,
de gastrina as como el aumento del
la prevalencia se hallara
pico de secrecin cida observada en
condicionada tambin por otros
los pacientes portadores de
factores adems de la edad, as el
Helicobacter pylori podran jugar un
factor socioeconmico, como le
rol de importancia en los pacientes
demuestra el hecho de una mayor
que padecen de lcera duodenal.
prevalencia y una ms temprana
Si bien con la erradicacin del
colonizacin por el germen en pases
microorganismo disminuye la
no desarrollados con relacin a
concentracin de gastrina srica, esto
aquellos industrializados.
no se traducira en una disminucin
del pico de secrecin cida que
permanecera elevado.
Este fenmeno sera debido a que tal
vez una hipergastrinemia
persistentemente elevada producira
un incremento en la masa de clulas
parietales; que por otra parte es
caracterstico en los pacientes con
lcera duodenal.
El fenmeno de hipergastrinemia
tendra su explicacin a travs del
hipottico mecanismo de gastrin-link
que consistira en que el sector de la
mucosa gstrica colonizada por el
Helicobacter pylori existira una
mayor alcalinidad debido a la
produccin de amonio, lo que
generara a un nivel local un falso
mensaje que el organismo
interpretara como una falta de
secrecin, estimulando a las clulas
productoras de gastrina a una mayor
liberacin de hormona.
Se ha observado en pacientes
colonizados por Helicobacter pylori
signos de gastritis crnica que
comprometeran fundamentalmente la
regin del antro pudiendo extenderse
incluso hacia el cuerpo gstrico en
individuos de edad avanzada.
En este aspecto algunos autores
consideran la existencia de dos
formas de gastritis crnicas:
1) Tipo A: que se localizara
fundamentalmente a nivel del cuerpo
gstrico y suele acompaar a la
anemia perniciosa. Esta respondera
en su gnesis a mecanismos
autoinmunes.
2) Tipo B de localizacin antral
(antritis), que suele asociarse a lcera
duodenal y presentara una fuerte
asociacin con la infeccin con
Helicobacter pylori. Existen diversos
mtodos para el diagnstico de la
infeccin por Helicobacter pilory.
Estos podran agruparse en mtodos
invasivos y no invasivos. Dentro de
los primeros a su vez se cuenta a
aquellos que se pueden denominar
directos, tales como la observacin
directa y cultivo y aquellos indirectos,
como el test de la ureasa. Los
mtodos no invasivos comprenderan
el test del aliento y a las pruebas
serolgicas.
Una vez obtenida una muestra de
mucosa gstrica por biopsia
endoscpica se procede de diversas
formas.
La observacin directa con y sin
tincin luego el cultivo en un medio
microaerofilo enriquecido con sangre
de carnero y con el agregado de
antibiticos, (para evitar el desarrollo
de flora coexistente) a 37 C,
permitira el aislamiento del germen.
El test de la urea (inclusin de la
muestra en una solucin rica en urea)
evidenciara la presencia del
Helicobacter pilory a travs de un
aumento de pH y un cambio en la
coloracin de la mencionada solucin
por accin de la ureasa producida por
el agente infeccioso.
El test del aliento consiste en el
empleo de una solucin de urea
marcada con C 13 o C14 que se
administrara al paciente por va oral
a fin de que si existiera colonizacin
de la mucosa gstrica por el
microorganismo la ureasa producida
por ste desdoblar la urea y liberar
CO2 marcado a travs del aliento el
CO2 marcado sera medido a travs
de un espectrmetro de masa
poniendo de manifiesto la presencia
de la infeccin. estas tcnicas son de tediosa
En este momento est aclarado el implementacin y su sensibilidad y
hecho que el Helicobacter pilory es el especificidad no han sido an
principal agente etiolgico de gastritis demostradas.
tipo B (gastritis crnica activa antral).
El diagnstico de sta generalmente
est basado en un gran nmero de Objetivo
datos: la historia clnica, hallazgos
Identificar la presencia de anticuerpos
radiolgicos, endoscpicos y anlisis
IgG contra H. pylori en muestras
de laboratorio (el cultivo, observacin
serolgicas por medio de ELISA
directa y test de la ureasa.). Todas
Material y Reactivos

Materiales
Micropozos recubiertos antgeno H. 12x8x1
Pylori
Diluyente de la muestra: 1 22 ml
Frasco(listo para usar)
Calibrador. 1 vial(listo para usar) 1 ml
Control positivo 1 vial(listo para usar) 1 ml
Control negativo. 1 vial(listo para 1 ml
usar)
Conjugado enzimtico. 1 Frasco(listo 12 ml
para usar)
Sustrato TMB. 1 Frasco(listo para 12 ml
usar)
Solucion de frenado. 1 Frasco(listo 12 ml
para usar)
Concentrado de Lavado 20x. 1 25 ml
Frasco(listo para usar)
Micropipeta y puntas
Metodo

Cortar numero de Lavar 3 tiempos Dispense 100l de

pozos a utilizar con 300l de solucion TMB 10 min
solucion de lavado

Prepara diluciones Incubar 20 min a

Dispense 100l
de la muestra temperatura
solucion de frenado
1:20 ambiente

Colocar 100l de
suero diluido, Dispense 100l de
Leer a 450 nm
calibrador y controles enzima conjugada
en pozos designados

Incubar 20 min a Lavar 3 tiempos

temperatura con 300l de
ambiente solucion de lavado

Resultados

OD Calibrad CF Punto de ndice

or OD corte anticuerpo
control 0.267 0.152 0.4 0.0608 4.39144736
positivo 8
controlneg 0.309 0.152 0.4 0.0608 5.08223684
ativo 2
Muestra 4 0.15 0.152 0.4 0.0608 2.46710526
3
Muestra 5 0.13 0.152 0.4 0.0608 2.13815789
5
Muestra 6 0.144 0.152 0.4 0.0608 2.36842105
3
Muestra 7 0.365 0.152 0.4 0.0608 6.00328947
4
Muestra 8 0.148 0.152 0.4 0.0608 2.43421052
6

ndice < 0.9

anticuerpo negativo OD
Indice anticuerpo=
0.9- 1.1 Punto de corte
dudoso
>1.1
positivo
 Punto de corte=( OD calibrador )( CF )

Muestra Nombre
4 Edad
Muestra Nombre
5 Edad
Muestra Nombre
6 Edad
Muestra Nombre
7 Edad
Muestra8 Nombre
Edad

c o n tro l +
c o n tro l -
c a l ib r a d o
r
M u e stra
4
M u e stra
5
M u e stra
6
M u e stra
7
m u e s tra
8

Discusin
En los resultados obtenidos se puede
observar una incongruencia esto tal
vez se debe a el equipo de lectura
pues en el momento de realizar dicha
operacin este mostraba algunas
anomalas e irregularidades al
momento de imprimir los resultados
Conclusin
Se determin la presencia de
anticuerpos IgG contra H. Pylori en
muestras de algunos de nuestros
compaeros por medio de ELISA
Referencias
Jorge Saurdias, Celso Cruz, Ariel
Colina, Laboratorio Clinico, Editorial
Ciencias Medicas
http://www.infobioquimica.com/wrapp
er/CDInterpretacion/te/bc/214.htm