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MANUAL DE PRCTICAS

LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR

ELABORARON: FIRMA: FECHA: 30 de enero de 2017.


M.C. Amanda Dvila Lezama
M.C. M.C. Marisela Martnez Gamboa
M.A.I.A. Marnie Gonzlez Estvez

REVIS: Dra. Paris Mier Maldonado FIRMA: FECHA

AUTORIZ: Dra. Vernica Gonzlez Torres FIRMA: FECHA

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NDICE

INTRODUCCIN 3

OBJETIVO GENERAL 3

REGLAMENTO GENERAL DE LOS LABORATORIOS 4

REGLAMENTO DEL LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR 6

GUA DE ELABORACIN Y ENTREGA DE REPORTES DE LABORATORIO 8

PRCTICA No. 1 9
PRCTICA No. 2 16
PRCTICA No. 3 25
PRCTICA No. 4 36
PRCTICA No. 5 43
PRCTICA No. 6 50
PRCTICA No. 7 57
PRCTICA No. 8 65

ANEXOS 73
A1: EVALUACIN DEL LABORATORIO 74
A2: INFORMACIN COMPLEMETARIA PRCTICA No. 1 79
A3: INFORMACIN COMPLEMENTARIA PRCTICA No. 2 81
A4: INFORMACIN COMPLEMENTARIA PRCTICA No. 4 y 6 82
A5: INFORMACIN COMPLEMETARIA PRCTICA No. 6 y 7 86
A6: INFORMACIN COMPLEMETARIA PRCTICA No. 8 89

2
INTRODUCCIN

El presente Manual de Laboratorio de Biologa celular rene las prcticas a desarrollar en


las sesiones de laboratorio de la asignatura, recopila la informacin necesaria para su realizacin
e indica los pasos principales de la experimentacin, de tal manera que los estudiantes cuentan
con la herramienta terica bsica para la realizacin exitosa de las prcticas.

Este material de apoyo didctico ha sido diseado para servir de apoyo tanto para los
alumnos como para los instructores, el proceso de experimentacin en un laboratorio escolar es
fundamental para relacionar y aplicar los conocimientos adquiridos en clase y reforzar el proceso
de enseanza aprendizaje, sin importar la orientacin cientfica por la que se inclinen los
alumnos.

Para que el alumno desarrolle las capacidades de resolucin de problemas es necesario


proporcionarle un ambiente donde tenga la oportunidad de encontrarse con casos y/o situaciones
que lo motiven a experimentar. El proceso constante de integracin de informacin requiere
apoyarse en la construccin de ideas, y es ah donde las actividades experimentales propician la
reorganizacin y clarificacin de conocimientos que facilitan alcanzar un aprendizaje significativo.

As pues, el seguimiento y la aplicacin del mtodo cientfico en un proceso de


experimentacin culmina con encontrar una respuesta a cuestionamientos que surgen en base
a sucesos reales; los objetivos del laboratorio de Biologa celular, es extrapolar a casos reales
problemticas revisadas en teora, donde el alumno podr sugerir posibles soluciones en base a
datos arrojados por un proceso de experimentacin desarrollado por el mismo.

OBJETIVO GENERAL

El objetivo general que persigue el presente Manual de Laboratorio como herramienta de


trabajo es que el alumno tenga a su alcance la informacin necesaria referente a la
reglamentacin del uso y permanencia de laboratorio, as como la temtica de cada una de las
prcticas permitiendo as avanzar favorablemente en la prctica.
Las ilustraciones y ejemplos que contienen las prcticas aqu propuestas respaldan y
demuestran los resultados de las sesiones, de sta manera, el alumno podr apoyarse en las
mismas para elaborar un informe de laboratorio completo y al nivel de trabajo que la materia y la
sesin prctica exija.

3
REGLAMENTO GENERAL DE LABORATORIOS

Este reglamento es de observancia obligatoria para cualquier persona que ingrese o visite los
laboratorios de la Escuela de Ciencias de la Salud (ECISALUD).

1. Usar bata blanca de laboratorio con manga larga, abotonada, traje quirrgico
correspondiente, zapato blanco cerrado, cabello recogido.
2. Portar credencial de identificacin visible mientras permanezca dentro del laboratorio. Los
alumnos de primer semestre la portarn hasta que el Centro las proporcione.
3. Esperar afuera del laboratorio hasta que el docente indique la entrada para iniciar sesin.
4. Prohibido: introducir alimentos y/o bebidas, fumar, gritar, correr, jugar, sentarse en las
mesas de trabajo, usar joyera y/o alhajas grandes que pudieran ocasionar accidentes,
lesin o interferencia en el trabajo, usar celulares o sistemas de comunicacin mvil.
5. Mantener sus pertenencias fuera del rea de trabajo o en los espacios asignados por el
docente de laboratorio.
6. Lavarse las manos antes y despus de trabajar en cada sesin.
7. No se podrn realizar prcticas sin la supervisin de un responsable del laboratorio.
8. Mantener limpia, ordenada y/o saneada su rea de trabajo, antes y despus de realizar
la actividad.
9. Usar equipo de proteccin personal (guantes de ltex, lentes de seguridad, mascarilla,
etc.) durante la permanencia dentro del laboratorio, de acuerdo a la actividad a realizar.
10. No distraer a sus compaeros durante la manipulacin de material, equipo y sustancias
qumicas.
11. No presentarse bajo el influjo de bebidas alcohlicas o cualquier otra droga.
12. Respetar horarios de actividades y en caso de no terminar la actividad en su horario,
solicitar acceso al responsable.
13. No mover, sustraer, manipular o hacer uso indebido de equipo sin autorizacin, as como
sistemas de cmputo y/o transmisin de datos.
14. Reportar incidentes o accidentes por leve que sean con o sin lesin, condiciones
inseguras y equipo daado al docente de laboratorio o al responsable del laboratorio.
15. No trate de atender un accidente o contingencia para lo cual no ha sido capacitado.
16. En simulacros o contingencias obedecer las disposiciones de seguridad indicadas por el
docente, coordinador o responsable del evento.
17. Disponer los residuos generados en la prctica en los contenedores correspondientes
bajo supervisin del tcnico acadmico, docente, responsable del laboratorio o por
personal capacitado para ello. Es responsabilidad del docente de laboratorio proporcionar
la informacin pertinente para la correcta disposicin de los residuos.
18. Prohibido verter slidos o sustancias qumicas peligrosas en los lavabos.
19. Mantener las puertas y ventanas cerradas en caso de que la actividad a realizar as lo
requiera.
20. Prohibido visitas no autorizadas. (Los responsables del laboratorio o direccin son los
que autorizan las visitas y debern de advertir a los visitantes sobre los riesgos y medidas
de seguridad del laboratorio).

4
21. El usuario deber de contar con material de limpieza de acuerdo a las actividades
realizadas.
22. Los alumnos que tengan asignada gaveta o rea, mantenerla limpia, en buenas
condiciones y desocuparla en el tiempo establecido por ECISALUD.
23. No se podrn guardar reactivos en las gavetas, a menos que el tcnico acadmico,
docente, investigador o responsable del laboratorio tenga una gaveta exclusiva para ello.
24. Respetar las condiciones de seguridad y funcionalidad del laboratorio.
25. En caso de ruptura o dao del material o equipo de laboratorio, ste deber ser repuesto
o reparado en un lapso no mayor a 15 das.
26. El responsable de la sesin o actividad, deber anotar, las cantidades de reactivos
utilizados en las prcticas, investigaciones o servicios externos; en la bitcora de
consumo de reactivos.
27. Al terminar la sesin de laboratorio, verificar que los servicios de agua, gas, vaco, aire a
presin y/o energa elctrica no se desperdicien.
28. Prohibido introducir mascotas al laboratorio.
29. Se deber notificar al Coordinador o Responsable de laboratorio acerca de las prcticas
que requieran muestras biolgicas. En caso de ser externas, se llenar y firmar el
formato de consentimiento informado. Las muestras slo pueden ser utilizadas con fines
de docencia.
30. No se podrn tomar muestras biolgicas sin la autorizacin y supervisin de un
responsable de laboratorio.

Por lo cual, en caso de incumplimiento parcial o total a estos lineamientos, se harn acreedores
a las sanciones correspondientes indicadas en la reglamentacin universitaria o estipulada en el
contrato colectivo de trabajo segn corresponda.

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REGLAMENTO DEL LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR

Los alumnos (as) que se encuentren inscritos en el curso de Biologa celular debern tener
conocimiento del reglamento general de laboratorios de ECISALUD y el reglamento del
laboratorio de biologa celular.

1. Cumplir con los lineamientos que establecen el Reglamento General de Laboratorios de


ECISALUD.
2. El alumno deber presentarse al laboratorio de manera puntual, por ningn motivo se
permitir su ingreso despus de 10 minutos de iniciada la sesin.
3. Para su ingreso y permanencia en el laboratorio, adems de lo estipulado en el
Reglamento General de Laboratorios de ECISALUD, los alumnos deben presentarse al
laboratorio adecuadamente preparados con su manual, previa lectura de la prctica,
diagrama de la misma y marco terico en su bitcora-manual. De no cubrir estos
requisitos, no podrn efectuar la prctica.
4. El alumno y maestro debern planificar el trabajo de manera que la prctica se complete
puntualmente, y los alumnos puedan salir del laboratorio 10 minutos antes de la prxima
clase o prctica, previendo el tiempo que utilizarn para recoger, ordenar el material y
limpiar su mesa.
5. Se requiere que los alumnos aporten al inicio del semestre, ciertos materiales para el
trabajo en el laboratorio:

o Jabn antibacterial lquido (1 frasco por equipo).


o Spray desinfectante o toallas desinfectantes (Lysol o Clorox, 1 bote por equipo).
o Toallas de papel absorbente (1 rollo por equipo).
o Guantes (1 caja por equipo).
o Alcohol (1 frasco por equipo).
o Jeringas (5 por equipo).
o Torundas de algodn (1 paquete de 10, por equipo).
o Torniquetes (1 por equipo)
o Estuche de diseccin (1 por equipo, prctica 8).
o Marcador indeleble (Sharpie, 1 por equipo).
o Caja plstica para contener todo el material (1 por equipo).
o Hisopos estriles (1 caja por subgrupo).
o Escobilln grande (1 por subgrupo).
o Escobilln pequeo, para tubos de ensaye (1 por subgrupo).
o Papel de seda, Kimwipes (1 caja por subgrupo).
o Portaobjetos (1 caja por subgrupo).
o Cubreobjetos (1 caja por subgrupo).
o Gasa (1 caja de 10 por subgrupo).
o Agua destilada (1 galn por subgrupo).

NOTAS:
Los alumnos (as) que no aporten el material que les sea solicitado para
alguna de las prcticas no podrn permanecer en el laboratorio.
En caso de que el material consumible se agote, el alumno ser

6
responsable de traer nuevo material para la realizacin de su prctica.

6. Para las prcticas que involucren el uso del microscopio, queda prohibido el uso de
maquillaje de ojos.
7. Los alumnos debern limpiar con solucin desinfectante el rea de trabajo ANTES de
empezar y al TERMINAR la prctica.
8. Los alumnos se harn cargo de la limpieza e integridad del material y equipo
proporcionado por el instructor al inicio de la prctica. Antes finalizar la sesin, debern
entregar el material proporcionado por el instructor, limpio y seco. De igual manera, el
equipo deber cumplir las condiciones de limpieza.
9. Los alumnos (as) son responsables de que las llaves de agua, gas y vaco, de sus mesas
de trabajo queden debidamente cerradas al finalizar cada prctica.
10. El rea de trabajo deber estar libre de cualquier material que no sea requerido para la
realizacin de prcticas (ej. ropa, bolsas, mochilas, libros, etc.).
11. La calificacin obtenida en cada prctica de laboratorio estar basada parcialmente en
los requisitos que marca la rbrica de evaluacin de bitcora (Anexo 1), la cual precisa
los puntos a seguir para elaborar la bitcora de laboratorio completa.
12. La evaluacin del alumno en sesin de laboratorio incluye, adems de la realizacin de
la bitcora de prctica, mantener una buena conducta, demostrar destreza en el
desarrollo de los experimentos, tener una actitud de compaerismo, trabajo y respeto
basado en valores. Estos aspectos sern considerados para su evaluacin final y se
encuentran detallados en la rbrica de evaluacin (Anexo 1).

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GUA DE ELABORACIN Y ENTREGA DE BITCORA DE LABORATORIO

El manual de laboratorio tendr una doble funcin como bitcora, ya que cada prctica
contiene los espacios destinados para que el alumno vaci la informacin que se le pide a mano.

La bitcora deber ser llenada y entregada en cada sesin de laboratorio con las siguientes
caractersticas:

Para ingresar al laboratorio y tener derecho a realizar la prctica en cuestin, la


bitcora deber contar con el diagrama de flujo de los procedimientos y el marco terico
investigado por el alumno.

Marco terico.
Una extensin mnima de cuartilla y mxima de una.
Utilizar y citar referencias bibliogrficas de mnimo tres libros y un artculo cientfico y
mximo 3 pginas web con dominio .edu de universidades reconocidas por su
calidad.
Citado en prrafo y al final del texto bajo los criterios del formato APA (Manual de la
APA disponible para consulta en la pgina web de Biologa Celular CISALUD,
pestaa Laboratorio).

Resultados e interpretacin.
Realizar lo que indica la prctica para esa seccin con una descripcin detallada.

Cuestionario.
Resolver las preguntas que se les presente en su manual.

Conclusiones.
Concluir en base a los resultados obtenidos y al cumplimiento de competencias. Media
cuartilla de extensin.

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PRCTICA No. 1

MANEJO DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLGICO-INFECCIOSOS (R.P.B.I.)

TEMA TERICO AL QUE APOYA: Introduccin al curso de Biologa celular y bases qumicas
de la biologa.

COMPETENCIA: El alumno aprender la normatividad vigente para la identificacin, recoleccin


y disposicin de RPBI, as como la aplicacin de dichos procedimientos en el manejo de
residuos dentro del Centro Universitario incluyendo el laboratorio de Biologa celular.

FUNDAMENTO DE LA PRCTICA:
La Ley General del Equilibrio Ecolgico y la Proteccin al Ambiente, define como residuos
peligrosos a todos aquellos residuos que por sus caractersticas corrosivas, reactivas, explosivas,
txicas, inflamables y biolgico-infecciosas, que representan un peligro para el equilibrio
ecolgico o el ambiente (LEGEEPA, 2010).
La manipulacin de Residuos Peligrosos Biolgico Infecciosos implica un riesgo para la
salud de las personas directamente relacionadas con los residuos pero tambin puede significar
un riesgo potencial para la poblacin en general y el medio ambiente. Por tales motivos, las
personas y empresas que generan y manejan dichos residuos estn obligadas a seguir la
normatividad vigente elaborada con el fin de minimizar riesgos y eficientizar su uso y disposicin.
La normatividad para el manejo de los residuos peligrosos biolgico-infecciosos responde
a estrictas regulaciones ambientales, las cuales, es necesario actualizar tomando en
consideracin las experiencias y competencias de los sectores involucrados en su cumplimiento,
con el fin de que sus disposiciones sean operativas y adecuadas para proteger el medio ambiente
y la salud de la poblacin en general (Diario Oficial de la Federacin, 2003).
As pues, siguiendo la labor de informacin, se hizo una actualizacin de la Norma Oficial
Mexicana NOM-087-ECOL-1995, resultando la NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, publicada
en el Diario Oficial de la Federacin. (Diario Oficial de la Federacin, 2003).
Las empresas que manejan y generan R.P.B.I tiene la responsabilidad de consultar la
Norma Oficial Mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002 para reglamentar cada una de los
procedimientos que se relacionan con estos residuos, as como tener a la mano un plan de
contingencia en caso de que suceda el derrame de algn residuo considerado peligroso (Diario
Oficial de la Federacin, 2003).
Para la identificacin de las reas, recipientes, materiales o procedimientos que impliquen
un riesgo biolgico se utiliza un smbolo universal, el cual se muestra en la imagen de la derecha.

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MARCO TERICO:

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MATERIALES Y EQUIPO

Recipientes y bolsas especiales para depsito de R.P.B.I.


Herramienta didctica con imgenes de R.P.B.I. generados en el laboratorio. Diversos
materiales utilizados habitualmente en las prcticas (jeringas, tubos, gasas, torundas de
algodn, agujas de diseccin, tubos vacutainer, guantes, agujas para vacutainer, etc.)

METODOLOGA

1. El instructor explicar las condiciones de generacin, disposicin y manejo de los


residuos peligrosos biolgico infecciosos en el laboratorio.
2. El alumno identificar el rea de disposicin de los R.P.B.I. en el laboratorio.
3. Los alumnos llevarn a cabo la clasificacin de los siguientes materiales (incluyendo
basura normal):

Cmara de jeringa.
Hisopo con saliva.
Aguja.
Torunda de algodn.
Tubo vacutainer con muestra de sangre.
Gasa.
Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Cubreobjetos con muestra.
Gasa con sangre.
Empaque de la jeringa.
Algodn con sangre.
Guantes.
Cmara de jeringa con sangre.
Algodn impregnado y tirando sangre.
Hisopos.
Sangre.
Portaobjetos con muestra de eritrocitos.
Papel.
Tubos rotos.
Abatelenguas con saliva.
Guantes con sangre o fludos.
Puntas de pipeta contaminadas.
Hoja de bistur contaminada.

11
DIAGRAMA DE FLUJO:

12
RESULTADOS E INTERPRETACIN

A. Organiza tus resultados en un mapa mental tomando en cuenta la normatividad para la


identificacin, recoleccin y disposicin de R.P.B.I. Puede consultar el Anexo 2.

13
CUESTIONARIO

1. Por qu es importante el buen manejo de los R.P.B.I. dentro y fuera del laboratorio?

2. La orina y excremento se consideran R.P.B.I.?

CONCLUSIONES:
Concluye en base a la utilidad de la prctica de laboratorio y la disposicin de estos materiales
para su confinamiento.

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APLICACIN PRCTICA: El manejo de forma correcta de los R.P.B.I en cualquier laboratorio o
institucin de salud, donde el estudiante contine su formacin como futuro profesionista.

LITERATURA CITADA
1. Norma Oficial Mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, Proteccin Ambiental, Salud
Ambiental, Residuos Peligrosos Biolgico infecciosos, Clasificacin y Especificaciones de
Manejo. Diario Oficial de la Federacin, 2003. Extrada de
http://www.fcq.uach.mx/phocadownload/Academico/Material_de_Estudio/RPBI/links/NO
M_087_ECOL_SSA1_2002.pdf
2. Ley General del Equilibrio Ecolgica y Proteccin al ambiente. Diario Oficial de la
Federacin, 2010. Extrada de http://www.diputados.gob.mx/LeyesBiblio/pdf/148.pdf

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PRCTICA No. 2

USO Y MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO PTICO

TEMA TERICO AL QUE APOYA: Estructura de la clula. Diferenciacin celular.

COMPETENCIA: El alumno aprender el uso y el manejo correcto del microscopio ptico.

FUNDAMENTO DE LA PRCTICA:

El microscopio es un instrumento que permite observar objetos no perceptibles a simple vista.


Est constituido por un sistema ptico que incluye las lentes y la fuente de iluminacin, y de un
sistema mecnico que permite el soporte y la manipulacin del sistema ptico. .

Se pueden clasificar desde un punto de vista muy sencillo en: simples y compuestos. Se le da el
nombre de microscopio simple a todas aquellas lentes con montura o sin ella, de distintos
espesores y dimetros, biconvexas o planoconvexas, que nos permiten amplificar los objetos,
comnmente conocidas como lupas (consultar Anexo 3).

Un microscopio compuesto est constituido por la combinacin de dos sistemas de lentes


convergentes. Uno, prximo al ojo del observador, por lo cual se llama ocular y que acta como
microscopio simple, y otro prximo al objeto, denominado objetivo.

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MARCO TERICO:

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MATERIALES Y EQUIPO:

Microscopio ptico
Laminillas con diferentes muestras
Aceite de inmersin
Papel seda (Kimwipes)
Lquido para limpiar oculares y lentes

METODOLOGA:

1. Designar dos integrantes de cada equipo como responsables de llevar el microscopio a


su mesa de trabajo, anotarse en la bitcora de uso y esperar las indicaciones del
instructor.
2. Seguir la explicacin del instructor(a) sobre el manejo y los componentes del microscopio
ptico.
3. Observar al microscopio laminillas con diferentes tipos celulares bajo el siguiente
procedimiento:
a. Colocar la laminilla en el centro de la platina, deslizando los clips sujetadores.
b. Verificar que el objetivo que est colocado para la visualizacin sea el de menor
aumento.
c. Colocar mediante el movimiento de la platina la muestra de estudio en el centro del
microscopio.
d. Acercar la platina al objetivo hasta alcanzar una distancia aproximadamente de 2 mm,
entre el cubreobjetos y el objetivo, mediante el ajuste macromtrico, y bajo la
observacin directa de la platina con los oculares.
e. Enfocar la muestra a observar, viendo a travs del ocular y usando el ajuste
micromtrico. Regule el diafragma para mejorar la iluminacin.
f. Al observar las caractersticas de la muestra con el lente objetivo de menor aumento,
cambiar el lente objetivo por el siguiente de mayor aumento. Enfocar la imagen con
el ajuste micromtrico y observar la diferencia.
g. Barrer la muestra a travs de movimientos de la platina, de arriba hacia abajo en
forma de ondas.
h. Cambiar nuevamente el objetivo hacia el de mayor aumento. Ajustar la imagen con el
ajuste micromtrico y regular el diafragma para mejor iluminacin.
i. Al llegar al objetivo de 40X y pasar al 100X es necesario que agregar una gota de
aceite de inmersin en la muestra y solo entonces colocar el objetivo mayor.
4. Elaborar dibujos de lo observado en las laminillas.

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DIAGRAMA DE FLUJO:

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RESULTADOS:

En los siguientes espacios dibuja lo observado en cada uno de los objetivos utilizados.

Laminilla 1: ______________________________

20
Laminilla 2: _______________________________

21
CUESTIONARIO:

1. Indica el nombre de cada una de las partes del microscopio:

22
2. Indica las ventajas y desventajas del uso y del manejo del microscopio ptico.

Ventajas Desventajas

3. Investiga acerca de otras tcnicas de microscopa y en base a ello responde lo siguiente:


a. Cul tcnica de microscopa te parece ms adecuada para la observacin de clulas
in vivo?

b. Cules son las ventajas de la microscopa ptica frente a la microscopa electrnica?

c. Cul es la utilidad prctica de la presente sesin de laboratorio?

23
CONCLUSIONES:
Concluye en base a tu experiencia en la sesin utilizando el microscopio ptico, acerca de su
manipulacin, enfoque y mantenimiento; as como la utilidad que tiene en el estudio de las clulas
y su comparacin con otras tcnicas de microscopa.

APLICACIN PRCTICA: El microscopio representa una de las herramientas ms tiles en el


estudio de las ciencias de la vida, la comprensin de los procesos a escala microscpica y la
elucidacin de muchos cuestionamientos relacionados con enfermedades actuales.

LITERATURA CITADA:
1. Bernis, M. 1998. Atlas de Microscopia. Mxico D.F. Segunda edicin. Editorial Fernando
Aldape Barrera. Pags. 95-107.
2. Vovides, A. 2000. Microscopia ptica: para las ciencias biolgicas. Chiapas. Universidad
de Ciencias y Artes del Estado de Chiapas. Pags. 14-19.
3. Seplveda, J. 2011. Histologa: Biologa celular y tisular. Instructivo de laboratorio. Quinta
edicin. Editorial Mc Graw-Hill. Pg. 2.

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PRCTICA No. 3

FROTIS BUCAL

TEMA TERICO AL QUE APOYA: Generalidades de la organizacin y estructura celular.

COMPETENCIA: El alumno aprender a elaborar preparaciones de muestras biolgicas que le


permitirn observar y reconocer clulas eucariotas y procariotas al microscopio, as como, sus
principales estructuras.
FUNDAMENTOS DE LA PRCTICA:
La clula es la unidad bsica funcional y estructural ms pequea que forma a los organismos
vivos. En su estado natural, son casi invisibles al microscopio convencional, una manera de
hacerlas visibles es realizar preparaciones donde se tian con colorantes orgnicos selectivos,
los cuales, se comportan como compuestos cidos o bsicos y tienen la tendencia de formar
uniones electrostticas con los radicales ionizables de los tejidos.

Las preparaciones pueden ser temporales, frescas y permanentes. Una preparacin temporal es
aquella que es utilizada en el momento de la observacin, ya que requiere que el medio de
montaje no se evapore tan rpidamente y que sea posible que el material biolgico se conserve
por un tiempo en condiciones de ser observado. Las preparaciones permanentes son aquellas
que permanecen intactas por siempre, por lo que se debe hacerse con un material especial
para que el cubreobjetos permanezca perfectamente adherido al portaobjetos durante aos y
muestra no se deteriore.

25
MARCO TERICO:

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MATERIALES, EQUIPO Y REACTIVOS:

Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Gotero.
Papel de seda (Kimwipes)
Hisopos estriles.
Abatelenguas.
Vaso de precipitados.
Azul de metileno.
Agua destilada.
Violeta de genciana.
Lugol.
Safranina.
Alcohol acetona.
Aceite de inmersin.
Microscopio ptico.

MUESTRA BIOLGICA:
Clulas de la mucosa bucal.

METODOLOGA:

CLULAS EUCARIOTAS:
1. Colocarse los guantes.
2. Tomar un portaobjetos y un cubreobjetos bien limpios y secos.
3. Para obtener la muestra, tirar del labio inferior hacia fuera y raspar de forma circular, la
parte interna del mismo con un hisopo estril.
4. Colocar la muestra en el portaobjetos frotando el hisopo en sobre el centro del mismo.
5. Depositar una gota de agua sobre la muestra, en el centro del portaobjetos.
6. Con el extremo contrario del hisopo, extender la mucosa extrada y disprsarla en la gota
de agua.
7. Teir las preparaciones agregando una gota de azul de metileno sobre la muestra.
8. Colocar el cubreobjetos cuidando de no hacer burbujas.
9. Observar al microscopio, enfocando progresivamente con los objetivos de menor a mayor
aumento.

CLULAS PROCARIOTAS:
Preparacin de la muestra:
1. Sujeta la lengua del paciente con el abatelenguas y frota con firmeza la pared
posterior de la garganta con el hisopo de algodn seco y estril (Fig. 1). NOTA:
Se debe tener cuidado de no tocar la epiglotis para no provocar el vmito en el
paciente.

27
Fig. 1. Toma de muestra de exudado farngeo.
2. Frota la muestra de manera circular en un portaobjetos limpio y seco. Deja
secar.
3. Fijar la extensin calentando suavemente a la llama del mechero en 3 series de
3 pases rpidos por la flama, cuidando de que el portaobjetos no se caliente
excesivamente.

Tincin:
1. Cubrir la muestra con colorante de Violeta de Genciana. Esperar 1 minuto.
2. Escurrir el colorante en un vaso de precipitados y sin enjuagar, cubrir con
solucin Gram de Yodo. Esperar 1 minuto.
3. Escurrir el colorante en el mismo vaso de precipitados y sin enjuagar, cubrir
con Alcohol acetona hasta decoloracin.
4. Escurrir el alcohol y sacudir para evaporar el resto del Alcohol acetona.
5. Cubrir el frotis con colorante Safranina. Esperar 1 minuto.
6. Lavar repetidas veces con agua corriente hasta que no haya restos de
colorante.
7. Secar y observar al microscopio.

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DIAGRAMA DE FLUJO:

29
RESULTADOS:

CLULAS EUCARIOTAS (Objetivo 4x) Dibujo

Descripcin

CLULAS EUCARIOTAS (Objetivo 10x) Dibujo

Descripcin

30
CLULAS EUCARIOTAS (Objetivo 40x) Dibujo

Descripcin

CLULAS EUCARIOTAS (Objetivo 100x) Dibujo

Descripcin

31
CLULAS PROCARIOTAS (Objetivo 4x) Dibujo

Descripcin

CLULAS PROCARIOTAS (Objetivo 10x) Dibujo

Descripcin

32
CLULAS PROCARIOTAS (Objetivo 40x) Dibujo

Descripcin

CLULAS PROCARIOTAS (Objetivo 100x) Dibujo

Descripcin

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CUESTIONARIO:
1. Se observa algn orgnulo citoplasmtico? Cul?

2. Por qu las clulas retienen los colorantes?

3. Cules colorantes se utilizan para teir clulas eucariotas, adems del azul de metileno?

4. Cul es la forma correcta de colocar el cubreobjetos?

CONCLUSIONES:
El alumno indicar el aprendizaje obtenido a partir de la realizacin de la prctica, as como su
comentario final al respecto de las observaciones.

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APLICACIN PRCTICA: Se utilizan tinciones especficas para observar ciertas caractersticas
celulares como la organizacin de organelos o resaltar de manera especial alguna caracterstica
o componente celular.

LITERATURA CITADA:
1. Karp, G. 2001. Biologa Celular y Molecular. ISBN: 9701016440
2. Alberts et al. 2006. Essential Cell Biology, An Introduction to the Molecular Biology of the
Cell. Garland Publishing, Inc. ISBN 0-8153-2045-0
3. Curtis, H. 2004. Biologa. Mxico D.F. Sexta edicin. Editorial Panamericana. Pags. 17-18.

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PRCTICA No. 4

FRAGILIDAD OSMTICA DEL ERITROCITO

TEMA TERICO AL QUE APOYA: Transporte a travs de membrana y smosis

COMPETENCIA: Observar y analizar el efecto de diferentes concentraciones de soluto y de los


detergentes sobre la membranas celulares, comprobando experimentalmente la fragilidad
osmtica de la membrana eritrocitaria.

FUNDAMENTOS DE LA PRCTICA:
La membrana de eritrocito es la ms sencilla de las membranas celulares. Esta consta
de una doble capa lipdica y un esqueleto proteico en su cara citoplasmtica. La morfologa del
eritrocito depende de la osmolaridad del medio en que se encuentra. En condiciones fisiolgicas
(osmolaridad de ~290 mOsm/Kg), el eritrocito tiene forma de disco bicncavo.
En sta prctica se visualizarn al microscopio los cambios morfolgicos del eritrocito en
medios hipertnico, isotnico e hipotnico.

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MARCO TERICO:

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MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS:

Jeringa.
Torniquete.
Torundas de algodn.
Alcohol etlico.
Tubo vacutainer con anticoagulante (EDTA).
Microtubos o tubos de ensaye.
Soluciones de NaCl al 1.8%, 0.9% y 0.45%
Solucin de sodio-dodecil-sulfato (SDS) al 0.1%
Agua destilada.
Pipetas semiautmaticas y puntas desechables.
Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Microscopio ptico.
Papel de seda y lquido para limpieza de lentes de microscopio.
Recipientes para R.P.B.I.

METODOLOGA:

1. Obtener sangre fresca (aprox. 3 ml) de uno de los alumnos del subgrupo, utilizando la
tcnica apropiada de venopuncin (descrita en Anexo 6 de este manual)
2 Transferir la sangre a un tubo vacutainer con EDTA o heparina.
3 Rotular los 4 tubos de ensaye de acuerdo a la solucin que van a contener (1.8%, 0.9%,
0.45% y SDS 0.1% respectivamente).
a. En el tubo # 1, colocar 1.5 ml de solucin NaCl al 0.45 %
b. En el tubo # 2, colocar 1.5 ml de solucin NaCl al 0.9 %.
c. En el tubo # 3, colocar 1.5 ml de solucin NaCl al 1.8 %.
d. En el tubo # 4, colocar 1.5 ml de solucin NaCl 0.9%, agrega 1 gota de SDS al
0.1%.
4. Aadir 1 gota de sangre a cada uno de los 4 tubos de ensaye.
5. Mezclar con cuidado.
6. Rotular 4 portaobjetos limpios de la misma forma que los tubos de ensaye.
7. Realizar 4 preparaciones temporales, colocando 1 gota de cada una de las suspensiones
obtenidas en el portaobjetos correspondiente y cubrir cuidadosamente con un
cubreobjetos.
8. Visualizar la morfologa eritrocitaria al microscopio en el objetivo 40X.

38
DIAGRAMA DE FLUJO:

39
RESULTADOS:
Describir en su bitcora la morfologa observada en cada tipo de solucin de NaCl y con el SDS.

Eritrocitos en solucin NaCl 0.45% Dibujo

Descripcin

Eritrocitos en solucin NaCl 0.9% Dibujo

Descripcin

40
Eritrocitos en solucin NaCl 1.8% Dibujo

Descripcin

Eritrocitos en solucin NaCl 0.9% + SDS 0.1% Dibujo

Descripcin

41
CUESTIONARIO:

A qu se le denomina fantasma de eritrocito?

CONCLUSIONES:
Anotar las conclusiones relativas a la fragilidad osmtica del eritrocito.

LITERATURA CITADA:
1 Karp, G. 2001. Biologa Celular y Molecular. ISBN: 9701016440
2 Alberts et al. 2006. Essential Cell Biology, An Introduction to the Molecular Biology of the Cell.
Garland Publishing, Inc. ISBN 0-8153-2045-0

42
PRCTICA No. 5

FRACCIONAMIENTO CELULAR Y TINCIN DE MITOCONDRIAS

TEMA TERICO AL QUE APOYA: Organelos Celulares y Mitocondria.

COMPETENCIA GENERAL: Los estudiantes adquirirn los conocimientos metodolgicos


bsicos del fraccionamiento celular y de la separacin diferencial de los organelos.

FUNDAMENTOS DE LA PRCTICA:

Los organelos celulares varan tanto en funcin como en forma, tamao y peso. Esto
permite, que a travs de medios fsicos, como la centrifugacin diferencial, los organelos puedan
ser separados para ser estudiados individualmente.

El fenmeno fsico que permite la separacin diferencial es el paso de elementos mviles


(en este caso los organelos) a travs de una matriz fija. La movilidad de los organelos es otorgada
en virtud de la fuerza centrfuga que los precipita hacia el fondo de un recipiente. Las partculas
de mayor densidad viajaran a velocidades ms elevadas que las de menor densidad y esto, es
lo que permite su separacin.

Los procedimientos de fraccionamiento celular son mtodos de purificacin de organelos.


En general, se fraccionan las clulas con mayor suavidad posible y la mezcla, llamada extracto
celular, se somete a fuerza centrfuga para hacerla girara en un dispositivo llamado centrifuga.
Tal fuerza separa el extracto en dos fracciones: un comprimido o pellet y un sobrenadante. El
comprimido o pellet, que contiene los materiales ms pasados y densamente compactados, se
forma en el fondo del tubo. El sobrenadante, o sea el lquido que queda encima del comprimido,
contiene las partculas ms ligeras, molculas disueltas e iones.

43
MARCO TERICO:

44
MATERIALES, EQUIPO Y REACTIVOS:

- Microcentrfuga
- Microscopio ptico
- Portaobjetos
- Cubreobjetos
- Bistur o tijeras
- Tubos para microcentrfuga
- Pipetas semiautomticas
- Vasos de precipitados
- Mortero con pistilo
- Pipetas transfer
- Hgado de pollo fresco (Responsabilidad del alumno)
- Colorante Verde Janus
- Buffer de homogeneizacin (Tris-HCl 15 mM pH 7.4, sacarosa 0.33 M y EDTA 0.025 mM)

METODOLOGA:

Tcnica de centrifugacin para fraccionamiento celular:


1. Una porcin de hgado se enjuaga con agua de la llave, se corta con el bistur o tijeras en
trozos lo ms pequeos posible y se colocan en un mortero fro con 10 ml del buffer de
homogeneizacin fro.
2. Homogeneizar el tejido con ayuda del pistilo.
3. Filtrar el homogeneizado a travs de 4 capas de gasa.
4. Centrifugar a 3800 rpm por 10 minutos, retirar el sobrenadante y preservarlo en un tubo
nuevo. Refrigerar por 5 minutos. Descartar el tubo que contiene el pellet.
5. Centrifugar el tubo refrigerado a 12200 rpm por 10 minutos.
6. Descarta el sobrenadante y se resuspende el pellet en buffer de homogeneizacin frio.
Centrifugar igual que en paso 5.
7. El pellet resultante se resuspende en aprox. 0.5 ml de buffer de homogeneizacin frio.
NOTA: Este homogeneizado se deber mantener en refrigeracin hasta finalizar la
prctica.

Tincin de mitocondrias:
1. Transferir 50l del homogeneizado del paso 7 a un microtubo nuevo y frio. Adicionar 50l
del colorante Verde de Janus. Esperar 10 minutos en refrigeracin.
2. Realizar una preparacin en fresco con una gota de la mezcla anterior y observar bajo el
objetivo seco fuerte y el de inmersin en aceite del microscopio. Identifique las
mitocondrias.

45
DIAGRAMA DE FLUJO:

46
RESULTADOS: Registro de todas las observaciones realizadas durante el proceso (tanto de
fraccionamiento como de observacin microscpica), debidamente documentadas con
fotografas.

OBJETIVO 40x Dibujo

Descripcin

OBJETIVO 100x Dibujo

Descripcin

47
CUESTIONARIO:

1. Qu otras tcnicas existen para la separacin de organelos celulares?

2. Cules son los principios de la centrifugacin diferencial o ultracentrifugacin?

3. Cules son las ventajas y las desventajas de trabajar con clulas enteras o fraccionadas?

CONCLUSIONES:
Definir los aciertos, errores y anotaciones pertinentes para una buena prctica, finalizando con
una conclusin que aporte acerca de la importancia de sta tcnica en la prctica clnica.

48
LITERATURA CITADA:

1. Callen J. 2003. Biologa celular: de las molculas a los organismos. Mxico, D.F. Segunda
edicin. Editorial Continental. Pgs. 122-125.

2. Cooper, G. 2002. La clula. Segunda edicin. Editorial Marbn. Pgs. 17-24, 81.

3. Coutio, R. y Fernandez, S. 1997. Biologa celular. Manual de laboratorio experimental. Textos


universitarios. Primera edicin. Pgs. 21-22.

4. Curtis, H. 2004. Biologa. Mxico D.F. Sexta edicin. Editorial Panamericana. Pgs. 100-112,
82.

49
PRCTICA 6

EXTRACCIN DE ADN

TEMA TERICO AL QUE APOYA: Estructura del ADN.

COMPETENCIA: El alumno al finalizar la prctica conocer el procedimiento para extraer ADN


a partir de una muestra sangunea humana.

FUNDAMENTOS DE LA PRCTICA:

El cido desoxirribonucleico (ADN) constituye el material gentico de los organismos, por


lo tanto, es el componente qumico primario de los cromosomas y el material del que los genes
estn formados.
La molcula de ADN es lineal, sin ramificaciones, forma hebras largas, y est formado
por dos cadenas de polinucletidos enrolladas alrededor del mismo eje, comnmente conocidas
como doble hlice con giro a la derecha. Cada una de estas cadenas, est formada por grupos
fosfatos que se encuentran al exterior de la molcula en contacto con el medio acuosa, a estos
grupos se unen, en C5 y C3, un azcar de cinco tomos de carbono llamado desoxirribosa.
Existen diferentes tcnicas de extraccin de ADN de las clulas, ya sean eucariotas o
procariotas, varan en algunos pasos entre s pero al finalizar la practica el producto se puede
distinguir mediante la observacin de un material precipitado. Estos resultados pueden utilizarse
en numerosas investigaciones, diagnsticos, estudios moleculares, etc. los cuales arrojan
resultados sobre ciertas regiones de inters del genoma, todo esto aunado a que conociendo la
informacin gentica de un individuo se pueden manipular muchas de sus funciones con fines
mdicos.

50
MARCO TERICO:

51
MATERIALES Y EQUIPO:

Muestra de sangre.
Microtubos.
Pipeta semiautomtica.
Puntas para pipeta.
Gradilla.
Agua destilada.
Tris-HCl 10mM y 20 mM (pH 7.6)
Isopropanol.
EDTA 1mM.
SDS 0.1% p/v.
Acetato de potasio 5M.
cido actico glacial.
Buffer TE.
Etanol absoluto.
MIcrocentrfuga.

METODOLOGA:

(Para la preparacin de reactivos consultar el Anexo 4)

Preparacin de la muestra:

1. Tomar una muestra de sangre de acuerdo a la tcnica de venopuncin (Consultar Anexo


6) y colocarla en un tubo vacutainer con EDTA como anticoagulante (tapn morado).
2. Transferir alcuotas de 300 uL de sangre completa a 2 microtubos.
3. Adicionar 900 uL de buffer de lisis de clulas rojas a cada tubo.
4. Mezclar por inversin.
5. Incubar la solucin a temperatura ambiente por 10 minutos, mezclando ocasionalmente
por inversin.
6. Centrifugar los tubos a velocidad mxima por 20 segundos a temperatura ambiente.
7. Descartar el sobrenadante hasta que queden aproximadamente 20 uL del mismo.
8. Resuspender los pellets celulares en el sobrenadante remanente. Combine el contenido de
ambos tubos en uno solo.

Extraccin de ADN:
1. Transferir la muestra a un microtubo conteniendo 600 uL de buffer de lisis celular frio.
Homogeneizar la suspensin en el homogeneizador por 30 a segundos. Nota: el SDS
se precipitar produciendo una solucin turbia. Esta precipitacin no afecta la extraccin

52
de DNA.
2. Permitir que la muestra alcance la temperatura ambiente. Adicione 200 uL de solucin
de acetato de potasio y mezcle el contenido del tubo en el vortex por 20 segundos.
3. Concentrar el complejo protena/SDS precipitado por centrifugacin a mxima
velocidad por 3 minutos a 4 C. NOTA: Un pellet de protenas debe ser visible en el
fondo del microtubo despus de la centrifugacin. De no ser as, incube el lisado por 5
minutos en hielo y repita la centrifugacin.
4. Transfiera el sobrenadante a un microtubo que contenga 600 uL de isopropanol.
Mezclar la solucin y recupera el precipitado de DNA por centrifugacin a mxima
velocidad por 1 minuto a temperatura ambiente.
5. Retirar el sobrenadante por aspiracin y adicionar 600uL de etanol al 70%. Mezclar por
inversin. Centrifugar a mxima velocidad por 1 minuto a temperatura ambiente.
6. Retirar el sobrenadante cuidadosamente por aspiracin y permita secar el pellet de DNA
por 15 minutos.
7. Disuelva el pellet de DNA en 100uL de buffer TE (pH 7.6). NOTA: La solubilizacion del
pellet de DNA genmico puede ser facilitado por la incubacin de la muestra por 16
horas a temperatura ambiente o 1 hora a 65 C.

53
DIAGRAMA DE FLUJO:

54
RESULTADOS:

Anota tus observaciones de toda la prctica.


Cul era la apariencia del ADN?
En qu momento se empez a observar la formacin de ADN?

OBSERVACIONES

CUESTIONARIO:
Explique la importancia de la extraccin y purificacin de DNA en la investigacin biomdica y
prctica clnica.

55
CONCLUSIONES:
Enriquece y finaliza tus observaciones concluyendo acerca del proceso de extraccin y el
resultado esperado.

APLICACIN PRCTICA: La extraccin de ADN hoy en da es una tcnica molecular utilizada


ampliamente con el fin de conocer ciertas caractersticas de la informacin gentica,
parentescos, secuencias de inters, mutaciones, silenciamiento de genes, etc. En algunas
ocasiones para investigacin molecular y en otras para diagnstico de predisposicin a
enfermedades hereditarias.

LITERATURA CITADA:
1. Karp, G. 2001. Biologa Celular y Molecular. ISBN: 9701016440
2. Alberts et al. 2006. Essential Cell Biology, An
3. Introduction to the Molecular Biology of the Cell. Garland Publishing, Inc. ISBN: 0-8153-
2045-0W.
4. Kulg et al. Conceptos de gentica. Ed. Prentice Hall. 5 ed. Madrid 1999. pp. 43-45.
5. Curtis, H. 2004. Biologa. Mxico D.F. Sexta edicin. Editorial Panamericana. Pp 249-261.

56
PRCTICA No. 7

ELECTROFORESIS DEL ADN

TEMA TERICO AL QUE APOYA: Estructura del ADN.

COMPETENCIA: El alumno al finalizar la prctica conocer el procedimiento para realizar un gel


de agarosa y separar los fragmentos de ADN de su muestra.

FUNDAMENTOS DE LA PRCTICA:

La concentracin e integridad del ADN extrado, as como el tamao de distintos


fragmentos de ADN (por ejemplo, productos de PCR) pueden ser verificadas mediante
electroforesis en geles de agarosa o poliacrilamida. La electroforesis consiste en la separacin
de molculas (protenas, isoenzimas, cidos nucleicos) a travs de una matriz tamponada
(agarosa, acrilamida, almidn). La matriz funciona como un filtro, separando las molculas en un
campo elctrico, de acuerdo al tamao y la carga neta que poseen. En el caso de los cidos
nucleicos, el grupo fosfato es el responsable por la fuerte carga negativa en condiciones de pH
neutro, haciendo que los fragmentos migren hacia el polo positivo (nodo) durante la
electroforesis (Posso y Ghneim 2008).

La resolucin y velocidad de separacin de fragmentos de ADN por electroforesis son


reguladas a travs de la concentracin de agarosa (o acrilamida) en el gel y el voltaje aplicado
durante la electroforesis. La agarosa funciona como un filtro en el que los fragmentos de menor
tamao migran ms rpidamente hacia el nodo que aquellos de mayor tamao. Al aumentar la
concentracin de agarosa se dificulta el movimiento de los fragmentos a lo largo del gel,
permitiendo obtener una mayor resolucin en los fragmentos de menor longitud. El incremento
del voltaje aumenta proporcionalmente la velocidad de migracin de los fragmentos en el gel
(Posso y Ghneim op cit.).

Los cidos nucledos separados en geles de agarosa pueden visualizarse mediante


tincin con colorantes fluorescentes, lo cual permite evaluar su integridad y estimar su
concentracin mediante un anlisis comparativo con patrones de concentracin conocida. Los
colorantes fluorescentes actan mediante insercin entre las pares de bases que conforman el
cido nucleco. El bromuro de etidio es ampliamente utilizado para la visualizacin de ADN y
ARN. Sin embargo, ste es un reactivo altamente txico, con propiedades mutagnicas, por lo
que debe ser manejado con extremo cuidado en el laboratorio. En la actualidad existen
colorantes fluorescentes alternativos, como SYBR Safe, SYBR Gold, SYBR Green I, Vistra Green
y Syto60, desarrollados especficamente para reducir los riesgos potenciales de mutagnesis.

La tcnica para la cuantificacin de ADN consiste simplemente en la utilizacin de una


secuencia de concentraciones de solucin patrn de ADN con la que se comparan muestras de
ADN de concentracin desconocida. El clculo de las concentraciones se hace bajo la luz
ultravioleta segn la fluorescencia. Debe evitarse la exposicin prolongada a la luz ultravioleta,
incluso con mscara de proteccin. La estimacin de las concentraciones de ADN puede

57
realizarse sobre una fotografa digital del gel tomada bajo luz ultravioleta si se cuenta con un
analizador de imgenes (Posso y Ghneim op cit.).

La concentracin de agarosa y el voltaje con los que se debe trabajar depende del tamao
del segmento de ADN que se quiera visualizar. Los segmentos de gran tamao, el ADN total
(proveniente de una extraccin de ADN), deben trabajarse con concentraciones del 0.8% y a
voltajes de 60V para evitar la fragmentacin del mismo. Los segmentos de 1500pb en adelante
con geles al 1%, los segmentos de 500pb a 1500pb en geles 1,5% o 2% y los pequeos
segmentos de 100pb a 500pb (los microsatlites por ejemplo) en geles al 4% o 6%. Para estos
el voltaje puede variar de 20V a 120V de pendiendo de la velocidad a la que quiera que migre el
ADN, a voltajes elevados ms rpido corren las muestras.

La pureza de la agarosa y de la solucin tampn (TAE o TBE) puede variar segn la


finalidad del ensayo. Es posible reutilizar una solucin de agarosa para fines de una simple
visualizacin de algn producto de PCR. No se debe reutilizar cuando con se va a cuantificar
ADN ni a extraer bandas a partir del gel. Para reutilizar la solucin de agarosa se recomienda
guardar el gel en un envase con tapa, esto evita la evaporacin y la entrada de polvo. En caso
dado de que se evapore algo de la solucin se puede completar el volumen con solucin tampn
limpia.

58
MARCO TERICO:

59
MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS:

Pipetas semiautomticas.
Puntas para pipeta.
Probeta.
Matraz Erlenmeyer.
Cmara de electroforesis horizontal con peine y bandeja.
Fuente de poder.
Guantes.
Sybr Green.
Agarosa grado molecular.
Tris base
cido Brico
EDTA
Azul de bromotimol
Glicerol
SDS
Agua Destilada.

METODOLOGIA:

1. Prepara 1 L de buffer TBE 10X (Anexo 4)


2. Prepara la bandeja sellando los bordes por presin.
3. Prepara el gel de agarosa al 1% siguiendo estos pasos:
a. Pesa 1 g de agarosa.
b. Coloca la agarosa dentro de un envase de vidrio que contenga 100 mL de buffer TBE
0,5X y calienta en el microondas o en el bao de Mara hasta su completa disolucin.
c. Cuando la solucin de agarosa haya alcanzado una temperatura soportable por la mano,
agrega 5 uL de SYBR Green I.
d. Mezcla bien, agitando el recipiente en forma circular, evitando que se formen burbujas en
la solucin.
e. Sirve la solucin en la bandeja de corrida vertindola lentamente por uno de los extremos
de la bandeja y retire las burbujas que queden sobre el rea de corrida de las muestras,
con una puntilla de pipeta limpia.
f. Coloca el peine y espera a que polimerice el gel (aproximadamente 30 minutos). Una vez
polimerizado, retira el peine.
4. En un microtubo, mezcla 2 uL de buffer de carga con 10 uL de muestra de ADN. Repetir
este paso para cada muestra.
5. Deposita la muestra en cada pozo del gel de agarosa. Utilizando el primer pozo para el
marcador de peso molecular.

60
6. Una vez cargadas las muestras, coloca el gel en la cmara de electroforesis.
7. Llena el tanque de la cmara de electroforesis con buffer TBE 0,5X hasta cubrir el gel (2
a 5 mm por arriba del gel) y coloca la tapa de la cmara.
8. Conecta los electrodos de la cmara a la fuente de poder, grada el voltaje deseado y
corre las muestras.
9. Monitorea el avance del azul de bromotimol en el gel y detn el proceso cuando el
colorante haya avanzado del gel.
10. Retira el gel de la cmara y observa en el fotodocumentador Gel doc-it.

61
DIAGRAMA DE FLUJO:

62
RESULTADOS:
Anotar las observaciones de todo el procedimiento.
Observar el bandeo en el gel y anotar el nmero de bandas observadas.

CUESTIONARIO:

1. Mencionar que otros tipos de electroforesis existen y los tipos de geles que se utilizan en
ellos.

63
CONCLUSIONES:
Concluir acerca del procedimiento para la observacin y la presencia de la banda de ADN en la
electroforesis.

APLICACIN PRACTICA: La electroforesis es una tcnica analtica de separacin de


fundamento cintico basada en el movimiento o migracin de las macromolculas disueltas en
un determinado medio (solucin tampn de electroforesis), a travs de una matriz o soporte
reticulado como resultado de la accin de un campo elctrico. Gracias a esto ha dado grandes
avances a la Biotecnologa, Biologa Molecular y Bioqumica.

LITERATURA CITADA:
1. Karp, G. 2001. Biologa Celular y Molecular. ISBN: 9701016440
2. Alberts et al. 2006. Essential Cell Biology, An Introduction to the Molecular Biology of the
Cell. Garland Publishing, Inc. ISBN: 0-8153-2045-0W.
3. Kulg et al. Conceptos de gentica. Ed. Prentice Hall. 5a ed. Madrid 1999. pp. 43-45.

64
PRCTICA No. 8

ANLISIS DE CARIOTIPO

TEMA TERICO AL QUE APOYA: Cromosomas.

COMPETENCIA: El alumno tiene la capacidad de identificar y distinguir a partir de una imagen


de cromosomas metafsicos el cariotipo de un ser humano con o sin aberraciones
cromosmicas.

INTRODUCCIN:
El cariotipo humano es la imagen del arreglo de sus 46 cromosomas que se hacen visibles
durante la metafase de la mitosis. En las ltimas tres dcadas las tcnicas de tincin han
permitido resolver ambigedades de la identificacin individual de los cromosomas e identificar
dentro de ellos regiones especficas dnde se localizan los genes. El anlisis de los cromosomas
metafsicos con las tcnicas de tincin ha permitido distinguir alrededor de 2000 regiones ricas
en adeninas y timinas (A y T) que facilitan la localizacin de genes especficos (Alberts y
colaboradores, 1994). Cada cromosoma posee un estrechamiento denominado centrmero, de
gran relevancia para los movimientos de los cromosomas durante divisin celular. De acuerdo a
la posicin del centrmero los cromosomas se clasifican en telocntricos, acrocntricos,
submetacntricos y metacntricos. En organismos diploides, como nosotros, las clulas a
excepcin de las gamticas poseen un doble juego de cromosomas (cromosomas homlogos)
que se indica con los caracteres 2n, mientras que las clulas con una sola especie (clulas
haploides) con la letra n (Junqueira y Carneiro, 1997).

Las variaciones en el nmero normal de cromosomas de una especie se conocen como


aberraciones cromosmicas. Adems del nmero, pueden varan en la forma, lo que se conoce
como aberraciones estructurales. Cuando no son letales, en ocasiones pueden transmitirse a la
progenie y producir malformaciones y o enfermedades congnitas, por lo cual estudiar el cariotipo
resulta ser una actividad importante. Este tipo de anlisis suele ser utilizado para evaluar a
parejas con antecedentes de abortos espontneos o examinar infantes con rasgos inusuales o
retrasos en el desarrollo. Los anlisis de cariotipo pueden realizarse prcticamente a partir de
cualquier tejido, incluyendo lquido amnitico, sangre, mdula sea, etc (MedlinePlus).

65
MARCO TERICO:

66
MATERIALES Y EQUIPOS:

Clasificacin de los cromosomas por la posicin del centrmero (anexo).


Imagen de las bandas cromosmicas y de la clasificacin de los cromosomas segn la
posicin de su centrmero (anexo).
Idiograma con los cromosomas humanos ordenados con bandas cromosmicas distinguibles
(anexo).
Imagen de los cromosomas metafsicos desordenados de un organismo.
Tijeras (responsabilidad del alumno).
Cinta adhesiva o goma (responsabilidad del alumno).

METODOLOGA:

1. Cuente y recorte individualmente los cromosomas de la imagen del cariotipo desordenado


que se le proporciona en el Anexo 5.
2. Ordnelos por tamao.
3. Identifique, por su patrn de bandas, los pares cromosmicos. (Para averiguar de qu
cromosoma se trata, comprelos con el patrn de bandas mostrado por el idiograma en el
Anexo 5).
4. Llene la tabla I de la seccin resultados.
5. Una vez ordenados los cromosomas, sujtelos con cinta adhesiva o goma.
6. Indique en la imagen de la seccin de resultados qu cromosomas son metacntricos, cuales
submetacntricos y cuales acrocntricos.
7. Indique segn el nmero de cromosomas a qu organismo pertenece?, si ste presenta
anomalas numricas y si existe dimorfismo sexual en los cromosomas a que sexo
corresponde el grupo de cromosomas analizado.
8. Discuta los resultados obtenidos con los de otros equipos y concluya a partir de su discusin
el cuerpo de conocimientos obtenido.

67
DIAGRAMA DE FLUJO:

68
RESULTADOS:
Entregar el cariotipo organizado y clasificado segn lo requerido en la metodologa.
1. Clasificacin y conteo de los cromosomas por la posicin del centrmero y el tamao.

Por posicin del centrmero Nmero Por tamao Nmero

Total de cromosomas (Chs)


A
encontrado

Total de Ch's autosmicos B

X Y C
Total y tipo de Ch's sexuales
D

Total de Ch's acrocntricos E

Total Ch's metacntricos F

Total de Ch's submetacntricos G

69
2. Organizacin del cariotipo: Imagen obtenida del ordenamiento del grupo de cromosomas
proporcionado.

1 2 3 4 5 6

7 8 9 10 11 12

13 14 15 16 17 18

19 20 21 22 23

70
CUESTIONARIO:

1. Qu caractersticas permiten diferenciar, en general, unos cromosomas de otros?

2. Cules son las diferencias que podran encontrarse en un cariotipo de una persona
sana y en una persona con alguna enfermedad relacionada con aberraciones
cromosmicas?

3. Cules son las caractersticas cromosmicas de las personas con sndrome de


Down?

71
CONCLUSIONES:
Detallar las conclusiones a las cuales llegaron al finalizar su cariotipo. Perteneca a una
persona sana? Enferma? Hombre? Mujer?

APLICACIN PRCTICA: La organizacin de los cromosomas en un cariotipo permite identificar


ciertas anomalas cromosmicas que indican o comprueban la prevalencia de una enfermedad,
cuando se trata de un producto en gestacin en ocasiones se opta por hacer un cariotipo si se
tiene la sospecha de alguna anormalidad gentica.

LITERATURA CITADA:
1. Biologa Celular y Molecular: Conceptos y Experimentos. Gerald Karp, 7ma edicin, 2013,
editorial McGraw Hill ISBN: 978-1118-20673-7, ISBN: 978-1118-30179-1
2. Alberts B., D. Bray, K. Hopkin, A. Johnson, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts, P. Walter, 2006.
Essential Cell Biology, An Introduction to the Molecular Biology of the Cell. Garland Publishing,

72
Inc. ISBN: 0-8153-2045-0
3. MedlinePlus http://www.nlm.nih.gov

ANEXOS

73
Anexo 1
EVALUACIN.
RBRICA PARA EVALUAR BITCORA DE LABORATORIO

RUBRO 9-10 7-8 4-6 0-3

-La bitcora est escrita -La bitcora est bien - La bitcora no est -La bitcora est
a mano, en limpio y organizada, la limpieza bien organizada, la desorganizada o sucia.
organizada. y cuidado estn limpieza y cuidado
- Hay secuencia lgica ausentes en algunas de estan ausentes en la
PRESENTACIN
de la presentacin de sus partes. mayora de sus partes.
10%
cada rubro a evaluar. No hay secuencia No hay secuencia
lgica de la lgica de la
presentacin de cada presentacin de cada
rubro a evaluar. rubro a evaluar.

El marco terico El marco terico El marco terico El marco terico


contiene informacin contiene informacin contiene informacin contiene informacin
necesaria y concreta necesaria y concreta necesaria y concreta necesaria sobre el
sobre el tema. Hay sobre el tema. Hay sobre el tema. tema.
MARCO TERICO antecedentes del antecedentes del Redactada con poca Redactada de manera
20% mismo y se lleva a cabo mismo. formalidad. totalmente informal.
una justificacin para Redactada con
abordar el tema a tratar. formalidad.
Redactada con
formalidad.

La bitcora describe La bitcora describe La bitcora describe La bitcora describe


clara, correcta y concretamente los concretamente los errneamente los
concretamente los resultados. resultados. resultados.
resultados Se establece una Se sigue una secuencia
RESULTADOS E Se sigue una secuencia relacin entre lo lgica.
INTERPRETACIN lgica. observado y los
35% Se establece una resultados. Algunas
La mayora de las
relacin entre lo descripciones no
descripciones no
observado (descripcin) corresponden con los
corresponden con los
y los resultados. resultados.
resultados.

Todas las preguntas Alguna pregunta no se La mayora de las No se resolvi el


estn resueltas resolvi o est resuelta preguntas estn sin cuestionario.
CUESTIONARIO
correctamente y de incorrectamente. resolver o la respuesta Todas las preguntas
10%
manera concisa. no es congruente con lo estn resueltas
que se le pide. incorrectamente.

Define de manera clara - Define de manera - Define el cuerpo de - No define el


el cuerpo de clara el cuerpo de conocimientos obtenido. conocimiento generado
conocimientos obtenido. conocimientos obtenido. -Emerge de los -Es incongruente con
CONCLUSIN
-Emerge de manera -Emerge de manera resultados obtenidos. los resultados.
15%
indiscutible de los indiscutible de los
resultados obtenidos. resultados obtenidos.
.
-Es concisa y precisa

La bitcora contiene La bitcora contiene La bitcora contiene La bitcora contiene


REFERENCIAS
mnimo 5 referencias mnimo 4 referencias mnimo 2 referencias mnimo 1 referencia
CITADAS
bibliogrficas: 3 libros, 1 bibliogrficas: 2 bibliogrfica: 1 libro y 1 bibliogrfica: 1 artculo
5%
artculo de investigacin libros, 1 artculo de artculo de investigacin de investigacin.

74
y 1 electrnica fuente investigacin y 1 La bitcora solo
confiable. electrnica de fuente contiene citas de
confiable. paginas web.

ORTOGRAFA, No comete errores. Errores de frecuencia Errores frecuentes: 4-6 -Errores frecuentes en
GRAMTICA Y -Errores (1-5) en todo el moderada: 1-3 por por pgina. todos los rubros:
SINTAXIS reporte. pgina. Ortografa, gramtica y
5% sintaxis.

75
RBRICA DE TRABAJO EN LABORATORIO

SEGUIMIENTO Conocen la Conocen la Conocen Conocen la No conocen la


DEL METODO competencia de competencia y solamente los competencia competencia
EXPERIMENTAL la prctica y algunos pasos del pasos del pero no los ni los pasos
(10 ptos.) todos los pasos procedimiento de procedimiento de pasos del del
del la prctica a la prctica a procedimiento procedimiento
procedimiento realizar. realizar pero no de la prctica a de la prctica a
de la prctica a (7-8 ptos.) conoce la realizar realizar.
realizar competencia (3-4 ptos.) (0-2 ptos.)
(9-10 ptos.) (5-6 ptos.)

MANEJO DE Conocen los Conocen el Conocen los Conocen No conocen el


MATERIALES, nombres y funcionamiento y nombres pero no algunos material ni su
EQUIPO E funcionamiento nombre de el funcionamiento nombres y funcionamient
INSTALACIONES de todo el algunos del material y poco sobre el o as tampoco
(5 ptos.) material y el materiales y algn equipo de funcionamient el equipo de
equipo de equipo de laboratorio. o del material laboratorio.
laboratorio. laboratorio. (2 ptos.) y equipo de (0 ptos.)
(5 ptos.) (3-4 ptos.) laboratorio.
(1 pto.)

COLABORACION Promueven Promueven la Promueven Promueven No promueven


EN EQUIPO (10 notablemente mayora del algunas veces el muy poco el el trabajo
ptos.) todo el tiempo tiempo durante el trabajo trabajo colaborativo o
el trabajo desarrollo de la colaborativo o en colaborativo o en equipo
colaborativo o prctica el equipo en equipo No participa
en equipo trabajo Participa Participa poco en ninguna
Participa colaborativo o en activamente en en las etapas etapa del
activamente en equipo algunas etapas del del desarrollo desarrollo de
la realizacin de Participa desarrollo de la de la prctica. la prctica.
toda la prctica. activamente en la prctica (3-4 ptos.) (0-2 ptos.)
(9-10 ptos.) mayora de los (5-6 ptos.)
momentos de la
prctica.
(7-8 ptos.)

COMPORTAMIEN Su Su Su Su Su
TO comportamiento comportamiento comportamiento comportamien comportamien
Y va de acuerdo al va de acuerdo al va de acuerdo al to va de to no va de
ORGANIZACION reglamento del reglamento del reglamento del acuerdo al acuerdo al
DEL AREA DE laboratorio todo laboratorio la laboratorio reglamento reglamento
TRABAJO (15 el tiempo a mayora del algunas veces del laboratorio del laboratorio
ptos.) partir de que tiempo desde su desde su ingreso pocas veces en ningn
ingresa al ingreso al mismo. al mismo. desde su momento
mismo. (10-12 ptos.) (7-9 ptos.) ingreso al desde su
(13-15 ptos.) mismo. ingreso al
(4-6 ptos.) mismo.

76
(0-3 ptos.)

PRCTICA Concluyeron la N/A Concluyeron N/A No


CONCLUIDA (10 prctica. parcialmente la concluyeron la
ptos.) (10 ptos.) prctica prctica
(5 ptos.) (0 ptos.)

77
78
Anexo 2
INFORMACIN COMPLEMETARIA PRCTICA No. 1
Tabla No. 1: Identificacin y clasificacin de los R.P.B.I.

Denominacin Estado fsico Descripcin

Cultivos en caja, tubos, hisopos, medios de transporte,


Cultivos y cepas Lquido / slido
guantes, colorantes, placas, etc.

Patolgicos Slido / lquido Biopsias, lquidos orgnicos.

No anatmicos Slido Gasas, hisopos, papel, tiras reactivas, etc.

Lancetas, agujas, agujas de bolsa de sangra, capilares


Punzocortantes Slido de hematocrito, aplicadores, tubos rotos, portaobjetos,
etc.

Generacin y manejo de R.P.B.I en el laboratorio: Es importante minimizar la generacin de R.P.B.I.


identificando y segregando los materiales que NO los contengan, por ejemplo: papel de envoltura de gasa
estril, envoltura de la jeringa, protector de las agujas, etc. En el desarrollo de las actividades se deber
separar adecuadamente los materiales que son reciclables, depositndolos en los recipientes destinados
para su posterior tratamiento y recuperacin (Ejemplo: tubos de ensayo, matraces, etc.). En el manejo de
R.P.B.I. se debern utilizar los implementos de proteccin personal para su manejo e identificar los sitios
designados en el laboratorio para depositarlos. El depsito y envasado de R.P.B.I. se realizar de acuerdo
a la siguiente tabla, observando que los recipientes solo se llenarn hasta las partes de su capacidad.
Los depsitos se etiquetaran con la leyenda PELIGRO: RESIDUO PELIGROSO (SLIDO O LQUIDO)
BIOLGICO INFECCIOSO.

Depsito y Confinamiento: El rea temporal de depsito se encuentra previamente sealado en el


Laboratorio con el smbolo universal que lo identifica y todos los recipientes que contiene R.P.B.I. deben
ser colocados en estos sitios. El personal responsable del manejo de los R.P.B.I., de acuerdo a la norma
NOM-087-Ecol-2002, tambin es responsable de la recoleccin y transporte al almacn general,
almacenamiento y entrega a la empresa tratadora, registro y elaboracin de bitcoras y reportes,
disposicin y tratamiento interno y externo y capacitacin y monitoreo.

79
Tabla No.2: Envasado de R.P.B.I.

Estado
Tipo de residuos Envasado Color
fsico

Sangre Lquidos Recipientes hermticos Rojo

Cultivos y cepas de
Slidos Bolsas de polietileno Rojo
agentes infecciosos

Patolgicos Slidos Bolsas de polietileno Amarillo

Lquidos Recipientes hermticos Amarillo

Residuos no anatmicos Slidos Bolsas de polietileno Rojo

Lquidos Recipientes hermticos Rojo

Recipientes rgidos
Objetos punzocortantes Slidos Rojo
polipropileno

80
Anexo 3
INFORMACIN COMPLEMENTARIA PRCTICA No. 2

81
Anexo 4
INFORMACIN COMPLEMENTARIA PRCTICA No. 4 y 6

EXTRACCIN SANGUINEA

Cuando se extrae sangre del cuerpo y se deja reposar en un recipiente de vidrio por algunos
minutos, sta se coagula, el cual se debe a la precipitacin de una protena plasmtica llamada fibringeno,
que forma hebras de fibrina insoluble. Las clulas de la sangre son atrapadas en una red de fibrina que
gradualmente se contrae y libera un lquido llamado suero. El suero no contiene fibringeno ni algunos
factores de la coagulacin, ya que estos se han consumido durante la formacin del coagulo. El plasma a
diferencia del suero, si contiene factores de coagulacin y se obtiene si el tubo donde se recolecta la
sangre tiene un anticoagulante.

Si se requiere una pequea cantidad de sangre sta puede obtenerse por puncin capilar
(puncionando la piel del dedo o el lbulo de la oreja con un instrumento cortante), para obtenerla primero
se limpia la piel con alcohol y se deja secar. Se inserta una lanceta o aguja estril en la piel a profundidad
de 1 o 2 mm. La primera gota de sangre que sale de la herida se limpia con torunda de algodn. Las gotas
subsecuentes se recogen con un portaobjetos para frotis, o con una pipeta o con algn otro recipiente para
pruebas diversas.

Si se requiere un volumen mayor de 0.5 ml entonces se debe realizar la tcnica de ven puncin o
flebotoma. Esta tcnica consiste en la puncin de la barrera protectora exterior (piel) por va extracutnea;
con un objeto punzocortante (cnula o aguja) para la obtencin de una muestra sangunea que puede ser
perifrica, arterial o venosa. Por lo general se prefiere sangre venosa para la mayor parte de exmenes y
se procurara obtener una mayor cantidad por si fuese necesario verificar alguna prueba. La flebotoma se
puede realizar por dos mtodos diferentes: utilizando tubos al vaco (sistema Vacutainer) y utilizando aguja
y jeringa convencional. El mtodo de utilizar tubos al vaco es ms rpido, pero se prefiere utilizar aguja y
jeringa cuando se trabaja en venas pequeas y frgiles, para evitar que estas colapsen.

Comnmente se emplea una vena del brazo (fosa antecubital) ya que stas son de fcil acceso,
relativamente largas y fciles de localizar. Se utiliza un torniquete para bloquear la circulacin venosa, se
selecciona alguna vena adecuada por su calibre y prominencia y se limpia la piel con alcohol (utilizando
tcnicas de asepsia y antisepsia ya estandarizadas). Una vez que el alcohol se ha evaporado se introduce
una aguja afilada adaptada a una jeringa de tamao adecuado y estril; enseguida se tira del embolo de
la jeringa para que la sangre penetre en sta. Tan pronto como se haya obtenido una cantidad adecuada
se libera la presin ejercida sobre el brazo y se extrae la aguja. Se aplica una torunda de algodn estril
en el sitio de la puncin y se ejerce presin firme durante medio minuto para evitar escurrimiento de la
sangre en los tejidos circunvecinos. Debe quitarse la aguja de la jeringa antes de distribuir la sangre en los
tubos de ensayo (no as cuando se depositar dentro de un tubo al vaco vacutainer).

Si se requiere suero, la sangre puede ser vertida en el interior de un tubo de ensayo (esterilizado). Si
se necesita sangre total o plasma, deber utilizarse algn anticoagulante, el ms comn para la mayor
parte de anlisis es el cido etilen-diamino-tetra-actico (EDTA). El citrato de sodio al 3% tambin es un
anticoagulante. La heparina es un anticoagulante antitrombnico que se usa en pruebas donde no se desea
la eliminacin de iones calcio. Los tubos del sistema Vacutainer (figura 1) vienen con tapones de diferentes
colores que indican los anticoagulantes o aditivos que contienen:
Tapn rojo: el tubo no contiene anticoagulante y el interior del tubo es estril, la sangre coagular
y liberar suero despus de la centrifugacin. Se utiliza para analizar la qumica del suero.
Tapn rojo y gris/negro: tambin llamado tubo de separador de suero, este tubo contiene un gel

82
que separa permanentemente el suero del coagulo despus de la centrifugacin. Tambin
contiene activador de cogulos.
Tapn lavanda/prpura: este tubo contiene EDTA, se usa si se requiere sangre entera o plasma.
Tubo verde: el tubo contiene heparina, se utiliza si se requiere sangre entera o plasma.
Tapn azul cielo: el tubo contiene citrato de sodio, se utiliza si se requiere sangre entera o plasma,
comnmente se usa para determinacin de tiempo de protrombina o tiempo parcial de
tromboplastina.
Tapn gris: el tubo contiene oxalato de potasio, se utiliza si se requiere sangre entera o plasma,
comnmente se usa para la prueba de tolerancia a la glucosa.
Figura 1. Tubos Vacutainer (Imagen extrada de http://www.proveedormedico.com/pmhyl.html).

Precauciones que se debe observar en la ven puncin:


1. El operador debe inspirar confianza durante la extraccin.
2. Debe utilizarse una aguja con grosor adecuado para obtener sangre fcilmente y la cantidad
necesaria de sangre.
3. Debe utilizarse venas que se vean o palpen con facilidad.
4. El antebrazo siempre deber estar apoyado en una superficie fija.
5. Al realizar la puncin venosa, el bisel deber estar hacia arriba.

Complicaciones que se pueden presentar en la venopuncion:


1. Algunas veces se produce sincope (desvanecimiento con prdida de conocimiento repentina y por
lo general es breve y reversible), en general se presenta en algunas personas emotivas. Si el
paciente se mantiene acostado, la recuperacin espontnea es rpida.

83
Diagrama de las venas del brazo
1. En algunos pacientes con tendencia a las hemorragias, puede producirse una estribacin local de la
sangre. Aplicando una presin adecuada (torunda) sobre el lugar de puncin se evita la formacin de
hematomas.
2. Despus de una serie de punciones venosas repetidas puede producirse trombosis (Formacin de un
trombo en el interior de un vaso sanguneo). O flebitis (inflamacin de las venas).

Riesgos relacionados con la puncin venosa:


1. Sangrado excesivo
2. Desmayo o sensacin de mareo
3. Hematoma (acumulacin de sangre debajo de la piel)
4. Infeccin (un riesgo leve en cualquier momento que se presente ruptura de la piel)
5. Punciones mltiples para localizar las venas
Contraindicaciones absolutas:

1. Insercin en zonas con hematomas.


2. Insercin en zonas de infiltracin o flebitis.
3. Venas esclerosadas o trombosadas.
4. Sitios con reacciones inflamatorias.
5. Sitios con enfermedades de la piel.
6. Sitios con solucin de continuidad de la piel.
7. Sitios con proceso infeccioso.
8. Venas del cuero cabelludo.

Contraindicaciones relativas:

1. Zonas de flexin.
2. Venas muy pequeas

TCNICA DE EXTRACCIN SANGUNEA POR PUNCIN VENOSA

1. Lavarse las manos.

84
2. Preparar el equipo necesario.
3. Identificar al paciente y explicar el procedimiento, esto ayuda a reducir ansiedad.
4. Seleccionar la vena que va a puncionar, teniendo en cuenta el flujo venoso. Iniciar por la
parte distal a la proximal de la extremidad (regin cubital del brazo).
5. Si se utiliza el mtodo con jeringa, abrir el paquete, asegurar la aguja en la jeringa, soltar
el tapn de la aguja (sin retirar hasta que vaya a ser utilizado) y mover el embolo hacia
arriba y abajo.
6. El brazo deber estar extendido en una posicin donde la palma de la mano quede hacia
arriba.
7. Aplicar un torniquete adecuadamente, aproximadamente de 4 a 6 centmetros de
distancia por encima del sitio donde realizara la puncin, esto es para que las venas se
salten.
8. Poner los guantes de ltex.
9. Escoger una vena apropiada para la puncin. Con el dedo ndice, palpar el brazo hasta
encontrar la mejor vena, si no se siente una vena se puede buscar en el otro brazo.
10. Limpiar el sitio con una torunda con alcohol en un movimiento circular comenzando del
sitio de la puncin hacia afuera, o bien con un barrido, evitando pasar el algodn varias
veces por el mismo sitio.
11. Dejar que el alcohol se evapore.
12. Estabilizar la vena colocando el dedo pulgar de la mano no dominante aproximadamente
a 4 cm del sitio de puncin y jalar la piel para tensarla y evitar que la vena se mueva.
13. Insertar la aguja con el bisel hacia arriba, en un movimiento lento y suave con una
angulacin aproximada de 15 a 30 grados. No se requiere empujar mucho la vena ya que
se puede atravesar. Es conveniente mantener la aguja alineada con la vena.
14. Una vez canalizada la vena, se observar en la aguja una gotita de sangre.
15. Si se utiliza el mtodo de aguja y jeringa, mover el mbolo hacia atrs para succionar la
sangre.
16. Retirar el torniquete antes de extraer la aguja, de preferencia en cuanto empiece a llenar
los tubos, es importante no mantener el torniquete por un tiempo prolongado ya que esto
le pudiera afectar en alguno de sus resultados.
17. Retirar la aguja.
18. Colocar una torunda seca o gasa ligeramente humedecida con alcohol sobre el sitio de
puncin aplicando una presin firme, esto ayuda a disminuir el riesgo de formacin de
hematoma.
19. Colocar cinta adhesiva piel o curita redonda (si se cuenta con ella) sobre el sitio de
puncin.
20. Descartar la aguja como un R.P.B.I. (objeto punzocortante) de acuerdo a la legislacin
aplicable.
21. Retirar los guantes y depositar en la bolsa roja para R.P.B.I. no anatmicos.
22. Lavar las manos.

85
Diagrama de la tcnica de ven puncin mediante sistema vacutainer

86
Anexo 5
INFORMACIN COMPLEMETARIA PRCTICAS No. 6 y 7

A. Buffer de lisis celular:

10mM Tris-HCl (pH 8.0)


1 mM EDTA (pH 8.0)
SDS 0.1% p/v
Almacenar a temperatura ambiente, pero separe en alcuotas para enfriar en el paso 2.

B. Solucin de acetato de potasio:

60ml de acetato de potasio 5M


11.5 ml de cido actico glacial
28.5 ml de agua destilada
La solucin resultante es 3 M con respecto al potasio y 5M con respecto al acetato. Almacene a
temperatura ambiente.

C. Buffer de lisis de clulas rojas:

20 mM Tris-HCl (pH 7.6)


Almacene a temperatura ambiente.

D. TBE 10X (1 L):

1. Agrega los siguientes reactivos a 500ml de agua destilada:


2.
REACTIVO CANTIDADES

Tris base 109g

cido brico 55g

EDTA 4.65g

3. Mezcla bien, lleva a pH 8.3 para la disolucin total.


4. De ser necesario, completa el volumen con agua destilada hasta la marca de aforo.

87
E. Buffer de carga de ADN 6X:

1. Disuelve en 6.25 ml of H2O:


2. 0.025g de Xileno cianol o 0.025g de Azul de bromofenol
3. 1.25ml de 10% SDS
4. 12.5ml de glicerol
Nota: Sucrosa (40%), Ficoll (15%), o glicerol (30%) pueden ser intercambiados en la
formula.

F. Buffer TE (1L):

10 ml de Tris-HCl 1M, pH 7.5


2 ml de EDTA 0.5M, pH 8.3

Aforar con agua destilada a 1000 ml.

G. Tris-HCl 1M (500 ml):

Agregar 60.57 g de Tris base a 0.5L de agua, ajustar pH a 7.5 utilizando HCl

H. 0.5M EDTA (100 ml):


Agregar 18.6 g de EDTA en 100ml de agua, ajustar pH 8.3 utilizando NaOH

NOTAS:
El EDTA no se solubilizar hasta que alcance el pH de 8.0
Mezcle vigorosamente con agitador magntico y calor moderado.

88
Anexo 6
INFORMACIN COMPLEMETARIA PRCTICA No. 8

Clasificacin de los cromosomas para la elaboracin de un cariotipo humano

Los grupos que comprende el cariotipo humano son los siguientes:


- Cromosomas grandes
* Grupo A, (cromosomas 1, 2 y 3), meta y submetacntricos
* Grupo B, (cromosomas 4 y 5), submetacntricos
- Cromosomas medianos
* Grupo C, (cromosomas 7, 8, 9, 10, 11, 12 y adems los cromosomas X),
submetacntricos
* Grupo D, (cromosomas 13, 14 y 15) acrocntricos
- Cromosomas pequeos
* Grupo E, (cromosomas 16, 17 y 18) submetacntricos
* Grupo F, (cromosomas 19 y 20) metacntricos
* Grupo G, (cromosomas 21 y 22) acrocntricos

Patrn de bandeo

89
Idiograma

Un idiograma es la representacin esquemtica del tamao, forma y patrn de bandas de


todo el complemento cromosmico, los cromosomas se sitan alineados por el centrmero, y
con el brazo largo siempre hacia abajo. Los cromosomas sexuales X e Y se separan de sus
grupos correspondientes y se ponen juntos aparte al final del cariotipo.

Idiograma de una persona sana

90
CARIOTIPO HUMANO DESORDENADO

91
Anexo 6

92