Manual Biofarmacia 2011

LABORATORIO DE BIOFARMACIA
Universidad Autnoma del Estado de Mxico
Facultad de Qumica
Manual de Prcticas de Biofarmacia
Licenciatura de
Qumico Farmacutico Bilogo
7 Semestre
Elabor: Dra. Araceli Amaya Chvez

M en SHO. Juan Jaime Guerrero Daz del Castillo
Toluca, Mxico. Julio 2011
Fecha de Aprobacin por los Consejos Acadmico y de Gobierno de

la Facultad de Qumica: ____________________
1
Sello:
CONTENIDO:
Pgina
1. Introduccin 3
2. Objetivo general del laboratorio de biofarmacia 4
3. Reglamento del Laboratorio de Biofarmacia 4
4 Reglas de seguridad en el laboratorio 5
5 Sesiones experimentales a desarrollar 6
5.1 Validacin de un mtodo bioanalitico 6
5.2 Modelo abierto de un compartimiento: anlisis de datos 13

sanguneos despus de una administracin intravenosa.
5.3 Modelo abierto de un compartimiento: administracin con 20

proceso de absorcin, datos sanguneos.
5.4 Cintica de eliminacin de un medicamento a partir de los 25

datos de excrecin urinaria
5.5 Determinacin de la biodisponibilidad absoluta de 38

sulfadiazina administrada por va intramuscular
5.6 Determinacin de biodisponibilidad relativa 45

(bioequivalencia) en diferentes formulaciones conteniendo
acido acetilsaliclico
5.7 Cintica de disolucin 49
Bibliografa
6 Evaluacin del curso
2
7 Anexos:
8. Manejo de residuos peligrosos y biolgico infeccioso
3
1.- INTRODUCCION:
El objetivo general de este manual es reforzar y complementar los

conocimientos adquiridos en el curso terico de la unidad de aprendizaje de
Biofarmacia, para esto, la cronologa de las prcticas y su contenido se
correlacionan con la del curso terico.
La Biofarmacia se ha considerado durante los ltimos aos como una disciplina

de gran inters sanitario. Su aplicacin se dirige principalmente, hacia el
desarrollo de nuevos medicamentos, control de calidad en la produccin de
medicamentos y a la optimizacin de los tratamientos farmacolgicos. Otras
aplicaciones menos conocidas son la deteccin diagnstica de las respuestas
anmalas, el anlisis retrospectivo de errores teraputicos o tratamientos
inadecuados, y las actividades educativas encaminadas a asegurar el uso
eficaz y seguro de los medicamentos. Dentro de la investigacin farmacolgica,
la farmacocintica puede dirigirse a la resolucin de aspectos clnicos
concretos, como la deteccin de interacciones o los problemas de
biodisponibilidad, o a la definicin de parmetros tiles para el diseo de
regmenes de dosificacin individualizados.
Se contempla la validacin de mtodos analticos, que para cualquier estudio

de farmacocintica es indispensable manejarlo y aplicar las diferentes normas
vigentes para que nuestros resultados tengan mtodos utilizados
Los modelos monocompartamentales sern utilizados para representar el

cuerpo en el que se utiliza un compartimiento simple en el cual el frmaco se
distribuye uniformemente conforme a un comportamiento cintico particular.
Esto implica que el frmaco que entra al organismo desde el sitio de
administracin, es rpidamente equilibrado en los fluidos de distribucin. As el
paso de ste por el organismo puede representarse adecuadamente por un
grfico de concentracin sangunea en funcin del tiempo, ya que las muestras
sanguneas representan una solucin uniforme, se demostraran y los diferentes
parmetros farmacocinticos.
Cuando se desarrolla un nuevo medicamento (medicamento innovador o marca

lder), este es patentado y despus comercializado durante cierto tiempo solo
por el laboratorio que lo sintetizo y realizo todos los estudios necesarios para
que se llevara a cabo su aprobacin, pero cuando la patente se vence, otras
compaas pueden fabricar copias (medicamentos genricos) e igualmente
venderlo al mercado, lo cual provoca que baje el precio del producto.
Los medicamentos genricos son aquellos que contienen el mismo principio

activo en dosis y presentaciones farmacuticas similares al producto innovador
o de marca lder, pero no necesariamente contienen los excipientes. En
consecuencia pueden mostrar diferentes biodisponibilidades y actividades
farmacolgicas; en este manual se desarrollaran las prcticas de
biodisponibilidad y bioequivalencia de formulaciones de marca lder y genrica.
4
Otro parmetro fundamental en la industria farmacutica es la cintica de

disolucin, donde se determinara la cintica de liberacin del frmaco conforme
la tcnica de la Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos.
5
2. OBJETIVO DEL LABORATORIO DE BIOFARMACIA.
El alumno conocer y evaluar las distintas etapas de la farmacocintica de los

medicamentos y la manera cmo influyen sobre el organismo, adems de los
procesos de disolucin de frmacos mediante las tcnicas experimentales que
se adaptaron para este curso
3. REGLAMENTO DE LABORATOTIO DE BIOFARMACIA.
Se darn 10 minutos de tolerancia a los alumnos para entrar al

laboratorio
Toda persona que requiera entrar al laboratorio deber llevar puesta

bata limpia y abotonada, si como lentes de seguridad.
Queda prohibido salir del laboratorio sin causa justificada
Todas las actividades del laboratorio debern estar supervisadas por el

profesor.
Prohibido comer, fumar o beber en el laboratorio as como llevarse

cualquier objeto a la boca
Los residuos debern manejarse de acuerdo al programa de residuos

peligrosos y biolgico infecciosos, identificarlos y registrarlos plenamente
conforme al programa de la norma oficial
Los productos voltiles y reactivos peligrosos debern manejarse en la

campana de extraccin
Anotarse en las bitcoras de los equipos despus de utilizarlos
El tcnico laboratorista proporcionar material, reactivos y equipos solo

con la identificacin con fotografa y una lista de lo solicitado.
Al termino de su trabajo en el laboratorio este deber quedar limpio y los

equipos limpios y apagados
6
4.- REGLAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
1. Usar material y equipo de laboratorio apropiados para el trabajo : usarlos

con seguridad y responsabilidad
2. Seguir las instrucciones y no arriesgarse, en caso de duda preguntar al

profesor o tcnico responsable
3. Tener las reas limpias y ordenadas
4. Usar equipo de proteccin personal, bata de manga larga, lentes de

seguridad, zapato cerrado, cabello recogido, cubre bocas o mascarilla,
5. Prohibido comer, fumar en el laboratorio y hacer bromas en el rea de

trabajo y evitar distraer a los dems.
6. Todos los reactivos se deben considerar como peligrosos, antes de

utilizarlos siempre se deben leer las indicaciones de manejo y
cumplirlas, cumplir todas las reglas o instrucciones de seguridad, USAR
EL SENTIDO COMUN.
7. No usar fuego o parrillas con resistencia abierta cerca de solventes

inflamables.
8. Reportar todas las lesiones inmediatamente, conseguir primeros auxilios

en seguida.
7
5.1.- PRCTICA # 1
VALIDACIN DE UN MTODO BIOANALTICO
OBJETIVO: Validar un mtodo espectrofotmtrico para la determinacin de

salicilatos en orina.
HIPTESIS: El mtodo bioanaltico para la determinacin de salicilatos en

orina cumple con los parmetros de validacin.
INTRODUCCIN:
De manera especfica la validacin del mtodo puede definirse como el

proceso por el cual queda establecido, por estudios de laboratorio, que la
capacidad del mtodo satisface los requisitos para las aplicaciones analticas
deseadas, la capacidad se expresa, en este caso, en trminos de parmetros
analticos que son principios cientficos adecuados y optimizados para
propsitos prcticos de medicin cuya evaluacin tiene su fundamento en la
estadstica. La validacin generalmente incluye la evaluacin de cuatro
parmetros estadsticos bsicos (precisin, linearidad, exactitud y
especificidad), y otros complementarios (tolerancia, limite de cuantificacin,
limite de deteccin, intervalo).
LINEARIDAD: la linealidad de un sistema o mtodo analtico es su habilidad

para asegurar que los resultados analticos, los cuales pueden ser obtenidos
directamente o por medio de una transformacin matemtica bien definida, son
proporcionales a la concentracin de la sustancia dentro de un intervalo de
referencia.
INTERVALO: el intervalo de un mtodo bioanaltico est definido por las

concentraciones comprendidas entre los niveles de concentracin superior e
inferior de la sustancia, en el cual se ha demostrado que el mtodo es preciso,
exacto y lineal.
8
EXACTITUD: la exactitud de un mtodo analtico es la concordancia entre un

valor obtenido experimentalmente y el valor de referencia. Se expresa como el
por ciento de recobro obtenido del anlisis de muestras adicionando
concentraciones conocidas de una sustancia.
PRECISION: la precisin de un mtodo bioanaltico, es el grado de

concordancia entre resultados analticos individuales cuando el procedimiento
es aplicado repetidamente a diferentes muestreos en una muestra homognea.
Usualmente se expresa en trminos de desviacin estndar o del coeficiente
de variacin. La precisin es la medida del grado de reproducibilidad y/o
repetitividad del mtodo analtico bajo las condiciones normales de operacin.
a) REPETIBILIDAD: es la precisin de un mtodo bioanaltico

expresada como la concordancia entre determinaciones
independientes realizadas bajo las mismas condiciones.
b) REPRODUCIBILIDAD: es la precisin de un mtodo bioanaltico

expresada como la concordancia entre determinaciones
independientes realizadas bajo condiciones diferentes.
Debido a la introduccin de regulaciones de biodisponibilidad y bioequivalencia,

la FDA mejora sus polticas regulatorias y se introduce el trmino de mtodo
bioanaltico estableciendo la validacin del mismo como parte integral del
desarrollo. El analista deber: estar capacitado en la seleccin del tipo de
muestra biolgica requerida para proveer la informacin deseada a cerca del
frmaco o metabolitos estudiados y tener conocimiento detallado acerca de los
componentes del fluido biolgico y las interferencias que se puedan presentar
para tratar de eliminarlas a fin de que la cuantificacin del frmaco mediante el
mtodo validado sea confiable.
Para evaluar la ejecucin de la validacin del mtodo en 1991 Lang y Bolton
proporcionaron la primer estrategia global de validacin que aun se acepta. La
estrategia de validacin se compone de cuatro elementos:
9
1. CALIFICACIN DEL PERSONAL: Antes de iniciar la validacin se

efecta una pre-validacin por un analista primario. Esto provee al
analista la oportunidad de obtener experiencia prctica con el mtodo
ayudndole a identificar las condiciones crticas. En este punto se
recomienda establecer el rango optimo de la curva estndar y numero
de calibradores, as como de optimizar el esquema de extraccin y
recobro, para que los datos entren en los lmites de cuantificacin y para
ayudarle a determinar si el procedimiento de extraccin es reproducible.
2. VALIDACIN PROSPECTIVA: La validacin prospectiva consta de
cuatro ensayos analticos generados por dos analistas en dos das
diferentes. Cada ensao imita las condiciones analticas del estudio
prospectivo y las expectaciones del tiempo de corrida. Esa estrategia
ayuda al analista primario a desarrollar una rutina diaria usada durante el
estudio y anticipar problemas potenciales en el ensayo.
3. ESTUDIO PROSPECTIVO: una vez que se ha determinado por las dos
etapas anteriores que el mtodo cumple con los parmetros de
validacin, se generarn curvas estndar para determinar las
concentraciones de frmaco en las muestras cada vez que se requiera.
4. ANLISIS ESTADSTICO: el diseo estadstico permite revelar que los
datos bioanalticos obtenidos a partir del mtodo son reproducibles y
estn dentro de una rutina bsica.
Existe una amplia variedad de mtodos para la determinacin de salicilatos en

orina, siendo los colorimtricos los ms usados en la prctica. El mtodo de
Trinder, que se propone emplear en esta prctica, da un color violeta que
aparece cuando el salicilato es acomplejado por el ion Fe +3 como nitrato ferrico
Por la extensin de la estrategia, en esta prctica nicamente realizaremos
la primera etapa y slo obtendremos algunos parmetros de validacin.
10
MATERIAL Y REACTIVOS
a). MATERIAL BIOLGICO

Orina. 1 L por equipo
b). MATERIAL
Matraces volumtricos de 10 ml.
Tubos de ensayo de 16 x 150 o 13X100
Pipetas graduadas de 1, 2 y 5 ml.
Pizeta y pauelos desechables para limpieza de celdas
c). REACTIVOS
Agua destilada.
Salicilato de sodio
Reactivo de Trinder
d). EQUIPO
Espectrofotmetro VISIBLE.
Centrifuga
PREPARACIN DE LA CURVA ESTANDAR CON ORINA.
1.- Homogenice la orina y forme un pull con todos los equipos, a

continuacin repartir a cada equipo un volumen suficiente para el
desarrollo de esta practica
2.- Centrifugue la orina a 3500rpm
3.-Pesar en un matraz volumtrico de 10ml, aproximadamente 3mg de
salicilato de sodio, si el peso se excedi o falta, anote correctamente el
peso en la seccin de resultados para que sus concentraciones sean
ajustadas.
4.- Afore con orina. De esta solucin tome 5 ml y adicione 1ml de orina,
de esta solucin tomar 4ml y adicione 1 ml de orina, de esta tome 3 ml y
11
adicione 1 ml de orina, finalmente de esta ultima solucin tome 2 ml y

adicione 1ml de orina. (Este procedimiento debe ser realizado por dos
analistas diferentes, cada analista a su vez repetir dos veces el
procedimiento)
5.- Tomar un mililitro de cada muestra y adicionar 4 ml del reactivo de
Trinder
6.- espere 15 minutos
7.- empleando orina como blanco y la muestra de menor concentracin,
realizar un barrido en el espectrofotmetro para detectar la longitud de
onda de mayor absorcin y leer todas las muestras a esa longitud
(aproximadamente 525nm).
8.- RESIDUOS: los tubo que contengan reactivo de Trinder, el contenido
depositarlo en el frasco correspondiente y el resto de la orina deber ser
neutralizada con hipoclorito y desecharse en los baos.
RESULTADOS:
PESO EXACTO DEL SALICILATO DE SODIO: ______________________
1. CURVA PATRON:
Dependiendo del peso exacto del salicilato de sodio determine las
concentraciones exactas de las soluciones y antelas en los siguientes
cuadros.
12
PRIMER ANALISTA:
CONCENTRACIN ABSORBANCIA ABSORBANCIA

(g/mL) CURVA 1 CURVA 2
SEGUNDO ANALISTA:
CONCENTRACIN ABSORBANCIA ABSORBANCIA

(g/mL) CURVA 1 CURVA 2
Determinacin de la linealidad.
Empleando regresin lineal obtenga el valor de r y determine r 2.
ANALISTA CURVA r r2
1 1
1 2
2 1
2 2
Criterio de Linealidad: En mtodos espectrofotomtricos si r2 es mayor de 0.9

el mtodo es lineal.
CONCLUSIN:
_______________________________________________________________
13
Determinacin de la proporcionalidad.
Empleando regresin lineal obtenga el valor del intercepto en y
ANALISTA CURVA INTERCEPTO

1 1
1 2
2 1
2 2
Criterio: Si el intercepto no es diferente de cero el mtodo es proporcional
Realice una prueba de t de student para ver si los interceptos no son

diferentes de cero y concluya si el mtodo es o no proporcional.
CONCLUSIN:
Determinacin de la precisin:
a). Repetitividad: Empleando la concentracin media de la curva, determine
para cada analista el coeficiente de variacin (C.V.).
C.V = (DESVIACIN ESTANDAR /MEDIA) X 100
ANALISTA 1 ABSORBANCIA ANALISTA 2 ABSORBANCIA

CURVA 1 CURVA 1
CURVA 2 CURVA 2
MEDIA MEDIA
DESVIACIN DESVIACIN
ESTANDAR ESTANDAR
C.V. C.V.
Criterio: Un mtodo espectrofotomtrico se considera repetible cuando el

coeficiente de variacin es menor del 3%.
CONCLUSIN:
14
b. Reproducibilidad: Esta se realiza por dos analistas en dos das diferentes,

en este caso no es posible determinarla porque nicamente realizaremos una
sesin pero realizando un anlisis de los seis datos obtenidos en la
determinacin de la repetitividad determine el coeficiente de variacin para
establecer si no hay diferencias entre los dos analistas y el mtodo es
reproducible de analista a analista.
ENSAYO ABSORBANCIA
ANAL.1C1
ANAL.1C2
ANAL.2C1
ANAL.2C2
Media
Desv.std.
C.V.
Criterio: Un mtodo espectrofotomtrico se considera reproducible cuando el

coeficiente de variacin es menor del 3%.
CONCLUSIN:
CUESTIONARIO:
1. Con base a los parmetros de validacin mencionados en la parte

terica de esta prctica, establezca:
a. Cuales no se determinarn en esta prctica.

b. Cmo se determinan los parmetros del inciso a
15
c. Cules son los criterios para que los parmetros del inciso a sean
cumplidos por un mtodo para que este pueda ser considerado
validado.
16
5.2.- PRACTICA # 2
Titulo: Modelo abierto de un compartimiento: anlisis de datos

sanguneos despus de una administracin intravenosa.
OBJETIVO:
El alumno emplear un mtodo de simulacin in vitro para comprobar los

supuestos que constituyen el soporte de la ecuacin y parmetros
farmacocinticos procedentes de datos sanguneos de una administracin
intravenosa que se ajustan a un modelo abierto de un compartimiento .
HIPTESIS:
El muestreo del frmaco en estudio producir una curva-monofsica,

caracterstica de la administracin intravenosa cuyo anlisis permitir la
obtencin de parmetros farmacocinticos similares a las condiciones de
simulacin empleadas.
INTRODUCCIN.
El mtodo ms utilizado para la caracterizacin farmacocintica de un

medicamento consiste en representar al organismo como un sistema de
compartimientos, an cuando, frecuentemente, estos compartimientos no
tengan una realidad anatmica o fisiolgica manifiesta. Este tipo de modelo se
fundamento en varios supuestos que pueden ser simulados in vitro y que a
continuacin se detallan.
El modelo ms sencillo, es el modelo abierto de un compartimiento, el trmino

abierto indica que el frmaco sigue una direccin, es decir, entra (absorcin) y
sale (eliminacin) del cuerpo, el cual se considera como un solo
compartimiento homogneo. Es muy til en el anlisis farmacocintico de los
datos de concentracin en sangre, plasma o suero o de excrecin urinaria, de
aquellos frmacos que despus de su ingreso en la circulacin sistmica se
17
distribuyen con rapidez entre el plasma y otros fluidos y tejidos del organismo.
Un modelo monocompartimental presupone que cualquier cambio que ocurra
en el plasma refleja cuantitativamente cambios ocurridos en los niveles
tisulares del medicamento.
Un segundo criterio para utilizar un modelo monocompartimental es el de que

la eliminacin del medicamento se realiza en el organismo segn una cintica
de primer orden. La constante de proporcionalidad que relaciona velocidad y
cantidad es la constante de velocidad de eliminacin de primer orden, la cual
se expresa en unidades de tiempo recproco por ejemplo min -1, hr-1.
Si el frmaco se administra por va intravenosa, se diluye con rapidez en la

sangre circulante. De hecho, debido al bombeo del corazn, en una persona
normal estara diluido en menos de dos minutos. Desde el punto de vista de
este modelo la concentracin mxima y el equilibrio se alcanzaran en forma
instantnea.
Despus de una inyeccin intravenosa rpida de un medicamento que se

distribuye en el organismo al tiempo t y X o es la cantidad inicial de frmaco en
el organismo.
Ln X = Ln Xo Kt (1)
Donde:
Ln= logaritmo natural
X = cantidad de frmaco en el organismo al tiempo t.
Xo = cantidad inicial de frmaco en el organismo.
An cuando los datos de concentracin plasmtica y excrecin urinaria puedan

describirse representado al organismo como un modelo monocompartimental,
evidentemente el organismo no es homogneo. Normalmente, las
concentraciones de medicamento en el hgado, rin, corazn, msculo, grasa
y otros tejidos diferirn entre s y tambin de la concentracin plasmtica. Si la
unin relativa de un medicamento a los componentes de estos tejidos y fluidos
es esencialmente independiente de la concentracin de dicho medicamento, la
18
relacin entre las concentraciones de medicamentos en los distintos tejidos y

fluidos es constante. Por, consiguiente, existir una relacin constante entre la
concentracin plasmtica C y la cantidad de medicamento en el organismo.
X = VC (2)
La constante de proporcionalidad V de esta ecuacin resulta expresada en

unidades de volumen y se conoce como volumen aparente de distribucin. El
volumen aparente de distribucin de un frmaco es el volumen lquido en el
que aparentemente se disuelve. Esta constante, a pesar de su nombre, no
tiene normalmente un significado fisiolgico directo.
La relacin entre la concentracin plasmtica y la cantidad de medicamento en

el organismo tal y como se expresa en la ecuacin anterior, hace posible la
transformacin de la ecuacin 1 de una relacin de cantidad-tiempo en otra de
concentracin-tiempo, que puede expresarse como:
Ln C = Ln Co Kt (3)
La constante de velocidad de eliminacin de primer orden aparente, K, puede

calcularse a partir de la pendiente de la recta, que es igual a K. Este
parmetro a su vez nos permite obtener el tiempo de vida media que es el
tiempo necesario para que la concentracin de medicamento correspondiente a
cualquier punto de la recta disminuya la mitad de su valor y que se define
como:
t1/2 = 0.693/K
Otros parmetros farmacocinticos que son posibles estudiar a partir de un

curso temporal de las concentraciones del frmaco en el organismo son el
aclaramiento y el rea bajo la curva.
El aclaramiento o depuracin se define como el volumen de lquido del cual el

medicamento es totalmente retirado por unidad de tiempo. Matemticamente
se expresa como:
19
Cl = KVd
El rea bajo la curva se puede expresar como el cociente de la cantidad de

frmaco que llega a la circulacin sistmica (dosis D) y la depuracin corporal
total:
ABC = D/Cl
En esta prctica realizaremos un modelo in vitro que basado en los

supuestos del modelo abierto de un compartimiento por administracin
intravenosa nos permita obtener los parmetros farmacocinticos antes
mencionados y compararlos con las condiciones de simulacin empleadas.
MATERIAL:
Equipo de venoclisis uno por equipo
Matraz Kitazato de 500ml.
Mangueras de hule ltex..
Soporte universal.
Pinzas de tres dedos.
Tubos de ensayo de 13 x 10.
Gradilla.
Pipetas de varios volumenes.
Matraz aforado de 10 ml.
EQUIPO:
Equipo para recirculacin.
Espectrofotmetro.
Agitadores magnticos.
REACTIVOS:
Azul de Metileno.
METODOLOGA:
20
1. Monte el dispositivo como lo indica la figura 1. El matraz representa el

organismo.
2. Llenar el matraz con agua midiendo el volumen exacto de mismo. Este
representa el volumen de distribucin.
3. Ajuste el equipo de venoclisis aproximadamente a 40 ml/min, este
representa el aclaramiento corporal. La cubeta siempre debe de
mantener un volumen igual. La manguera adicional a la de venoclisis
permitir que el volumen excesivo de agua no genere fugas en el equipo
de infusin. Esta etapa es crtica y en ella se invierte mucho tiempo por
lo que se sugiere iniciar puntualmente la prctica. Durante el montaje del
dispositivo se puede realizar el siguiente paso.
4. Pesar aproximadamente 10 mg de azul de metileno, colocarlo en un
matraz volumtrico de 10 ml y diluirlo a 10 ml con agua. (solucin 1)
5. Conectar el equipo de venoclisis y administrar 9 ml de la solucin 1 en el
centro del matraz para que esta sea homognea. Esta representa la
dosis de frmaco (D = 9 mg)
6. Tome muestras cada 5 minutos del contenido del matraz por una hora, el
sitio de muestreo recomendado es el centro del matraz. Durante el
muestreo se puede realizar el siguiente paso.
7. Construya una curva estndar a las concentraciones de 10, 5, 2.5, 1.25
y 0.625 mcg/ml.
8. Leer las concentraciones de la curva estndar en orden ascendente a
664 nm, empleando agua como blanco.
9. Leer las muestras problemas en el espectrofotmetro a 664 nm, e
interpolarlas en la curva estndar realizar diluciones si es necesario.
10. Anote todas las lecturas y observaciones en la seccin de resultados.
11. RESIDUOS: Las soluciones de azul de metileno no tienen impacto
contamnate, por lo que se pueden desechar en un frasco ambar para
inactivar con hipoclorito de sodio.
21
FIGURA 1. Dispositivo.
A = Equipo de recirculacin
B = Equipo de venoclisis
C= Jeringa de muestreo
D = Manguera de eliminacin del frmaco conectada a la tarja
E = Agitador magntico para homogenizar el contenido del matraz
F = Parrilla con agitacin
22
RESULTADOS:
Curva patrn
CONCENTRACIN ABSORBANCIA
g/ml
1.56
3.12
6.25
12.50
25.00
50.00
r 2 = ____________
Concentraciones de los problemas:
t(mn) ABSORBANCIA CONCENT. (g/ ml) Ln

5
10
15
20
25
23
30
35
40
45
50
55
60
1. Grafique en la escala adecuada el curso temporal de las

concentraciones de frmaco en el organismo, para confirmar parte de la
hiptesis
2. Obtenga todos los parmetros farmacocinticos posibles, derivados
del experimento.
3. Compare los parmetros farmacocinticos obtenidos (volumen de
distribucin, la dosis y el aclaramiento) con las condiciones de simulacin
empleadas (el volumen del matraz, la dosis de azul de metileno adicionada y la
velocidad de infusin de agua del equipo de venoclisis). Para confirmar la
segunda parte de la hiptesis.
4. Discuta ampliamente la prctica y realice conclusiones concretas.
Cuestionario:
1. Defina simulacin.
2. El mtodo de simulacin cumpli con los siguientes supuestos requeridos

para un modelo abierto de un compartimiento por administracin intravenosa,
justifique.
Supuestos:
a. Es abierto ___________ explique__________________________________
b. El frmaco se distribuy rpidamente ________ explique______________
24
c. Cualquier cambio que ocurra en el plasma refleja cuantitativamente cambios

ocurridos en los niveles tisulares del medicamento ___________ explique___
d. La eliminacin del medicamento se realiza en el organismo segn una
cintica de primer orden ______________ explique ______________________
e. La concentracin mxima y el equilibrio se alcanzaran en forma
instantnea________ explique_____________________________________
3. Describa las ventajas y desventajas de la simulacin farmacocintica

realizada
5.3.- PRCTICA # 3
Titulo: Modelo abierto de un compartimiento: administracin con proceso

de absorcin, datos sanguneos.
OBJETIVO:
Determinar la farmacocintica simulada de los datos sanguneos de un frmaco

administrada por una va con proceso de absorcin y cuya cintica se ajusta a
un modelo abierto de un compartimiento.
HIPTESIS:
El muestreo del frmaco en estudio producir una curva bifsica, caracterstica
de la administracin con proceso de absorcin cuyo anlisis permitir la
obtencin de parmetros farmacocinticos similares a las condiciones de
simulacin empleadas.
INTRODUCCIN:
Si en vez de inyectar los frmacos rpidamente por va intravenosa, se les
administra por va oral o se inyecta por va intramuscular o subcutnea, en la
farmacocintica no slo interviene el proceso de eliminacin, sino tambin la
absorcin, para la inmensa mayora de los frmacos, este proceso sigue una
cintica de primer orden. Es as que al comienzo toda la cantidad de el frmaco
25
administrado o dosis se encuentra en el lugar de la absorcin y la velocidad de

la misma es mxima, para declinar luego en forma exponencial o logartmica,
en esta forma, el nivel sanguneo del frmaco se va elevando mientras que la
velocidad de eliminacin va aumentando, hasta que dicho nivel alcanza un
mximo, en que la velocidad de absorcin y eliminacin son iguales, y luego
este nivel desciende, (Fig.1), siempre en forma exponencial o logartmica; se
tiene entonces una absorcin y eliminacin con cinticas de primer orden.
Figura 1. Curso temporal de la concentracin plasmtica de un

medicamento administrado por una va con proceso de absorcin. El eje de la
concentracin esta expresado en unidades logartmicas (Ln)
La ecuacin que expresa el curso temporal de las concentraciones de frmaco

despus de una administracin con proceso de absorcin es la siguiente:
C= ka C0 ( e-kat e-ket) / k-e- ka
Donde:
C = Concentracin del frmaco en el plasma.
C0 = Concentracin al t = 0
ka = Constante de velocidad de absorcin
ke = Constante de velocidad de eliminacin
e = 2.7183 (base de logaritmos naturales)
t = Tiempo
Esta ecuacin es vlida cuando ka > ke
26
La constante de velocidad de eliminacin de primer orden aparente, K, puede

calcularse a partir de la pendiente del segmento rectilneo terminal, que es igual
a K. Este parmetro a su vez nos permite obtener el tiempo de vida media
que es el tiempo necesario para que la concentracin de medicamento
correspondiente a cualquier punto de la recta disminuya la mitad de su valor y
que se define como:
t1/2 = 0.693/K
Otros parmetros farmacocinticos que son posible estudiar a partir de un

curso temporal de las concentraciones del frmaco en el organismo son:
a. La constante de absorcin y el tiempo medio de absorcin. A travs
del mtodo de residuales que se estudia con profundidad en el curso terico de
esta materia.
b. La concentracin mxima y el tiempo mximo
c. El rea bajo la curva y el aclaramiento.
En esta prctica realizaremos un modelo in vitro que basado en los supuestos

del modelo abierto de un compartimiento por administracin con proceso de
absorcin nos permita obtener los parmetros farmacocinticos antes
mencionados y compararlos con las condiciones de simulacin empleadas.
MATERIAL:
Equipo de venoclisis.
Matraz Kitazato de 500ml.
Mangueras de hule ltex..
Soporte universal.
Pinzas de tres dedos.
Tubos de ensayo de 13 x 10.
Gradilla.
Pipetas
Matraz aforado de 10 ml.
Embudo de separacin en forma de pera.
27
EQUIPO:
Equipo para recirculacin.
Espectrofotmetro.
Agitadores magnticos.
REACTIVOS:
Azul de Metileno.
METODOLOGA
1. Preparar una solucin patrn de azul de metileno 10 mg en 10 ml de
agua.
2. Montar el dispositivo como lo ilustra la figura 2.
3. Determinar el volumen del matraz (Este simula el volumen de
distribucin corporal)
4. Determinar la velocidad de infusin del equipo de venoclisis
aproximadamente 30 ml/min (Simula el aclaracin corporal)
5. Determinar el volumen y la velocidad de flujo del embudo ( 35
ml/min).
6. Poner a funcionar el dispositivo con agitacin constante, en el
embudo cerrado colocar 81 ml de agua y 9 ml de la solucin patrn
de azul de metileno (Dosis = 9 mg).
7. Realizar el muestreo cada 30 segundos hasta que el embudo se
vace.
8. Posteriormente realizar el muestreo cada 5 minutos hasta 1 hora total
de muestreo. Durante el muestreo puede realizarse la siguiente
etapa.
9. Construir una curva estndar a las concentraciones de 10, 5, 2.5,
1.25 y 0.625 mcg/ml.
10. Leer las concentraciones de la curva en orden ascendente a 664 nm,
empleando agua como blanco.
11. Leer las muestras problemas en el espectrofotmetro a 664 nm., e
interpolarlas en la curva estndar realizar diluciones si es necesario.
12. Anotar todas las lecturas en la seccin de resultados.
28
13. Los residuos de azul de metileno se vertiran en un frasco ambar para

inactivar con hipoclorito de sodio.
FIGURA 2. DISPOSITIVO.
A = Equipo de recirculacin, B = Equipo de venoclisis, C = Embudo de

separacin, D = Salida del matraz a la tarja, E = Jeringa de muestreo, F =
Agitador magntico, G = Parrilla de agitacin.
Resultados:
29
Curva Patrn:
Concentracin mcg/ml Absorbancia
0.625
1.250
2.50
5.00
10.0
r 2 = ____________
Muestras:
t(mn) ABSORBANCIA CONCENT. (g/ ml) Ln
1. Graficar en la escala apropiada el curso temporal del frmaco para

comprobar parte de la hiptesis
2. Obtenga todos los parmetros farmacocinticos posibles, derivados del
experimento.
30
3. Compare los parmetros farmacocinticos obtenidos (volumen de

distribucin, la dosis y el aclaramiento) con las condiciones de
simulacin empleadas (el volumen del matraz, la dosis de azul de
metileno adicionada y la velocidad de infusin de agua del equipo de
venoclisis). Para confirmar o no su hiptesis.
3. Discuta ampliamente la prctica y realice conclusiones concretas.
CUESTIONARIO:
1. El mtodo de simulacin cumpli con los siguientes supuestos requeridos

para un modelo abierto de un compartimiento por administracin con proceso
de absorcin, justifique.
Supuestos:
a. Es abierto ___________ explique __________________________________
_______________________________________________________________
b. La eliminacin del medicamento se realiza en el organismo segn una
cintica de primer orden ___________________________________________
explique________________________________________________________
c. La absorcin del medicamento se realiza en el organismo segn una cintica
de primer orden _________________________________________________
explique________________________________________________________
3. Describa las ventajas y desventajas de la simulacin farmacocintica

realizada.
31
5.4 - PRACTICA #4.

Titulo: Cintica de eliminacin de un medicamento a partir de los datos de
excrecin urinaria.
Objetivo:
El alumno determinar la constante de eliminacin y el tiempo de vida media

del acido acetil saliclico mediante datos de excrecin urinaria
Hiptesis:
La constante de eliminacin y el tiempo de vida media del cido acetil saliclico

determinada por el mtodo de velocidad de excrecin urinaria no sern
significativamente diferentes de los valores obtenidos por el mtodo de sigma-
menos
Introduccin:
Farmacocintica del acido acetil saliclico: Se absorbe en el tubo digestivo y las

concentraciones plasmticas son mximas 2 horas despus de su
administracin oral. Hasta 50% de la sustancia se fija a las protenas
plasmticas. Experimenta rpida biotransformacin (vida media biolgica de 15
a 30 min.) en el plasma e hgado, hasta convertirse en acido saliclico,
metabolito activo que se une en 90% a las protenas del plasma. Este
metabolito se conjuga con glicina (acido salicilrico) y una pequea fraccin se
oxida hasta su conversin a acido gentsico. Se excreta en orina como acido
salicilrico (75%) y en menor grado como acido saliclico (10%) y acido
gentsico (1%). La excrecin renal del acido saliclico y de sus metaboltos
depende del pH de la orina; en la orina alcalina se elimina hasta 85% como
salicilato libre, en tanto que en orina acida es de apenas 5%.
Es posible determinar la cintica de eliminacin de un medicamento a partir de

los datos de excrecin urinaria. Esto exige, normalmente que una parte del
medicamento por lo menos, se elimine inalterado. Existen dos mtodos para
32
determinar la constante de eliminacin de un frmaco empleando datos

urinarios:
Mtodo de velocidad de excrecin

Mtodo sigma-menos
Mtodo de la velocidad de excrecin.
Puesto que, con una cintica de primer orden, la velocidad de aparicin en la

orina del medicamento inalterado X u/t es proporcional a la cantidad de
medicamento en el organismo. La representacin semilogaritmica de los datos
de excrecin de medicamento no biotransformado en funcin de los tiempos
correspondientes al punto medio de los periodos de recoleccin (t mid), es una
recta con una pendiente igual a K (ver ecuacin 1 y grfica 1). sta pendiente
es la misma que se obtiene en la representacin semilogartmica de la
concentracin plasmtica en funcin del tiempo. As pues, la constante de
velocidad de eliminacin de un medicamento puede obtenerse indistintamente
a partir de datos de concentracin plasmtica o de excrecin urinaria.
ln Xu/t = ln keX0 Ktmid ----- Ecuacin 1
Donde:
ln = logaritmo natural
Xu/t = velocidad de aparicin en la orina del medicamento inalterado
ke = constante de excrecin urinaria
Xo = dosis
K = constante de eliminacin
t = tiempo correspondiente al punto medio del periodo de recoleccin de orina
ln keX0
-K
ln Xu/t
33
tmid
Las fluctuaciones de la velocidad de eliminacin de un medicamento se reflejan

muy acusadamente en las grficas de velocidad de excrecin. A veces los
datos son tan dispersos que es difcil el clculo de la semivida. Para superar
este problema existe un procedimiento alternativo denominado mtodo de
sigma-menos, en donde la representacin grfica del logaritmo de la cantidad
de medicamento inalterado que quedo por excretar en funcin del tiempo es
una recta cuya pendiente es K (ecuacin 2 y grfica 2). Para determinar X u la
recoleccin de orina debe prolongarse hasta que no se detecte en ella ms
medicamento inalterado.
ln Xu - Xu) = Ln XuKt
Donde:
ln = logaritmo natural
(Xu - Xu) = Cantidad de medicamento que queda por excretar (remanente)
Xu = Cantidad excretada a tiempo infinito
K = constante de eliminacin
t = tiempo correspondiente final del periodo de recoleccin de orina
Ln Xu
-K
u - Xu)
ln X
Siempre que sea posible, la recogida de orina debe realizarse durante un

espacio de tiempo igual a unas 7 vidas medias del medicamento para poder as
determinar Xu. Esto presenta considerables dificultades de orden prctico si el
medicamento tiene una semivida larga. Este problema no se presenta si se el
mtodo de velocidad de excrecin urinaria, puesto que para obtener una
estimacin razonable de la constante de velocidad de eliminacin basta con
recoger la orina durante un periodo de tiempo correspondiente a cuatro vidas
34
medias. Adems no tiene porque recogerse todas las muestras de orina (por
ejemplo pueden perderse muestras de orina o descartarse intencionalmente)
ya que para determinar un punto de la grfica se precisa slo la recogida de
dos muestras consecutivas de orina.
MATERIAL:
1 voluntario por equipo que no presenten sensibilidad al acido
acetilsaliclico.
Frascos para recoleccin de orina
Tubos de ensayo de 13X100
Matraces volumtricos
5 Matraces volumtricos de 10 ml.
EQUIPO:
Espectrofotmetro
Centrfuga
Balanza analtica
REACTIVOS:
Tabletas de aspirina 500mg
Agua
Reactivo de Trinder
Salicilato de sodio
METODOLOGA:
1. Voluntarios en ayuno de 8h, tomaran de 300 a 500ml de agua antes de

iniciar el estudio y recolectaran la segunda orina de la maana (para
realizar la curva patrn), se debe mantener en refrigeracin.
35
2. Una vez obtenida la muestra blanco, tomaran 1 tableta de aspirina con

desayuno estndar, previamente acordado por los voluntarios, los
alumnos y profesor.
3. Los voluntarios se mantendrn hidratados tomando 300ml de agua cada

30 min.
4. Se recolectaran todas las muestras de orina durante 18h despus de

haber tomado la aspirina, anotando el volumen ( no es necesario
guardar todo el volumen de orina para el ensayo con 20ml es suficiente)
5. El da del anlisis, construir para cada voluntario una curva estndar

como se indica a continuacin
a) Homogenice la orina y centrifugue
b) Pesar en un matraz volumtrico 10ml aproximadamente 3mg de

salicilato de sodio (si el peso se excedi o falta, anote correctamente
el peso en la seccin de resultados para que sus concentraciones
sean ajustadas).
c) Afore con 10ml de orina, de esta solucin tome 5ml y adicione 1ml de
orina, de esta solucin tomar 4ml y adicione 1 ml de orina, de esta
solucin tome 3 ml y adicione 1 ml de orina, finalmente de esta ultima
solucin tome 2ml y adicione 1 ml de orina.
d) Tomar 1 ml de cada muestra.
e) Adicione 4 ml de reactivo de Trinder
f) Espere 15 min
g) Empleando orina como blanco y el punto de menor concentracin en

la curva, realizar un barrido en el espectrofotmetro para ver la
longitud de onda de mayor absorcin (aproximadamente 525mn) y
leer a esa longitud toda la curva.
36
6. Homogenizar las muestras de orina de los voluntarios y centrifugar.

7. Tomar 1ml de cada muestra y adicionar 4ml del reactivo de Trinder,
esperar 15 min y leer a esa misma longitud de onda que la curva patrn.
8. Interpolar los resultados de las muestras de orina en la curva estndar
para obtener la concentracin y llenar la tabla b de los resultados.
9. RESIDUOS: Los tubos que contengan reactivo de Trinder, el contenido
RESULTADOS:
a). Curva estndar:
Longitud de ondamx = ______________ r2 = ___________________
b). Muestreo urinario:

Voluntario Tiempo Volumen Concentracin Cantidad
(hr) urinario (ml) urinaria excretada
(gml) (g)
37
C). Recopile todos los valores de K obtenidos por ambos mtodos para
todos los animales empleados.
Voluntario Velocidad de excrecin Sigma menos
PROMEDIO+EE K = ___________ K = ____________
EE = Error estndar = o/ raz cuadrada de n.
D). Realice una prueba t de student para comparar las constantes de

eliminacin obtenidas por ambos mtodos y contraste estos resultados
con la hiptesis para aceptarla o rechaza
Cuestionario:
1. Es correcto asumir que el tiempo de vida media que obtuvo por los dos
mtodos, corresponde al del acido acetilsaliclico por qu?
2. Cul es la diferencia entre K y Ke
3. Calcule Ke
4. Comparando el valor de Ke con el de K infiera la va de excrecin del
frmaco y sus metabolitos.
5.5.- PRACTICA 5
TITULO: Determinacin de la biodisponibilidad absoluta de sulfadiazina
administrada por va intramuscular
Objetivo:
38
El alumno determinar la biodisponibilidad absoluta de la sulfadiazina

administrada por va intramuscular mediante datos sanguneos.
Hiptesis:
La fraccin de dosis absorbida de sulfadiazina despus de una administracin
intramuscular es mayor de 0.9 por lo tanto 0.9<F<1.
Introduccin:
Biodisponibilidad. Se define como la cantidad de frmaco que se absorbe y la
velocidad a la cual ocurre este proceso. Esta es una medida del frmaco
disponible para el sitio o sitios de accin.
Matemticamente la biodisponibilidad es una medida comparativa en la que se

emplean estndares de comparacin, as si el estndar de comparacin es la
va intravenosa, hablamos de biodisponibilidad absoluta (que se determinar en
esta prctica), pero si el estndar de comparacin es una formulacin
administrada por va extravascular entonces hablamos de biodisponibilidad
relativa.
Los resultados de los estudios de biodisponibilidad son necesarios para una

mejor seleccin de: dosis teraputica, formulacin farmacutica y va por la
cual ser administrado el frmaco.
Por lo anterior la evaluacin de la biodisponibilidad de un frmaco responde a

tres objetivos:
La eleccin de una va de administracin, durante el desarrollo de un
nuevo frmaco o una nueva forma farmacutica.
El establecimiento de un control continuo de calidad despus del

desarrollo de un medicamento, para la modulacin de sus condiciones
de empleo de cada caso particular
Precisar si los medicamentos procedentes de distintos fabricantes

presentan caractersticas de equivalencia, que autoricen la posibilidad
de intercambio en las prescripciones.
39
El protocolo detallado de estudios de biodisponibilidad implica el conocimiento

de:
Las caractersticas fsicas y los parmetros farmacocinticos de cada
frmaco (t 1/2, Vd, Cp0)
Disponer de un mtodo bioanaltico que considere: la especificidad,

sensibilidad y precisin en la cuantificacin del frmaco en fluidos
biolgicos. Siguiendo el protocolo principalmente acerca de la duracin
de la recoleccin de muestras urinarias y de sangre.
Realizar un protocolo experimental fundamentado en bases cientficas,

en el cual se debe considerar que las condiciones para llevar a cabo un
estudio de biodisponibilidad en sujetos humanos, deben ser bien
controladas, para obtener informacin cuantitativa de la influencia de
variables sobre la formulacin farmacutica, porque se ha demostrado
que para determinados frmacos influyen por ejemplo: la edad, sexo,
talla, presencia de alimentos, ejercicio fsico etc.. En la biodisponibilidad
por lo tanto, se deben controlar estas variables para que los resultados
sean confiables.
METODOS PARA CALCULAR LA BIODISPONIBILIDAD
La biodisponibilidad se puede calcular al medir cualquiera de las siguientes

variables dependientes:
La concentracin en suero, plasma o sangre total de frmaco inalterado

despus de una dosis nica.
La cantidad total de frmaco inalterado excretado en orina despus de
una dosis nica.
La concentracin en suero, plasma o sangre total de frmaco inalterado
en el estado estacionario en dosis mltiples.
La cantidad total de un metabolito del frmaco excretado en orina en
dosis nica.
40
La cantidad total de un metabolito del frmaco excretado en orina en la

fase estacionaria en dosis mltiples.
En esta prctica emplearemos el primer mtodo que consiste en medir la

cantidad de frmaco inalterado en sangre total que se calcular utilizando el
mtodo de sigma-menos.
La biodisponibilidad absoluta se obtiene mediante la siguiente formula.
Xue.v Di.v
F= ________________
Xui.v De.v.
Donde:
F = biodisponibilidad absoluta o fraccin de dosis absorbida
Xue.v = cantidad de frmaco excretado inalterado despus de una
administracin extravascualr
Xui.v = cantidad de frmaco excretado inalterado despus de una
administracin intravascular
Di.v = dosis intravenosa
De.v. = dosis extravascular
Cuando Di.v = De.v. la ecuacin anterior se reduce a :
Xue.v
F= _________
Xui.v
Si F es igual a 1 esto significa que la dosis administrada por va extravascular

se absorbe en un 100%, pero si F= 0.9 solo el 90% de la dosis se absorbe. F
no puede tener un valor mayor a 1 (100%)
Material:
Conejos con peso mayor a 1 Kg por equipo
41
Jeringas de insulina
Tubos de ensayo para recoleccin de sangre
Matraces volumtricos
Equipo:
Espectrofotmetro
Centrifuga
Balanza granataria
Bistur
Pipetas
Papel filtro No 40
Reactivos:
Sulfadiazina (frmaco en solucin)
Agua destilada
Solucin isotnica
Heparina
Saponina
Acido tricloroactico
Nitrito de sodio 0.1%
Sulfato de amonio 0.5%
Solucin de N-(1-naftietilendiamina) al 0.1%
Metodologa:
1.- Administrar a los conejos por va subcutnea 10ml de solucin isotnica

(estril) 24h antes de la administracin.
2.- Tomar una muestra de sangre de los conejos (hacer asepsia)
3.- Administrar por va intramuscular, intravenosa y oral 400mg/kg de peso de
sulfadiazina.
4.- Despus de la administracin, tomar muestras de sangre de la oreja del
conejo a los siguientes tiempos: 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, y 3.0 hrs.
42
5.- Determinar la concentracin de sulfadiazina de las muestras obtenidas.

6.- Determinacin de sulfadiazina libre. Se utilizan dos mililitros de sangre con o
sin anticoagulante y se colocan en un matraz de 125ml y se diluyen con 30ml
de saponina, despus de dos minutos se precipitan las protenas con 8ml de
solucin de acido tricloroactico y se filtra con papel filtro watman 40.
7.- Tomar 2ml del filtrado y se adiciona 1ml de nitrito de sodio 0.1%, despus
de tres minutos se adiciona 1ml de solucin de sulfato de amonio 0.5% y dos
minutos ms tarde se adiciona 1ml de solucin de N-(1-naftiletilendiamino) al
0.1%, leer a 520mn y comparar con la curva patrn.
8.- CURVA PATRON: Preparar una solucin de sulfaniamida al 0.04% de esta
solucin preparar las siguientes diluciones 20, 10, 5, 2.5, y 1.125 g/ml.
Realizar el mismo procedimiento que para las muestras en la cualtificacion de
sulfadiazina. Se realizar una curva estndar por conejo.
Resultados:
a) Curva estandar:
Concentracin g/ml Absorbancia
43
r 2 = ____________ max=
_____________
b) Muestreo sanguneo:
No de conejo Tiempo (h) Volumen de Concentraci

sangre n sanguneas
(g/ml)
Calcular:
a) Xu
b) La biodisponibilidad absoluta
Cuestionario:
1. En ausencia de solucin intravenosa que sugiere emplear para

determinacin de la biodisponibilidad absoluta de un principio activo
2. Cual en el valor de F de un frmaco que administrado por va
extravascular se adsorbe completamente
3. En estudios de biodisponibilidad absoluta y relativa el valor mximo de F
es 100% por qu?
4. Establezca al menos 3 diferencias de la biodisponibilidad absoluta vs
relativa.
44
5.6.- PRACTICA # 6
TITULO: Determinacin de biodisponibilidad relativa (bioequivalencia) en

diferentes formulaciones conteniendo acido acetilsaliclico
Objetivo:
Emplear datos urinarios en humanos para determinar la bioequivalencia de una
formulacin genrica conteniendo acido acetilsaliclico con respecto a la
formulacin innovadora.
Hiptesis:
Los medicamentos genricos intercambiables y los de formulacin innovadora
mostraran una similar biodisponibilidad.
Introduccin:
Para la realizacin de esta prctica se requiere de un voluntario por equipo
Material:
Frascos para recoleccin de orina
Probeta
Pizeta
Tubos de ensayo
Pipetas graduadas
Pipetas volumetricas
Equipo:
Espectrofotmetro
Centrifuga
Balanzas
Reactivos:
Tabletas de aspirina 500mg
Tabletas de acido acetilsaliclico G.I
Reactivo de Trinder
45
Agua destilada
Metodologa:
1. Dividir a los voluntarios en dos grupos
2. Los voluntarios debern tener ayuno de 8h, y tomaran de 300 a 500ml

de agua antes de iniciar el estudio y recolectaran la segunda orina de la
maana (para realizar la curva patrn), se debe mantener en
refrigeracin.
3. Una vez obtenida la muestra blanco, tomaran 1 tableta de aspirina o

medicamento genrico anotando la hora de la toma.
4. Los voluntarios tomaran un desayuno estndar, previamente acordado

por los voluntarios, los alumnos y profesor.
5. Los voluntarios se mantendrn hidratados tomando 300ml de agua cada

30 min.
6. Se recolectaran todas las muestras de orina durante 18h despus de

haber tomado la presentacin de acido acetilsaliclico, anotando el
volumen ( no es necesario guardar todo el volumen de orina para el
ensayo con 20ml es suficiente).
7. El da del anlisis, construir para cada voluntario una curva estndar

como se indica a continuacin
h) Homogenice la orina y centrifugue
i) Pesar en un matraz volumtrico 10ml aproximadamente 3mg de

salicilato de sodio (si el peso se excedi o falta, anote correctamente
el peso en la seccin de resultados para que sus concentraciones
sean ajustadas).
46
j) Afore con 10ml de orina, de esta solucin tome 5ml y adicione 1ml de
orina, de esta solucin tomar 4ml y adicione 1 ml de orina, de esta
solucin tome 3 ml y adicione 1 ml de orina, finalmente de esta ltima
solucin tome 2ml y adicione 1 ml de orina.
k) Tomar 1 ml de cada muestra.
l) Adicione 4 ml de reactivo de Trinder
m) Espere 15 min
8. Empleando orina como blanco y el punto de menor concentracin en la

curva, realizar un barrido en el espectrofotmetro para ver la longitud de
onda de mayor absorcin (aproximadamente 525mn) y leer a esa
longitud toda la curva.
9. Homogenizar las muestras de orina de los voluntarios y centrifugar.
10. Tomar 1ml de cada muestra y adicionar 4ml del reactivo de Trinder,
esperar 15 min y leer a esa misma longitud de onda que la curva patrn.
Realizar el estudio por duplicado.
11. Interpolar los resultados de las muestras de orina en la curva estadar
para obtener la concentracin y llenar la tabla de los resultados.
12. RESIDUOS: Los tubos que contengan reactivo de Trinder, el contenido
Resultados
a). Curva estndar:

47
Longitud de ondamx = ______________ r2 = ___________________
b). Muestreo urinario:

Voluntario (iniciales)________________ equipo: __________
No de Volumen Hora Tiemp Absorbanc Concentracin Cantidad
Muestr urinario (h) o ia urinaria (gml) excretad
a (ml) a
(g)
Recopile los siguientes datos y realice los clculos
Aex acumulada Aex - Aac Ln Aex - Aac
Cuestionario:
48
5.5.- PRACTICA 7
TITULO: Cintica de disolucin.
Objetivo:
El alumno realizar perfiles de disolucin de cpsulas de rifampicina para
determinar la cintica de liberacin del frmaco.
Hiptesis:
Las cpsulas de rifampicina se disolvern segn una cintica de primer orden.
Introduccin:
Mientras que la prueba de disolucin es una determinacin frmacopeica que

en general requiere de una sola medicin, el perfil de disolucin es una curva
que caracteriza al proceso de disolucin, y que se obtiene cuando se
representa grficamente el tiempo versus la cantidad o el porciento disuelto, y
que por lo tanto permiten caracterizar la cintica y la velocidad de disolucin de
un frmaco contenido en una forma farmacutica solida.
En general las cinticas de disolucin se realizan sobre un nmero suficiente

de muestras (al menos 5) a fin de poder determinar un valor promedio
conveniente y apreciar la dispersin de los resultados. Para expresarlos, se
pueden utilizar diferentes representaciones graficas.
Representaciones graficas: segn las escalas utilizadas para las

coordenadas, se pueden utilizar varios modos de representacin. Dichas
coordenadas se escogen adecuadamente para obtener una alineacin de los
puntos experimentales. Las dos escalas, mas empleadas aunque no las nicas
son:
1. La representacin en papel milimtrico. Si se coloca el porciento de

frmaco disuelto frente a tiempo, una disolucin con cintica de
orden cero se traducir en una recta con pendiente positiva que
corresponde a la constante de velocidad de disolucin.
49
Reaccin de orden cero: la velocidad es constante e independiente

de la cantidad de soluto presente. La expresin matemtica de la
cantidad remanente de soluto es:
Qt = Q0 k t
Donde:
Qt = cantidad remanente
Q0 = cantidad inicial
K = constante de velocidad (pendiente de la curva)
t = tiempo
La semivida o tiempo necesario para la liberacin de la mitad de la

cantidad de soluto presente, se expresa por:
t = Q0 / 2k
2. Representacin en papel semilogartmico: la proporcin no disuelta

en funcin del tiempo se coloca en las ordenadas (escala
logartmica). La obtencin de una recta pendiente negativa, indica
que la cintica es de orden uno.
Reaccin de orden 1. La velocidad es proporcional a la cantidad que

permanece sin disolver; la liberacin del soluto disminuye con el tiempo de
manera exponencial. La ecuacin matematica de este tipo de reaccin es :
ln Qt = ln Q0 k t
la semivida o tiempo de liberacin 50% es:
t = ln 2/ k
Para estudiar la cintica de liberacin de un frmaco es necesario tener en

cuenta dos consideraciones:
En la mayora de los casos, solo puede determinarse la cintica

mediante los mtodos que proporcionan la concentracin del soluto en el
50
disolvente (algunas veces puede determinarse la cantidad que queda en

la forma slida)
La determinacin de la cintica exige que el nico parmetro variable

sea la concentracin del producto liberado.
Material.
Tubos de ensayo
Pipetas graduadas y volumtricas
Perilla
Embudo de filtracin
Papel filtro
Vasos de precipitado
Matraces aforados 10 ml
Probetas 1 L
Equipo:
Disolutores con accesorios
Espectrofotmetro
Bao mara a 40C
Parrilla de agitacin
Reactivos:
Capsulas de rifampicina que cada equipo de trabajo comprar
Acido clorhdrico 0.1 N
Agua destilada
Estndar de rifampicina
Metodologa:
1. Preparar un bao mara a la temperatura de 40C
2. Calibrar en el disolutor, la distancia de las canastillas al vaso con
la pelota a 25mm
3. Llenar con agua destilada la caja de acrlico del disolutor hasta la
marca de llenado, encender el equipo y ajustar la temperatura
hasta 37C.
4. Preparar 7 L del medio de disolucin (HCL 0.1N) y llevarlo al bao
mara.
5. Una vez que el disolutor alcanza la temperatura adecuada,
coloque en los vasos 900ml del medio de disolucin a
51
temperatura de 40C, y acomdelos en el disolutor, (conserve el

medio restante a temperatura ambiente).
6. Permita que se equilibren todos los vasos a 37C
7. Ajuste las revoluciones a 50 por minuto.
8. Coloque una capsula de rifampicina en cada una de las
canastillas, e introdzcalas en el medio de disolucin y accione el
motor para que empiece a girar, en ese momento anote el tiempo
de inicio de la prueba.
9. Muestreo: alcuotas de 5ml cada 5 minutos durante 45 min. Filtre
las alcuotas y realice en las muestras el tratamiento indicado en
la tabla de asignacin de tratamientos que se muestra a
continuacin.
Tabla de asignacin de tratamientos

Muestra Tiempo min. Tratamiento Factor de
dilucin F*
1 5 Ninguno 1
2 10 Ninguno 1
3 15 Ninguno 1
4 20 Diluir 1 ml en 10 ml 10
de medio de
disolucin
de medio de
disolucin
de medio de
disolucin
52
de medio de
disolucin
de medio de
disolucin
de medio de
disolucin
*Se emplea en la formula para% disuelto del frmaco
10. Pese 8.1mg del estndar y llvelos a 25ml con el medio de

disolucin, tome 1ml y diluya nuevamente con medio a 25 ml
(concentracin de 12.96 g/ml
11. Considerando un blanco como medio de disolucin ajuste el
equipo a una absorbancia de 475mn, a esta longitud de onda
proceda a realizar la lectura del estndar y de las muestras
tratadas.
12. Calcule el % de rifampicina disuelta mediante la siguiente
ecuacin:
%disuelto de rifampicina = Abs mtra x concentracin del estndar x F x 100 x

900
Abs Std pmgt
Donde:
Abs mtra = absorbancia de la muestra
Abs. Std = absorbancia del estndar
Concentracin del estndar 12.96 g/ml
F = factor de dilucin de la alcuota
900 = volumen del medio de disolucin
100 = equivalentes al 100%
pmgt = peso en miligramos de la capsula.
Resultados.
Determine:
53
a) La cintica de liberacin del frmaco

b) La constante de disolucin
c) El tiempo medio de disolucin
d) El porcentaje disuelto a los 30 minutos, directamente de la grfica
y por la ecuacin.
Cuestionario:
1. Explique con sus propias palabras que es la cantidad remanente por

disolverse y como se determina
2. En qu casos es posible obtener una cintica de orden cero
3. Que nos indica el valor de la constante de disolucin (kd)
4. Describa las ventajas y desventajas de emplear un perfil de disolucin vs
prueba de disolucin.
BIBLIOGRAFA
1. Bonate P., (2005). Pharmacokinetics and Pharmacodinamics Modeling and Simulation,

Springeg.
2. Burton M. E., Shaw L. M. Schentag J. J., Evans W. E., (2005). Applied

Pharmacokinetics and Pharmacodinamics: Principles of Therapeutic Drug Monitorin 4 th
edition
3. Domenech Berrozpe J., Martnez Lanao J., Pla Delfina J. M. . 2001. Biofarmacia y
Farmacocintica, Madrid Espaa
4. Niazi, S. K., (2004). Handbook of Pharmaceutical manufacturing formulations. CRC

Press.
5. Shargel, L. Wu-Pong, S., Yu, A. B. C., (2004). Applied biopharmaceutics &

pharmacokinetics. 5a. edition, Mc. Graw-Hill Medical.
6. .NOM-177-SSA-1998, diario oficial de la federacin 1999, 7 de Mayo
7. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos FEUM 8 edicin. SSA, Mxico, 2005.
8. .Mtodos analticos, Gua de validacin; Colegi Nacional de Qumicos Farmacuticos

Bilogos A.C; Mxico.
54

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LABORATORIO DE BIOFARMACIA

Universidad Autnoma del Estado de Mxico

Manual de Prcticas de Biofarmacia

Elabor: Dra. Araceli Amaya Chvez

Toluca, Mxico. Julio 2011

Fecha de Aprobacin por los Consejos Acadmico y de Gobierno de

2. Objetivo general del laboratorio de biofarmacia 4

3. Reglamento del Laboratorio de Biofarmacia 4

4 Reglas de seguridad en el laboratorio 5

5 Sesiones experimentales a desarrollar 6

5.1 Validacin de un mtodo bioanalitico 6

5.2 Modelo abierto de un compartimiento: anlisis de datos 13

5.3 Modelo abierto de un compartimiento: administracin con 20

5.4 Cintica de eliminacin de un medicamento a partir de los 25

5.5 Determinacin de la biodisponibilidad absoluta de 38

5.6 Determinacin de biodisponibilidad relativa 45

5.7 Cintica de disolucin 49

6 Evaluacin del curso

8. Manejo de residuos peligrosos y biolgico infeccioso

El objetivo general de este manual es reforzar y complementar los

La Biofarmacia se ha considerado durante los ltimos aos como una disciplina

Se contempla la validacin de mtodos analticos, que para cualquier estudio

Los modelos monocompartamentales sern utilizados para representar el

Cuando se desarrolla un nuevo medicamento (medicamento innovador o marca

Los medicamentos genricos son aquellos que contienen el mismo principio

Otro parmetro fundamental en la industria farmacutica es la cintica de

2. OBJETIVO DEL LABORATORIO DE BIOFARMACIA.

El alumno conocer y evaluar las distintas etapas de la farmacocintica de los

3. REGLAMENTO DE LABORATOTIO DE BIOFARMACIA.

Se darn 10 minutos de tolerancia a los alumnos para entrar al

Toda persona que requiera entrar al laboratorio deber llevar puesta

Queda prohibido salir del laboratorio sin causa justificada

Todas las actividades del laboratorio debern estar supervisadas por el

Prohibido comer, fumar o beber en el laboratorio as como llevarse

Los residuos debern manejarse de acuerdo al programa de residuos

Los productos voltiles y reactivos peligrosos debern manejarse en la

Anotarse en las bitcoras de los equipos despus de utilizarlos

El tcnico laboratorista proporcionar material, reactivos y equipos solo

Al termino de su trabajo en el laboratorio este deber quedar limpio y los

4.- REGLAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

1. Usar material y equipo de laboratorio apropiados para el trabajo : usarlos

2. Seguir las instrucciones y no arriesgarse, en caso de duda preguntar al

3. Tener las reas limpias y ordenadas

4. Usar equipo de proteccin personal, bata de manga larga, lentes de

5. Prohibido comer, fumar en el laboratorio y hacer bromas en el rea de

6. Todos los reactivos se deben considerar como peligrosos, antes de

7. No usar fuego o parrillas con resistencia abierta cerca de solventes

8. Reportar todas las lesiones inmediatamente, conseguir primeros auxilios

OBJETIVO: Validar un mtodo espectrofotmtrico para la determinacin de

HIPTESIS: El mtodo bioanaltico para la determinacin de salicilatos en

De manera especfica la validacin del mtodo puede definirse como el

LINEARIDAD: la linealidad de un sistema o mtodo analtico es su habilidad

INTERVALO: el intervalo de un mtodo bioanaltico est definido por las

EXACTITUD: la exactitud de un mtodo analtico es la concordancia entre un

PRECISION: la precisin de un mtodo bioanaltico, es el grado de

a) REPETIBILIDAD: es la precisin de un mtodo bioanaltico

b) REPRODUCIBILIDAD: es la precisin de un mtodo bioanaltico

Debido a la introduccin de regulaciones de biodisponibilidad y bioequivalencia,

1. CALIFICACIN DEL PERSONAL: Antes de iniciar la validacin se

Existe una amplia variedad de mtodos para la determinacin de salicilatos en

a). MATERIAL BIOLGICO

PREPARACIN DE LA CURVA ESTANDAR CON ORINA.

1.- Homogenice la orina y forme un pull con todos los equipos, a