Hematoxilina y eosina

HEMATOXILINA

La hematoxilina es un colorante natural que se obtiene de la madera del rbol

Haematoxylum campechianum. El nombre deriva del griego: haimatos: sangre y xylon:
madera. La hematoxilina que se compra proviene directamente de estos rboles que son
originarios de Amrica Central y del Sur. Aunque se ha conseguido sintetizar en el
laboratorio su produccin sigue siendo natural. Para su obtencin se astilla la madera y se
hierve. Se obtiene una solucin rojiza que luego se vuelve amarilla, y posteriormente
negruzca cuando se vuelve a enfriar. El agua se evapora dejando la hematoxilina cruda con
una pureza que puede llegar al 10 %. Es necesario purificar posteriormente con ter, secar y
volver a cristalizar en ambiente acuoso.

Como colorante fue introducido independientemente por Bhmer (1865) y Fischer (1875).
Wossowzky (1876) introdujo la mezcla hematoxilina y eosina en una tincin.

Converisin de hematoxilina en hematena

El colorante no es realmente la hematoxilina sino la hematena, la cual se consigue durante

la preparacin del colorante mediante la oxidacin qumica de la hematoxilina, aunque
tambin se puede obtener por oxidacin del oxgeno atmosfrico dejndola madurar
durante 6 a 8 semanas. El yodato sdico es el agente oxidante ms comnmente usado (0.2
g oxidarn a 1 g de hematoxilina). Otros son la iodina, el perxido de hidrgeno, o el
permanganato potsico. Esta oxidacin continuar por la accin atmosfrica y si el
colorante es muy viejo se puede producir una sobreoxidacin que resultar en malas
tinciones. Esta tasa de oxidacin se puede reducir aadiendo glicerol o un alcohol a la
solucin. Normalmente se aade la mitad del oxidante necesario para oxidar toda la
hematoxilina de la solucin por lo que con el tiempo se ir produciendo ms hematena sin
riesgo de sobreoxidacin, y el colorante se podr usar durante mucho tiempo.

La hematena en solucin tiene un color rojo a pH menor que 1, amarilla a un pH entre 1 y

5, y violeta a un pH por encima de 6. Sin embargo, la hematena no tie por s sola, sino
que necesita iones metlicos cargados negativamente, y que actan como mordiente.
Normalmente estas sales sonde aluminio (como el alumbre de amonio o de potasio) o de
hierro (cloruro frrico o alumbre de hierro). Las soluciones que contienen metales y
hematena se llaman hemalumbres. Otros mordientes menos frecuentes son el alumbre de
cromo y el cido fosfotngstico. La hematoxilina con mordiente de aluminio se usa para
resalta ncleos, los mordientes de hierro permiten teir ncleos en ambientes cidos, para
las estras musculares. Con cido fosfotngstico se usa para las estras musculares, fibrina y
fibras gliales. El color de la tincin con hematoxilina se puede cambiar mediante su
combinacin con los mordientes. As, cuando se mezcla con alumbre de aluminio se
consigue un color azul, el alumbre de hierro da un color negro y las sales de estao dan un
color rojo.

Tincin hematoxilina-eosina
La tincin hematoxilina-eosina corresponde a la mezcla de hematoxilina y eosina. La
tincin hematoxilina y eosina es uno de los mtodos ms populares de tincin utilizado en
histologa y medicina diagnstica.

El mtodo supone la aplicacin de la tincin de hematoxilina, que por ser catinica o

bsica, tie estructuras cidas (basfilas) en tonos azul y prpura,como por ejemplo los
ncleos celulares; y el uso de eosina que tie componentes bsicos (acidfilos) en tonos de
color rosa, gracias a su naturaleza aninica o cida, como el citoplasma.

Tcnica
Sumergir los preparados histolgicos en xilol para eliminar los excesos de parafina.
El xilol es un alcohol txico pero existen reactivos (como el Hemo-D) que ejercen
la misma funcin aclarante de parafina sin la toxicidad del xilol.

Luego pasan por una serie de alcoholes en concentracin decreciente para rehidratar
la muestra (100, 95 y 70).

Se lava en agua para eliminar exceso de alcohol

Se sumerge en hematoxilina por 10 minutos, luego se lava en agua para eliminar

excesos y se pasa rpidamente por alcohol cido.

Se lava nuevamente

Se sumerge 30 segundos en eosina.

 Se pasa por otra serie de alcoholes, esta vez en orden creciente (70, 95 y 100)
para deshidratar la muestra y que se pueda realizar el montaje con un pegamento no
soluble en agua.

Finalmente se deja remojar 10 minutos en xilol, antes de realizar el montaje final.

Resultados
Ncleo celular: Violeta

Citoplasma: Rosa

Musculatura: Rojo , rosa o fucsia

Glbulos rojos: Rojo, anaranjado

Fibrina: Rosa