UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA

DE MXICO
FACULTAD DE QUMICA
ANALTICA EXPERIMENTAL II (1607)
SEMESTRE 2017-1

PRCTICA
DETERMINACIN DE PARMETROS CROMATOGRFICOS EN
CROMATOGRAFA DE LQUIDOS DE ALTA EFICIENCIA

EQUIPO: LOS YA MERITO

GRUPO:17

INTEGRANTES: CABRERA HERNANDEZ MARIO EDUARDO

CARDOSO GARCIA GUILLERMO
MAGAA ESCAMILLA DANA
FERNANDA
LOPEZ SANCHEZ MANUEL ENRIQUE

FECHA DE ENTREGA: 21/NOVIEMBRE/2016

OBJETIVOS

Identificacin y conocimiento de la funcin de las principales partes que

constituyen el cromatgrafo de gases
Comprensin de la informacin que se puede obtener de un
cromatograma
Obtener los parmetros cromatogrficos y ver su relacin con la
separacin que se logra
Conocer las ventajas y limitaciones de la tcnica de cromatografa de
lquidos

INTRODUCCIN

La cromatografa de lquidos de alta eficiencia es la tcnica analtica de

separacin ms ampliamente utilizadas. La cromatografa de lquidos se
utilizaba bsicamente para separar compuestos polares, siendo la fase
estacionaria de un carcter altamente polar y la fase mvil poco polar. Pero en
1950 los cientficos Howard y Marlin revirtieron la polaridad de las fases con lo
que surgi la cromatografa de fase reversa; aquella en la que la fase
estacionaria es no polar y la fase mvil es polar. Entonces, a la primera
modalidad de cromatografa se le empez a conocer como cromatografa de
fase normal.

Uno de los componentes bsicos de un cromatgrafo de lquidos es el detector

el cual permite medir a la salida de la columna una propiedad fsica del
eluyente, que deber depender de la composicin de este. El detector de UV-
VIS se fundamenta en que cuando se hace pasar una radiacin
electromagntica a travs de compuestos que presentan determinados grupos
funcionales, estos experimentan una excitacin electrnica a causa de la
absorcin de energa, a una longitud de onda que ser especfica para cada
grupo funcional. Esta energa, provoca el paso de un electrn desde el estado
basal hasta un nivel de energa superior. La absorcin de energa, se traduce
en una disminucin de la intensidad del haz luminoso que se ha hecho pasar a
travs de la muestra, pudindose medir esta disminucin de intensidad
haciendo incidir el haz sobre una fotocelda.

En los detectores de absorcin ultravioleta, la lnea de base representa la

mxima transmisin de luz, y cualquier desviacin de ella indicar prdida o
absorcin de radiacin. Estos detectores pueden ser de diferentes tipos como
el de longitud de onda fija, de longitud de onda variable que usa lmparas de
deuterio o bien, de matriz de diodos.

Otro de los componentes fundamentales son las bombas las cuales se pueden
clasificar acorde a su fuerza motriz en: Bombas neumticas donde hay bombas
de desplazamiento directo y bombas amplificadoras de aire; las otras son
bombas de motor elctrico donde se encuentran bombas de jeringa o bombas
alternantes (pistn o membrana)
MATERIAL Y EQUIPO

Material: Equipo:
1 matraz aforado de 25 mL Cromatgrafo de lquidos
2 Perillas de goma para o Columna: Empacada
pipeta Pasteur con fase estacionaria
1 tapn horadado para C18 (octadecil de
matraz kitasato de 500 ml tendencia no polar)
Esptula o Longitud: 30 cm.
Sistema de filtrado Millipore o Dimetro: 1/4 de
1 Jeringa de 100 ul para pulgada.
cromatografa de lquidos
Reactivos:
2 Pipetas Pasteur
Ac. actico 1% (filtrado)
1 Kitasato de 500 ml
Cafena
2 Vasos de precipitado de 50
Cafena
ml
Ac. Acetilsaliclico
2 Naves para pesar
Fase mvil:
55% H2O
45% MetOH

Detector
=254nm
 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

A. Preparacin de estndar

Se pesaron 20.2 mg de cafena y Se

319.8 mg de ac
disolvieron enacetilsaliclico Se disolvieron
metanol en un matraz en metanol
volumtrico en un matraz vol
de 50 mL

Se complet hasta la marca de aforo Se

concoloc
metanol
en un matraz volumtrico
De la de 50 mL anterior se tom una
disolucin

B. Preparacin de la muestra

Se pesaron 5 tabletas
Se colocaron
de Aspirina
en mortero
Se pes
para410
triturar
mg y se
homogeneizar
colocaron en matraz Phillips a

Se filtr
Se tom una a un de
alcuota matraz
4 mL volumtrico de 50 mL y se llev
Se al aforoen
coloc con
unmetanol
Sonicador p

Se coloc en un matraz volumtrico de 50 mL y se llev al aforo con metanol

RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS

 Parmetros cromatogrficos
Estandar

Ilustracin 1. Cromatograma 1 de la Ilustracin 2. Cromatograma 2 de la

muestra muestra

TIEMPO MUERTO
t0= 1.193 min

TIEMPO DE RETENCION
TRAAS= 1,787 min
TRAS= 3,305

ANCHO DE BASE

1
Wb AAS= 11.4 seg= 0.19 min Wb 2 = Wb*0,9493=0,1803min
 1
Wb AS= 13.6 seg=0.226 min Wb 2 = Wb*0,9493=0,2145 min

NUMEOR DE PLATOS TEORICOS

2 2
TR
N AAS 16 ( )Wb = 16 ( 1,787 min
0,19 min ) =1415.34

2 2

N AS 16 ( WbT )
R
= 16 ( 3,305 min
0,226 min ) =3421.73

TIEMPO DE RETENCION CORREGIDO

Tr AAS= TR-T0= 1,787 min 1,193 min= 0,594 min

Tr AS= TR-T0= 3,305 min 1,193 min= 2,112 min

FACTOR DE RETENCION

Tr 0,594 min
kAAS= T0 = 1,193 min = 0,497

Tr 2,112 min
kAAS= T 0 = 1,193 min = 1,770

FACTOR DE SELECTIVIDAD

Tr AAS 0,594 min

= Tr AS = 2,112 min = 0,2812

RESOLUCION DE COLUMNA

2( TRASTRAAS) 2(3,305min1,787 min)

Rs= =
(WbAS +WbAAS) = (0,226 min+0,19 min) 7,29