LOS ACTINOMICETOS

1. GENERALIDADES:
DEFINICION:
Son microorganismos procariotas, presentan formas bacilares, filamentosas,
ramificadas. Su crecimiento es muy lento que el de otras bacterias. Son
prolferos en cuanto a la produccin de antibiticos. Ineralizan la materia
orgnica que hongos y bacterias verdaderas generalmente no degradan.

ECOLOGIA:
ECOLOGIA Y DISTRIBUCION EN LA NATURALEZA:

Los actinomicetos son microorganismos muy ubicuos que se encuentran sobre

todos

los

sustratos

naturales

corrientes.Aunque

las

primeras

cepas

de

actinomicetos fueron aislados de fuentes humanas y animales, es el suelo el que

constituye su servicio ms rico a partir del cual estos microorganismos pueden
invadir numerosos ambientes.
a) SUELOS:
Los actinomicetos son ampliamente propagados en todos los suelos con
excepcin de los lugares expuestos a condiciones demasiado extremas.
Su nmero y proporcin en la microflora telrica depende de numerosos
factores entre los cuales los principales son:
- La naturaleza y abundancia de materia orgnica.
- La profundidad; entre 2 y 15 cm es generalmente a profundidad ptima.
- El pH, los actinomicetos prefieren un pH correspondiente entre 7 y 8.
- La aireacin y la humedad; la mayor parte de los actinomicetos son
aerobios y prefieren tasas de humedad del orden del 10 al 30%.
b) MEDIOS MARINOS:
Existen una flora de actinomicetos propios de los sedimentos marinos
caracterizados por su tolerancia a la presin, su halofilia y una temperatura
ptima baja; as, ciertas cepas nocardioformes aisladas a ms de 2000 metros
de profundidad se desarrollan bajo presiones hidrostticas de 500 bares en
presencia de agua de mar de 18C.
c) AGUAS DULCES:
Los actinomicetos estn presentes en los sedimentos de los fondos fluviales o
lacustres donde juegan un papel importante en la descomposicin de los restos
vegetales y dan al agua su olor a tierra y su sabor.
d) AIRE:
La presencia de actinomicetos en el aire, en forma de propagulos, es
proporcional a la cantidad de polvo dispersado por el viento.

e) PATOGENOS:

Los actinomicetos pueden causar enfermedades a los vegetales, los animales

y el hombre.
DETERMINATES ECOLOGICOS:

Para los actinomicetos el status de materia orgnica, pH, humedad y

temperatura son los determinantes ecolgicos principales. La estacin del ao
y la profundidad en el perfil, son importantes, pero la funcin de estas variables
parece ser, en gran medida, resultado de las interacciones entre los
determinantes primarios.
Los actinomicetos son afectados directamente por la presencia de carbono
aprovechable y se presentan en cantidades especialmente grandes en terrenos
con abundante materia orgnica. La relacin con nutrientes orgnicos tales
como derivados proteicos, restos de cultivo y estircol animal aumentan la
abundancia de actinomicetos.
Los hongos y otras bacterias por lo general proliferan inicialmente, en particular
si el nitrgeno es abundante, mientras que la respuesta de los actinomicetos no
es favorecida sino hasta las etapas finales de la descomposicin. Esto sugiere
que la elevada velocidad de crecimiento y la versatilidad bioqumica de algunas
bacterias y hongos hacen de ellos los agentes iniciales de la destruccin,
mientras que los actinomicetos solo aparecen cuando ya han sido
metabolizados los compuestos ms fcilmente desagradables y la crisis
competitiva ha disminuido.
Como grupo, los actinomicetos no toleran valores bajos de pH y el tamao de
la comunidad est relacionada inversamente a la concentracin del ion
hidrogeno. Las condiciones neutras o alcalinas favorecen el desarrollo
vegetativo y la poblacin es ms abundante en suelos con valores de pH de
aproximadamente 6.5 a 8.0.
El contenido de humedad es otro determinante ambiental crtico. En
condiciones de inundacin o en lugares donde la humedad est muy elevada,
estos microorganismos aparecen raramente. Esto es consecuencia de que
todos los actinomicetos comunes del suelo tienen metabolismo aerobio y
consecuentemente son incapaces de desarrollarse y de diseminarse cuando el
O2 libre es escaso. Por el contrario, los niveles bajos de humedad favorecen a
los grupos filamentosos tanto en su desarrollo vegetativo como en la formacin
de conidios.
En cuanto a la temperatura los actinomicetos mesofilos crecen poco a 5C y
prcticamente nada a 39C. El intervalo ptimo es por lo general de 28 a 37.
BIOLOGIA DEL DESARROLLO:
Todos los actinomicetos tienen una estructura celular parecida a la de las bacterias
Gram positivas; no tienen membrana nuclear, no tienen mitocondrias, no tienen
retculo endoplasmtico pero si poseen un material nuclear que corresponde a
cuerpos cromatinicos, ribosomas y estructuras parecidas a mesosomas.
En la mayora de actinomicetos se observan dos caractersticas principales:
La presencia del micelio (del sustrato y areo) y la formacin de esporas.

1.1 MICELIO DEL SUSTRATO Y MICELIO AEREO:

 El micelio del sustrato, tambin denominado micelio vegetativo o

primario, se desarrolla a partir del tubo de germinacin proveniente de
la espora y est anclado en el soporte solido de donde toma sus
nutrientes. Las hifas tienen un dimetro que vara de 0.2 a 0.8um.
Tiene una apariencia gelatinosa, en ocasiones seca presentando varios
tamaos, formas y grosores. El color del crecimiento puede ser blanco o
crema, en algunas ocasiones amarillo, rojo, rosado, naranja, verde o caf.
Adicionalmente produce algunos pigmentos que difunden en el medio de
cultivo. Algunos de estos pigmentos son cafs u oscuros, los cuales son
formados por complejos orgnicos con el medio de cultivo y son resultado de
la accin de algunas enzimas del tipo de la tirosinasa, las cuales son capaces
de oxidar algunos constituyentes orgnicos del medio que generan color.
El micelio areo, tambin llamado micelio secundario est formado por
hifas erguidas sobre el micelio del sustrato. Estas hifas areas son ms
largas y mucho menos ramificadas que las hifas del sustrato, en
general son pigmentadas (blanco, gris, naranja, rojo, lila, verde),
encerradas en una envoltura externa hidrfoba y con un dimetro entre
1 y 1.4um. El micelio areo le da a la colonia la apariencia algodonosa
o pulverulenta, de un granulado muy fino.
En las hifas sean del micelio del sustrato o en el areo se pueden observar
dos tipos principales de septacin formadas por:
a) Una simple pared interna que genera compartimientos aislados que no se
separan como los que se presenta sobre todo en las hifas del sustrato y
separan las partes viejas del micelio.
b) Una doble pared interna, mayormente en el micelio areo y conduce a la
separacin de los elementos delimitados. Se encuentra asociada a la
esporulacin (streptomyces) y a la fragmentacin.
FORMACION DE LAS ESPORAS:
Los diversos tipos de esporas de los actinomicetos puede clasificarse en
dos grupos segn su modo de formacin: exosporas y endosporas.
a) EXOSPORAS:
Se forman por septacin de las hifas existentes y separacin de los
elementos obtenidos. A su vez pueden ser divididas segn la ausencia
o la presencia de una envoltura recubriendo la pared de la hifa
esporogena:
Formacin de exosporas por fragmentacin de hifas con
envoltura: streptomyces, Actinoplanes.
Formacin de exosporas por fragmentacin de hifas sin
envoltura: Micromonospora.
b) ENDOSPORAS:
Estas esporas producidas por los actinomicetos termfilos son
parecidas a las de bacillius, con cido dipicolnico y una pared externa
gruesa, multicapa, muy residente que envuelve el crtex, la membrana
citoplasmtica, el sistema membranario intracitoplasmtico, los
ribosomas y el nucleoide. Se forman en el citoplasma de la hifa
despus de la reorganizacin de este y construccin de una nueva
pared interna (thermoactinomyces).

FISIOLOGIA DE LAS ESPORAS DE LOS ACTINOMICETOS:

Las esporas de actinomicetos tienen una funcin de dispersin y de
supervivencia en condiciones desfavorables para el crecimiento
vegetativo. La variabilidad d las esporas es funcin de su tipo:
endosporas de thermoactinomyces han sobrevivido varios cientos de
aos en sedimentos lacustres a 5C. Comparativamente, exosporas
secas de streptomyces sobreviven de 20 a 30 aos.
FACTORES QUE CONTROLAN LA ESPORULACION:
La esporulacin es controlada por factores exteriores al
microorganismo y por factores propios de esta.
Entre los elementos exteriores que favorecen la esporulacin
son: las fuentes naturales de nitrgeno, la desecacin, una
concentracin elevada de agar, el glicerol como fuente de
carbono, la adicin de carbonato clcico y extracto de suelo, la
presencia de magnesio, hierro y de manganeso, un pH
ligeramente alcalino (7.5).
Los factores propios del microorganismo son de orden gentico
y bioqumicos. En streptomyces coelicolor, una decena de
genes cromosmicos participan en el mecanismo de la
esporulacin; en cambio, los genes implicados en la formacin
del micelio areo y la esporulacin streptomyces alboniger
serian de naturaleza plasmdica.
Tambin se ha demostrado la presencia de biorreguladores
codificados por genes cromosmicos o plasmdicos que influyen
de manera compleja sobre la esporulacin; sobre la
diferenciacin celular o sobre la biosntesis de metabolitos
secundarios.
ESPORULACION EN CULTIVO SUMERGIDO:
Las esporas formadas en cultivo sumergido son parecidas pero no
idnticas a las esporas areas.
Las esporas obtenidas en cultivos sumergidos son sensibles a la lisozima al
contrario que las esporas areas.
GERMINACION DE LAS ESPORAS
Las esporas germinan para dar lugar a un micelio. Tiene cuatro etapas: la
activacin, la iniciacin, la emergencia del tubo de germinacin y el crecimiento
de este.

EXOSPORAS: Sensibles al medio. Cuyo letargo es de tipo exgeno

Germinan por un choque trmico. Iniciacin en presencia de: L-alanina,
adenosina, ac. Glutmico, ac. Para-amino benzoico, iones Ca+2, Mg+2 y
CO2

ENDOSPORAS: Cuyo letargo es constitutivo. Activacin especifica de

naturaleza fsica. Germinan en condiciones de medios favorables.
Enfriamiento a 20C .Choque trmico de 55C.

METABOLISMO:
Dos de las propiedades ms significativas de los actinomicetos son su
capacidad para desarrollarse sobre los sustratos ms diversos y su aptitud
para sintetizar numerossimos metabolitos bioactivos entre los cuales se
encuentran los dos tercios de los metabolitos producidos por microorganismos.
METABOLITO PRIMARIO:
El metabolismo primario corresponde al conjunto de las vas catablicas,
anfibolicas y anablicas que suministran al organismo la energa y las
molculas necesarias para su crecimiento. El metabolismo primario de los
actinomicetos es parecido al de los otros microorganismos. La accin de las
enzimas del catabolismo conduce a la degradacin de los nutrientes y fuentes
de energa ms o menos complejos. Los productos finales del catabolismo se
utilizan para formar intermediarios primarios o glcidos, aminocidos, cidos
grasos, nucletidos, vitaminas y otros polmeros esenciales que derivan de
ellos como los polisacridos, protenas, lpidos, cidos nucleicos as como
coenzimas.
Estos metabolitos primarios forman la estructura celular, permiten el
funcionamiento del metabolismo general y algunos de ellos constituyen la
materia prima del metabolismo secundario.
Como la mayora de las bacterias, los actinomicetos utilizan fuentes de
carbono clsicas (carbohidratos, polialcoholes, sales de cidos orgnicos)
fuentes de nitrgeno (aminocidos, protenas, sales de amonio y nitratos);
fuentes de fosforo y azufre (fosfatos y sulfatos respectivamente).
Adicionalmente los actinomicetos tienen la capacidad de degradar
hidrocarburos y asimilados (alcanos, alquenos, alquinos, ciclanos, terpenos),
compuestos nitrogenados no aromticos (nitritos, amidas heterocclicas),
compuestos aromticos, (hidrocarburos arilalifticos, aminas aromticos,
fenoles heterocclicos), esterales y esteroles.
METABOLISMO SECUNDARIO:
Los metabolitos secundarios son definidos como compuestos de bajo peso
molecular, no esenciales para el crecimiento del microorganismo productor y
cuya sntesis est a menudo asociada a un crecimiento limitado
correspondiente a la fase estacionaria de la curva de crecimiento. Esta fase de
produccin de metabolitos secundarios se llama idiofase, denominndose
idiolitos los metabolitos secundarios producidos entonces. La fase de
crecimiento rpido que precede a la idiofase se llama tropofase. El conjunto de
los metabolitos secundarios conocidos corresponde a una gran diversidad de
familias compuestos orgnicos sobre todo aminoazcares, epxidos,
alcaloides, quinonas, glucsidos, lactonas, macrlidos, nucleosidos, pptidos,
fenazinas, polienos, pirroles, quinolinas, tetraciclinas, naftalenos, etc.
A pesar de la diversidad de sus estructuras qumicas y de sus actividades
biolgicas, los metabolitos secundarios son sintetizados a partir de un pequeo
nmero de precursores directamente provenientes del metabolismo primario

que son transformados gracias a tres tipos principales de reacciones qumicas:

oxidaciones reducciones, metilaciones y halogenaciones, a travs de una
media docena de vas principales (clasificadas en base al origen del carbono).
Incorporacin del esqueleto carbonado completo de la glucosa para
firmar ya sea el conjunto del metabolismo secundario (estreptomicina y
otros aminoglicosidos) o ya sea una parte a menudo correspondiente a
un glcido ligado a un esqueleto carbonado proveniente de otra va
(eritromicina y otros macrlidos).
Utilizacin de la va del cido shikmico para la biosntesis de la parte
aromtica de ciertos metabolitos (novobiocina, cloranfenicol).
Utilizacin de la va de los polictidos para acceder a otros metabolitos
con ciclos aromticos (tetraciclinas).
Conversin o incorporacin de aminocidos (cefamicinas y cicloserina).
Utilizacin de la va de las pentosas para la biosntesis de metabolitos
nucleotidcos (tubercidina).
Utilizacin de la va de los terpenos y de los esteroides (geosmina).

2. BIOQUIMICA
RELACION ENTRE EL METABOLISMO PRIMARIO Y SECUNDARIO:
La mayora de los metabolitos secundarios son molculas orgnicas complejas
que para su formacin requieren un gran nmero de reacciones enzimticas
especficas.
Se sabe, por ejemplo que en la sntesis del antibitico tetraciclina estn
implicados al menos 72 pasos enzimticos separados y ms de 25 en la
sntesis de la eritromicina. Sin embargo, las vas metablicas de estos
metabolitos secundarios arrancan de metabolitos primarios, porque los
materiales de partida para el metabolismo secundario vienen de las vas
biosintticas principales. Observemos la figura:

 En el extremo superior izquierdo podemos observar que para la sntesis

de aminoglucsidos como la estreptomicina se incorpora el esqueleto
carbonado completo de la glucosa 6 P.
La estreptomicina es un antibitico formado por tres azucares de las
cuales dos son portadores de grupos laterales nitrogenados
(aminoazcares). Estos tres azucares son formados en vas diferentes y
posteriormente como subunidades se juntan al final del proceso.
Para las vas I y II se utiliza el esqueleto carbonado de la glucosa 6 P a
las que se les incorpora dos grupos guanidina y un grupo metilo de la
arginina y metionina respectivamente.
Recordemos que la arginina proviene del precursor X cetoglutarato y la
metionina del oxalacetato, ambos del ciclo de Krebs.
En la va II al esqueleto carbonado de la glucosa 1 P se incorpora un
nucletido cuyo precursor es la ribosa fosfato de la va de la pentosa
fosfato.
En el extremo superior derecho observamos el caso de antibiticos
como la candicina, nistatina, cloranfenicol, mocardicina, novobiocina
para cuya sntesis se utiliza la va del cido shikmico (aa aromticos).
El fosfoenolpirvico (proveniente de la glucolisis) se une con la eritrosa
4 fosfato (proveniente de la va de la pentosa fosfato) y originan el cido
shikmico. Esta a su vez da lugar al cido corsmico el cual se puede
convertir en cido prefnico precursor de la tirosina y fenilalanina o bien
por perdida de la cadena lateral en el cido antranlico precursor del
triptfano. Algunos antibiticos derivan de intermediarios de esta va
como por ejemplo, del cido shikmico, la rifomicina del cido corsmico,
la candicina y cloranfenicol. Por el contrario otros antibicos derivan de
los productos finales de la va tal es el caso de la actinomicina a partir
del triptfano y la novobiocina a partir de la tirosina.
En la parte media izquierda observamos la va donde para la sntesis de
antibiticos se incorporan aminocidos (cefomicina).
Recordemos que los aminocidos se originan a partir de los esqueletos
carbonados provenientes bien de la ruta glicoltica o del ciclo de Krebs.
En el primer caso los precursores pueden ser acido 3 fosfoglicrico,
fosfoenolpirvico + eritrosa 4 fosfato, piruvato.
A partir del cido 3 fosfoglicrico se origina la serina a la cual se le
incorpora H2S y origina la cristera.
A partir del piruvato se origina la valina.
Y estos aminocidos van a ser incorporados para la biosntesis de
antibiticos como la cefamicina.
En el extremo inferior derecho observamos el uso del esqueleto
carbonado de la glucosa con una parte del esqueleto carbonado
proveniente de la oxidacin de los cidos grasos para la sntesis de los
macrlidos como la eritromicina.
Los macrlidos estn formados por azucares (6 desoxihexosas)
unidos glicosdicamente a un anillo lactnico (aglicona) de 12, 14, 16 o
17 miembros. El anillo lactnico, en el caso de la eritromicina tiene
como unidad de partida el propionil CoA en forma de acetil CoA
proveniente de la oxidacin de los cidos grasos. Posteriormente se
condensan seis molculas de 2 metilmalonil CoA originando un
poliktido sobre un complejo polienzimtico llamado lactona sintasa.
Despus, la eritronlida B se une con el esqueleto carbonado de la
glucosa originando eritromicina D. Al sufrir una metilacin origina

eritromicina B y al sufrir hidroxilacion origina la eritromicina C que

posteriormente pos accin de una transmetilasa origina la eritromicina
A.

3. BIOPROCESO:
Produccin de la tetraciclina
Tetraciclina antibitico de primera procesos de produccin industrial ms interesantes
y de limitada difusin donde se detallan, el proceso de propagacin del
microorganismo productor, tanto a nivel de laboratorio como en tanque germinador; y
el proceso de recuperacin del antibitico.

PROCESO DE PRODUCCIN DE LA TETRACICLINA:

1. LABORATORIO DE FERMENTACIN.
a) Placas de Petri.
b) Cultivos maestro y de trabajo.
c) Inculo.
2. PLANTA FERMENTACIN.
a) Germinador de primera etapa (Germinador-A).
b) Germinador de segunda etapa (Germinador-B).
Tanque fermentador o birreactor de produccin.