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GRUPO 11
TIPOS DE LABORATORIO
Clasificacin de los laboratorios
Teniendo en cuenta el amplio espectro de laboratorios que existen, los podemos clasificar,
teniendo en cuenta su funcin, de la siguiente manera:
1. Laboratorios de metrologa: en ellos se efectan estudios tanto de las unidades y las
medidas de las magnitudes, como de las exigencias tcnicas de los mtodos e instrumentos
que se usan para la medicin. Los laboratorios de este tipo se clasifican jerrquicamente
teniendo en cuenta cul es la calidad de sus patrones:
De acuerdo a su dependencia:
LABORATORIOS
DE
RUTINA
O
DE
Los laboratorios de rutina tienen cuatro departamento
bsicos: Hematologa, Inmunologa, Microbiologa y
Qumica Clnica (o Bioqumica).
Los laboratorios de rutina pueden encontrarse dentro
de un hospital o ser externos a ste. Los laboratorios
hospitalarios, con frecuencia tiene secciones
consideradas de urgencia, donde se realizan estudios
que servirn para tomar decisiones crticas en la
atencin de los pacientes graves. Estudios tales
SEGUIMIENTO.-
tiempos
LABORATORIOS DE ESPECIALIDAD.
En los laboratorios de pruebas especiales se realizan estudios ms sofisticados,
utilizando metodologas como amplificacin
de cidos nuclicos, estudios cromosmicos,
citometra de flujo y cromatografa de alta
resolucin, entre otros. Estas pruebas
requieren instalaciones y adiestramiento
especial del personal que las realiza. Con
frecuencia, estos laboratorios forman parte
de programas de investigacin.
DE FSICA:
Las propiedades fsicas y qumicas del medio o sustancia donde se encuentran los
microorganismos, tambin tienen una profunda influencia sobre la eficacia de la
destruccin microbiana, por ejemplo, el calor es mucho ms eficaz en materiales cidos que
en materiales alcalinos.
La consistencia del material influye notablemente en la penetracin del agente. La
presencia de material orgnico puede reducir significativamente la eficacia de un agente
qumico, ya sea inactivndolo o protegiendo de l a los microorganismos si estn presentes.
Limpieza de material reusable no contaminado
La limpieza se define como el proceso de remover, a travs de medios mecnicos y/o
fsicos, el polvo, la grasa y otros contaminantes de las superficies, equipos, materiales,
personal, etc. Este proceso, junto con un adecuado proceso de desinfeccin, es
indispensable para controlar la presencia de los microorganismos en el ambiente.
El primer paso del proceso de desinfeccin es la limpieza. La limpieza remueve restos de
tejido, moco, sangre, etc., que podran interferir con la accin del desinfectante.
Para realizar una limpieza adecuada se deben considerar el tipo de accin del agente
utilizado (remocin mecnica, disolucin o detergente), las condiciones requeridas para
aplicar la solucin limpiadora y el tiempo de contacto necesario para que sta ejerza su
efecto.
Los instrumentos con partes removibles debern desensamblarse de acuerdo con las
instrucciones del fabricante, para asegurarse que todas las superficies se expondrn al
procedimiento de limpieza.
Aproximadamente 99.8% del material orgnico puede ser removido con una limpieza
meticulosa. La limpieza puede ser acompaada de lavado manual o mecnico.
Cuatro tipos importantes de recipientes para productos potencialmente infectados :
Cestos o bolsas autoclavables de un solo uso para recibir cultivos y muestras.
Vasijas de un solo uso para recibir portaobjetos, pipetas Pasteur y pequeos artculos a
desechar.
Vasijas altas para pipetas graduadas (reusables).
Bolsas de plstico para materiales combustibles tales como cajas para muestras y
envoltorios que puedan estar contaminados.
Todos estos recipientes deben ir a la seccin de limpieza y esterilizacin para el tratamiento
final y esterilizacin de aquellos potencialmente contaminados.
Eleccin del recipiente :
Las vasijas de desechos deben ser fuertes y esterilizables por autoclave y los
recipientes ms adecuados son los bocales de 1 litro de polipropileno o los tarros del
mismo material con tapa a rosca. Son suficientemente profundos para mantener
sumergidas la mayora de las cosas que es probable se desechen, son irrompibles y
resisten muchas esterilizaciones por autoclave. Son mejores los tarros de
polipropileno con tapa a rosca, ya que pueden cerrarse despus de su uso, invertirse
para asegurar que el desinfectante est en contacto con el material.
Un recipiente de desecho de 1 litro debe contener 750 ml de desinfectante diluido,
dejando espacio para que ascienda el nivel sin que se derrame ni que gotee cuando
se traslade.
Nunca deben aadirse grandes volmenes de lquido a los desinfectantes diluidos.
Lquidos tales como los sobrenadantes de la centrifugacin, deben verterse en
vasijas de desecho, que contienen el volumen usual de desinfectante puro, a travs
de un embudo adaptado en la parte superior de la boca. Esta disposicin impide se
derramen gotas y se formen aerosoles.
No debe agregarse a los desinfectantes artculos que contengan grandes cantidades
de protena, sino que deben desinfectarse en el autoclave o incinerarse.
Ningn material debe dejarse en el desinfectante de la vasija de desecho durante
ms de 24 horas, ya que en caso contrario se desarrollarn las bacterias
supervivientes. Por tanto, todas las vasijas deben vaciarse una vez al da, aunque es
una cuestin particular s se hacen al final del da o a la maana siguiente.
Las vasijas para las pipetas recuperables deben estar hechas de polipropieno o de
goma. Son de mayor seguridad que el vidrio. Las vasijas deben ser suficientemente
altas para permitir que las pipetas se sumerjan totalmente sin que se derrame el
desinfectante. Debe aadirse al desinfectante un detergente compatible para facilitar
la limpieza de las pipetas en la fase final.
Desinfeccin
De acuerdo a su definicin, la desinfeccin se emplea cuando se tratan los
instrumentos de uso mdico, utensilios, paredes y pisos de las habitaciones de los
enfermos, etc., con el propsito de evitar una posible infeccin. Para realizar este
proceso se usan agentes qumicos (desinfectantes) o procesos fsicos como el calor.
Sanitarizacin usualmente se refiere al proceso empleado para reducir el contenido
de microorganismos viables remanentes en una superficie limpia. En la industria se
emplea este trmino cuando se tratan, con agentes qumicos o fsicos, las reas
de produccin y los equipos empleados en la elaboracin de productos, con el
propsito de reducir el contenido microbiano hasta niveles insignificantes.
Limpieza de Equipos : El personal de limpieza y desinfeccin tambin ser
responsable de la limpieza de los equipos de laboratorio, tales como las
refrigeradoras, autoclave ( reas no tcnicas ), hornos, etc , lo cual debe realizarse al
menos una vez al mes y en coordinacin con los jefes de cada seccin del
laboratorio.
ESTERILIZACIN
Proceso mediante el cual se eliminan todas las formas de vida de los microorganismos de
un objeto o de una sustancia para evitar su reproduccin.
ASEPSIA: Libre de microorganismos.
MICROORGANISMOS
Microorganismo, ser vivo que slo se puede observar utilizando microscopios pticos o
electrnicos. Los microorganismos se clasifican en:
Las bacterias y cianobacterias (o algas verde azuladas) pertenecen al reino Mneras.
Son organismos con clulas procariticas y presentan una gran variedad de formas
de vida.
Los hongos y las levaduras, son microorganismos que pertenecen al reino Hongos.
Estos seres tienen una gran importancia econmica por el uso industrial en la
fabricacin de antibiticos y productos alimenticios como el pan o el vino, o por las
prdidas que producen al descomponer alimentos.
Los virus son un tipo de microorganismo peculiar. No tienen metabolismo y son
parsitos intracelulares que causan un gran nmero de enfermedades en las
personas, los animales y las plantas. Y por ltimo los parsitos, los cuales viven a
expensas de otros microorganismos.
MTODOS DE ESTERILIZACIN
Comprende todos los procedimientos fsicos, mecnicos y preferentemente qumicos, que
se emplean para destruir grmenes patgenos. A travs de esta, los materiales quirrgicos y
la piel del
enfermo
alcanzan
un
estado
de
desinfeccin
que
evita
la contaminacin operatoria. Hay varias formas de esterilizar como:
MTODOS QUMICOS
Estos mtodos provocan la perdida de viabilidad de los microorganismos.
Hipoclorito de Sodio: Es el ms utilizado por su fcil adquisicin y por su
efectividad en la desinfeccin. Vida media 20 minutos.
xido de etileno: Destruye todos los microorganismos incluso virus.
Aldehdos: Son agentes alquilantes que actan sobre las protenas. Estos
compuestos destruyen las esporas.
Glutaraldehdo: Este mtodo tiene la ventaja de ser rpido y ser el nico
esterilizante efectivo fro.
Formaldehdo: Las pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 36
horas.
Gas-plasma de Perxido de Hidrgeno: Es proceso de esterilizacin a baja
temperatura la cual consta en la transmisin de perxido de hidrgeno en fase
plasma.
Alcohol: Esteriliza superficies, pero se evapora fcilmente.
MTODOS FSICOS
Calor: La utilizacin de este mtodo y su eficacia depende de dos factores:
el tiempo de exposicin y la temperatura. Todos los microorganismos son
susceptibles, en distinto grado, a la accin del calor. El calor provoca
desnaturalizacin de protenas, fusin y desorganizacin de las membranas
y/o procesos oxidantes irreversibles en los microorganismos.
Calor Hmedo: El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de
protenas.
-Autoclave
El Autoclave es el aparato ms comnmente utilizado en los laboratorios para
esterilizar cultivos y soluciones que no se desnaturalicen a temperaturas mayores a
100C. Una temperatura de 121 C ( 15 Lbs de presin) con un tiempo
de exposicin de 15 minutos sirve para destruir microorganismos, incluso los
formadores de esporas.
Calor seco: El calor seco produce desecacin de la clula, es esto txico por niveles
elevados de electrolitos, fusin de membranas.
-Estufas
-Hornos
Doble cmara, el aire caliente generado por una resistencia, circula por la cavidad
principal y por el espacio entre ambas cmaras, a temperatura de 170 C para el
instrumental metlico y a 140 C para el contenido de los tambores.
Radiaciones: Su accin depende de:
o El tipo de radiacin
o El tiempo de exposicin
o La dosis
o
-Rayos Ultravioletas: Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos. Son
escasamente penetrantes y se utilizan para superficies, se utilizan para la
esterilizacin en quirfanos.
-Rayos Gamma: Su empleo esta basado en los conocimientos sobre la energa
atmica. Filtracin: Se usan membranas filtrantes con poros de un tamao
determinado. El tamao del poro depender del uso al que se va a someter la
muestra.
cidos:
DEFINICIONES
a) Esterilizacin : Proceso que destruye toda forma de vida microbiana. Un objeto estril
(en sentido microbiolgico) est libre de microorganismos vivos.
bacteriana sirve para dar su tamao y forma al organismo as como para prevenir la lisis
osmtica. El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el
peptidoglicano. La pared de la clula gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas
interconectandas de peptidoglicano as como algo de cido teicoico. Generalmente, 80%90% de la pared de la clula gram-positiva es peptidoglicano.
Debido a su importancia en taxonoma bacteriana y a que indica diferencias fundamentales
de la pared celular de las distintas bacterias, describiremos aqu con algn detalle la tincin
de Gram y las interpretaciones que actualmente se hacen sobre el porqu de su
funcionamiento.
Las clulas fijadas al calor sobre un portaobjetos se tien, primero con una solucin de
cristal violeta (otros colorantes bsicos no son tan efectivos) y son lavadas despus para
quitar el exceso de colorante. En este estado, todas las clulas, tanto las grampositivas
como las gramnegativas, estn teidas de azul.
El portaobjetos se cubre entonces con una solucin de yodo-yoduro potsico. El ingrediente
activo es aqu el I2; el KI simplemente hace soluble el I 2 en agua. El I2 entra en las clulas y
forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta. De nuevo tanto las clulas
grampositivas como las gramnegativas se encuentran en la misma situacin.
Para poner de manifiesto las clulas gramnegativas se utiliza una coloracin de contraste.
Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina bsica. Despus
de la coloracin de contraste las clulas gramnegativas son rojas, mientras que las
grampositivas permanecen azules.
Deben destacarse algunos aspectos cruciales de la tincin de Gram:
1) El tratamiento con cristal violeta debe preceder al tratamiento con yodo. El yodo por s
solo tiene poca afinidad con las clulas.
2) La decoloracin debe realizarse con poca agua para evitar que pierdan la tincin las
clulas grampositivas. EI proceso de decoloracin debe ser corto y es esencial un clculo
preciso del tiempo para obtener resultados satisfactorios.
3) Cultivos ms viejo de 24 horas pueden perder su habilidad de retener el complejo cristal
violeta - yodo.
Ya hemos visto que la tincin de GRAM aporta dos ideas bsicas para la deficinin
"taxonmica" de las bacterias: el color que adquieren tras la tincin y la forma que
presentan las clulas bacterianas.
Microorganismos Gram-positivos; cuando aparecen teidos de color azul-violeta y de Gram
negativos; cuando se visualizan de color rojo-rosado.
Formas bsicas en que se puede visualizar la morfologa bacteriana en una tincin GRAM:
-
for
ma
esf
rica
: se
lla
ma
Coc
o
Divisin a lo largo
del mismo plano,
formando cadenas
cortas
2
4 - 20 en
cocos
cadenas:
juntos: Estreptoco
Diploc
cos
ocos
Divisin a
lo largo de
2 planos
diferentes:
Ttradas
Divisin a lo largo de
3 planos
regularme
nte:
Sarcinas
irregular
mente:
Estafiloc
ocos
Forma de
Dos bacilos
vara: se
juntos:
llaman
Diplobacilos
Bacilos
cocobacilos
Cadenas de
bacilos:
Estreptobacilos
Empalizadas,
Bacilos lado con
lado o en figuras
en X, V o Y
Si la espiral es flexible y
ondulada se llama:
Espiroqueta
Cocos Gram-positivos
Racimos:
forma
tpica
Cadenas:
de Staphylococcus sp, como S. aureusforma
tpica
de Streptococcus sp,
como S.
pneumoniae, Strepto
Tetradas: forma coccus grupo B
tpica
de Micrococcus sp
Bacilos Gram-
positivos
Ramificados:
forma
de Actinomycetes y Nocardia,
israelii
tpica
como A.
Cocos Gram-negativos
Bacilos
finos:
forma
usual
enterobacteriaceae, como E. Coli
de
sp,
sp,
Bacilos Gramnegativos
Algunos gneros bacterianos, entre los que destacan Clostridium y Bacillus, producen en su
interior formas de resistencia denominadas endosporas. Se producen cuando las
condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento de los nutrientes, temperaturas
extremas, radiaciones, compuestos txicos, etc.) formndose una espora por cada forma
vegetativa. Al finalizar el proceso de esporognesis, la clula vegetativa se lisa y libera la
espora al exterior. Cuando el ambiente es favorable, la espora germina generando una
nueva forma vegetativa. La capacidad de germinar perdura durante aos. Algunas de las
bacterias productoras de endosporas son patgenas para el hombre, por lo que su estudio y
observacin son de enorme inters.
FUNDAMENTO
Las endosporas poseen unas cubiertas exclusivas que las hacen resistentes a los
factores ambientales adversos. Adems, estas cubiertas hacen que las esporas aparezcan en
el microscopio ptico como estructuras refringentes y de difcil tincin.
La tincin especfica de esporas requiere dos colorantes:
1.- Verde malaquita: capaz de teir las esporas en caliente.
2.- Safranina: colorante de contraste que tie las formas vegetativas.
Las endosporas, tras la primera tincin, no perdern el colorante en el lavado
con agua, y s lo harn las formas vegetativas, que quedarn teidas con el segundo
colorante.
REALIZACIN
Se emplearn cultivos en fase estacionaria para dar lugar a que las bacterias produzcan las
esporas. Esta tincin es delicada en su realizacin y para poder obtener unos resultados
satisfactorios hay que seguir cuidadosamente las instrucciones.
1.
2.
Teir con verde malaquita.
Con unas pinzas de madera colocar
la muestra encima de la llama del
mechero de forma que el colorante
humee durante 5 min.
Nota: evitar que la
muestra hierva. Aadir ms
colorante si ste se evapora; es
importante que la muestra no se
seque.
3.
Lavar con abundante agua el
exceso de colorante.
4.
5.
Lavar con abundante agua el
exceso de colorante.
6.
Secar la preparacin.
7.
Observar la preparacin al
microscopio. Anotar la disposicin y
la morfologa de las tres especies del gnero Bacillus.