TOXICO

DETERMINACION DE LA CONCENTRACION LETAL MEDIA CL 50-48 DEL HERBICIDA
ROUNDUP 747 SOBRE ECOSISTEMAS ACUATICOS MEDIANTE

PRUEBAS TOXICOLGICAS CON DAPHNIA magna
DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN LETAL MEDIA (CL50-48) DEL

HERBICIDA ROUNDUP 747 SOBRE ECOSISTEMAS ACUATICOS MEDIANTE
PRUEBAS TOXICOLOGICAS CON DAPHNIA magna.
CATALINA MARIA GAMEZ ROJAS

EMILCE JINETH RAMIREZ RIVEROS
UNIVERSIDAD DE LA SALLE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTA Y SANITARIA
BOGOT D.C
2008

DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN LETAL MEDIA (CL 50-48) DEL

HERBICIDA GLIFOSATO ROUNDUP 747 SOBRE ECOSISTEMAS ACUATICOS
MEDIANTE PRUEBAS TOXICOLOGICAS CON DAPHNIA magna
CATALINA MARIA GAMEZ ROJAS

EMILCE JINETH RAMIREZ RIVEROS
Trabajo de grado para optar al

Ttulo de Ingenieros Ambientales y sanitarios
Director
PEDRO MIGUEL ESCOBAR MALAVER
QUMICO INDUSTRIAL
LIC. QUMICO Y BIOLOGA
UNIVERSIDAD DE LA SALLE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTA Y SANITARIA
BOGOT D.C
2008

Nota de aceptacin:
Firma del Director de Tesis
Firma del Jurado
Firma del Jurado
Bogot D.C., Diciembre de 2008

3

Gracias a Dios, porque indudablemente ha estado conmigo en cada paso dado.

Hoy y siempre gracias a mi familia, a mis padres, hermanos, tos y muy
especialmente a mis abuelitos Leito y Jos por brindarme el nimo, apoyo, cario
y consejos a lo largo de mi existencia. Soy muy afortunada por recibir su amor y
ejemplo.
A Kike, por ser la persona con la que siempre podr contar, por
soar y crecer
a mi lado. Gracias por creer en m.
Un gracias a
Catalina por haber estado ah, en los momentos tristes y alegres,

por tener siempre tendida su mano amiga.
Llegar al final de este logro,
no hubiese sido posible sin la cooperacin

desinteresada de todas y cada una de las personas que han sido soporte en los
momentos de desfallecimiento, para ellos mi ms sincero agradecimiento.
JINETH RAMIREZ

A mis padres por su comprensin, apoyo

Y por darme en la vida todo lo necesario para lograr mis metas,
A mis hermanas quienes con una palabra, en el momento indicado
Me llenaron de valor para seguir adelante,
A mis cuados por sus sabios y valiosos consejos,
A mi familia en general por su aporte de una u otra forma
En el logro de esta meta para mi vida.
A Juan Jos por llegar a mi vida, por ensearme la verdadera felicidad,
Por cada una de sus sonrisas, abrazos, besos, y por toda su comprensin.
A Sonery por su verdadero amor y por darle a mi vida mi mayor alegra.
A mis amigas quienes me acompaaron no solamente en el crecimiento intelectual
sino tambin en el personal,
A Jineth por su verdadera e incondicional amistad.
Cada uno de los das felices y difciles de mi vida, cada uno de mis triunfos,
Cada una de las personas y Empresas que forman parte de mi vida,
No existiran, de no ser por la presencia
y el amor tan grande de DIOS.
CATALINA GAMEZ

AGRADECIMIENTOS
Al profesor Pedro Miguel Escobar nuestro director de tesis, quien no solamente

nos brindo sus conocimientos sino, todo el apoyo que estuvo en sus manos y
comparti con nosotros sus buenos consejos para seguir adelante.
A los profesores Rubn Daro Londoo y Edwin Beltrn, por su colaboracin en la

contextualizacin de nuestro tema de tesis.
Al grupo de monitores del laboratorio de Ingeniera ambiental y Sanitaria,
encabezado por el laboratorista Oscar Fernando Contento, por su colaboracin
durante el desarrollo de nuestro trabajo de investigacin.
A los investigadores de bioensayos quienes nos colaboraron cuando los

necesitamos.

INTRODUCCIN
Desde 1992, se inicio la prctica de aspersin area con Glifosato bajo la

presentacin comercial de Roundup Ultra aprobada por el Consejo Nacional de
Estupefacientes (CNE). En un principio este herbicida fue asperjado bajo una tasa
de 8 L/ha pero a finales del ao 2002, el CNE aprob el incremento de la
concentracin en la mezcla de aspersin hasta 10,4 L/ha sobre cultivos de coca y
de 2.5. El glifosato adems es usado como madurante de caa, desecante de
granos y para el control de malezas en cultivos de arroz.
Entre 1986 y 1996 el uso del glifosato se triplic en Estados Unidos y en Europa
su uso se increment en 129% entre 1991 y 1995, por las declaraciones de
Monsanto de que el herbicida no es peligroso para los humanos y que es
ambientalmente seguro. Pero de acuerdo con informaciones de Cox (1995) y de
Dinham (1998), existen resultados de investigaciones cientficas acerca de
herbicidas que contienen glifosato, independientes de Monsanto, que contradicen
las indicaciones de la empresa fabricante del veneno y muestran una visin muy
diferente sobre los riesgos de salud y ambientales de estos herbicidas.
Con el auge de la ecotoxicologa - ciencia que predice los efectos de los agentes
potencialmente txicos en los ecosistemas naturales- (Hoffman 1995) se ha
reforzado la idea de realizar monitoreo y pruebas de toxicidad para la deteccin,
prediccin y control de los efectos de diferentes tipos de sustancias sobre los
ecosistemas, en particular el acutico.
En Colombia las Entidades de Manejo y Administracin del Recurso EMAR, son
las encargadas de la realizacin de bioensayos y del establecimiento de la CL50-96
de las sustancias de inters sanitario. Aunque la legislacin existe (Decreto 1594
de 1984) la capacidad de gestin es muy baja y no define con que especies se
deben realizar estas determinaciones. Actualmente, slo algunas entidades
estatales como la Corporacin Autnoma Regional de Cundinamarca C.A.R.
dentro del programa de control de la contaminacin de aguas bajo su jurisdiccin
ha empezado a realizar dichos bioensayos, usando Daphnia magna.
La Daphnia magna tiene varios aspectos biolgicos interesantes que las hace
ideales para los ensayos. A su corta vida (3 o 4semanas) y una vez alcanzada su
madurez se reproduce cada 24 horas aprox. pero la caracterstica ms interesante
es su sensibilidad a los txicos ya que es capaz de detectar la presencia de, por
ejemplo, 0,005 mg. de mercurio en el agua y an menores concentraciones de
numerosos pesticidas y residuos industriales.

Con Daphnia magna se hacen generalmente dos tipos de bioensayos: de

toxicidad aguda y de toxicidad crnica. En los de toxicidad aguda se evala la
concentracin del txico (conocido o desconocido) que es capaz de matar o
inmovilizar el 50 % de la poblacin (CL50 o CE50) en 48 horas. Si un test de
toxicidad aguda no detecta efecto alguno de mortandad o inmovilizacin esto no
siempre significa que el agua analizada no contenga sustancia alguna capaz de
producir otro tipo de dao. Para estos casos se utilizan los test de toxicidad
crnica en los que la evaluacin se basa en la capacidad reproductiva o el
crecimiento de los individuos. Es posible, entonces, con estas tcnicas dar una
respuesta sobre la incidencia de efluentes industriales en un ambiente acutico. 1
El presente proyecto busca por medio de la realizacin de ensayos toxicolgicos,
identificar el efecto del herbicida Roundup 747 en el medio acutico con ayuda de
la especie Daphnia magna bajo condiciones experimentales especficas y
controladas, lo que permitir determinar la concentracin letal media (CL50) del
herbicida expuesto a diferentes concentraciones.
Como resultado del proyecto, se busca que en un futuro se replanteen las normas
vigentes para la proteccin de ecosistemas acuticos, teniendo en cuenta que la
microfauna en cuerpos de agua juega un papel importante y que por medio de los
bioensayos se puede tener una visin justificada de cules son los factores o
componentes especficos que causan un impacto en ellos.
_____________________
1
Daphnia magna en ecosistemas acuticos, Instituto Nacional de Limnologa (INALI)

GLOSARIO
BIOENSAYO Mtodo para evaluar la potencia relativa
de un agente sobre
organismos vivos, mediante la comparacin del efecto del agente con el de una
solucin patrn o Standard.
CADENA TRFICA Tambin llamada cadena alimentaria, es la corriente de

energa y nutrientes que se establece entre las distintas especies de un
ecosistema en relacin con su alimentacin.
CONTAMINANTE Sustancia introducida en el ambiente como resultado, por lo

menos en forma parcial, de la actividad humana y que produce efectos adversos
no deseados sobre los organismos individuales y sobre el ecosistema.
DUREZA Concentracin en el agua de sales de calcio y magnesio. Se suele

expresar en mg/l de carbonato de Calcio.
DOSIS Cantidad de sustancia que se absorbe en 24 horas expresada con relacin

a kilogramos de peso corporal.
ECOSISTEMA ACUTICO Es la unidad funcional bsica de interaccin de los

organismos vivos entre s y de estos con el ambiente acutico en un espacio y
tiempo determinado.
ECOTOXICOLOGIA Es el estudio de la relacin dosis o concentracin / efecto de

txicos liberados al ambiente sobre los sistemas biticos incluyendo los niveles de
organizacin inferiores y superiores al nivel de organismos.

ECOTOXICOLOGIA ACUATICA Es el estudio cualitativo y cuantitativo de los

efectos adversos de xenobiticos sobre los ecosistemas acuticos.
EFECTO Es el cambio biolgico producido tanto en el nivel de organismo

individual como en niveles de organizacin inferiores o superiores al individuo,
asociado a la exposicin al txico.
EFIPIO Capsula protectora, la cual se encuentra en la cmara incubadora de las

Daphnia magna, engrosando sus paredes, en ella se desarrollan los machos de
esta especie, cuando cambian las condiciones favorables del ambiente o el cultivo.
Su caracterstica principal es su color oscuro.
ENSAYO DE TOXICIDAD Permite la deteccin y evaluacin de la capacidad de

un agente de producir efectos txicos adversos sobre organismos vivos.
ENSAYOS DE LABORATORIO Reproduccin parcial de las condiciones reales

del ambiente.
REPLICA
Batera de ensayo que contiene un nmero especificado de
organismos en una concentracin dilucin de muestra definida o de agua de

dilucin como control.
RESPUESTA Es la proporcin de los problemas que manifiesta un determinado

efecto definido.
TOLERANCIA Es la habilidad de un organismo a tolerar una condicin dada por

un periodo de tiempo prolongado de exposicin, sin que muera.
10

TOXICIDAD Es la capacidad de una sustancia de causar algn efecto nocivo

sobre organismos vivos que depende de la cantidad administrada o absorbida, va
de ingreso al organismo, distribucin a lo largo del tiempo despus de su
administracin, naturaleza y severidad del dao producido, tiempo necesario para
producir el efecto.
TOXICO Es el agente que puede producir un efecto adverso, dao referido a la

estructura y funcin del sistema, donde
la introduccin puede ser deliberada
(efluentes) accidental (derrames). La cantidad liberada debe superar un nivel

umbral para que se manifieste el efecto. Se establece la relacin concentracin /
respuesta, duracin de la exposicin por medio de Ensayos de toxicidad.
TOXICIDAD AGUDA La toxicidad aguda tiene por objeto determinar los efectos de
una dosis nica y muy elevada de una sustancia. Usualmente, el punto final del
estudio es la muerte del animal y la toxicidad aguda se expresa por la dosis letal
50, que viene a representar ms o menos la dosis de la sustancia que produce la
muerte en el 50% de los animales.
PARTENOGNESIS Es una forma de reproduccin basada en el desarrollo de
clulas sexuales femeninas no fecundadas, que se da con cierta frecuencia en
crustceos.
XENOBIOTICO Son aquellas sustancias producidas por actividades antrpicas.
11

RESUMEN
Mediante pruebas de toxicidad aguda se evalu la concentracin letal media del

Herbicida Glifosato Roundup 747 en el cladcero Daphnia magna. Se prepar
agua reconstituida dura (160-180 mg/I CaCO3), para el mantenimiento de las
colonias y las pruebas de toxicidad. El sistema utilizado en el laboratorio para la
realizacin de los bioensayos durante el perodo de experimentacin fue de tipo
esttico, de corta duracin y sin renovacin, teniendo en cuenta las
recomendaciones de protocolos internacionales estandarizados para la realizacin
de pruebas ecotoxicolgicas, los cuales fueron efectuados por un periodo de siete
meses, donde fue necesario realizar el cultivo y mantenimiento de la especie de
Daphnia magna teniendo en cuenta la parmetros de su hbitat agua dura,
dureza, pH, temperatura y oxgeno disuelto; al igual que su alimento con las algas
Scenedesmus acutus.
Con el propsito de comprobar la buena condicin de los organismos se realizaron
pruebas de sensibilidad en todos los tratamientos con K2Cr2O7. La medida de
toxicidad empleada permiti determinar la concentracin efectiva del txico que
inmovilizaba el 50% de la poblacin en un perodo de 48 horas (CL50-48), mediante
la aplicacin del Mtodo Probit del programa estadstico SAS (1990). Para la
realizacin de estas pruebas de toxicidad se tuvo en cuenta la realizacin de diez
pruebas preliminares con concentraciones de 0.001, 0.01, 0.1, 1.0, 10 mg/litro.En
los resultados obtenidos en la prueba de sensibilidad se encontr una CL50-48 para
el dicromato de potasio de 1, 09254 ppm. En cuanto a la sensibilidad de Daphnia
magna al herbicida, se determin que la CL 50-48 fue de 42, 9053 ppm, la cual fue
comparada con la concentracin letal media en Dahpnia pulex (CL 50-48: 19 ppm) y
en peces (CL 50-48: 1, 088 ppm), observndose que la especie Daphnia pulex es
las ms sensible al herbicida en estudio.
Debido a las especificaciones txicas del herbicida, las autoras elaboraron un
protocolo para el almacenamiento, manipulacin, transporte y disposicin de
residuos de herbicidas generados a lo largo de investigaciones cientficas en el
laboratorio de bioensayos de la Universidad de la Salle.
12

ABSTRACT
By acute toxicity tests evaluated the average lethal concentration of Roundup

herbicide Glyphosate 747 in the cladocerans Daphnia magna. Was prepared
reconstituted hard water (160-180 mg / I CaCO3), for the maintenance of the
colonies and evidence of toxicity. The system used in the laboratory for conducting
bioassays during the experimental period was kind of static, short-term, without
renewal, taking into account the recommendations of standardized protocols for
testing ecotoxicological, which were carried out by a period of seven months,
where it was necessary to make the cultivation and maintenance of the species
Daphnia magna taking into account the parameters of their habitat hard water,
hardness, pH, temperature and dissolved oxygen, like their food with algae
Scenedesmus acutus.
With the aim of checking the condition of the bodies were tested for sensitivity in all
treatments with K2Cr2O7. The extent of toxicity employed allowed us to determine
the effective concentration of toxic immobilized for 50% of the population over a
period of 48 hours (CL50-48), using the statistical method Probit program SAS
(1990). For the realization of these toxicity tests took into account the completion of
ten preliminary tests with concentrations of 0.001, 0.01, 0.1, 1.0, 10 mg / litro. The
results in the sensitivity test was found to CL50-48 Potassium dichromate of
1,09254 ppm. With regard to the sensitivity of Daphnia magna to the herbicide, it
was determined that the CL50-48 was 42, 9053 ppm, which was compared with the
median lethal concentration in Dahpnia pulex (CL50-48: 19 ppm) and fish (CL50-48:
1,088 ppm), observed that the species Daphnia pulex is the most sensitive to the
herbicide in study.
Due to the specifications of the toxic herbicide, the authors developed a protocol
for the storage, handling, transportation and disposal of waste generated
herbicides along scientific research in the laboratory bioassays of the Salle
University.
13

1. OBJETIVOS
1.1. OBJETIVO GENERAL

Determinar la concentracin letal media (CL
Roundup
747
sobre
ecosistemas
50-48)
del Herbicida Glifosato
acuticos
mediante
pruebas
toxicolgicas con Daphnia magna.
1.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

Determinar la sensibilidad de la Daphnia magna expuestas a Dicromato de
potasio.
Establecer una comparacin entre los resultados obtenidos de la

concentracin letal media (CL 50-48) en los estudios toxicolgicos al Herbicida
Glifosato Roundup 747, bajo diferentes especies en la Universidad de la
Salle.
Definir pautas para el manejo y disposicin de residuos del herbicida

Glifosato Roundup 747 en el laboratorio.
14

2. MARCO TEORICO
2.1. TOXICOLOGIA
El trmino toxicidad se emplea para describir la naturaleza de los efectos
perjudiciales producidos y las condiciones necesarias para su produccin.
La
toxicologa estudia las relaciones entre la cantidad de sustancia introducida en el

organismo y el efecto biolgico obtenido, tanto a nivel cualitativo como
cuantitativo. Esta ocurre toda vez que una sustancia entra en contacto con una
superficie corporal como la piel, los ojos o la mucosa del sistema digestivo o
respiratorio1.
En la sociedad moderna, la toxicologa es ya un elemento importante de la salud
ambiental y de la salud en el trabajo. Ello es as porque muchas organizaciones,
tanto gubernamentales como no gubernamentales, utilizan la informacin
toxicolgica para evaluar y regular los peligros presentes tanto en el lugar de
trabajo como en el medio ambiente general.
La toxicologa es un componente crucial de las estrategias de prevencin, pues

proporciona informacin sobre peligros potenciales en los casos en que no hay
una exposicin humana amplia.
Si se fuese a establecer el origen de la toxicologa se debera situar paralelamente

con el origen de la biologa, porque en el momento en que aparece la vida,
aparece el riesgo que sta entre en contacto con agentes nocivos que ponen en
peligro el funcionamiento normal del organismo. Pero la toxicologa
como se
puede observar en la Figura N 1, abarca todas las ciencias bsicas como la

__________________
1.
Instituto
nacional
de
seguridad
e
GuiasMonitor/SaludMedicina/III/Ficheros/mtiii02.pdf
15
higiene
en
el
trabajo.
Disponible
en
Internet:

Qumica, Biologa, Farmacologa etc., y tiene como reas fundamentales la

analtica y experimental. Este proyecto se enfocar en el rea experimental que se
aplica en las ciencias ambientales mediante la ecotoxicologa la cual se describir
ms adelante.
Figura N 1 Tipos de toxicologa
Fuente: Repetto, 1997
Los mtodos de la toxicologa son as mismo muy utilizados por la industria en el

desarrollo de productos, pues permiten obtener una informacin valiosa para el
diseo de determinadas molculas o formulaciones.
Mediante la concentracin letal media CL50 se calcula estadsticamente un agente

qumico o fsico que se espera cause una mortalidad en el 50% de los organismos
de una poblacin bajo un conjunto de condiciones definidas.
2.2. TOXICIDAD
La toxicidad es la capacidad de una sustancia de causar algn efecto nocivo
sobre organismos vivos. Depende de2:
____________________
2.
16
www.monografias.com/trabajos42/parametros-toxicologicos-agua/parametros-toxicologicos-agua.shtml

Cantidad administrada o absorbida

Va de ingreso al organismo
Distribucin a lo largo del tiempo despus de su administracin.
Naturaleza y severidad del dao producido.
Tiempo necesario para producir el efecto.
2.2.1. Categoras de toxicidad y clasificacin de la toxicidad Las categoras
de toxicidad se refieren a una calificacin arbitraria de las dosis o niveles de
exposicin que causan efectos txicos. Se habla as de sumamente txico, muy
txico y moderadamente txico. Lo ms frecuente es que estas expresiones se
apliquen a la toxicidad aguda.
La clasificacin de la toxicidad se refiere a la agrupacin de las sustancias

qumicas en categoras generales conforme a su efecto txico principal. Se habla
as de sustancias alergnicas, neurotxicas y carcingenas.
Los txicos son definidos por la OSHAS (Administracin para la seguridad y salud
ocupacional) como un producto qumico que se encuentra en una de estas 3
categoras:
Un producto qumico que tiene una dosis letal media (DL50) de ms de 50
miligramos por kilogramos pero no ms de 500 miligramos por kilogramo de
peso corporal cuando administrado oralmente a ratas albinas de entre 200 y
300 gramos de peso.
Un producto qumico que tiene una dosis letal media (DL50) de ms de 200
miligramos por kilogramo pero no ms de 1000 miligramos por kilogramo de
peso corporal cuando administrado por contacto continuo durante 24 horas (o
menos si la muerte ocurre durante las siguientes 24 horas) con la piel desnuda
de conejos albinos de entre 2 a 3 kilogramos de peso.
17

Un producto qumico que tiene una concentracin letal media (CL50) en el aire
de ms de 200 partes por milln pero no ms de 2000 partes por milln por
volumen de gas o vapor, o ms de 2 miligramos por litro pero no ms de 20
miligramos por litro de niebla, humo, o polvo, cuando administrado por
inhalacin continua durante una hora (o menos si la muerte ocurre en menos de
una hora) a ratas albinas de entre 200 y 300 gramos de peso.
2.2.2. Relacin dosis-efecto Es la relacin entre la dosis y el efecto a nivel
individual. Un incremento de la dosis puede incrementar la intensidad de un efecto
o su gravedad. Puede obtenerse una curva de dosis-efecto a nivel de todo el
organismo, de la clula o de la molcula diana.
2.2.3. Relacin dosis-respuesta Es la relacin entre la dosis y el porcentaje de

individuos que presentan un determinado efecto. Al incrementarse la dosis lo
normal es que aumente el nmero de individuos afectados en la poblacin
expuesta.
Pueden establecerse varias curvas de dosis-respuesta respecto de una misma
sustancia qumica (una curva para cada tipo de efecto). En la mayora de los
efectos txicos, cuando se estudian en poblaciones grandes, la curva de dosisrespuesta tiene una forma sigmoidea. La curva de dosis-respuesta refleja las
variaciones entre individuos de una misma poblacin. La pendiente de la curva
vara segn la sustancia qumica de que se trate y tambin entre los diferentes
tipos de efectos, en la siguiente grafica se puede apreciar un tipo de curva dosisrespuesta, donde la regin NOEC representa la dosis o concentracin ms alta a
la cual no se observa ningn efecto y la regin LOEC representa la concentracin
mnima donde an se observa efecto de mortalidad.
18

Curva Dosis-Respuesta.
0 a 1.-Regin NOEC; 2.-LOEC; 3.-Regin Lineal; y 4.-Respuesta Mxima
En el caso de algunas sustancias que tienen efectos especficos (carcingenos,

iniciadores, mutgenos) la curva de dosis-respuesta podra ser lineal desde la
dosis cero dentro de un determinado intervalo de dosis. Esto significa que no hay
un umbral y que hasta las dosis pequeas representan un riesgo. Por encima de
ese intervalo de dosis, el riesgo puede incrementarse a una tasa superior a la
lineal3.
2.3. TOXICIDAD AGUDA

La toxicidad aguda tiene por objeto determinar los efectos de una dosis nica y
muy elevada de una sustancia. Usualmente, el punto final del estudio es la muerte
del animal y la toxicidad aguda se expresa por la dosis letal 50, que viene a
representar ms o menos la dosis de la sustancia que produce la muerte en el
50% de los animales4.
Cuando se quiere determinar el efecto de un determinado toxico sobre una
especie, lo primero que debe hacerse es determinar las condiciones del cultivo
tanto en el cultivo de los organismos como en el bioensayo mismo, a fin de
proporcionar condiciones estndar que permitan la reproducibilidad de las
pruebas.
_____________
3
SILBERGEL, Ellen K. Enciclopedia de salud y seguridad en el trabajo. capitulo 33. [citado14 de Agosto de 2007].
TOXICOLOGIA AMBIENTAL Evaluacin de Riesgos y Restauracin Ambiental. 1996-2001, The University of Arizona
19

En segundo lugar deben realizarse dos tipos de pruebas a fin de hallar las
concentraciones del toxico que causen un efecto adverso en los organismos.
2.4. TOXICOLOGIA AMBIENTAL
La toxicologa ambiental evala los impactos que producen en la salud pblica la
exposicin de la poblacin a los txicos ambientales presentes en un sitio
contaminado. Los txicos son los xenobiticos (cualquier substancia que no ha
sido producida por la biota) que producen efectos adversos en los organismos
vivos. Estos impactos producidos se miden por su:
2.4.1. Exposicin Es el contacto de una poblacin o individuo con un agente
qumico o fsico. La magnitud de la exposicin se determina midiendo o estimando
la cantidad (concentracin) del agente que est presente en la superficie de
contacto (pulmones, intestino, piel, etc.) durante un perodo especificado.
2.4.2. Ruta de exposicin Es el camino que sigue un agente qumico en el
ambiente desde el lugar donde se emite hasta que llega a establecer contacto con
la poblacin o individuo expuesto. El anlisis de la ruta de exposicin describe la
relacin que existe entre las fuentes (localizaciones y tipo de derrames
ambientales) y los receptores (localizacin de las poblaciones, patrones de
actividad, etc.).
Se consideran como rutas significativas las que dan lugar a exposicin humana.
Las rutas de exposicin consisten generalmente de cuatro elementos:
fuentes y mecanismos de emisin de txicos.
medio de retencin y transporte (o medios en el caso de que haya
transferencias de un medio a otro).
punto de contacto potencial entre el medio contaminado y los individuos.
va de ingreso al organismo.
20

2.4.3. Va de exposicin Es el mecanismo por medio del cual el txico entra en el

organismo. Para el propsito de la toxicologa ambiental, se consideran de
importancia la ingestin, la inhalacin y el contacto cutneo (absorcin cutnea).
2.4.3.1. Ingestin Cuando el txico se ingiere, entra al TGC, (tracto gastro

intestinal) la mayor cantidad se absorbe en el estmago y en los intestinos. El
sitio de absorcin depende en parte del estado de ionizacin del compuesto. Los
cidos dbiles es ms probable que se absorban en el estmago, donde hay un
pH bajo, mientras que las bases dbiles, que estn menos ionizadas a pH alto, se
absorben mejor en el intestino donde existen estas condiciones.
2.4.3.2. Inhalacin La inhalacin es la va de exposicin a gases, vapores de

lquidos voltiles, aerosoles y partculas suspendidas en el aire. Los sitios de
absorcin son la nariz y los pulmones. La nariz acta como un limpiador o trampa
para los gases solubles en agua y los muy reactivos as como, para retener las
partculas grandes.
Las molculas de los gases se absorben en el espacio alveolar de los pulmones,

disolvindose en la sangre, hasta que las concentraciones del gas en ambas fases
llegan
al
equilibrio.
La
solubilidad
de
gases
en
la
sangre
depende
fundamentalmente de su solubilidad en agua y de la presin parcial del gas en el

aire inhalado. Si se incrementa la concentracin de un gas en el aire, se
incrementar su velocidad de difusin en los pulmones, hasta alcanzar la nueva
concentracin de equilibrio en la sangre.
La regin del aparato respiratorio en el que se depositan las partculas y aerosoles

depende de su tamao. Las partculas de 5 m o ms grandes se depositan en la
regin nasofarngea, que es la regin ms alta. Las partculas de 1 a 5 m son
depositadas en la regin traqueobronquiolar del pulmn, que es la regin
21

intermedia.
Las partculas de 1 m y ms pequeas penetran a los sacos
alveolares de los pulmones. Estas pueden ser absorbidas a la sangre o bien,

pueden ser eliminadas a travs del sistema linftico.
2.4.3.3. Absorcin cutnea La piel, a diferencia del epitelio del intestino y de los
alvolos pulmonares, no est diseada para la absorcin de substancias tiles al
organismo. La permeabilidad a travs de la piel es muy baja debido a que est
formada
por varias capas, algunas de ellas muy gruesas y con muy escasa
irrigacin sangunea. Para que una substancia se absorba por la piel debe
difundirse a travs del estrato crneo y las dems capas de la epidermis, antes de
contactar los vasos capilares sanguneos y linfticos de la dermis y pasar al
torrente sanguneo. 5
2.4.4. Tiempo de exposicin Para la toxicologa ambiental las exposiciones se

clasifican de acuerdo a la magnitud del perodo de exposicin en:
Exposiciones crnicas: Son las exposiciones que duran entre 10% y el 100%
del perodo de vida. Para el caso del hombre entre 7 y 70 aos.
Exposiciones subcrnicas: Son exposiciones de corta duracin, menores que
el 10% del perodo vital.
Exposiciones agudas: efecto letal u otro efecto producido en un tiempo
relativamente corto, usualmente dentro de los 4 das para peces o macro
vertebrados y periodos ms cortos ( 2 das) para organismos ms pequeos,
estas exposiciones suceden en un solo evento.
___________
5,
TOXICOLOGIA AMBIENTAL: Evaluacin de Riesgos y Restauracin Ambiental 2001 The University of Arizona
http://superfund.pharmacy.arizona.edu/toxam
22

2.5. INDICADORES DE TOXICOLOGIA

Las siguientes unidades de medida expresan los valores de concentracin de
contaminantes y las dosis recibidas por un organismo, sirviendo como indicadores:
2.5.1. Dosis Letal Media DL50 Dosis es la cantidad de toxico que penetra en el
organismo y Dosis Letal 50 es la dosis individual de una sustancia que provoca la
muerte del 50% de la poblacin animal debido a la exposicin a la sustancia por
cualquier va distinta a la inhalacin. Normalmente expresada como miligramos o
gramos de material por kilogramo de peso del animal.
2.5.2. Concentracin Letal Media CL50
Concentracin letal 50 es la
concentracin, obtenida por estadstica, de una sustancia de la que puede

esperarse que produzca la muerte, durante la exposicin o en un plazo definido
despus de sta, del 50% de los animales expuestos a dicha sustancia durante un
periodo determinado. El valor de la CL50 se expresa en peso de sustancia por
unidad de volumen de aire normal (miligramos por litro, mg/L).
2.5.3. Concentracin Efectiva CE50 Concentracin del txico que produce

efectos negativos apreciables en el 50 por ciento de la poblacin (prdida del
equilibrio, frecuencia respiratoria, en un tiempo determinado).
2.5.4. CL50 asinttica
Concentracin de txico a la cual CL50 llega hacerse
constante para un tiempo de exposicin prolongado.
2.5.5. Concentracin de efectos no observados (CENO)
La mayor
concentracin a la cual no se observa reaccin crnica alguna en las especies

ensayadas.
23

2.5.6. Concentracin de efectos mnimos observables (CEMO) La menor

concentracin de txico a la cual puede observarse algn efecto sobre la especie
ensayada.
2.5.7. Nivel de efectos agudos no observados (NEANO) Es la mayor

concentracin del txico para la cual la mortalidad registrada es del 10%
inferior.
2.5.8. Partes por Milln (ppm) Para determinar la concentracin de una
substancia qumica en un volumen se utilizan las partes por milln de partes
iguales. Cada millonsima parte de este volumen, correspondiente a la substancia
de nuestro inters, se considera una parte por milln de la substancia. Las ppm se
utilizan para determinar concentraciones muy pequeas de gases en la atmsfera.
2.5.9. Efectos Es el cambio biolgico producido tanto en el nivel de organismo

individual como en niveles de organizacin inferiores o superiores al individuo,
asociado a la exposicin del txico. Estos pueden ser:
2.5.9.1
Efecto agudo
Corto tiempo de exposicin (horas, das) donde la
severidad es la mortalidad y se determina la concentracin que causa la

mortalidad del 50% de la poblacin expuesta (CL50).
2.5.9.2 Efecto letal Causa la muerte por accin directa como consecuencia de la
exposicin a una determinada concentracin del agente txico.
2.5.9.3. Efecto subletal
Se produce por debajo del nivel que causa la muerte
directamente, como resultado de la exposicin a una determinada concentracin

del agente txico.
2.5.10. Respuesta Proporcin de la poblacin expuesta al txico que manifiesta

el efecto definido
24

2.6. ECOTOXICOLOGIA
El principio de la ecotoxicologa es que los organismos vivos son herramientas
esenciales para la evaluacin de la calidad ambiental, puesto que ellos son los
que estn expuestos a los efectos combinados de la ecotoxicidad. 6.
La ecotoxicologa ambiental estudia los efectos nocivos de sustancias altamente
txicas (qumicas o fsicas) presentes en el ambiente, sobre organismos vivos, los
cuales son parte esencial en los ecosistemas (vegetales, microorganismos,
animales y el hombre), en esta interviene la toxicologa y la ecologa; su finalidad
es evaluar el riesgo ecolgico que se puede presentar por la presencia de
sustancias potencialmente txicas en un ambiente acutico reuniendo as, la
suficiente informacin para la proteccin de los ecosistemas. En este estudio se
debe resaltar las caractersticas de la sustancia entre ellas: distribucin en el
ambiente, patrones de descarga, efectos en organismos vivos, degradacin,
actividad biolgica, formas de bioacumulacin, etc., as como las caractersticas y
las propiedades de los ecosistemas.
Con ella se evala la probabilidad de ocurrencia de efectos adversos que pueden
ocurrir o estn ocurriendo en ecosistemas que se encuentran en exposicin a
sustancias de inters sanitario que producen estrs en los organismos, esta
evaluacin est determinada en dos elementos:
Exposicin de organismos en estudio con agentes contaminantes:
interaccin entre frecuencia, intensidad y respuesta de los organismos frente
a sustancias que alteran su ecosistema.
_____________________________
LEVIN, S. A., M. A.. KELLY y K. D. KIMBALL. 1989. Ecotoxicology: problems and approaches. Springer-Verlag.
25

Caractersticas de los efectos producidos por sustancias txicas: relacin

dosis-respuesta entre la sustancia qumica contaminante y los efectos que
produce en el organismo.
En ocasiones, la nica diferencia entre toxicologa y ecotoxicologa parece estar
centrada en las especies seleccionadas para las pruebas toxicolgicas. Sin
embargo, la diferencia esencial entre las dos ciencias radica en su enfoque frente
al problema. La toxicologa concierne a los efectos sobre los organismos
individuales, estudia los efectos de la introduccin directa del compuesto dentro
del organismo y focaliza su atencin en una sola especie (incluido el hombre), y en
sus estudios se habla de dosis de aplicacin, mientras que, la ecotoxicologa se
ocupa de los efectos sobre los ecosistemas y su inters abarca toda la biota,
incluyendo los aspectos estructurales y funcionales del ecosistema expuesto y en
sus estudios se habla de concentracin del xenobitico en el medio.
La ecotoxicologa estudia el destino y los efectos de los contaminantes en los
ecosistemas, intentando explicar las causas y prever los riesgos probables. La
ecotoxicologa prospectiva evala la toxicidad de las sustancias antes de su
produccin y uso. La ecotoxicologa retrospectiva se ocupa de confirmar si la
sustancia produce daos en el ecosistema.
2.7 BIOENSAYOS
Se entiende por bioensayo un ensayo en que un tejido, organismo o grupo de
organismos vivos se usan como reactivo para determinar la potencia de cualquier
sustancia fisiolgicamente activa cuya actividad se desconoce (FAO, 1981).
Los bioensayos, o pruebas de toxicidad son experimentos que miden el efecto de

uno o ms contaminantes en una o ms especies (Reish y Oshida, 1987),
permiten evaluar el grado de toxicidad de una sustancia qumica, un efluente, un
26

cuerpo de agua, etc., empleando organismos vivos (Esclaps, 1999). Puede

determinarse la influencia relativa de cada factor sobre los parmetros biolgicos
estudiados. Los rangos de variacin de los factores considerados pueden ser
mayores que los existentes en el ambiente natural, lo que muchas veces facilita el
estudio de su modo de accin. Tambin pueden estudiarse combinaciones de dos
o ms factores, lo que permite revelar la existencia de antagonismos o
sinergismos entre ellos. La posibilidad de controlar muchas de las variables hace
posible la eliminacin de las fluctuaciones propias de las condiciones naturales,
que generalmente oscurecen o interfieren con la finalidad principal del estudio
llevado a cabo (Rodrguez et al., 1995).
Para proteger el medio acutico es necesario fijar lmites superiores a las

descargas de contaminantes perjudiciales qumicos y fsicos, adems de vigilar y
regular las descargas que se realicen posteriormente. Los lmites superiores de las
descargas se derivan de la consideracin de los criterios apropiados de calidad de
agua formulados a partir de datos de respuestas para sistemas biolgicos
(bioensayos crnicos o agudos) (FAO, 1981).
Los individuos son expuestos a concentraciones crecientes del txico para

determinar cambios en el organismo. En general la muerte es el criterio ms
utilizado en la prueba de CL50 horas. Uno o ms controles son utilizados en
organismos expuestos a similares condiciones excepto cuando existe falta de
disponibilidad del txico (Reish y Oshida, 1987). Los bioensayos toxicolgicos
tienen por finalidad determinar las concentraciones de un txico dado que
ocasionen efectos dainos o nocivos en un organismo modelo. Estos efectos
pueden incluirse en las siguientes categoras:
27

Afectacin del trmino de vida

Alteracin de la tasa de crecimiento
Cambios de los parmetros reproductivos (Reish y Oshida, 1987).
Cuando se produce algn efecto se anota el efecto y la concentracin del
compuesto qumico. Si el organismo de prueba muere se anota la concentracin
letal. Esta es la manera por la cual se determina en un laboratorio la toxicidad de
un compuesto qumico. Puede ocurrir que a bajas concentraciones de un
compuesto qumico muchos de los animales de prueba mueran, esto significa que
el compuesto en cuestin es muy txico. Cuando sabemos cmo de txico es un
compuesto, tambin sabemos los efectos de este compuesto cuando una cierta
concentracin se presenta en una zona.
2.7.1. Tipos de bioensayos

2.7.1.1. Ensayos de respuesta directa
2.7.1.1.1. Bioensayos de toxicidad
Bioensayos agudos: Cuantifican las concentraciones letales de un xenobitico a
una especie en particular. El valor calculado se denomina concentracin letal
media (CL50), y representa la concentracin que causa la muerte al 50 % de la
poblacin experimental, en un tiempo determinado (generalmente 48 o 96 horas)
(Esclaps, 1999).
De tipo esttico: Se efecta sin la renovacin continua del flujo constante de las
diluciones sometidas al ensayo (FAO, 1981).
Sin renovacin: los organismos se exponen a la misma solucin de prueba el

tiempo de duracin del ensayo (Esclaps, 1999).
28

Con renovacin: los especimenes se someten a una preparacin fresca de la

misma concentracin inicialmente empleada, peridicamente (generalmente cada
24 horas) (Esclaps, 1999). Tal renovacin puede ser necesaria cuando
importantes sustancias txicas se deterioran, o son absorbidas, o se pierden por
cualquier otra razn, con suficiente rapidez para influir considerablemente con los
resultados del ensayo (FAO, 1981).
De flujo continuo: Circula continuamente una corriente de sustancia de prueba

nueva en contacto con los individuos experimentales (Esclaps, 1999). Se realizan
con la renovacin continua o casi continua de las diluciones sometidas al ensayo,
con el fin de mantener casi constantes las concentraciones de las sustancias
txicas activas (FAO, 1981).
Bioensayos crnicos: Estiman la concentracin efecto media (CE50), la cual es

la
concentracin de la sustancia de prueba que causa un efecto al 50% de la
poblacin experimental, al cabo de un tiempo determinado; depende del estado

de vida considerado o del ciclo de vida del organismo empleado. Alternativamente,
un ensayo definitivo puede utilizarse para estimar el tiempo requerido para
producir un efecto al 50% de los organismos (TE50), a una concentracin
especfica (Esclaps, 1999).
Bioestimulacin: Se mide la facultad de las aguas residuales o de las sustancias
qumicas de estimular la multiplicacin y el desarrollo de algas, efecto este de
eutroficacin que frecuentemente se traduce en una superabundancia o
proliferacin de algas (FAO, 1981).
Bioensayos de repelencia: Trata de medir en el laboratorio las reacciones de

escapes de los animales acuticos frente a un contaminante. Al organismo
29

utilizado (generalmente pez o crustceo de buen tamao) se le ofrece la

oportunidad de elegir entre aguas "contaminadas" y aguas "limpias" en un tubo o
tanque pequeo; el gradiente de interfaz puede ser brusco. Los aparatos y
procedimientos miden tambin, por lo general, cuando existe la atraccin hacia el
contaminante. Para las especies con motilidad el escapamiento puede ser a veces
la respuesta subletal clave, de naturaleza ms sensible y ms significativa que el
deterioro de la reproduccin medido mediante ensayos de toxicidad crnicos. Sin
embargo, es particularmente difcil predecir, a partir de estos resultados de
laboratorio, lo que ocurrira en el medio. Las respuestas de escape pueden estar o
no relacionadas con la toxicidad del contaminante, en algunos casos los
organismos no pueden soportar determinadas concentraciones txicas o pueden
ser atradas por ellas (FAO, 1981).
Bioacumulacin: Son necesarios para las sustancias que se acumulan en las

plantas y animales acuticos; las grandes concentraciones de sustancias txicas
en los tejidos pueden causar la muerte, pero el organismo es capaz de acumular
durante algn tiempo cantidades menores sin sufrir dao. En este ltimo caso, los
depredadores pueden acumular las sustancias en grado tal que resulte nociva
para ellos o para los depredadores del nivel trfico siguiente (FAO, 1981).
2.7.1.2
Ensayos de respuesta indirecta
2.7.1.2.1. Ensayos organolpticos Algunos contaminantes pueden producir

olores o sabores desagradables en los organismos acuticos. El contaminante
puede no ser nocivo para el organismo acutico, pero puede ocurrir que el
organismo pierda valor econmico. El mejor procedimiento consiste en la
evaluacin por parte de personas experimentadas en bromatologa y emplear gran
nmero de catadores diestros (FAO, 1981).
30

2.7.1.2.2. Ensayos de bioestimulacin Los efectos de los nutrientes adicionales

pueden ser indirectos, como por ejemplo, la produccin de sustancias txicas o la
desoxigenacin del agua debida a la proliferacin de algas (FAO, 1981).
En el cuadro N 1 se puede observar de manera resumida, los tipos de
bioensayos.
2.8.
ENSAYOS PRELIMINARES
Estos ensayos se utilizan para determinar en forma preliminar, la toxicidad de una

sustancia o de los efluentes.
Los tratamientos son dos y consisten de un control (se usa agua de la localidad o
agua de laboratorio preparada para el cultivo) y efluente sin diluir (100 %). El
nmero de rplicas, densidad de los organismos y procedimientos generales son
los mismos empleados en el ensayo definitivo para la especie en cuestin. La
determinacin de oxgeno disuelto, temperatura, alcalinidad, dureza total y
conductividad especfica se realizan como en el ensayo definitivo (Rodrguez y
Esclaps, 1995). Estos ensayos estn diseados para proveer un estimado
preliminar de las concentraciones, cuando se desconoce la toxicidad de la muestra
a evaluar. Se preparan de cinco a diez diluciones de exposicin. En este tipo de
ensayo, es suficiente que las concentraciones de las soluciones de exposicin
sean aproximadas, por lo que se pueden utilizar cilindros graduados para su
preparacin. Este ensayo permite definir el orden de magnitud del intervalo de las
concentraciones entre las cuales se debe realizar el ensayo definitivo (Rodrguez y
Esclaps, 1995).
31
DETERMINACION DE LA CONCENTRACION LETAL MEDIA CL 50-48 DEL HERBICIDA ROUNDUP 747 SOBRE ECOSISTEMAS
ACUATICOS MEDIANTE
CUADRO No. 1 Clasificacin de los Bioensayos

BIOENSAYOS DE TOXICIDAD
ENSAYO DE
RESPUESTA
INDIRECTA
ENSAYO DE RESPUESTA DIRECTA
BIOENSAYO
AGUDO
DE TIPO
ESTATICO
BIOENSAYO
CRNICO
BIOESTIMULACION
BIOENSAYO
DE
REPELENCIA
DE FLUJO
CONTINUO
SIN RENOVACION
ENSAYO
ORGANOLPTICO
CON RENOVACION
FUENTE: Elaboracin propia
32
BIOACUMULACIN
ENSAYO DE
BIOESTIMULACIN
DETERMINACION DE LA CONCENTRACION LETAL MEDIA CL 50-48 DEL HERBICIDA ROUNDUP

747 SOBRE ECOSISTEMAS ACUATICOS MEDIANTE
2.9 ENSAYOS DEFINITIVOS
Es un experimento en el cual un grupo de organismos se exponen durante un

perodo de tiempo determinado a una serie de concentraciones de un efluente o un
compuesto de inters (Esclaps, 1999).
El propsito de este ensayo es establecer las curvas de concentracin respuesta y
los valores de las CL50 24 y 48 horas; para determinar estos parmetros se deben
emplear cinco o ms concentraciones con rangos establecidos entre 1.5 y 2.0mg
por litro (Alberdi, 1990). En esta prueba, diferente al tipo de ensayo preliminar, cada
concentracin debe correr por triplicado (USEPA, 1987).
El intervalo de trabajo estar comprendido entre la concentracin a la cual el 100%

de los organismos mueren y la concentracin que produce una mortalidad no mayor
al 10%. La concentracin ms baja podr ser aquella que no causa efecto en los
organismos de prueba. Las sucesivas concentraciones se incrementarn sobre la
base de un mltiplo constante hasta alcanzar aquella que resulte lo suficientemente
alta para matar el 100% de la poblacin expuesta (Tortorelli, 1990).
2.10 ORGANISMO PTIMO PARA LA REALIZACION DE BIOENSAYOS
Representativo de ambientes tropicales, de amplia distribucin en el pas o de

importancia comercial (Esclaps, 1999).
Disponibilidad, ser fciles de encontrar, en nmero suficiente y colectarse sin
dificultad.
Que sean representativos para los estudios estadsticos.
De fcil cultivo, lo que garantiza un adecuado suministro de organismos en los
ensayos y el establecimiento con exactitud de la edad o estado de desarrollo. La
33

edad es de suma importancia en los bioensayos, ya que la sensibilidad puede

variar significativamente durante su desarrollo (Esclaps, 1999).
Especies con gran susceptibilidad a exposiciones con sustancias xenobiticas.
Garantizando proporcionar resultados que ofrecen una alta proteccin al resto
de la cadena trfica (Esclaps, 1999).
2.11 DAPHNIA magna
Daphnia son pequeos crustceos planctnicos, entre 1 y 3 mm de longitud.
Taxonmicamente las Daphnias pertenecen a la familia Daphnidae y al suborden
Cladcera, llamados comnmente pulgas de agua debido a su estilo de natacin
(dando pequeos saltos en el agua), aunque son insectos tienen muchas diferencias
como por ejemplo: la respiracin por medio de agallas, poseen un par de antenas y
tienen cinco pares de patas los cuales utilizan para alimentarse y para la
locomocin.
Figura N 2 Anatoma de la Daphnia magna
Fuente: www.asalab.it/docs/Image/Daphnia_magna.jpg
Daphnia magna ha sido usada por muchos aos en los Estados Unidos, Canad y
Europa como organismo de test para llevar a cabo estudios de toxicidad. La
distribucin geogrfica de la especie en este continente ha sido reportada en el
34

Norte y el Noreste de Norte Amrica. Todos los hbitats en los que la especie ha
sido encontrada son en cuencas alcalinas o salinas de California y el oeste del
Canad. Se encuentra en aguas dulces a temperaturas aproximadas de 15 a 30C,
siendo la
temperatura ptima entre 18 y 28C. Daphnia magna fue trada del
Instituto de reservas nacionales de agua que se encuentra ubicado en (Ontario,

Canad).
Casi todos los de cultivos de Daphnia magna ahora en uso, no son descendientes
de especies recolectadas en Norteamrica. McCarthur y Baillie afirman que
Daphnia magna Strus var. Schaefferi, es un vestigio posterior de un stock
importado hace aos como alimento favorito de peces, del continente europeo. El
stock de este organismo en la EPA, puede tener un origen similar, al haber sido
obtenido de la universidad de Michigan (Goulden op.cit.). Su papel fundamental es
que es un organismo representativo de una cadena trfica, porque, la utilizacin de
estos sirve como indicador natural de la contaminacin del medio ambiente.
2.11.1.
TAXONOMIA En la siguiente tabla se resume el grupo taxonmico al
cual pertenece la Daphnia magna:
Tabla N1: Taxonoma Daphnia magna
Clase:
Sub-clase:
Crustacea
Branchiopoda
Orden:
Sub-orden:
Familia:
Gnero:
Cladcera
Anompoda
Daphniidae
Daphnia
Especie:
Nombre vernacular:
Daphnia Magna
Cladcero de agua dulce pulga de
agua
Fuente: ESCOBAR, P.M, GARCIA, L.E. Determinacin de la CL50 de los detergentes mediante pruebas
estticas utilizando Daphnia magna. Universidad de la Salle. 1993
35

2.11.2. MORFOLOGIA
Estos organismos se caracterizan por poseer un cuerpo comprimido lateralmente y
ovalado; no se distinguen segmentos como en otros crustceos. Presentan
dimorfismo sexual marcado, la hembra es ms grande que el macho, presentan un
carapacho de quitina transparente, las antenas o apndices con numerosas setas y
ojo compuesto, adems de,
una cavidad embrinica con huevos y embriones
situados en la parte dorsal, entre el carapacho y el dorso del cuerpo. 7

El corazn se encuentra en la parte superior de la espalda, justo detrs de la
cabeza, y su ritmo cardaco promedio es de aproximadamente 180bpm en
condiciones normales. Daphnia, al igual que muchos animales, son propensos a la
intoxicacin por alcohol, y excelentes organismos para el estudio de los efectos de
compuestos txicos. 8
Estos organismos son incoloros o transparentes pero, a veces se observa una
coloracin rosada o roja debido a la presencia de hemoglobina en el interior del
cuerpo. La presencia de hemoglobina depender de la cantidad de oxigeno disuelto
en el agua. Por esta razn, en aguas bien aireadas las Daphnia son incoloras,
mientras que en aguas estancadas presentan un color rosado. Son organismos
filtradores, y los bordes de los apndices del tronco, estn provistos de cerdas finas
filtrantes (Mc Innis, 1989).
Estas cerdas filtrantes retienen organismos
(generalmente pertenecientes al nanoplanctn) y partculas muy finas (menores de

treinta micras).
__________________
7
Cultivo de microcrustaceos de agua dulce. 1991 www.fao.org/docrep/field/003/AB473S/AB473S06.htm
8.
Disponible en:.wikipedia.org/wiki/Daphnia.
36

Mediante el movimiento de apndices del tronco el alimentado filtrado que se

encuentra en el agua, se dirige hacia adelante a lo largo de los apndices y es
dirigido contra el cuerpo inmediatamente detrs de la boca. Las mandbulas
mastican el extremo anterior del lado de la masa alimenticia, y dirigen los
fragmentos a la boca.
Una de las caractersticas anatmicas ms destacadas de las pulgas de agua es
que la mayor parte de su cuerpo est rodeado por una concha o caparazn, que en
realidad es como su esqueleto externo. Peridicamente las pulgas de agua cambian
de caparazn para poder crecer y expandirse, antes de que la siguiente capa pueda
endurecerse. 9 La Figura N 3, indica cada una de las partes de la Daphnia magna.
Figura 3: Partes de la Daphnia magna
Fuente: RICO ORDS, Jos Manuel; MENNDEZ VALDERREY, Juan Lus. Asociacin
ASTURNATURA.. <http://www.asturnatura.com/articulos/artropodos/branquio.php>.
_______________________
9.
Contreras, Op. Cit, p 19
37

2.11.3. REPRODUCCION
La reproduccin de esta especie es masiva en condiciones ptimas. Bajo buenas
condiciones se reproduce por partenognesis (sin necesidad de machos) y en
condiciones deficientes (falta de alimento, superpoblacin, falta de agua) se
reproduce mediante huevos de resistencia (intervienen machos y hembras) capaces
de aguantar mucho tiempo en malas condiciones, incluso soportan los jugos
gstricos de los animales, eclosionando cuando las condiciones vuelvan a ser
buenas, estos huevos tienen incluso mecanismos para adherirse a las plumas de
las aves y as poder ser dispersados por el viento. Los huevos de resistencias se
observan dentro de unas estructuras de color negro, el efipio, que llevan en la zona
dorsal de su cuerpo.
Pueden vivir por varias semanas durante el verano y hasta cien das si no son
depredadas. El periodo de huevo se desarrolla completamente dentro de la cmara
de cra de la madre. El periodo juvenil presenta entre cuatro y cinco estadios. El
adolescente es breve y vara entre 1 o 2; es en este periodo donde se desarrollan la
primera camada de huevos dentro del ovario. El adulto en cambio presenta mayor
nmero de estadios. La aparicin de la funcin reproductiva es la que marca el
comienzo de este ltimo periodo. (Alberdi, 1990).
2.11.4. CICLO DE VIDA
La vida de una Daphnia no exceda de 120 das en condiciones optimes de

temperatura. Por ejemplo, los organismos pueden vivir hasta 108 das a 30 C,
mientras que algunos organismos vivos viven slo 29 das a 28 C.
Pueden vivir por varias semanas durante el verano y hasta cien das si no son
depredadas.
38

El periodo de huevo se desarrolla completamente dentro de la cmara de cra de la

madre. El periodo juvenil presenta entre cuatro y cinco estadios. El adolescente es
breve y vara entre 1 o 2; es en este periodo donde se desarrollan la primera
camada de huevos dentro del ovario. El adulto en cambio presenta mayor nmero
de estadios. La aparicin de la funcin reproductiva es la que marca el comienzo de
este ltimo periodo. (Alberdi, 1990).
2.11.5 ALIMENTO
Las Daphnias son crustceos depredadores, se pueden alimentar de bacterias,
algas, detritus, levaduras y de zooplancton de menor tamao, que constituyen
generalmente su nica fuente de alimentacin.
2.11.6. PARAMETROS AMBIENTALES
2.11.6.1.
Habitat Son organismos ampliamente distribuidos en lagos, reservorios
artificiales, charcos temporales y aguas de desecho. Son abundantes en ambientes

con alta concentracin de materia orgnica en donde proliferan bacterias, levaduras
y microalgas. Especies de Daphnia pueden cohabitar con Moina, Coppodos y
Brachipodos.
La daphnia o pulga de agua (Daphnia magna) vive de forma salvaje en Europa,

frica, Asia y Amrica del Norte, se dice que es una especie cosmopolita.
___________________
10
www.botanical-online.com, 1999-2008, el mundo de la naturaleza.
39
10

2.11.6.2. Temperatura
Daphnia magna es especialmente resistente a cambios
extremos de temperatura desde OC a 22C y se consideran 18C-20C como su

temperatura ptima.
2.11.6.3. Requerimiento de oxgeno Estos organismos habitan en medios donde

la concentracin de O2 es variable, ya que pueden crecer tanto en completa
saturacin de O2 hasta concentraciones muy bajas. Estas concentraciones estn en
relacin a temperatura, concentracin de materia orgnica, concentracin de
microalgas, etc.
La supervivencia en medios pobres de oxgeno depende de la capacidad de
sintetizar hemoglobina. Este fenmeno est en relacin directa del oxgeno
ambiental. Un incremento en hemoglobina est en razn directa de alta temperatura
y excesiva densidad de poblacin. Incluso la hemoglobina est presente tambin en
los huevos y la sntesis de hemoglobina tambin est relacionada con la
concentracin de CO2 ambiental.
2.11.6.4.
Requerimiento de pH
El pH ptimo en estas especies es difcil de
determinar. En trminos generales, el pH oscila entre 7.5 8.0.
2.12 OTROS REQUERIMIENTOS
Existe en estas especies una alta sensibilidad a cambios del equilibrio inico
a diferentes concentraciones de cationes en el medio.
Las reacciones de Daphnia a la presencia de sales de fosfatos y nitratos (0.5
mg/l) es interesante, pues estimula la reproduccin y la madurez sexual.
Los huevos contienen carotenoides y su sntesis requiere de la presencia de
luz. Es importante mencionar que la madurez sexual tambin est
influenciada por la presencia de luz.
40

La abundancia y distribucin de estas especies depende de la variacin

estacional
pues
el
nmero
tamao
de
huevos
de
resistencia
partenogenticos y la madurez sexual dependen de las variaciones de T,

S, pH y luz, entre otros. Un exceso de luz solar reduce considerablemente
una poblacin.
En relacin a la produccin de huevos efipios
(huevos de resistencia)
dependen de la temperatura principalmente.

Las colectas de estos organismos de los medios naturales para su cultivo,
deben hacerse en primavera y verano.
2.13 ECOLOGIA
Los componentes animales de las aguas dulces constituyen un entramado diverso
de organismos representantes de casi todos los grupos taxonmicos.
La evaluacin de la dinmica de la poblacin y de ciertas importantes caractersticas
de conducta adaptiva que influyen en esta dinmica, resultan fundamentales para
las formulaciones sobre la productividad de poblaciones de especies en concreto de
la comunidad entera. Detrs de cualquier evaluacin de la productividad de los
animales, estn su alimento y sus relaciones trficas con las plantas y con los
dems animales, adems de las interacciones de competencia y depredacin, que
permiten un mayor xito de una especie sobre las otras.
El cladcero de agua dulce, es un animal planctnico que tiene un papel muy
importante en el ecosistema acutico toda vez que al recoger y alimentarse de
organismos ms pequeos, sirven a su vez como alimento para animales mucho
mayores.
41

2.14 CRITERIOS PARA SU ESCOGENCIA
Daphnia ha sido utilizada en estudios de tolerancia por mucho tiempo. Los

resultados obtenidos por diferentes investigadores son comprables y en
general, los dfnidos son menos tolerantes
a sustancias txicas que los
peces.
Daphnia magna es la ms grande de los dfnidos, alcanzando un tamao de
5 mm aproximadamente.
Los neonatos son de 0,8 y 1 mm de longitud, y pueden observarse sin ayudas
pticas.
Las hembras individuales de Daphnia magna tiene un promedio de
longevidad de 26 das a 28C, y pueden criarse individualmente en pequeos
recipientes y en cultivos masivos, en acuarios grandes.
Cuando las condiciones del cultivo son ptimas, las hembras liberan sus
primeros neonatos a los diez das de cultivadas a 25C, despus de esto son
liberados nuevos neonatos cada dos o tres das.
Se producen 20 o ms neonatos por camada, mientras se mantengan las
condiciones adecuadas de cultivo.
Los neonatos son menos tolerantes a muchas sustancias que los animales
ms viejos.11
________________
11
, Escobar Malaver Pedro, Garca Luis, Determinacin de la toxicidad aguda de los detergentes mediante sistemas estticos
utilizando Daphnia Magna, 1993.
42

2.15 METODOS DE ANALISIS PARA RESULTADOS DE TOXICIDAD

El mtodo a usar para determinar los valores de CL50 en pruebas de toxicidad aguda
depende de la forma de la distribucin de tolerancias12, es decir el porcentaje de
organismos de una poblacin dada que se ver afectada a una cierta dosis.
Generalmente los mtodos ms usados son los siguientes:
Mtodo Probit (paramtrico).
Mtodo de Litchfield-Wilcoxon (grfico).
Mtodo de Sperman-Karber (no paramtrico).
Mtodo grfico1
2.15.1. Metoto Probit
El Probit se basa en la cuantificacin probabilstica de la
vulnerabilidad, en este caso un medio acutico (ros, lagunas etc.,) ante efectos
fsicos de una magnitud determinada que se suponen conocidos. Dicho mtodo
consiste en la aplicacin de correlaciones estadsticas para estimar las
consecuencias desfavorables sobre la poblacin u otros elementos vulnerables a los
fenmenos fsicos peligrosos.
El mtodo de anlisis Probit permite estimar la CL50 ajustando los datos de
mortalidad mediante una tcnica de probabilidad para estimar los valores
que siguen una distribucin logartmica de tolerancias. El porcentaje de
organismos afectados o muertos por la accin txica de una sustancia se
transforma a unidades Probit.
Una de las restricciones del mtodo es que para el clculo de la
CL50
deben obtenerse valores intermedios entre 0 y 100% de mortalidad.

12
Tolerancia se refiere al porcentaje de organismos de una poblacin dada que se ver afectada a una cierta dosis. As,
la distribucin de tolerancias es una cierta distribucin de frecuencias o de probabilidades de tolerancias a las distintas
dosis del txico.
43

Para el ejercicio de la obtencin de CL50 en este trabajo, se usara este mtodo el

cual evaluara la relacin concentracin-respuesta del herbicida Roundup sobre la
Daphnia magna.
2.15.1.1. Analisis Probit Al realizar las pruebas de toxicidad aguda, se obtienen
las siguientes variables para el clculo de la CL50:
Concentracin de la sustancia o dosis (d).
Nmero de individuos (n).
Nmero de organismos muertos o afectados (r).
Porcentaje de efecto (p).
La representacin grfica de p vs. d, o relacin dosis-respuesta, genera una curva

parablica que muchas veces presenta dificultades en la construccin de un modelo
lineal. Una forma de abordar este problema es transformando d a una escala
logartmica (X = log10(d), lo cual mostrar una relacin dosis-respuesta de forma S
o sigmoidea normal, para, obtener la distribucin de p vs. X que ser de tipo normal.
Posteriormente, mediante las tablas de Probit se transforma p (porcentaje de efecto)
a unidades Probit (buscando en una tabla de distribucin normal el valor de z
correspondiente a una probabilidad acumulada igual a p y sumndole a continuacin
cinco unidades), se obtiene una distribucin de puntos en un sistema bivariado de
tipo lineal, los cuales se procesan segn un anlisis de regresin tpico. Vale la pena
enfatizar que el Probit es una transformacin sobre la tasa de efecto (p), y la
ecuacin generada es de la forma:
44

y a bx
Donde:
y (expresado en unidades Probit) = z + 5
z= Variable normal estndar = zO tal que la Prob (z zO) = p
a y b son los estimadores de los parmetros de la recta de regresin
As, cuando p= 50% entonces y = 5, por lo tanto:
X5= log10 CL50, entonces CL50 = 105
Para facilitar los clculos, simplemente se puede usar un software como el

suministrado por la EPA, El procedimiento Probit permite encontrar estimadores mverosmiles de parmetros de regresin y de tasas naturales (por ejemplo, tasas de
mortalidad) de respuesta para ensayos biolgicos, analizando porcentajes de efecto
vs. dosis dentro del marco de la regresin. 13
2.15.1.2 Aceptabilidad de los resultados

La mortalidad en el control negativo no debe exceder el 10%.
La concentracin final de oxgeno disuelto debe ser mayor de 2 mg/L.
La CL50 para el txico de referencia deber estar dentro de los lmites de confianza
preestablecidos en la carta control.
_____________________________________
13
DAZ BEZ, Mara Consuelo, PICA GRANADOS, Yolanda RONCO, Alicia. Ensayos toxicolgicos y mtodos de
evaluacin de calidad de aguas. [citado 5 de Agosto de 2007]. Disponible en Internet: http://www.idrc.ca/openebooks/1477/#page_65gs\\bioensayos\Captulo 5_ Mtodos Estadsticos para el Anlisis de Resultados de Toxicidad Internacional
45

En caso de emplear un control positivo de concentracin cercana a la CL50, los

valores de mortalidad obtenidos debern encontrarse cercanos al 50%. Se puede
considerar aceptable el encontrar mortalidades entre el 33 y 57%. 14
2.15.2. Anlisis de varianza (ANOVA) La abreviatura ANOVA proviene del ingls
Analysis Of Variance. La teora y metodologa del anlisis de la varianza fueron
desarrolladas e introducidas por R.A. Fisher durante los primeros aos de la
segunda dcada del siglo XX.
El nmero de anlisis de la varianza que utiliza ANOVA proviene del hecho de que a
pesar de que comparamos medias, el estadstico de contraste que utiliza ANOVA se
basa en el cociente de dos estimadores de la varianza.
El objetivo del anlisis de varianza es comparar si los valores de un conjunto de
datos numricos
son significativamente distintos a los valores de otro o ms
conjuntos de datos. Para este tipo de anlisis se requiere que el nmero de replicas
por tratamiento sea superior a tres y que todos los tratamientos tengan el mismo
nmero de replicas. En el caso que las replicas sean menores de tres no se deber
proceder con una prueba hiptesis.
La tcnica de contraste de hiptesis sirve para comprobar si una determinada

hiptesis sobre un hecho vinculado a un experimento aleatorio se puede aceptar o
se tiene que rechazar. Para esto se establece una hiptesis nula y una hiptesis
alternativa. 15
_________________________
14
APHA, 1998, Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 20th ed., American Public
Health Association, Ap. 8010G., Washington D.C., pp. 8-20, 8-23.
15
El anlisis de la varianza (ANOVA). Josep Gibergans Bguedisponible en www.uoc.edu
46

HIPOTESIS NULA:
Todas las medidas poblacionales de las que provienen las muestras son iguales.
Ho: 1 = 2 = 3
Las diferentes concentraciones producen el mismo efecto en todos los organismos.
HIPOTESIS ALTERNATIVA:
No todas las medidas son iguales
H1: las medidas no son iguales
Las diferentes concentraciones producen un diferente efecto en todos los
organismos.
En la prueba ANOVA, se rene evidencia muestral de cada poblacin bajo estudio y
se usan estos datos para calcular un estadstico muestral. Despus se consulta la
distribucin muestral apropiada para determinar si el estadstico muestral contradice
la suposicin de que la hiptesis nula es cierta. Si es as, se rechaza; de lo contrario
no se rechaza.
Hemos de recordar que en la prueba de varianza con dos poblaciones se calcula el
coeficiente de las varianzas muestrales y se verifica con arreglo a la distribucin F.
Este procedimiento tambin se usa en ANOVA para probar la hiptesis nula.
Se supone que todas las poblaciones bajo estudio tienen la misma varianza, sin
importar si sus medias son iguales. Es decir, ya sea que las poblaciones tengan
medias iguales o distintas, la variabilidad de los elementos alrededor de su
respectiva media es la misma. Si esta suposicin es vlida, entonces se puede
probar la hiptesis nula de las medias poblacionales iguales usando la distribucin
F.
47

El anlisis de varianza parte de algunos supuestos que han de cumplirse:

La variable dependiente debe medirse al menos a nivel de intervalo.
Independencia de las observaciones.
La distribucin de la variable dependiente debe ser normal.
Homogeneidad de las varianzas
Los modelos de efectos aleatorios asumen que en un factor se ha considerado tan
slo una muestra de los posibles valores que ste puede tomar, estos modelos se
usan para describir situaciones en que ocurren diferencias incomparables en el
material o grupo experimental. El ejemplo ms simple es el de estimar la media
desconocida de una poblacin compuesta de individuos diferentes y en el que esas
diferencias se mezclan con los errores del instrumento de medicin.
La tcnica fundamental consiste en la separacin de la suma de cuadrados (SS,
'sum of squares') en componentes relativos a los factores contemplados en el
modelo. El nmero de grados de libertad (gl) puede separarse de forma similar y se
corresponde con la forma en que la distribucin chi-cuadrado describe la suma de
cuadrados asociada, (glTotal = glError + glFactores ). Los datos de resultados de ANOVA
deben ser registrados en las tablas que se observan en el (Anexo I).
2.16 HERBICIDAS
Un herbicida es un producto fitosanitario utilizado para matar plantas indeseadas.
Los herbicidas selectivos matan ciertos objetivos, mientras preservan la cosecha
relativamente indemne. Algunos actan interfiriendo con el crecimiento de las malas
hierbas y se basan frecuentemente en las hormonas de las plantas. Pero los
herbicidas utilizados para limpiar grandes terrenos no son selectivos y matan toda
planta con la que entran en contacto16.
48

2.16.1. Clasificacin de herbicidas Los herbicidas se clasifican segn su finalidad,

su modo de actuacin y segn el momento de aplicacin; a continuacin se
nombrarn de manera resumida:
2.16.1.1. Por su finalidad
Total. Es aquel que destruye toda la vegetacin sobre la que se aplica. Puede
ser selectivo si se aplica en dosis menores.
Selectivo. Son aquellos que en condiciones normales destruyen las malas
hierbas y no el cultivo.
En un tratamiento selectivo hay que tener en cuenta:
Dosis exacta que recomienda la casa comercial.
La mxima uniformidad posible en la distribucin del producto.
Naturaleza de la planta.
Empleo del producto adecuado.
2.16.1.2. Por su modo de actuacin
Residuales. Son aquellos que permanecen en el suelo el suficiente tiempo como
para ir matando las malas hierbas en el momento de su germinacin; estos
productos no son txicos para la planta cultivada o se descomponen en productos
no txicos antes de que nazca sta.
__________________________
16.
Casley J.C. Manejo de malezas para pases en desarrollo. Capitulo 10, Herbicidas. Deposito
Documentos de la FAO.
49

Se aplican despus de la siembra del cultivo y antes de su germinacin.

De contacto. Aquellos que matan las plantas sobre las que caen, pero su accin
txica es de muy poca duracin y se descomponen rpidamente en sustancias no
fitotxicas o se evaporan. En este tipo de herbicidas hay que tener en cuenta el
factor mojabilidad, ya que solamente quema las partes que moja.
Sistmicos. Penetran en el interior de la planta, mezclndose con la savia y
repartindose por toda ella. Actan por translocacin.
2.16.1.3. Segn el momento de aplicacin
Pre- siembra o preplantacin.
Son los que se aplican despus de la preparacin del suelo, pero antes de la
siembra o plantacin.
Preemergencia Son los productos que se aplican despus de la siembra de la
planta cultivada, pero antes de su germinacin.
Post-emergencia. Son aquellos que se aplican despus del nacimiento de las
malas hierbas y de la planta cultivada17.
2.16.2. Formulacin
Los herbicidas se fabrican en forma relativamente pura, que se denomina herbicida
de grado tcnico. Este puede ser slido o lquido, y raramente es adecuado para ser
________________________________
17.
Dorronsoro Carlos, Garca Ins. Contaminacin del suelo. Tema 13 Herbicidas. Universidad de
Granada Espaa.
50

usado as en el campo. Por ejemplo, el herbicida para avena silvestre difenzoquat se

fabrica en la forma de sulfato de metilo y es fcilmente soluble en agua (765 g/1),
pero la solucin acuosa de difenzoquat no tiene actividad herbicida a menos que se
agregue un tensoactivo o surfactante no-inico a la solucin.
El tensoactivo o surfactante facilita la retencin y penetracin del herbicida y se
incorpora en el producto comercial, que es un concentrado soluble. El producto
formulado de todos los herbicidas aplicados mediante asperjadoras tiene que ser
soluble o miscible, en un vehculo conveniente, que es generalmente agua. Adems
de presentar buenos resultados en el campo, tiene que ser estable durante el
transporte y almacenaje y ser capaz de soportar situaciones climticas extremas.
Al igual que los concentrados solubles, se formulan compuestos solubles en agua
en forma de granulados dispersables en agua, que contienen slidos molidos
finamente combinados con agentes de suspensin y dispersantes (tensoactivos o
tensoactivo o surfactantes). Se pueden agregar directamente en el tanque de la
asperjadora y verter limpiamente desde el envase (por ej., metsulfuron-metil).
En el caso de compuestos con baja solubilidad, el ingrediente activo puede molerse
hasta convertirlo en un polvo, mezclarlo con un portador inerte y un tensoactivo o
surfactante y ser vendido como un polvo humedecible o humectable.
Varios herbicidas son cidos dbiles y reaccionan con bases para formar sales y
con alcoholes para formar steres. Las sales son solubles en agua, insolubles en
aceite y tienen baja volatilidad, mientras que los steres son insolubles en agua,
solubles en aceite y tienden a tener alta volatilidad. Los steres generalmente tienen
una actividad herbicida superior a las sales, pero su alta volatilidad puede provocar
daos a plantas que se encuentran fuera del rea a tratar. Los steres de la mayora
de otros grupos de herbicidas, incluyendo los steres de cido ariloxifenoxialcanoico
(por ej. fenoxaprop-etil) no son voltiles18.
51

El contenido de ingrediente activo (i.a.) se expresa sobre la etiqueta del producto

como g i.a./peso o volumen del producto y/o como % i.a. p/p (peso del i.a. como %
del peso de i.a. + portador + formulantes). A menudo se describe el i.a. de las
formulaciones de ster y sal de cidos dbiles como e.a. (equivalente cido), ya que
el cido es el ingrediente fitotxico liberado en la planta.
2.16.3. Mezclas
Mientras que algunos productos son formulaciones de un solo ingrediente activo
(por ej., glifosato), la mayora de los productos formulados son mezclas de dos o
ms ingredientes activos. Las mezclas aumentan el espectro de malezas
controladas y/o combinan la actividad de contacto o sistmica con la residual (por
ej., 2, 4-D ms atrazina). En los productos formulados, los componentes de la
mezcla han sido evaluados por su compatibilidad fsica y qumica en el tanque de
aspersin, por efectos adversos sobre la fitotoxicidad contra las malezas y por su
selectividad en los cultivos.
Las mezclas de tanques consisten en la unin en el tanque de aspersin de dos o
ms productos herbicidas formulados independientemente y otros plaguicidas. Los
beneficios de las mezclas de tanque son los ahorros que se pueden hacer en el
tiempo consumido para la aplicacin y menor cantidad necesaria del vehculo del
asperjado (agua). Adems, a menudo dosis reducidas de los herbicidas individuales
son efectivas. Sin embargo, algunas mezclas han resultado antagnicas19.
___________________________
18,19
Rodrguez Tineo Elio. Proteccin y sanidad vegetal. Seccin 2 Combate y control de malezas.
Universidad central de Venezuela. 2000.
52

Algunas mezclas de tanque aumentan la fitotoxicidad y pueden daar al cultivo: por

ejemplo, los insecticidas organofosforados bloquean el metabolismo de propanil en
arroz. Es de la mayor importancia cumplir las instrucciones de las etiquetas con
respecto a las mezclas de tanque, y si se contemplan mezclas "no incluidas en la
etiqueta", se debe evaluar su efectividad y seguridad para el cultivo antes de su uso
rutinario. Como regla general, surgen ms problemas con las mezclas de tanque de
herbicidas de aplicacin foliar que con los de aplicacin al suelo.
2.16.4. Coadyuvantes
Los productos herbicidas comnmente contienen tensoactivos o surfactantes y
otros componentes para asegurar buenas caractersticas de almacenaje y facilitar su
mezcla con el agua en el tanque de la asperjadora. Estos formulantes tambin
ayudan a la retencin sobre y la penetracin dentro de las malezas objeto de la
aplicacin. Para ciertas malezas y bajo determinadas condiciones climticas, se
puede aumentar la accin del herbicida mediante tensoactivos o surfactantes o
coadyuvantes oleosos, que se mezclan en el tanque con el herbicida.
Las molculas de los tensoactivos o surfactantes tienen dos partes diferenciadas. El
extremo lipoflico generalmente est compuesto de estructuras en forma de largas
cadenas hidrocarbonadas o de anillos benznicos y posee baja solubilidad en agua
y alta solubilidad en aceite. La parte hidroflica tiene una fuerte afinidad por el agua.
Existen tres tipos principales de tensoactivos o surfactantes, determinados por la
estructura qumica de la porcin hidroflica de la molcula. Los amnicos y
catinicos se ionizan en agua para formar sustancias cargadas negativa y
positivamente, respectivamente. Los tensoactivos ms ampliamente usados son los
no inicos, que son fciles de usar y no son afectados por aguas duras. Los
tensoactivos disminuyen la tensin superficial de las gotas del asperjado y
aumentan su cobertura sobre la superficie del follaje.
53

Un coadyuvante inadecuado puede provocar la prdida de la actividad fitotxica y/o

daos al cultivo, y por lo tanto, slo deben usarse los coadyuvantes recomendados
en la etiqueta del producto para cada herbicida, maleza y situacin de cultivo, o por
un asesor local experto. Se recomienda enfticamente la evaluacin de los
coadyuvantes bajo condiciones locales (Holloway 1993) por una amplia resea
sobre formulaciones y coadyuvantes.
2.16.5 Como actan los herbicidas
Pueden actuar va radicular o va foliar. Los que se absorben por va foliar
deben atravesar la cutcula o entrar por los estomas.
Los que penetran por las races lo hacen disueltos conjuntamente con las
sustancias alimenticias del suelo.
Una vez que ha penetrado en el interior del vegetal, puede ejercer su accin
alrededor de su zona de penetracin o moverse a lo largo de la planta si es
de translocacin. En este caso el herbicida produce su accin txica en
donde se almacena, o a lo largo de su trayecto20.
2.16.6. Factores que afectan la actividad de los herbicidas La efectividad puede

variar segn numerosos factores: absorcin (solubilidad del herbicida), naturaleza
del suelo, naturaleza del herbicida, acidez del suelo, humedad, volatilizacin,
degradacin, disponibilidad de herbicidas en el suelo, insolacin, temperatura,
precipitaciones, viento y otros factores culturales.
___________________
20.
Dorronsoro Carlos, Garca Ins. Contaminacin del suelo. Tema 13 Herbicidas. Universidad de
Granada Espaa.
54

2.16.7. GLIFOSATO
El uso de herbicidas de amplio espectro aplicados por va area con el fin de
erradicar los cultivos ilcitos causa graves e innecesarios problemas de salud en
personas y animales, contamina suelo, aire, agua y alimentos, y destruye cultivos
bsicos, animales de cra y peces base de la sobrevivencia de comunidades
campesinas e indgenas y atenta contra la biodiversidad21.
2.16.7.1. Estructura y propiedades del glifosato
2.13.7.1.1. Frmula del Glifosato
Composicin: Sal isopropilamina de N-(Fosfono metil) glycina.

ROUNDUP: Solucin viscosa de color ambarino claro
OO
|| ||
HO - C - CH2 - NH - CH2 - P - OH
|
OH
Fuente. Fred Slyfe. Universidad de Illinois. 1992.
2.16.7.1.2. Formulacin comercial del glifosato El Glifosato es una molcula

formada por una fraccin de glicina y un radical aminofosfato unido como
sustituyente de uno de los hidrgenos del grupo -amino.
_____________________
21
.Kaczewer Jorge. Toxicologa del Glifosato: Riesgos para la salud humana. 2002. Disponible en:
www.ecoportal.com.ar/content/view/full/21199
55

Como producto protector de cultivos, constituye uno de los descubrimientos

agroqumicos ms importantes de este siglo, siendo el herbicida de mayor uso en el
mundo por ser efectivo, seguro y porque permite su aplicacin de diversas maneras.
Las formulaciones de glifosato se encuentran registradas en ms de cien pases,
incluyendo los Estados Unidos; en donde ha sido aprobado por la E.P.A. (Agencia
de Proteccin Ambiental) para ser utilizado en ms de sesenta cultivos agrcolas, en
manejo de bosques sometidos a intervencin para su conservacin, y en sistemas
de cultivos diferentes, incluidos el mantenimiento de canales y vas y los jardines
pblicos y domsticos. (130 aplicaciones en total). Bajo los siguientes numerales se
har una presentacin resumida para caracterizar los aspectos relevantes de la
constitucin qumico biolgico del herbicida Glifosato.
2.16.7.2. Caractersticas Generales Glifosato es un herbicida no selectivo de

accin sistmica, de amplio espectro, y adecuado para el control de muchas
especies de malezas, en tratamientos de post emergencia al follaje. No acta sobre
las semillas que existieran por debajo del suelo y tampoco es absorbido por las
races. En igualdad de condiciones tambin se puede decir que no es de accin
residual prolongada y que no es ni acta como herbicida esterilizante del suelo. La
casi totalidad de las formulaciones comerciales del Glifosato son fciles de manejar,
muy solubles en agua y qumicamente muy estables en cualquier proporcin.
2.16.7.3. Propiedades Fsico - Qumicas Por la naturaleza de sus propiedades

fsicas y qumicas el Glifosato es un plaguicida perteneciente al grupo de los
herbicidas de accin sistmica, por la va del follaje. No es apto para tratamientos de
control de malezas por la va del sistema radicular.
El Glifosato es una solucin lquida, clara, viscosa y de color ambarino; normalmente
tiene una concentraciones de iones H de 4,4 a 4,9 y una gravedad especfica de
1,17. Prcticamente inoloro o con un ligero olor a amina; tiene un peso molecular de
56

169,08 y un punto de fusin de 200o C. En la siguiente tabla se indica algunos de

sus propiedades.
Tabla N 2 Propiedades Fisicoqumicas
COMPUESTO PURO
(INGREDIENTE ACTIVO)
SAL DE GLIFOSATOISOPROPILAMONIO
Frmula Molecular
Peso Molecular
C3 H8 N O5 P
169.1 g/mol
Estado fsico
Slido blanco
C8 H17 N2 O5 P
22.2 g/mol
Liquido viscoso color ambar
amarilla
Inodoro con ligero olor a
amina
1,160 - 1.180 g/mol
No aplica (estado (lquido)
PROPIEDAD
Olor
Inodoro
Densidad
Punto de fusin
0.5 g/ml
184.5 C
Presin de vapor
Punto de Ebullicion
pH en solucin al 1%
Solubilidad en agua
Otros solventes
Estabilidad
Coeficiente de Particin
octanol/agua
Constante de Ley de Henry
Corrosividad
3 x 10 ^ (-7) mm Hg a 25 C
1.84 x 10 ^ (-7) mm de Hg a 45C

Se descompone
2.5
12.000 ppm a 25C
Ninguno
32 das a 25 C y pH = 5.7 9
Se descompone
4,7
900.000 ppm a 25C
Slo soluble en agua
32 das a 25 C y pH = 5.7 9
Pow = -2.8
< 7 X 10 ^ (-11)
No corrosivo
N.D.
N.D.
No corrosivo
Fuente: Documento Plan de Manejo Ambiental Erradicacion de Cultivos Ilcitos. 2000
2.16.7.4. Tipos de Formulaciones Comerciales El glifosato se comercializa en la

forma de concentrados solubles de la sal isopropanolamina del N- (Fosfonometil)
glicine, en los cuales se integran el Glifosato y los ingrediente inertes requeridos
para cada tipo de formulacin comercial. Aunque la forma de comercializacin ms
comn son los concentrados solubles en agua, tambin es posible tener acceso a
las siguientes preparaciones para uso especficos:
57

Ingrediente de grado qumicamente puro (Para uso de laboratorio)

Ingrediente de grado tcnico.
Concentrados emulsionables y concentrados en emulsiones invertidas
Concentrados solubles en agua, de diferente concentracin
Polvos mojables, solubles en agua y para espolvoreo y Formulaciones fumigantes
Formulaciones granulares y Formulaciones encapsuladas
2.16.7.5. Surfactantes
En la formulacin de un herbicida se presentas tres
componentes bsicos, la sustancia o ingrediente activo; el disolvente o vehculo, que

generalmente carece de efecto fitotxico; y el coadyuvante o surfactante. Este ltimo
es inerte y por tanto carece de accin pesticida, lo que no quiere decir que se
descarte su potencial toxicolgico. Este tiene como objeto incrementar la actividad
del ingrediente activo y el control del efecto deriva, al reducir la ruptura de la mezcla
en gotas tan pequeas que pueden ser arrastradas del rea de aplicacin
Ingrediente activo: Glifosato, N-(Fosfonometil) glicina, en sal isopropilamina, 41,0%

Inertes (Seboaminas etoxiladas)* 59,0 %
Algunas de las formulaciones comerciales del Glifosato incorporaban un surfactante
conocido como POEA, en una proporcin cercana al 15 %. Este compuesto, segn
varias investigaciones toxicolgicas, puede ser causa de daos gastrointestinales,
ciertas afecciones al sistema nervioso central, algunos problemas respiratorios y ser
capaz de destruir los glbulos rojos en la sangre humana.
Del POEA se dice, tambin, que puede contener una impureza identificada como 14 Dioxano la cual, se menciona igualmente, que ha demostrado tener capacidad
cancergena para animales y de causar dao en el hgado y los riones de los
humanos.
58

A continuacin podemos ver algunas de los nombres comerciales usados en nuestro

pas para la distribucin del glifosato y sus respectivas concentracines:
Tabla N 3 Presentaciones comerciales del Glifosato
NOMBRE COMERCIAL
Faena 320
Faena 320 SL
Fuete SL
Ranger SL
Rocket SG
Rocky SL
Roundup madurante SL
Roundup SG
Roundup SL (Sal)
Glifosato 48 SL
Clinofox
Glifosol SL
Glyfosan SL
Glyphogan 480 SL
Candela 120 SL
Candela XL
Coloso SL
Panzer 320 SL
Panzer 480 SL
Regio SL
FIRMAS PRODUCTORAS
Proficol SA
Monsanto Colombia
Monsanto Colombia
Monsanto Colombia
Monsanto Colombia
Monsanto Colombia
Monsanto Colombia
Monsanto Colombia
Monsanto Colombia
Coagro Ltda
Cedar Crystal Chemical
Colijap Ind. Agroqumica
Quimicos e Insumos Agrcolas
Magan de Colombia
Agroser SA
Agroser SA
Basf Qumica Colombiana
Invequmica SA
Invequmica SA
Quimor SA
CONCENTRACIN
320 g/L
320 g/L
480 g/L
240 g/L
74-75%
120 g/L
480 g/L
74-75%
480 g/L
48%
480 g/L
480 g/L
480 g/L
480 g/L
120 g/L
120 g/L
480 g/L
320 g/L
480 g/L
480 g/L
REGISTRO
ICA
1800
1775
2475
2312
1993
1757
2670
2488
756
2699
2490
2337
2234
2530
2233
2800
2609
2569
2399
2211
Fuente: Documento Plan de Manejo Ambiental Erradicacin de Cultivos Ilcitos. 2000.
2.16.7.6. Propiedades, toxicidad y ecotoxicidad Glifosato es un herbicida simple,

no selectivo, de amplio espectro (toda planta que reciba por lo menos un 20% de
ste es controlada), de naturaleza post-emergente (post - nacimiento), con actividad
sistmica en las plantas.
59

El producto comercial es una formulacin concentrada de la sal Isopropilamina de

glifosato, a concentraciones variables, con agua como solvente, y adicionado de una
sustancia tensoactiva que permite su dispersin uniforme tanto en la mezcla para
aplicacin, como sobre el follaje de las plantas a las cuales se aplica.
Nombre Qumico: N - (Fosfonometil) glicina (I.U.P.A.C. y C.A.)
Nombre Comn: Glifosato (E-ISO, F-ISO, )
Grupo Qumico:
N-fosfonoaminocido
Formula estructural:
Compuesto Puro (Ingrediente activo)
OO
OH - C - CH2 - NH - CH2 P - OH
OH
Sal de Glifosato-Isopropilamonio
O
CH3
OH - C - CH2 - NH - CH2 - P O-
H3N+
.
CH
OH
CH3
2.16.7.7 CONDICIONES PARTICULARES MEZCLA DE ROUNDUP

La mezcla de aspersin sobre cultivos de coca y amapola se compone de glifosato
utilizado bajo la presentacin comercial Roundup Ultra constituyendo el 44% de la
mezcla en proporcin volumen/volumen lo que determina una concentracin de 180
g de Glifosato como principio activo por litro de la mezcla. Adems se agrega el
surfactante no-inico
60
denominado Cosmoflux 411F, cuyo uso se realiza

nicamente en Colombia, al 1%, y el 55% restante de la mezcla est constituido por

agua. La tasa de aspersin de la mezcla sobre los cultivos para el Roundup Ultra es
de 17.6 a 30.8% L/ha. Los parmetros de uso de la mezcla citados anteriormente se
contraponen a los establecidos por los fabricantes de estos agroqumicos quienes
recomiendan una concentracin de 1.6% a 7.7% de Roundup Ultra en la mezcla y
una tasa de aspersin de 2.8 L/ha.
En investigaciones conducidas en Australia, la formulacin Roundup ha demostrado

una seria toxicidad a anfibios. En un estudio comisionado en 1995 por el Western
Australian Department of Environmental Protection (DEP) y dirigido por el Dr.
Joseph Bidwell del Curtin Exotoxicology Program concluy que Roundup 360 (otra
formulacin de Roundup que contiene glifosato y surfactantes) puede ser
agudamente txico a ranas adultas y renacuajos en las tasas de aplicacin
recomendadas (1.8 to 5.4kg/ha). Roundup 360 fue ms txico a ranas y renacuajos
que el grado tcnico de glifosato solo. Fue asumido que el surfactante de Roundup,
y no glifosato en s, hubo causado el incremento en toxicidad. Hay que notar que es
precisamente el mismo surfactante (POEA) que se encuentra en el Roundup
utilizado en Colombia22.
La toxicidad de formulaciones de glifosato a biotas acuticas est muy bien

establecida, y ste es el tema ms importante para Ecuador pues muchos ros de
origen colombiano fluyen al sur, entrando en territorio ecuatoriano. En la ausencia
de investigacin cientfica sobre, entre otras cosas, las concentraciones y los efectos
de las formulaciones de glifosato en tanta variedad de ecosistemas.
___________________
22.
BINLFA. Report on issues relate on the aerial eradication of illicit coca in Colombia. Released by
the Bureau for International Narcotics and Law Enforcement Affairs. 2002
61

2.16.7.8. Caractersticas de accin de la mezcla

El glifosato es el nico herbicida comercializado que afecta la biosntesis de los
aminocidos aromticos. Se trata de uno de los herbicidas ms mviles por el
floema y es especialmente efectivo contra las malezas perennes, al acumularse en
el tejido de los tallos, races y rganos de almacenamiento. Como resultado, la
divisin celular y el crecimiento se detienen, en una semana o menos
posteriormente entrar en un proceso de necrosis.
Este herbicida penetra el follaje con relativa lentitud y requiere normalmente un

periodo de seis horas sin lluvia despus de su aplicacin para asegurar un efecto
fitotxico ptimo. Estos sntomas son ms fuertes y se presentan primero en el
pice y en las zonas meristemticas23 para luego extenderse por las partes ms
antiguas de la planta.
La absorcin del herbicida depende muchas veces de factores ambientales como la

lluvia, el viento y la temperatura, pues despus de la fumigacin el agente qumico
puede evaporarse y perderse en la atmosfera, permanecer en la superficie de la
cutcula o penetrar a travs d la cutcula o de los estomas24.
2.16.7.9. Impacto en el agua

El Glifosato es altamente soluble en agua, con una solubilidad de 12 gramos/litro a
25C, pero se caracteriza por tener menor persistencia en el agua que en los suelos,
seguramente por la adsorcin a partculas en suspensin, a sedimentos y a la
______________________
23
Son tejidos embrionarios que se multiplican activamente para formar los tejidos adultos
diferenciados y a su vez originan nuevas clulas meristemticas. Los meristemas permiten que se
produzca el crecimiento de las plantas en sentido longitudinal y diametral.
24
Manejo de malezas para pases en Desarrollo. Estudio FAO Produccin y Proteccin Vegetal. Pag
120.1996
62

descomposicin microbiana. Dos estudios canadienses encontraron persistencia del

Glifosato en el sedimento 400 das despus de su aplicacin.25
Igualmente por el efecto de deriva, el Glifosato asperjado puede caer en cuerpos de

agua aportando fsforo (el Glifosato es un organofosforado), y por tanto,
produciendo un problema de eutroficacin perjudicial para flora y fauna. Esta
incidencia es corroborada por los anlisis efectuados sobre los cultivos ubicados en
el cordn fronterizo de Colombia y Ecuador en donde se sugiere que la
concentracin de fosforo en las plantas estaba incrementada en un 300% y
constitua la causa de la mortalidad de las plantas a tres (3) Kilmetros
de la
frontera; de tal forma, era evidente el efecto deriva de las fumigaciones areas26.
El Decreto 1843 de 1991 en el artculo 35 determina que se deber establecer una

franja de seguridad minima de 100 metros para aplicacin area de plaguicidas,
distante de ros, carreteras, personas, animales y/o cultivos susceptibles de dao
por contaminacin.
2.16.7.10 Impacto en el suelo

Aunque el glifosato no es aplicado directamente al suelo, una cantidad significativa
puede alcanzar la superficie del mismo (Haney et al., 2002). La cantidad de glifosato
disponible en el suelo depende de varios factores.
___________________
25
26
Cox, op. Cit.
MALDONADO, Adolfo. Impactos en la salud ecuatoriana. Fumigaciones fronterizas del Plan

Colombia.
63

2.17.7.10.1. Composicin y pH: A mayor concentracin de fosforo (P) en el suelo

se reduce la capacidad de adsorcin del glifosato a partculas del mismo y sus
reacciones de adsorcin son ms dbiles, lo que promueve una mayor movilidad en
el glifosato. El aumento del pH del suelo incrementa la estabilidad del Al+3 y el Fe+2
y, de este modo, promueve el mantenimiento de concentraciones ms altas de estos
cationes. Ello conlleva a una mayor adsorcin del glifosato a partculas del suelo.
(Jonge et. Al., 2001).
2.16.7.10.2. Actividad microbiana del suelo y temperatura: La tasa de
degradacin del glifosato ha sido correlacionada con la actividad microbiana de los
suelos y esta a su vez est relacionada con la temperatura. El glifosato es
descompuesto por microorganismos en el suelo, agua y sedimento a travs de dos
vas: en una de ellas se presenta el clivaje del enlace C-N, lo cual lleva a la
formacin de acido aminometilfosfnico (AMPA), el cual es posteriormente
transformado en metilamina (Gardner & Grue, 1996); y una segunda va en la cual
ocurre el clivaje del enlace C-P formando sarcosina (N-metil-glicina), el cual es
biodegradado a glicina, formando CO2 a travs de la va del formaldehido (WHO,
1994).
2.16.7.11. Impacto en la vegetacin
El glifosato, por ser herbicida de amplio espectro, tiene efectos txicos sobre la
mayora de especies de plantas y puede ser un riesgo para especies en peligro de
extincin si se aplica en reas donde ellas viven. De acuerdo con informacin de la
EPA, ms de 74 de estas especies en Estados Unidos pueden estar en riesgo por el
uso del glifosato. Adems, dosis subletales pueden incrementar la susceptibilidad de
algunas plantas (manzana, cebada, soya, tomate) a enfermedades causadas por
hongos.
64

Puede tambin inhibir hongos benficos que ayudan a las plantas a absorber
nutrientes y agua. En dosis subletales puede interferir con algunos procesos
metablicos en plantas; en frijol, inhibir la absorcin de potasio y sodio, y en
esprragos y lino, reducirse la produccin de lignina.
65

3. MARCO LEGAL
Para la proteccin de los derechos colectivos y del ambiente, la fumigacin de

cultivos de uso ilcito y el manejo de herbicidas en nuestro pas, la reglamentacin
aplicada se resume a continuacin.
Cuadro N 2 Legislacin
NORMA
LEY 812 de 2003, Articulo 8, Literal A
numeral 2 de la Ley 812 de 2003
Ley 99 de 1993
LEY 30 DE 1986, Articulo 91, literal g) de la

Ley 30 de 1986
Decreto 2159 de 1992, Articulo 5
Decreto 1843 de 1991, Artculos 82 101
66
DESCRIPCION
Por el cual se implementa la poltica de
lucha contra el problema de las drogas
ilcitas y el crimen organizado estar
orientada hacia la desarticulacin del
proceso de produccin, comercializacin y
consumo de drogas.
Por el cual el Ministerio de Ambiente,
Vivienda y Desarrollo Territorial, en ejercicio
de las funciones de evaluacin, control y
seguimiento asignadas en la Ley, adelanta
de Manera peridica visitas de control y
seguimiento a las actividades del Programa
y verifica el cumplimiento de las medidas
establecidas en el Plan de Manejo
Ambiental.
Relacionada con la destruccin de los
cultivos de marihuana, coca y dems
plantaciones de las cuales se puedan
extraer
sustancias
que
produzcan
dependencia, y teniendo en cuenta
consideraciones
de
ndole
social,
econmica, legal, de salud, ambiental y
orden pblico.
Establece las funciones de la Direccin
Nacional de Estupefacientes.
Uso y manejo de plaguicidas para
actividades
agrcolas,
indican
los
requisitos y condiciones tcnico sanitarias
para desarrollar actividades
Inherentes a la aplicacin de plaguicidas
por va area.

RESOLUCIN 008 de Marzo 2 de 2007 del

Consejo Nacional de Estupefacientes
RESOLUCIN 0015 del 05 de agosto de

2005 del Consejo Nacional de
Estupefacientes
RESOLUCION 1054 del 30 de septiembre

de 2003 Ministerio de Ambiente, vivienda
y desarrollo Territorial.
RESOLUCIN 031 de Septiembre 26 de

2003 del Consejo Nacional de
Estupefacientes
RESOLUCIN 013 de Junio 27 de 2003 del
RESOLUCION 1065 de noviembre de 2001

Ministerio de Ambiente, Vivienda y
Desarrollo Territorial
RESOLUCIN 005 de Agosto de 2000 del

67
Por la cual se modifica la Resolucin

nmero 0017 del 04 de octubre de 2001
que establece un procedimiento para la
atencin de quejas derivadas de los
presuntos daos causados por la aspersin
area con el herbicida glifosato, dentro del
marco del Programa de Erradicacin de
Cultivos Ilcitos.
Por el cual se autoriza al Presidente del
Consejo Nacional de Estupefacientes, para
decidir sobre la aspersin area con el
herbicida Glifosato en Parques Nacionales
Naturales, siempre y cuando se realice una
evaluacin previa para cada parque en
particular.
Por la cual se modifica un Plan de Manejo
Ambiental
y
se
toman
otras
determinaciones. En donde el MAVDT., en
uso
de
sus
facultades
legales
especialmente las conferidas en la Ley 99
de 1993, el Decreto 1753 de 1994, el
Decreto 1180 de 2003. Bajo el precepto que
en Colombia se desarrolla el Programa de
Erradicacin de Cultivos Ilcitos mediante
aspersin area con Glifosato. (PECIG).
Por la cual se modifica el artculo 5 de la
Resolucin nmero 0013 del 27 de junio de
2003 mediante la cual se adopta un nuevo
procedimiento para el Programa de
Erradicacin de Cultivos Ilcitos.
Por la cual se revocan las Resoluciones
nmeros 0001 del 11 de febrero de 1994 y
0005 del 11 de agosto de 2000 y se adopta
un nuevo procedimiento para el Programa
de Erradicacin de Cultivos Ilcitos. .
Referente a la erradicacin de cultivos
ilcitos mediante aspersin area con el
herbicida glifosato cuenta con un Plan de
Manejo Ambiental.
Modifica y amplia la resolucin 001/94,

establece
procedimientos
para
la
erradicacin, define la auditoria tcnica y
determina la creacin del Comit Tcnico

Interinstitucional, como rgano asesor para

el desarrollo del Programa de Erradicacin
de Cultivos.
Por la cual se adopta el Manual Tcnico en
Materia de Aplicacin de Insumos
Agrcolas.
Resolucin 1068 de 1996
RESOLUCIN 001 de Febrero de 1994 del

Sentencia del 19 de octubre de 2004 del

Consejo de Estado
Mediante la cual se resolvi extender y

precisar las autorizaciones concedidas para
la destruccin y erradicacin de cultivos
ilcitos en el pas, a travs de los medios
idneos prescritos para tal fin.
Mediante el cual se ampar la fumigacin
de cultivos ilcitos, sealando De las
pruebas reseadas no se infiere, con
certeza, que el glifosato empleado para la
erradicacin de cultivos ilcitos produzca
daos irreversibles en el medio ambiente;
por el contrario, hay elementos de juicio que
permiten concluir que la regeneracin de las
zonas asperjadas se produce en lapso no
muy largo y que, en cambio, numerosas
hectreas de bosques son destruidas por
causa de la tala de estos cultivadores
ilcitos.
Fuente: Elaboracin propia.
68

4. METODOLOGIA
En este captulo se mencionan los diferentes procedimientos desarrollados en la

elaboracin del proyecto, la metodologa a seguir para la elaboracin de bioensayos
de toxicidad con Daphnia Magna durante toda la investigacin se desarrollar en
cinco fases y se explica en el diagrama N 1.
4.1. APRENDIZAJE SOBRE LA MANIPULACION DE LA DAPHNIA magna
4.1.1. Diseo Experimental
En el proceso de investigacin se midieron y
controlaron las siguientes variables:
Variables independientes: Concentracin del Herbicida buscando establecer el

efecto sobre la Daphnia magna.
Variables dependientes: Concentracin letal media (CL50-48) del herbicida en un
tiempo de 48 horas de exposicin por el ciclo de vida del organismo prueba
puesto que el resultado depende de los efectos que los txicos ocasiona a los
organismos prueba.
Constantes: Nmero de organismos utilizados (20 neonatos de Daphnia magna
por cada concentracin) tiempo de duracin de los ensayos (48 horas) y los
parmetros
fisicoqumicos
requeridos
durante
el
mantenimiento
de
los
organismos y durante las pruebas toxicolgicas (pH, dureza, temperatura y

oxigeno disuelto).
4.1.2. Materiales y equipos de laboratorio
Para desarrollar cada una de las
fases del proyecto, fue necesario contar con cada uno de las materiales y equipos
de laboratorio mencionados en el cuadro N3.
69

Cuadro N 3 Materiales y Equipos de laboratorio
Materiales de laboratorio
16 peceras de 3 L de capacidad.
1 acuario de 30 L de capacidad.
Baln aforado de 100 , 250ml 500 y
1000mL
Beaker de 2000 mL
Pipetas graduadas y volumtricas
de 1, 5 y 10 mL,
Pipeta Pasteur plsticas de 10mL
Pipetas Pasteur de vidrio
Micropipeteadores 10-100 L y
100-1000 L
Probeta de 500 y 2000 mL
Lmpara luminiscente.
Pipeteadores
Papel aluminio.
Papel Kraff
Garrafn de veinte litros.
Manguera delgada para aireadores
Difusores
Vidrio reloj
Esptula
Papel Parafilm.
Tubos de ensayo
Copas blancas de 1 onz
Plstico transparente
Estantera
Equipos de laboratorio
Microscopio trinocular CME Leica
Balanza analtica.
Aireador
Refrigerador (4 2 C).
Autoclave o equivalente
Medidor de oxgeno disuelto

pHmetro
Tituladores para dureza y alcalinidad.
Termmetro.
Centrfuga.
Temporizador
Fuente: Elaboracin propia
4.1.3. Adaptacin al medio
Antes de comenzar el trabajo experimental, fue
necesario proporcionar a la Daphnia magna condiciones ambientales similares a las

que estaban expuestas en su anterior hbitat, controlando los parmetros
respectivos para el funcionamiento ptimo de los organismos, como se explican en
la tabla N. 4.
Los organismos fueron conservados en el laboratorio en peceras de vidrio con un
volumen de dos litros de agua reconstituida, estos brindan las caractersticas
necesarias para cumplir con algunos de los parmetros como el fotoperiodo y la
70

temperatura, dentro de cada uno de los recipientes se adicionan 20 individuos, esto

debido a la relacin 1/100 (1 individuo por cada 100 ml de agua reconstituida)
Tabla N. 4: Parmetros de control.
PARMETROS
DAPHNIA MAGNA
Fotoperiodo
16h luz / 8 h oscuridad
Temperatura
20+/- 2C
Luz
600 1000 Lux
pH
7.5 8.0
Oxigeno Disuelto
> 6 mg/L O2
Dureza
160- 180 mg/L (CaCO3 /L)
Alimentacin
4.5 x 106 u. algas /individuo /da
Densidad de poblacin
1 daphnia /100 ml
Longevidad
30 65 das
Maduracin sexual
10 +/- 2 das
4.2
ESTANDARIZACION DE
OBTENCION DE LA CL 50-48
PRUEBAS
DE
TOXICIDAD
PARA
LA
4.2.1 Preparacin del agua dura y medio Bristol.
4.2.1.1.
Agua dura
Para mantener condiciones optimas del cultivo de los
organismos prueba en el laboratorio, se prepar agua de 160 a 180 mg de CaCO3 /

litro segn
metodologa CETESB, protocolo (LBM 05.017) y se realizaron las
pruebas de toxicidad bajo condiciones de laboratorio, incorporando a la

investigacin caractersticas del medio controladas, para regular el cultivo sin que
este presentara alteraciones. El agua se preparo con los siguientes reactivos y
materiales:
71

Cloruro de Calcio (CaCl2)

Sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO4 . 7 H2O)
Cloruro de potasio (KCl)
Bicarbonato de sodio (NaHCO3)
Acuario de 30 Litros
Probeta de 500 ml.
Aireadores de 1 salida
Plstico para cubrir acuario
pH-metro
Oximetro
En la tabla N 5 se menciona la composicin del agua del cultivo y la cantidad de

reactivo a diluir segn el volumen de la pecera a utilizar (20 30 Litros)
Tabla N 5. Composicin del agua de cultivo y dilucin.
Reactivos
Cloruro de Calcio (CaCl2)
Gramos/Litro
13.5
ml /20L
300
ml /30 L
450
36.5
84
125
10
10
150
400
225
600
Sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO4 . 7

H2O)
Cloruro de potasio (KCl)
Bicarbonato de sodio (NaHCO3)
Fuente: Escobar Malaver Pedro Miguel. Determinacin de la toxicidad aguda de los detergentes
mediante sistemas estticos, utilizando Daphnia magna. Universidad de la Salle
Las soluciones preparadas se deben mantener refrigeradas (4 +/- 2C) y pueden

almacenarse por un periodo de hasta 6 meses.
PROCEDIMIENTO
1. Se agreg agua destilada al acuario por debajo de los 30 Litros a preparar.
72

2. Con ayuda de una probeta de 500ml se adicionaron los volmenes

correspondientes a cada reactivo como se indica en la tabla N 5.
3. Para la completa dilucin de los reactivos se adiciona agua destilada hasta
completar el volumen de 30 Litros en el acuario.
4. Se coloc 1 aireador de una salida para aumentar el oxigeno disuelto en la
pecera (por un periodo mayor a 24 horas) y se tapo la pecera con un plstico,
como se observa en la figura N4
Figura N4. Agua reconstituida
5. Se midieron los siguientes parmetros fisicoqumicos: temperatura, pH, oxigeno

disuelto, dureza; siempre en un perodo mayor a 24 horas. Segn Tabla N 6.
6. En caso de realizar la lectura y que la dureza sea mayor a 180 mg de Ca

CO3 / litro se puede agregar agua destilada, si por lo contrario es menor se le
agregaba Sulfato de magnesio heptahidratado.
7. Antes de usar el agua reconstituida
se comprob que los para metros
fisicoqumicos eran ptimos para el desarrollo de la Daphnia magna, esto se hizo

mediante un test de viabilidad que consisti en llevar 5 neonatos en una copa
con agua reconstituida y dejarlos all durante 24 horas, despus de las cuales se
realizaba un conteo de organismos que debera tener ms del 90% de neonatos
vivos para que el agua preparada fuera apta de lo contrario se deba preparar
73

nuevamente. Esta prueba fue realizada cada vez que se preparo agua
reconstituida.
Tabla N 6 Parmetros de agua reconstituida
METODO
2340 C Titulomtrico EDTA
4500 H B Electrodo de
membrana.
4500 0 G. Electromtrico
2550 B Laboratorio y de campo
PARAMETRO DE
CONTROL
Dureza
pH
160 180 mg/L CaCO3

7.5 8
O.D
TC
>6 mg/L
18 22
RANGO
Fuente: Escobar Malaver Pedro Miguel. Determinacin de la toxicidad aguda de los detergentes
mediante sistemas estticos, utilizando Daphnia magna. Universidad de la Salle
DIAGRAMA No. 2 Preparacin del agua dura para 30L.
PREPARACION AGUA
DURA
Agua destilada (proveniente
del Laboratorio de Ing.
Ambiental)
Adicionar 20L en el Acuario.
Adicionar reactivos segn

Tabla No. 5
Temperatura.
Oxigeno Disuelto.
pH.
Dureza.
Completar el volumen de la
pecera a 30 L. con agua
destilada.
Medir parmetros fisicoqumicos.
Realizar prueba de sensibilidad.
74
Aireacin constante.
Leer la prueba 24 horas despus y

corroborar un 90% de organismos
vivos
Agregar 5 neonatos en
50 ml del agua dura
preparada.

4.2.1.2 Preparacin del medio Bristol y cultivo de algas verdes El medio Bristol
segn la metodologa Dutka (1989) se realiza con el fin de multiplicar las algas
verdes, en condiciones de laboratorio por medio de la fotosntesis, con ayuda de una
lmpara luminiscente y nutrientes para la reproduccin de las mismas, las cuales
despus de un proceso estn listas para la administracin del alimento dependiendo
la cantidad calculada con ayuda de la Cmara Neubauer. En la tabla N 7
se
exponen las cantidades de compuestos para preparar el Medio Bristol.
El alga utilizada en el laboratorio fue Scenedesmus acutus, suministrada por la

facultad de microbiologa de la Universidad Javeriana. Los materiales y equipos que
se emplearon para la preparacin del medio Bristol y para el cultivo de algas fueron:
Recipiente de vidrio de 3.5 Litros

Lmpara luminiscente
Aireador de 1 entrada
Beaker de 2000 ml
Beaker de 500 ml
Probeta de 10 ml
Probeta de 2000 ml
Pipeta graduada de 1 ml
Pipeta graduada de 10 ml
Pipeta Pasteur de vidrio
Pipeteador
12 tubos de ensayo (preferiblemente plsticos)
Centrifuga DINAC II Brand
Agua destilada
75

Tabla N 7 Preparacin de Medio Bristol
No.
COMPUESTO
STOCK
1
2
3
4
5
6
NaNO3
CaCl2 .2H2O
MgSO4.7H2O
K2HPO4
NaCl
KH2PO4
KOH
EDTA
FeSO4. 7H2O
H2SO4
H3BO3
25.0 gr./l
2.5 gr./l
7.5 gr./l
7.5 gr./l
2.5 gr./l
17.5 gr./l
15.5 gr./ 500 ml
25.0 gr. / 500 ml
2.49 gr. / 500 ml
0.05 ml. / 500 ml
5.71 gr. / 500 ml
7
8
9
ml de Stock para
1 litro de agua
destilada
10
10
10
10
10
10
1
1
1
SOLUCION DE ELEMENTOS TRAZA

10
11
12
13
14
15
ZnSO4. 7H2O
MnCl2. 4H2O
MoO3
CuSO4. 5H2O
Co (NO3)2. 6H2O
CoCl2. 6H2O
4.41 gr. / 500 ml

0.72 gr. / 500 ml
0.355 gr. / 500 ml
0.785 gr. / 500 ml
0.245 gr. / 500 ml
0.174 gr. / 500 ml
1 ml del stock
combinado
Fuente: Determinacin de la toxicidad agua de los detergentes mediante sistemas estticos,

utilizando Daphnia Magna. Universidad de la Salle
PROCEDIMIENTO:
1. Se tomaron 1500 ml de agua destilada en una probeta de 2000 ml y se
adicionaron las diferentes alcuotas de macro y micro nutrientes. (Tabla No. 7)
Figura No. 5 Reactivos para el medio Bristol.
Fuente. Elaboracin propia.
76

2. Se adicion en un Beaker de 2000 ml la cantidad especificada para cada uno de

los reactivos, se complet con agua destilada hasta completar el volumen.
3. La solucin preparada en el Beaker, se tap con papel aluminio papel Kraft.
4. Se esteriliz el medio en autoclave por un periodo de 15 minutos a 121 C y 15

libras de presin.
Figura No. 6 Medio Bristol en autoclave
5. Una vez esterilizado y enfriado el medio, se transfiri al recipiente de vidrio de

3.5L, y mediante una pipeta se adicion una alcuota de 2ml de cultivo de algas
verdes Scenedsmus Acutus concentrada.
6. El recipiente se cubri con papel parafiilm e inmediatamente se procedi a
oxigenar e iluminar con una lmpara luminiscente de 20 vatios de manera continua
durante 12 a 15 das, hasta obtener el color verde oscuro. Figura N 7.
Figura No.7 Medio Bristol oxigenado e iluminado
77

7. El medio Bristol ya verde se transfiri a un Beaker de 500 ml y de este a tubos de

ensayo de 10 ml para centrifugar.
Figura No. 8 Medio Bristol en tubos de ensayo.
8. Se colocaron 12
tubos de ensayo durante quince minutos en la centrifuga
DINAC II Centrifuge (Brand), con una velocidad de
2000 a 2500 rpm, para
concentrar el cultivo de las algas.

Figura No. 9 Tubos de ensayo en centrifuga.
9. Se retir el sobrenadante y se extrajo el concentrado de las algas mediante una

pipeta Pasteur.
78

Figura No. 10 Extraccin del concentrado de las algas
10. El concentrado de algas se almacen en un tubo falcom, se cubri con papel

parafilm y se rotulo registrando la fecha de extraccin.
Figura N 11. Alimento concentrado
11. Con el fin de determinar la cantidad y frecuencia de alimentacin del cultivo se

realiz el conteo de algas por medio de la cmara Neubauer con un microscopio.
Figura No. 12 Conteo de algas.
79

DIAGRAMA No. 3 Preparacin del medio Bristol.

Adicionar cantidad de reactivos segn
Tabla No. 7 a Beaker de 2000 ml.
Completar con Agua destilada a

volumen del Beaker.
Esterilizar en autoclave, durante 15

minutos a 121 C y 15 libras de
presin.
Trasvasar a recipiente de vidrio,

adicionar 2 ml de alga concentrada.
Tapar, oxigenar e iluminar, mximo

15das
Trasvasar a Tubos de ensayo
Llevar a centrifuga DINAC II durante

15 minutos a 2000-2500 ppm
Extraer concentrado con pipeta

Pasteur.
Conteo de algas.
80

4.2.1.3 Conteo de algas scenedesmus acutus Para el conteo de algas se utiliza

la Cmara Neubauer con una capacidad de 1 x 10-4 ml. Usada para realizar el
conteo de glbulos, en una cantidad fija de lquido.
PROCEDIMIENTO
1.
Para realizar el conteo, el primer paso fue agitar la solucin de algas verdes
concentradas que tenamos en el tubo Falcom Figura N 11, hasta observar una
coloracin homognea.
2.
Se tomo una alcuota de 0.1 ml del concentrado de algas ms 2.9 ml de agua

destilada en un tubo de ensayo para tener una dilucin de 3 ml. Se limpio la
cmara Neubauer con papel de arroz.
3.
Se coloco el cubreobjetos sobre los canales de la cmara y con ayuda de una

micropipeta Brand o pipeta Pasteur se toma una alcuota de 0.1 ml de esta
dilucin y se coloca en el borde de este. Se dejo ingresar la dilucin a l cmara
por capilaridad en un tiempo de 2 minutos sin que pase a los canales laterales;
no se puede dejar burbujas dentro de la cmara.
4.
Se coloco la cmara de Neubauer en la platina del microscopio trinocular y se

enfoco el objetivo 40X zoom.
5.
Se localizo el cuadro central de la rejilla, el cual est dividido en 25 cuadros,

teniendo cada uno un rea de 0.04 mm2.
81

Lectura en la Cmara de Neubauer

1
Figura N 6
Fuente: LB03 Conteo de algas con la Camara Neubauer Laboratorio Bioensayos

UNISALLE
6. El nmero de clulas contadas en cada cuadro en forma diagonal se multiplico

por 4 o 5 dependiendo de la cuadricula. Luego se sumaron los valores obtenidos
y se calculo el promedio.
7.
Se determino la cantidad de clulas que existen en un 1 ml, partiendo del hecho

que la cmara tiene una capacidad de 1 x 10 -4 ml, de la siguiente manera:
XCelulas
1 10 4 ml
No.celulas
1ml
8. Este valor se multiplico posteriormente por el factor de dilucin, dado as el valor

real de clulas que exista en 1 ml.
9. Se calculo el volumen de alimento necesario para cada pecera que contena 20
organismos Daphnia magna con la siguiente frmula:
A B
C
Donde:
V = Volumen del concentrado de algas
A = Nmero de Daphnia magna por acuario.
B = Dosis ptima recomendada (4.5 x 10 6 clulas por Daphnia
82
magna /da).

C = Concentracin (nmero de clulas/ml) de la suspensin de algas descritas

y halladas anteriormente.
DIAGRAMA N 4 METODOLOGIA CONTEO DE ALGAS

CONTEO DE
ALGAS
Dilucin de 3
ml descrito en
paso 2
Cmara
Neubauer
Colocar 1 gota en la
cmara mediante pipeta
Pasteur.
Ubicacin de
cuadricula en
microscopio
Lecturas
diagonales (5)
Limpieza con pao suave y

agua destilada.
83
Clculos para
cantidad de
alimento

4.2.2 Cultivo y mantenimiento de Daphnia magna

La Daphnia magna es un cladcero internacional que es usado por diferentes
universidades en nuestro pas para realizar ensayos de toxicidad, dentro de estas
universidades estn: la Universidad Nacional, Javeriana
la Salle, adems
tambin ha sido usada por la Corporacin Autnoma Regional de Cundinamarca

(CAR). El laboratorio de microbiologa de la Universidad Javeriana fue el donador
de neonatos para poder iniciar el cultivo al igual que el alga de Scenedesmus acutus
para su reproduccin.
El mantenimiento del cultivo de los organismos Daphnia magna se realiz segn la
metodologa CETESB (L5.018) para
realizar el mantenimiento y conservar un
cultivo masivo de 4 edades, manteniendo as, la posibilidad de usar neonatos del

primer al cuarto parto, donde su reproductividad es ms alta.
Adems, se tuvo en cuenta que no existieran alteraciones que pudieran producir

bajas en la reproduccin de los organismos, entre ellas:
Presencia de efipios (machos).

Presencia de caparazones.
Residuos que entraran en contacto con la Daphnia magna y pudieran causar
efectos de mortalidad en el cultivo.
Falta de oxigeno o alimentacin en el cultivo.
Sedimentacin de alga concentrada o alimento.
84

Para el mantenimiento y limpieza del cultivo de los organismos prueba bajo

condiciones de laboratorio se utilizaron los siguientes materiales:
16 peceras.
Bandeja blanca para el conteo y separacin del microorganismo.
Mallas filtro.
Pipetas de 3 ml.
Recipientes plsticos de 250 y 120 ml aproximadamente.
Lavadores con agua destilada.
Agua dura.
Agua caliente de la llave.
Toallitas absorbentes.
Esponja para lavado de peceras.
4.2.2.1. Mantenimiento.
El cultivo de Daphnia magna se realiz en peceras con 2 litros de agua dura para
el ptimo crecimiento de los individuos. Segn metodologa (EPA 1994). En cada
una de ellas se mantuvo 20 individuos, manejando la relacin de 1/100 (1 individuo
por cada 100ml de agua reconstituida), con una dureza total que pudo variar entre
160-180mg CaCO3 para su desarrollo. (Se debe tener en cuenta los parmetros de
control establecidos en el protocolo LBM-M01).
Cada pecera permaneci tapada, para ello se utiliz un
plstico transparente
evitando el polvo, sustancias qumicas y vapores que afectaran la calidad del agua
y alteraran el cultivo, o que permitieran el paso de luz.
La iluminacin es un factor que se tuvo en cuenta para llevar a cabo la cra de este
crustceo, Se debe manejar foto - periodo 16h de luz / 8h de oscuridad y una
intensidad lumnica de alrededor de 800 lux.
85

Fue necesario renovar el cultivo de la Daphnia magna, y mantenerlo en peceras

separados por edad desde 0 1 semana hasta cuatro semanas; eliminando los
organismos mayores a cinco semanas y renovando el cultivo con neonatos que se
obtuvieron ese da. (CETESB /L5.018, 1992).
Figura N13. Cultivo y mantenimiento
Dentro del mantenimiento general del cultivo se manej:
4.2.2.2. Limpieza.
La limpieza de las peceras se realiz los das lunes, mircoles y viernes, para retirar
los caparazones de la D. magna y restos de comida encontrados en el fondo, claro
est que a veces fue necesario realizar esta limpieza diariamente. Se evit el uso
de cualquier jabn o desinfectante. Los neonatos y las Daphnia magna madres se
separaban en recipientes plsticos y se llev un registro del conteo diario de los
organismos. El conteo de las madres se realiz para corroborar la cantidad de
individuos presentes en las peceras.
Luego mediante 2 coladores se filtraba el agua depositada en las vasijas blancas,

tratando de mantener los 2 L de agua dura. Cada 8 das se renovaba la mitad del
agua dura, (antes de esto se realizaba la prueba de viabilidad). Figuras 14 y 15.
86

De igual forma, los das de limpieza se alimentaban los organismos, teniendo en

cuenta el nmero de algas contabilizado en la cmara de Neubauer.
Figura No. 14 Limpieza
Figura No. 15 Filtracin
4.2.3 Seleccin de neonatos para los ensayos.

Diariamente fueron separados los neonatos para realizar los ensayos de toxicidad,
estos generalmente se hacan los das martes, mircoles, jueves y sbados segn
la demanda que exista y teniendo en cuenta que la prueba se lea a las 48 horas.
Los das viernes los neonatos se usaban para iniciar un nuevo cultivo.
Figura N16. Seleccin de neonatos
87

DIAGRAMA No. 5. Mantenimiento del cultivo de Daphnia magna.

MANTENIMIENTO CULTIVO DAPHNIA magna
MANTENIMIENTO
LIMPIEZA
SELECCIN DE
NEONATOS
4 PECERAS (2L AGUA

DURA)
20 ORGANISMOS
LAVAR CON AGUA
EXTRAER
NEONATOS
DESTILADA
SEPARAR
DAPHNIA magna
MANTENER
CONDICIONES DE
CULTIVO: T: 20C; 16h
luz/8h oscuridad
NUEVA SIEMBRE
CADA 8 DIAS HASTA
4 SEMANAS
REALIZAR
PRUEBAS DE
VIABILIDAD
CADA 8 DIAS
CAMBIO AGUA
DURA
RECONTITUIDA
REALIZAR PRUEBAS
4.2.4.
Determinacin
DE SENSIBILIDAD
88
REALIZAR
SIEMBRA
CONDICIONES DE
MANTENIMIENTO
INICIAL

4.2.4. Determinacin de la sensibilidad de los organismos con Dicromato de

Potasio Los ensayos de toxicidad aguda empleando Daphnia magna, se llevaron a
cabo teniendo como gua los protocolos de la universidad de la Salle con Daphnia
pulex suministrados por el Ingeniero Pedro Miguel Escobar. Los resultados son
empleados para determinar la CL50 en un periodo de exposicin de 48 horas en
condiciones controladas de laboratorio.
Previo a la realizacin de los ensayos, se evalu la sensibilidad de los organismos

empleando dicromato de potasio (K2Cr2O7) como sustancia txica de referencia. Las
condiciones generales de exposicin se resumen en la Tabla N 8
Las diluciones para el dicromato se realizaron segn la siguiente ecuacin:

V1 x C1 = V2 x C2
Estas diluciones fueron preparadas con agua reconstituida entre 160 a 180 mg/ L de
CaCO3 y con una solucin patrn preparada a 100 ppm, almacenadas y refrigeradas
en frascos de vidrio de 500 ml.
Sumado los resultados de estandarizacin se puede definir por medios estadsticos

el rango de sensibilidad del organismo prueba (Daphnia magna) frente a
determinado txico de referencia, a un tiempo de exposicin y a la manifestacin
biolgica empleada.
4.2.5. Condiciones necesarias durante la realizacin de un ensayo de toxicidad

aguda con Daphnia magna
Como se describe en la tabla N 8, para la realizacin de un bioensayo de toxicidad

aguda con Daphnia magna, se tuvieron en cuenta algunas condiciones y factores
que son necesarios para que los resultados de las pruebas no sean alterados:
89

Tabla N 8 Condiciones generales de exposiciones utilizadas en los bioensayos de toxicidad aguda.
BIOENSAYOS DE TOXICIDAD EMPLEANDO Daphnia magna

Condiciones generales de exposicin
Temperatura
20 0,5 C
Agua de dilucin
Agua dura entre 160 y 180 mg CaCO3/l
Unidad experimental
Copas blancas
Capacidad
1 onza
Volumen de solucin test
10 ml
Edad de los organismos
6 - 24 horas
N de organismos/copa
5
N de rplicas por concentracin
4
Duracin del test
48 horas
Estimacin de CL 50
Mtodo Probit
Por medio de los test preliminares se obtiene un rango de toxicidad el cual permite
establecer unos intervalos mas simplificados de concentraciones del Dicromato de
Potasio, para as poder llegar al resultado final esperado por medio de los test
definitivos.
Estos se realizan con al menos cinco concentraciones en progresin
geomtrica, las cuales permiten verificar un porcentaje de mortalidad entre 0

100%.
El procedimiento utilizado para la determinacin de la concentracin letal media CL
50-48
con Dicromato de Potasio es el siguiente:
Preparar la solucin patrn de Dicromato de Potasio a 1000 ppm.

Preparar cinco diluciones a partir de la solucin patrn con las
concentraciones establecidas para las pruebas a realizar.
Separar los neonatos con un periodo de vida < 24 horas.
Preparar la batera de ensayo como se describe en el numeral 4.2.6 de este
documento.
Agregar 10 ml de solucin y el blanco control en cada una de las copas.
Introducir cinco neonatos en cada una de las copas de concentracin y el
blanco de control.
90

Incubar a condiciones establecidas, por un intervalo de 48 horas.

Realizar la lectura de organismos muertos durante la prueba y consignar los
datos.
Calcular la concentracin letal media por medio del mtodo estadstico probit.
(ver Anexo J)
Pasar los datos por el mtodo de anlisis de varianza. (ver Anexo I)
4.2.6. Montaje para pruebas de sensibilidad y sustancias puras Por medio de

los test preliminares se obtiene un rango de toxicidad, el cual permite establecer
unos intervalos ms simplificados de concentraciones, para as poder llegar al
resultado final esperado por medio de los test definitivos. Estos se realizan con al
menos cinco concentraciones en progresin geomtrica, las cuales permiten
verificar un porcentaje de mortalidad entre
0-100 %.
PROCEDIMIENTO
1. Montar la batera (bandeja con 24 copas blancas de 1 onza), las cuales estn
distribuidas por las cinco (5) cinco concentraciones diferentes y un blanco
(agua dura). Con cada batera se realiza una prueba de
sensibilidad
Herbicida. (Cada copa est marcada con la respectiva concentracin).

Figura No. 17 Organismos en recipiente
91

2. Se adiciono 10 ml de los diferentes porcentajes de concentracin con ayuda

de una pipeta graduada en las copas, siendo preparadas cuatro (4) replicas
por concentracin, cada una, con su respectivo control (agua reconstituida
dureza entre 160-180mg CaCO3).
3. Se llevo a cada copa 5 neonatos de 6 a 24 horas de nacidos con ayuda de
una pipeta Pasteur de plstico, cada concentracin necesita 20 organismos y
en cada batera de ensayo se utilizan 120 organismos.
Figura No. 18 Batera de prueba
4. Se cubri la batera con papel Kraff y con una bolsa negra preferiblemente de
tela con el fin de ser aislada de la luz por 48 horas, para que la D. magna al
tratar de encontrarla tuviera mayor contacto con el contaminante.
Figura No. 19 y 20 Batera cubierta con papel Kraf y bolsa de tela.
92

5. Al completar las 48 horas se descubri la batera de ensayo y se realizo la

lectura de los organismos muertos en cada copa.
6. Se hizo la medicin de parmetros de control (pH, O.D.) despus de cada

prueba, tomando de manera aleatoria cualquier concentracin, con el fin de
demostrar que la manifestacin de los organismos expuestos se deba al
efecto de las sustancias puras o vertimientos y no a alteraciones de las
caractersticas fisicoqumicas de las mismas.
7. Una vez realizadas cada una de las pruebas preliminares tanto para
sensibilidad como para el herbicida; al obtener los rangos se prepararon las
diluciones para las pruebas definitivas, repitiendo el procedimiento anterior.
4.2.7. Preparacin de soluciones para pruebas preliminares y definitivas
El Dicromato de Potasio es utilizado como txico de referencia, para establecer el

grado de sensibilidad que presentan los organismos prueba. Se parte de una
solucin de 1000 ppm, esta se complet a un volumen de 1000 ml con agua
desionizada por medio de la siguiente ecuacin.
1 ppm = 1 mg/L
1000 ppm = 1 g K2Cr2O7 / 1L
Despus de preparada la solucin patrn se determinan las diluciones tanto para las
pruebas de sensibilidad como para las pruebas con el herbicida, estas diluciones
son calculadas por medio de la ecuacin de dilucin [ ]1V1 = [ ]2V2:
[ ]1 = Concentracin de Solucin madre

V1 = Volumen a utilizar de la solucin madre
93

[ ]2 = Concentracin que deseo trabajar

V2 = Volumen del Baln de aforo a utilizar
Al despejar la ecuacin queda:
V1 = [ ]2 V2 / [ ]1
Las soluciones son preparadas para un volumen total de 250 ml, y completadas
con agua dura reconstituida, se almacenan en recipientes de vidrio de 500 ml y
se refrigeran a 4C.
Figura N 21. Soluciones para pruebas
Fuente: elaboracin propia
4.2.8. Preparacin de soluciones para pruebas de toxicidad con el herbicida

Como la presentacin del herbicida era en polvo, se prepar la solucin teniendo en
cuenta la proporcin
1g Herbicida /1000ml agua destilada, y se prepararon las
diluciones como se explico anteriormente, teniendo en cuenta
los rangos de
concentraciones a utilizar tanto para las pruebas preliminares como para las
definitivas.
Inicialmente para las pruebas definitivas se tomaron rangos de
concentraciones de 0.001, 0.01, 0.1, 1 y 10 ppm, partiendo de la solucin patrn,

posterior a estas se realizan otras pruebas preliminares tomando un rango amplio de
100, 200, 300, 400 y 500 ppm, el cual permita identificar dentro de que
concentracin probable
estara el rango de toxicidad para efectuar los test
definitivos. El procedimiento a realizar es en esencia el mismo que se utiliza para

las pruebas de sensibilidad.
94

4.3. OBTENCIN Y CLCULO DE LA CL50-48

4.3.1. Clasificacin de resultados significativos de las pruebas preliminares y
definitivas Una vez finalizada cada prueba se analizo su confiabilidad, teniendo en
cuenta que a medida que aumenta la concentracin debe aumentar el porcentaje
de mortalidad, si no es as, se descarta la prueba. La tabla N 9 es un ejemplo de
una prueba que hay que descartar, mientras que la tabla N 10 se ajusta a
condiciones ptimas de una prueba. El anexo D muestra el formato que se manejo
en el desarrollo del proyecto, suministrado por la Universidad de la Salle, Facultad
de Ingeniera Ambiental y Sanitaria.
Tabla N 9 Prueba para descartar
Blanco
0.3ppm
No. de
Organismos
Muertos
1 2 3
4
0 0 0
0
0 0 5
1
0.8ppm
1 ppm
1.5ppm
2 ppm
Concentracin
Nominal
Medidas
Finales
OD
pH
No. observadode muertes

%
No. Total de organismos Mortalidad
Obtenido
0.0
0.3
0
30
0.05
0.6
60
0.50
50
0.50
55
3.85
7.65
3 3.90 7.60
Tabla N 10. Condiciones ptimas de una prueba
Blanco
0.3ppm
No. de
Organismos
Muertos
1 2 3
4
0 0 0
0
0 0 0
1
0.8ppm
1 ppm
1.5ppm
2 ppm
Concentracin
Nominal
95
Medidas
Finales
OD
pH
No. observadode muertes

%
No. Total de organismos Mortalidad
Obtenido
0.0
0.05
0
5
0.05
0.1
10
0.50
50
0.50
55
3.83
7.66
3 3.95 7.63

4.3.2. Introduccin de resultados en software Probit

En el desarrollo del proyecto
el anlisis estadstico se realiz con el mtodo
paramtrico Probit, ya que se cont con el software que fue suministrado por la
Corporacin Autnoma Regional para mayor precisin del clculo de la
concentracin letal media, y cuyo procedimiento se describe en el protocolo de
bioensayos LB06, Facultad de Ingeniera Ambiental y Sanitaria
dndonos un
margen de confiabilidad del 95%.

El mtodo probit nos muestra el lmite superior e inferior, de igual forma la
concentracin letal media a 48 horas CL50-48
4.3.3. Validacin de los resultados mediante el anlisis de varianza (ANOVA)
Los resultados del software fueron validados mediante el anlisis de varianza
(ANOVA) cuyo procedimiento se describe en el protocolo de bioensayos LB07
suministrados por la Universidad de la Salle, Facultad de Ingeniera Ambiental y
Sanitaria, con ayuda de sofware Excel.
El anlisis de varianza (ANOVA) nos permite comparar el F calculado suministrado
por este, con el F terico tomado de las tablas del libro Diseo y anlisis de
experimentos Douglas C. Montgomery, para finalmente formular una hiptesis nula y
una hiptesis alternativa y llegar a una conclusin.
96

4.4. COMPARACIN DE CL
50-48
PARA EL HERBICIDA OBTENIDO CON
DIFERENTES ESPECIES EN PROYECTOS DE INVESTIGACIN REALIZADOS

EN LA UNIVERSIDAD DE LA SALLE
Para poder confrontar las respectivas concentraciones letales es necesario seguir
los siguientes pasos:
Recopilacin de datos: para este es necesario disponer de la carta de control
elaborada por cada uno de los investigadores, y extraer de estas las
respectivas concentraciones letales medias calculadas.
Comparacin de datos: a travs de una tabla se recopilaron
las
concentraciones letales medias tanto para Daphnia pulex, Daphnia magna, y

peces.
A partir de los resultados obtenidos se determin la especie ms sensible al
herbicida en estudio, teniendo en cuenta el valor de la concentracin letal
media obtenida y sus caractersticas morfolgicas.
4.5 ELABORACIN DEL DOCUMENTO FINAL

Anlisis de resultados: Se interpreto grficamente las mediciones de dureza
realizadas durante la ejecucin del proyecto, ciclo de vida de la especie en
estudio, concentracin letal media CL
50-48
de la especie frente al dicromato
de potasio y al herbicida en estudio.
Se presenta como anexo J a este documento el protocolo para manejo,

transporte, manipulacin, y disposicin de residuos de herbicidas generados
en el desarrollo de investigaciones en la Universidad de la Salle.
97
ACUATICOS MEDIANTE
Diagrama N1. Metodologa propuesta
METODOLOGA
Aprendizaje sobre la
manipulacin de la D.
magna
Diseo
experimenal
Induccin por
parte de grupo
de investigador
de bioensayos
Estandarizacin de
pruebas de toxicidad
para la obtencin de la
CL50
Preparacin del agua dura y medio

Bristol
Cultivo y mantenimiento de Daphnia

magna
Obtencin y Clculo
de la CL50-48.
Clasificacin de resultados
significativos de las pruebas
preliminares y definitivas
Introduccin de resultados en
el software Probit
Comparacin de Cl5048 para el Herbicida

obtenidos con
diferentes especies en
la universidad de la
salle
Elaboracin y entrega
de documento final
Recopilacin de datos
Comparar datos
Seleccin neonatos para ensayos
Determinacin de la sensibilidad de
los organismos con Dicromato de
potasio
Validacin de resultados
mediante el anlisis de
varianza
Determinar la especie
mas sensible al
Herbicida
Elaboracin de
protocolo para
manejo, transporte,
manipulacin y
disposicin de
desechos del
herbicida
Conclusiones y
recomendaciones
Preparacin de soluciones para

pruebas preliminares y definitivas
Montaje de pruebas de toxicidad
98
Anlisis de
resultados

5. RESULTADOS Y ANLISIS DE RESULTADOS

De acuerdo a los protocolos usados en la realizacin de los bioensayos, a
continuacin, se presentan los resultados obtenidos:
5.1. PREPARACION DEL AGUA DURA
Para preparar el agua reconstituida se llev un formato de control en el tiempo de
ejecucin del proyecto (anexo A), la cual se tuvo en cuenta para elaborar la grfica
N 1.
Grfica N 1 Rango de la dureza del agua
En la grfica N 1 se puede observar que el agua dura utilizada en el proyecto

mantuvo un rango de 160 a 180 mg CaCO3, siendo esta apta para sus respectivos
usos como lo fueron el mantenimiento del cultivo y preparacin de soluciones para
las pruebas.
99

5.2 CONTEO DE ALGAS scenedesmus acutus

A continuacin se muestra un ejemplo del conteo de las algas realizados en la
ejecucin del proyecto; en el anexo B estn registrados el nmero de clulas /ml
resultado de los conteos.
Figura N 22 Lectura de algas en la cmara Neubauer

88
84
84
98
92
105
78
112
5
61
64
34
65
64
102
105
109
115
120
125
101
102
De las clulas contadas en cada cuadro en forma diagonal se multiplic por 4 o 5

dependiendo de la cuadricula; se sumaron los valores obtenidos hallando
promedio.
lectura1
lectura2
lectura3
lectura4
lectura5
(88 4)
(84 4)
(105 4)
(102 4)
(61 5)
lecturas 8120
X 1624clulas
100
(84 4) (92 4) (78 4) 1368

(98 4) (105 4) (112 4) 1596
(115 4) (125 4) (102 4) 1788
(109 4) (120 4) (101 4) 1728
(64 5) (34 5) (65 5) (64x5) 1640
su

Se determin la cantidad de clulas que existen en un 1 ml, partiendo que la

cmara tiene una capacidad de 1 x 10-4 ml, de la siguiente manera:
1624clulas
1 10 4 ml
Nodeclulas
= No.clulas 16.240106
1ml
Este valor se multiplic posteriormente por el factor de dilucin, dado as el valor

real de clulas que existe en 1 ml. El factor de dilucin fue de 30
16.240 106
factordedilucin 487.2 106
Se calcul el volumen de alimento que necesita cada pecera que contiene 20

Daphnia magna con la siguiente frmula:
V
V
A B
C
20 (4.5 106 )
487.72 106
0.184
ml
dia
Con base en los resultados obtenidos en el conteo de la cmara Neubauer y al

Nmero de organismos por pecera el volumen de alimento es el que se presenta
en la tabla N 11
Tabla N 11 Volumen de alimento segn N de organismos
N de Daphnia magna
por pecera
20
18
15
12
Volumen de
alimento (ml)
0.18
0.16
0.13
0.11
101

5.3. CICLO DE VIDA DE LA DAPHNIA magna.

Durante el desarrollo del proyecto se registro en una hoja de control (ANEXO C) la
reproduccin de la Daphnia magna, y se observo la poca donde la especie tiene
su mayor periodo de reproduccin y la etapa donde su ciclo de reproduccin
finaliza.
En la grfica N 2 se observa el comportamiento del cultivo realizado el 8 de
agosto del 2008 ejecutada en el proceso del proyecto (ANEXO C).
Grfica N 2 Comportamiento del cultivo
Lo que se puede observar en la curva es el nmero total de neonatos en un

tiempo determinado (das).
Del
primer da al
noveno
los neonatos alcanzan su edad adulta donde
almacenan en su cmara de incubacin los huevos de Daphnia magna hasta que

las cras estn totalmente formadas.
102

A partir del da dcimo estas cras son expulsadas por las Daphnia magna
peridicamente alcanzando un pico de 504 neonatos.
En los das 17 y 18 hay un descenso de produccin de neonatos hasta alcanzar
los 203 individuos, recuperndose nuevamente desde el da 19
al da 22,
alcanzando los 993 individuos, siendo esta la mejor cosecha de este cultivo.
Desde el da 23 al 38 se observa un descenso variable llegando a 8 neonatos.
Del da 39 al 43 se presenta una ltima produccin significativa alcanzando un
tope de 371 neonatos, donde luego se presenta un descenso variable hasta su
mortalidad total.
5.4. PRUEBAS TOXICOLOGICAS

5.4.1. Pruebas con K2Cr2O7
5.4.1.1 Pruebas de Sensibilidad Las pruebas de sensibilidad, se realizaron con
el fin de determinar si la especie es o no sensible a cualquier txico, en este caso
y segn los protocolos de bioensayos de la Universidad de la Salle, se maneja el
dicromato de potasio (K2Cr2O7). Con este resultado se da inicio a las pruebas
toxicolgicas con el Herbicida.
Prueba de sensibilidad preliminar con dicromato de potasio (K2Cr2O7)
Para la prueba de sensibilidad preliminar fue necesario iniciar con los rangos
establecidos en el protocolo LBM05, partiendo de estos rangos se establece un
rango ms pequeo para determinar la concentracin exacta donde la mitad de los
organismos expuestos viven en un trmino de 48 horas. La tabla N 12 muestra
un ejemplo de las pruebas realizadas.
103

TABLA N.12 Prueba de sensibilidad preliminar con dicromato de potasio (K2Cr2O7)
CONCENTRACION NOMINAL
1
0
0
0
0
3
5
Blanco
0.001
0.01
0.1
1
10
NO. ORGANISMOS MUERTOS

2
3
0
0
0
0
0
0
0
0
3
2
5
5
% MORTALIDAD
OBTENIDO
4
0
0
0
0
0
5
0
0
0
0
40
100
Se aprecia que el rango a trabajar est entre 0.1 y 10 ppm, debido a que en la
concentracin de 0.1 ppm muere el 0% y en 10 ppm muere el 100% de los
organismos expuestos.
5.4.1.2. Prueba de sensibilidad definitiva con dicromato de potasio (K2Cr2O7)
Despus de realizadas las pruebas preliminares, se estableci que los organismos
prueba moran en un rango de 0.1 ppm y de 10 ppm, dndose la necesidad de
trabajar con rangos ms cortos con el fin de hallar un valor exacto de la
concentracin letal media CL50-48 .
La tabla N 13
nos muestra un ejemplo de las pruebas realizadas, para
concentraciones de 0.3, 0.8, 1, 1.5 y 2 ppm, las cuales se efectuaron un total de

quince (15) pruebas para obtener un resultado confiable. Los resultados de las
pruebas realizadas se recopilaron en el ANEXO E
Con las pruebas de sensibilidad se puede verificar las condiciones ptimas de los
organismos, para posteriormente poder realizar las pruebas necesarias con el
contaminante en estudio, asegurando un buen funcionamiento de los organismos.
104

Tabla N. 13 Prueba de sensibilidad definitiva con dicromato de potasio (K2Cr2O7)

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
0.3
0.8
1
1.5
2
2
3
5
1
1
2
3
5
5
1
4
5
% MORTALIDAD
OBTENIDO
0
10
15
25
60
100
En la anterior tabla se observa que para las concentraciones de 0.3, 0.8 y 1ppm
existe un porcentaje de mortalidad de 10%, 15% y 25% respectivamente, en la
concentracin de 1.5ppm existe un porcentaje de mortalidad de 60% y en la
concentracin de 2ppm un porcentaje de mortalidad del 100%, con esto podemos
concluir que el rango de sensibilidad de la especie en estudio se encuentra
alrededor de 1.5 ppm.
Para mayor confiablidad en los datos, este dato ser
comparado con el calculado por el mtodo del probit.
5.4.1.3. Determinacin de la Concentracin Letal Media CL50-48 para la prueba

de sensibilidad con dicromato de potasio (K2Cr2O7) para Daphnia magna.
Por medio del programa estadstico probit se determino la concentracin letal
media en la prueba de sensibilidad trabajando con K2Cr2O7 donde nos muestra el
lmite superior y el lmite inferior, con un lmite de confianza de 95%. La tabla N
14 nos muestra los resultados definitivos obtenidos en este programa, donde
podemos observar que los valores de la CL
50-48
para todas las pruebas estn
dentro de los lmites calculados, y oscilan entre el mismo rango.
105

Tabla N 14 Carta de control de prueba de sensibilidad definitiva con Daphnia magna
FECHA
CL 50-48
Limite
Inferior
Limite
Superior
10/04/2008
10/04/2008
10/04/2008
15/04/2008
15/04/2008
15/04/2008
17/04/2008
17/04/2008
17/04/2008
22/04/2008
22/04/2008
22/04/2080
29/04/2008
29/04/2008
29/04/2008
PROMEDIO
1,1867
1,0513
1,1092
1,2874
1,2548
1,1675
0,9249
0,671
1,1854
1,2453
1,1195
1,2149
0,9104
1,0535
1,0063
1,09254
0,8543
0,6201
0,9076
1,0992
0,9392
0,7019
0,7714
0,2982
0,8599
1,0818
0,9864
1,0376
0,7195
0,6575
0,8525
0,82581
1,7498
1,9266
1,365
1,5437
1,8443
2,7114
1,0722
0,9915
1,7275
1,4426
1,2536
1,4421
1,1171
1,7569
1,1757
1,54133
Realizadas quince (15) pruebas confiables y en rangos ms reducidos se obtuvo

una concentracin Letal Media CL50-48 de 1.09254 mg K2Cr2O7 /L
Daphnia magna muestra su sensibilidad
donde la
al K2Cr2O7, dentro de los siguientes
limites calculados (lmite superior: 1.54133 ppm, lmite inferior: 0.8258) siendo esta
una base para realizar bioensayos con diferentes txicos.
Con estas pruebas se comprueba que la Daphnia magna es afectada por el txico
y no por otros factores fallas operacionales en la aplicacin del mtodo,
determinando el rango de variabilidad y sensibilidad frente al tiempo de
exposicin.
106

En la grfica N 3, se presenta el comportamiento de las sensibilidades resultado

de las pruebas, en donde se muestran los lmites superior e inferior y el valor
promedio.
107
ACUATICOS MEDIANTE
Grfica N 3. Pruebas de Sensibilidad para Dicromato de potasio
108

La grfica
permite ver la dinmica que presenta la Daphnia magna como
respuesta al dicromato de potasio (K2Cr2O7), mostrando una cada en la octava

prueba realizada, esto pudo ocurrir por
humedad debido a que el extractor de
olores no estuvo encendido todo el tiempo, o por olores ofensivos que afectaron
el cultivo.
Al hacer una comparacin entre los resultados de las pruebas preliminares y el
obtenido por el mtodo probit, se observa que el valor de sensibilidad se aproximo
a una concentracin de 1.5 ppm alcanzando
un 60% como porcentaje de
mortalidad y el obtenido por el mtodo Probit de 1.092 ppm, indicando una

cercana similitud.
El valor de la concentracin resultante de las pruebas preliminares de 1.5. ppm se
encuentra dentro de los lmites aceptables calculados por el mtodo Probit de
0.82581 como lmite inferior y 1.54133 como lmite superior.
Se compar el valor de sensibilidad encontrado en la presente investigacin con
los encontrados en el desarrollo de actuales proyectos de investigacin como se
muestra en la Tabla N 15 y con proyectos realizados en otros pases como
muestra la Tabla N 16.
Tabla N. 15. Comparacin de resultados de sensibilidad
Ao
CL 50-48 (ppm)
Referencia
2008
1.3723
ALVAREZ M. Y MONJE L.
2008
1.0540
SIERRA M. Y ZARATE A.
2008
1.0925
GAMEZ C. Y RAMIREZ J.
109

Tabla N 16. Valores internacionales de la CL50-48 en Daphnia magna con dicromato de potasio.
CL 50-48
Pas
Autor / Entidad
Documento
(ppm)
1.2
EEUU
0.9 - 2
Honduras
Toxicity
determination
of
explosive contaminated soil
leachates to Daphnia magna
Haley, M.C. Checkai, R.T.;
using
adapted
toxicity
characteristics
leaching
C.W.; Wentsel. R.S.
procedure.
CESCCO (Centro de estudios y Estudios
de
efluentes
control de contaminantes).
industriales.
Se interpreta de la tabla anterior que los rangos obtenidos en el desarrollo de este

documento estn acordes a los datos entregados anteriormente en los ensayos
hechos en el laboratorio de Bioensayos
de la Universidad de la Salle y que
adems estn dentro o cercanos a los datos internacionales, demostrando el buen

estado del cultivo y garantizando la confiabilidad de los resultados entregados con
el Glifosato Roundup 747.
5.4.1.4. Anlisis de varianza para las pruebas de sensibilidad con dicromato
de potasio (K2Cr2O7). En la tabla N 17 se presenta un ejemplo para realizar el
anlisis de varianza despus de obtener la concentracin letal media (CL50-48) en
las pruebas definitivas de sensibilidad para validar los resultados obtenidos por el
software Probit. En el anexo E se encuentra el ANOVA de las pruebas restantes.
Concentracin
110
Tabla N 17. Anlisis de Varianza

Nmero de rplicas
total
Promedio
0,5
0,75
1,25
12
R1
R2
R3
R4
0.3
0.8
1.5

20
Blanco
42
10,5
Total
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
las
variaciones
Entre grupos
Suma de
cuadrados
Grados de
libertad
72
Promedio
de
cuadrados
14,4
Dentro de
Grupos
4,5
18
0,25
Total
76,5
23
CL 50-48
LIMITE SUPERIOR
LIMITE INFERIOR
6
4
24
F
Calculado
F Terico
57,6
2.77
1.0513 ppm
0.6201 ppm
1.9266 ppm
Se determina el valor de F para luego poder comparase con el valor de F terico, y

poder concluir teniendo en cuenta dos hiptesis.
Ho: Las diferentes concentraciones producen el mismo efecto en todos los

organismos
H1: Las diferentes concentraciones producen un diferente efecto en todos los
organismos.
Se observa que en la prueba realizada el Fc > FT por lo tanto se rechaza la
hiptesis nula (Ho), y se acepta la hiptesis alterna (H1), concluyendo que las
diferentes concentraciones producen efectos distintos en los organismos prueba.
111

5.4.2. Prueba de toxicidad con el Herbicida Roundup 747

5.4.2.1 Prueba preliminar Fue necesario realizar varios ensayos a diferentes
rangos de concentracin iniciando con una variacin entre 0.001 ppm a 10 ppm,
donde el rango de mortalidad fue de 0%, luego se determin ampliar notoriamente
los rangos para poder encontrar con exactitud el rango a trabajar. Estos ensayos
se realizaron con un rango entre 100 ppm a 500 ppm, donde en la tabla No. 18
se muestran los resultados obtenidos:
Tabla N 18. Prueba preliminar

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
100
200
300
400
500
% MORTALIDAD
OBTENIDO
0
80
100
100
100
100
Dado a estos resultados donde los porcentajes de mortalidad para las

concentraciones de 200, 300, 400 y 500 ppm fue del 100 %, y para 100 ppm fue
de 80%, se dio la necesidad de bajar las concentraciones a rangos menores a 100
ppm para determinar la CL50-48.
5.4.2.2 Prueba Definitiva

Despus de realizados los ensayos preliminares se concluy que las pruebas
definitivas se trabajaran para concentraciones de 20, 40, 60, 80 y 100 ppm. La
Tabla N 19 muestra los resultados obtenidos.
112

Tabla N. 19 Prueba definitiva.

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
20
40
60
80
100
% MORTALIDAD
OBTENIDO
0
30
55
60
80
100
Se puede observar que para la concentraciones de 20, 40, 60,80 y 100 ppm el
porcentaje de mortalidad fue del 30%, 55%, 60%, 80% y 100% respectivamente,
concluyndose que la concentracin donde la mitad de organismos expuestos de
Daphnia magna se mueren por la exposicin al herbicida es 40 ppm y el rango se
encuentra entre 100 ppm donde muere el 100% y 20ppm donde muere el 30% de
la poblacin.
Se realizaron 12 pruebas definitivas con el Glifosato Rondup 747, con el fin de
garantizar los resultados.
Por cada tres pruebas realizadas con el Herbicida, se realiz una prueba con
dicromato de potasio para verificar que se encontrara dentro de los limites de
sensibilidad obtenidos anteriormente, por lo que se puede concluir y verificar en el
Anexo E, que los valores de sensibilidad para el dicromato de potasio con la
especie Daphnia magna obtenidos en los das que se realizaron las pruebas
definitivas con el herbicida en estudio, si se encuentran dentro de los lmites
aceptables. En la tabla N. 20 se observan los resultados calculados.
113

Tabla No. 20 Pruebas de sensibilidad con Dicromato de Potasio para pruebas con
herbicida Roundup 747.
FECHA
CL 50-48
LIMITE SUPERIOR
LIMITE INFERIOR
Sept. 3 08
1.2874 ppm
1.5437 ppm
1.0992 ppm
Sept. 10- 08
1.2374 ppm
1.3437 ppm
1.0872 ppm
Sept. 17- 08
1.2671 ppm
1.4904 ppm
1.0925 ppm
Fuente. Elaboracin propia
5.4.2.3. Determinacin de la Concentracin Letal Media CL50-48 para la prueba

con el Herbicida (Rondup 747) para Daphnia magna.
Por medio del programa estadstico probit se determin la concentracin letal
media, donde nos muestra el lmite superior y el lmite inferior, con un lmite de
confianza de 95%. La tabla N
21 nos muestra los
resultados definitivos
obtenidos en este programa.

Tabla N 21 Carta de control de prueba de sensibilidad definitiva con Daphnia magna
FECHA PRUEBA
SEPTIEMBRE 3 / 2008
SEPTIEMBRE 3 / 2008
SEPTIEMBRE 3 / 2008
SEPTIEMBRE 10 / 2008
PROMEDIO
CL50 (mg/L)
31,5626
48,5809
50,9970
38,2408
41,1958
45,4962
42,8240
48,9913
48,5809
41,1958
31,8725
45,3259
42,9053
114
LIMITE
INFERIOR
LIMITE
(mg/L)
SUPERIOR(mg/L)
18,3913
41,8040
39,5340
57,7525
40,7487
62,1933
25,1876
49,6108
30,4792
51,1070
32,2849
59,1399
26,3415
58,6998
39,6084
58,7242
39,5340
57,7525
30,4792
51,1070
19,1056
41,9194
35,2295
55,3883
31,4103
53,7666

Realizadas doce pruebas confiables se obtuvo una concentracin Letal Media

CL50-48 de 42,9053, mg/L un lmite inferior de 31,4103 mg/L y un lmite superior de
53,7666 mg/L.
Mediante esta tabla se puede concluir que si en un cuerpo de agua se vierte

42.9053 mg / L de herbicida Roundup 747, se produce la muerte al 50% de los
organismos Daphnia magna presentes en el.
De los datos calculados por el mtodo de Probit se puede observar una notable
variabilidad de las concentraciones letales medias en las primeras tres pruebas
realizadas, esto pudo ocurrir a causa de inestabilidad en el cultivo debido a
factores ambientales, para el caso de las nueve pruebas restantes, la variacin de
los valores obtenidos es menor por lo se puede decir que los valores entregados
son confiables.
115
ACUATICOS MEDIANTE
Grfica N 4. Prueba definitiva para el Herbicida
116

Antes de realizar las pruebas toxicolgicas fue necesario estabilizar el cultivo para
proporcionar buenos datos sin que estos se salieran de los limites, y compararlos
con las pruebas de sensibilidad para determinar si esta dentro del rango.
En la grfica N 4, se presenta el comportamiento de sensibilidad de la especie

Daphnia magna frente al herbicida en estudio, a travs de las concentraciones
letales CL
50-48
que resultaron de las pruebas, en donde se muestran los lmites
superior e inferior de 53, 7666 ppm y 31,4103 ppm respectivamente.

Se puede corroborar y comparar el valor aproximado de la concentracin letal
media donde el porcentaje de mortalidad este al 50% calculado en las pruebas
definitivas donde el rango encontrado fue de 40 ppm con un porcentaje de
mortalidad del 55%, con el obtenido por el mtodo Probit de 42,9053 ppm,
concluyndose la cercana exactitud entre los dos datos.
5.4.2.4. Anlisis de varianza
A continuacin (tabla N 22) se presenta un
ejemplo para realizar el anlisis de varianza despus de obtener la concentracin

letal media (CL50-48) en las pruebas definitivas de sensibilidad para validar los
resultados obtenidos por el software Probit. En el anexo E se encuentra el ANOVA
de las pruebas restantes.
Concentracin
Tabla N 22 Anlisis de varianza

Nmero de rplicas
total
Promedio
1,5
1,75
11
2,75
16
20
60
15
R1
R2
R3
R4
0.3
0.8
1.5
2
Blanco
total
117

TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
las
variaciones
Entre grupos
6
4
24
Suma de
cuadrados
Grados de
libertad
65,5
Promedio
de
cuadrados
13,1
Dentro de
Grupos
2,5
18
0,13888889
Total
68
23
CL 50-48
LIMITE SUPERIOR
LIMITE INFERIOR
F
Calculado
F Terico
94,32
2,77
41.1958 ppm
51.1070 ppm
30.4792 ppm


organismos
organismos.
Se observa que en la prueba realizada el Fc > FT por lo tanto se rechaza la
hiptesis nula (Ho), y se acepta la hiptesis alterna (H1), concluyendo que las
diferentes concentraciones producen efectos distintos en los organismos prueba.
118

6. COMPARACION DE RESULTADOS OBTENIDOS DE INVESTIGACIONES

REALIZADAS
EN
LA
UNIVERSIDAD
DE
LA
SALLE
PARA
LA
DETERMINACIN DE LA CL50-48 DEL HERBICIDA ROUNDUP 747 BAJO

DIFERENTES ESPECIES.
A continuacin se presentan los resultados obtenidos y encontrados segn
investigaciones de Bioensayos por tesistas de la Universidad de la Salle:
Tabla No. 23. CL50 calculados para diferentes especies.
Especie
de
crustceo
CL 50
ppm
Tiempo de
exposicin
Estado
Ambiente
Daphnia
pulex
86,642
48
Neonatos
Dulce
Daphnia
pulex
23.4
48
Neonatos
Dulce
Peces
(Trucha
arco iris)
1,088
96
Neonatos
Dulce
Daphnia
magna
42,9053
48
Neonatos
Dulce
Referencia
PIEROS Gisella y
QUINTERO Javier.
( 2008)
Universidad Nacional
de Colombia.
Departamento de
investigaciones
cientficas 2005.
GAMEZ Enrique y
BARRIOS Carmen
(2008)
RAMIREZ Jineth y
GAMEZ Catalina
(.2008)
Los datos mencionados en la tabla, fueron extrados de las respectivas cartas de

control de pruebas de toxicidad para el herbicida.
Se aprecia que la Daphnia pulex presenta mayor sensibilidad para el herbicida
debido a las caractersticas morfolgicas de cada especie y a las condiciones
fisicoqumicas de los ecosistemas en las que se encuentran. Esto se debe a que
las branquias de las Daphnia pulex son ms permeables y por ende el glifosato
entra ms rpido y fcil a su cuerpo afectando de manera casi inmediata al
microorganismo.
119

De igual manera, la Daphnia pulex habita en aguas blandas siendo ms sensible

que la Daphnia magna, ya que los organismos que residen en esta agua requieren
menos tiempo para perder el calcio que se encuentra en los tejidos de las mismas,
involucrando as efectos en la resistencia del organismo.
Otro factor que interviene para que la sensibilidad de la Daphnia pulex sea mayor
que la de Daphnia magna es el tamao, ya que la Daphnia pulex es mucho ms
pequea por lo que su proceso de intoxicacin es ms rpido.
La toxicidad de glifosato para organismos acuticos en nuestro pas se estima

como baja, correspondiendo a los intervalos de moderada a baja de las distintas
legislaciones tanto en la exposicin aguda como crnica, pero con los resultados
obtenidos en la tabla No. 23 se puede concluir que de acuerdo a las categoras
toxicolgicas de la EPA en peces la toxicidad del glifosato Roundup es altamente
toxica.
En la tabla N 24 podemos evidenciar que en bacterias acuticas, Roundup inhibi

seriamente la respiracin en Pseudomonas chlororaphis, a una concentracin de
2.623 mg/L, mientras que en Aeromonas hidrophila la respiracin apenas s se
afect en una exposicin de 6 das a la misma concentracin (Chan & Leung,
1.986).
Tabla N. 24 Comparacin resultados bioensayos con glifosato sobre diferentes especies.
ESPECIE
COMPUESTO
CL 50-96h
Glifosato
34 mg/L
Ictalurus punctatus
Glifosato
32 mg/L
Ciprynus carpio
Glifosato
2.4 mg/L
Pimephales promelas
Glifosato
>26 mg/L
Peces.
Salmo gairdneri
120

Salmo gairdneri
Roundup
14 33 mg/L
Crustaceos
Roundup
24 37 mg/L
Daphnia pulex
Roundup
19 mg /L
Gammarus psudolimnaeus
Roundup
42 mg/L
Insectos
Roundup
44 mg/L
Daphnia magna
Chironomus plumosus
Fuente. Documento Plan de manejo Ambiental Erradicacin de Cultivos Ilicitos. 2000
Haciendo referencia a determinacin de la especie ms sensible al herbicida, con

los valores de CL
50-96
registrados en la tabla N. 23, se observa con claridad que
la especie mas sensible es la Daphnia pulex con CL
50-96
de 19 mg/L, seguida de
la Daphnia magna con CL 50-96 de 24 - 37 mg/L y peces con CL 50-96 de 34 mg/L.

En cuanto a la sensibilidad de los peces al herbicida, su variacin va relacionada a
las caractersticas morfolgicas de cada una, como es el caso de la Trucha la cual
presenta una sensibilidad al herbicida muy baja.
Comparando los resultados de la concentracin letal media del Roundup calculado
en este documento (CL
(CL
50-48:
50-48:
42.9053 ppm) con el registrado en la tabla N. 21
37 ppm), podemos garantizar la confiabilidad de los resultados
obtenidos.
El Glifosato es letal para las plantas y las bacterias por inhibicin de la actividad de
la enzima enolpiruvilshikimato- fosfato sintasa (EPSPS), la cual es constitutiva de
los vegetales y las bacterias. Con base en este postulado la firma Monsanto ha
desarrollado, recientemente, un procedimiento para introducir un gen bacterial
resistente a la accin del Glifosato sobre la EPSPS en soya, con la idea de que el
Glifosato pudiera ser utilizado como herbicida selectivo en esta clase de cultivos.
Estos adelantos en las investigaciones de la firma Monsanto ya han sido
121

divulgados a nivel cientfico. La tabla N.24
hace referencia a las diferentes
concentraciones letales calculadas a lo largo de diferentes proyectos de

investigacin para diferentes contaminantes.
Tabla N. 25 Comparacin de resultados de CL 50- 48 de la especie Daphnia magna, frente a
diferentes sustancias.
Especie
de
crustceo
CL 50
ppm
Tiempo de
exposicin
Estado
Sustancia
Referencia
Daphnia
magna
0.50
48
Neonatos
Cromo
ALVAREZ M, MONGE L.2008

Universidad de la Salle
Daphnia
magna
0.053
48
Neonatos
Cobre
ALVAREZ M, MONGE L.2008

Universidad de la Salle
Daphnia
magna
9,29
exp-9
48
Neonatos
Plata
SIERRA M, ZARATE A.2008 Universidad

de la Salle
Daphnia
magna
9,49
48
Neonatos
Plomo
SIERRA M, ZARATE A.2008 Universidad

de la Salle
Daphnia
magna
42,9
48
Neonato
Herbicida
RAMIREZ J, GAMEZ C.2008 Universidad

de la Salle
Daphnia
magna
0.4
48
Neonato
Aluminio
Hoyos . 1995. Universidad Nacional

Facultad de Biologa, rea de
investigacin
Daphnia
magna
0.2
48
Neonato
Aluminio
Molano. 1993. Universidad Nacional

investigacin
Daphnia
magna
30
48
Neonato
Mercurio
Reyes. 1996. Universidad Nacional

investigacin
Daphnia
magna
0.05
48
Neonatos
Plata
Universidad Javeriana 2004.
Daphnia
magna
2,84
48
Neonatos
Cloruro de
zinc
Satizabal. A. Universidad del Valle.

Facultad de Ingeniera Ambiental y
Sanitiaria
Sanitiaria
Sanitiaria
Daphnia
magna
5.05
48
Neonatos
Cloruro
frrico
Daphnia
magna
16.2
48
Neonatos
Sulfato de
Aluminio
122

Para la elaboracin de la tabla anterior, fue necesaria la consulta bibliogrfica de

cada uno de los documentos mencionados en la columna de referencia, para
poder encontrar los valores de las concentraciones letales medias de la especie
Daphnia magna para diferentes contaminantes.
Podemos observar que entre las sustancias mencionadas la especie Daphnia

magna, es demasiado sensible a la sustancia Plata con una CL
segn referencia de Universidad de la Salle
50-48,
de 9.29 ^ -9
del ao 2008 y muestra su
comportamiento resistente frente al herbicida en estudio seguido del Mercurio con

(CL 50-48: 30 ppm) de fuente de Universidad Nacional del ao 1996.
El ensayo de laboratorio puede corroborarse por medio natural, siempre y cuando
el vertimiento sea de la sustancia txica utilizada en las condiciones controladas
de la prueba, o en un lugar
en donde se pueda asegurar que no exista la
presencia de otras sustancias txicas diferentes a la de estudio, con el fin de evitar

el sinergismo con otras sustancias o compuestos que pudieran estar presentes.
7. PROTOCOLO PARA TRANSPORTE, MANIPULACIN Y DISPOSICION DE

RESIDUOS DE HERBICIDAS.
En el ANEXO G se presenta un protocolo que tiene como objetivo prevenir la
contaminacin y generar una herramienta til de incidencia positiva en la manera
de almacenar, transportar, manipular y disponer los residuos de herbicidas
generados en el desarrollo de proyectos de investigacin en el laboratorio de
Bioensayos de la Universidad de la Salle.
123

CONCLUSIONES
De acuerdo a los resultados obtenidos durante la realizacin de las pruebas

toxicolgicas, se pudo concluir lo siguiente:
Se determin la concentracin letal media (CL50-48) del herbicida sobre

Daphnia magna de 42,9053 mg/L, obteniendo como resultado la base para
determinar el rango de toxicidad, indicando los lmites de tolerancia al que
pueden estar expuestos el organismo estudiado (lmite inferior: 31.4103
mg/L, lmite superior: 53.7666 mg/L)
Se observ que la sensibilidad obtenida para la especie Daphnia magna, se

encuentra
dentro
del
rango
suministrado
por
los
estndares
internacionales y que dichos resultados permiten generar el resto de

pruebas al corroborar la respuesta de este organismo frente a una
sustancia txica.
Generalmente,
durante el cultivo y mantenimiento en el laboratorio, los
organismos mantuvieron una alta tasa reproductiva, sin embargo, se

presentaron periodos de tiempo en los cuales el periodo del ciclo de vida
vario, disminuyendo de manera significativa la produccin de cras (estos
factores que influyeron fueron temperatura y alimentacin). La temperatura
en la que se mantuvieron los cultivos y se realizaron los bioensayos oscilo
entre18 y 22C.
124

Al obtener los resultados se les realiz el anlisis de varianza con una

confiabilidad del 95%. Esto nos demostr estadsticamente que la hiptesis
nula, la cual indica que a diferentes concentraciones de txico se produce el
mismo efecto en los organismos, fue rechazada, aceptando la hiptesis
verdadera la cual seala que a diferentes concentraciones los efectos sobre
los organismos varan (a mayor concentracin, mayor nmero de
organismos muertos).
Se confrontaron los resultados de la concentracin letal media (CL50-48)

del herbicida de las especies utilizadas en las pruebas de toxicidad,
observndose que la Daphnia magna y peces son
las especies mas
resistentes al herbicida, debido a sus caractersticas morfolgicas y

caractersticas del ambiente donde habita.
Se elabor un protocolo para el almacenamiento, transporte, manipulacin y

disposicin de residuos generados del Herbicida, durante el desarrollo de
trabajos de investigacin en la Universidad de la Salle.
Durante toda la realizacin de las pruebas de toxicidad fue necesario
mantener un control constante de parmetros de calidad del agua (pH,
temperatura y Oxigeno Disuelto), verificando as
que la muerte de los
organismos se genera por el herbicida y no por otro factor, como se puede

observar en los resultados presentados en este documento.
La universidad como institucin al profundizar en estos aspectos de la
toxicologa permite facilitar a las autoridades y entidades interesadas, los
conocimientos necesarios, para proponer y desarrollar programas de
prevencin, control y seguimiento y adoptar medidas de medicina
ocupacional e higiene industrial, que mejoren las condiciones de salud de
125

las personas involucradas en la labor de fumigaciones de cultivos bajo el

herbicida en estudio.
Teniendo en cuenta los casos y problemas expuestos por el uso del

Glifosato RoundupR 747SG en la erradicacin de cultivos ilcitos en el Pas, y
el resultado obtenido en la presente investigacin, podemos llegar a al
conclusin que este herbicida (Glifosato RoundupR 747SG) es altamente
txico para el medio ambiente y la salud humana. Comparando la
legislacin vigente (en cuanto a concentraciones de este herbicida y la
CL50) de varios pases como Estados Unidos que maneja un lmite de 0.7
p.p.m., Canad 0.28 p.p.m., Argentina 1.2 p.p.m., y el caso de Brasil y
Dinamarca donde esta prohibido el uso de este herbicida agrcola por sus
efectos txicos, Colombia maneja una normatividad imprecisa y muy flexible
permitiendo rangos de 7 12 p.p.m. Se debe tomar mayor conciencia al
usar este herbicida y realizar investigaciones mas profundas por parte de
las autoridades competentes.
A pesar de las justificaciones de un riesgo relativamente en la prctica de

fumigacin con glifosato en nuestro pas, no podemos mirar estos
resultados con tolerancia al saber que no ha sido soportada con estudios
cientficos que avalen su inocuidad y que existe un gran nmero de
artculos cientficos que advierten el riesgo de contaminacin con el uso de
Roundup sobre ecosistemas acuticos.
126

RECOMENDACIONES
Es conveniente controlar factores externos (olor a cigarrillo, colonias,

limpiadores de piso) frente a la realizacin de pruebas, esto con el fin de que
agentes ajenos a la investigacin, modifiquen o alteren el resultado esperado, o
que los resultados obtenidos sean poco confiables.
Se deben asegurar condiciones ptimas como la temperatura e iluminacin en
el laboratorio de Bioensayos para evitar cualquier cambio inesperado en el
mismo y evitar alteraciones a los organismos utilizados para las pruebas y por lo
tanto en los resultados obtenidos.
Es importante tener un control constante de parmetros como pH, O.D. y

temperatura antes y durante las pruebas de toxicidad. Esto se realiza para
garantizar excelentes condiciones de los organismos para la realizacin de las
pruebas.
Es recomendable realizar una prueba de sensibilidad con dicromato de potasio

al mismo tiempo de la prueba con la sustancia txica de inters para garantizar
el bueno estado de los organismos en el momento de la realizacin de la
prueba.
Se considera necesario utilizar el laboratorio de bioensayos exclusivamente

para este tipo de pruebas.
Si se trabaja con metales pesados o residuos
peligrosos, es necesario contar con un lugar especial para preparar las

soluciones y evitar la contaminacin del laboratorio. Esto se debe a que existen
127

residuos peligrosos que se disuelven en el agua y por lo tanto pueden ocasionar

la muerte de los organismos de prueba.
En la medida que se obtengan resultados mediante bioensayos, con diferentes

sustancias, se recomienda usar los estudios para proponer normatividad de
carcter ambiental, que proteja ecosistemas y especies sensibles al herbicida en
estudio.
Medidas como los Planes de Gestin Ambiental pueden ser alternativas objeto
de estudio para futuras investigaciones, con el fin de permitir comparar los
resultados frente a las propuestas en la presente tesis.
Es necesario estudiar el tipo de mecanismos de transporte y sus posibles

variaciones residuales, desde el momento en que un producto qumico es
aplicado, hasta su acumulacin en los sistemas naturales.
Realizar pruebas de toxicidad con otras especies del mismo ecosistema

(incluidas aves), para poder confrontar los resultados obtenidos a partir del
herbicida.
Se requiere determinar la concentracin letal media de este herbicida en toda la

cadena trfica presente en ecosistemas acuticos.
Es importante seguir realizando test de toxicidad con organismos como Daphnia

magna, ya que, como se pudo comprobar en esta investigacin, se emplean
metodologas sencillas y de bajo costo, obtenindose grandes beneficios, como
128

la deteccin de la contaminacin en el agua y el anlisis de los posibles efectos

de los contaminantes que estn presentes en el medio de estudio.
Se debera pensar en suspender la poltica de fumigacin area, amparndonos

en el principio de precaucin contemplado en la ley 99 de 1993, hasta tanto se
realicen los suficientes estudios acerca de la mezcla empleado para la
erradicacin de cultivos ilcitos y uso de este herbicida en nuestro pas.
Los plaguicidas antes de salir al mercado pasan por el proceso de la

formulacin, donde los ingredientes activos son mezclados con sustancias como
solventes y coadyuvantes conocidos como ingredientes inertes, sobre los
cuales no se da informacin en las etiquetas y pueden ser sustancias activas
toxicolgicas.
Esto significa que si no se revisan y reconocen las pruebas
toxicolgicas con los plaguicidas comerciales como se usan realmente, no es

posible evaluar con seguridad los riesgos sobre el ambiente y la salud de las
personas.
129

BIBLIOGRAFIA
ESCOBAR, P.M, GARCIA, L.E. Determinacin de la CL50 de los
detergentes mediante pruebas estticas utilizando Daphnia magna.
Universidad de la Salle. 1993.
HERNANDEZ SAMPIERI, Roberto, FERNANDEZ COLLADO, Carlos y

BAPTISTA LUCIO Pilar. Metodologa de la Investigacin. 3 ed. Mac Graw
Hill. Mxico. 2003. p 113-136
BERNAL PAREDES, Alba Janneth y ROJAS AVELLA, Andrea Paola.

Determinacin de la concentracin letal media ( CL50
del mercurio por
48 )
medio de bioensayos de toxicidad acutica sobre Daphnia Pulex. Bogot.
2007. Tesis de grado (Ingeniera Ambiental y Sanitaria). Universidad de La
Salle. Ingeniera Ambiental y Sanitaria.
ZARATE, Felipe, SIERRA, Maria .Determinacin de la concentracin letal

media (Cl50-48) del plomo y plata en los vertimientos de una industria
galvnica, mediante ensayos toxicolgicos sobre daphnia magna. 2008.
Tesis de grado (Ingeniera Ambiental y Sanitaria). Universidad de La Salle.
Ingeniera Ambiental y Sanitaria.
ROMERO ROJAS, Jairo Alberto. Acuiquimica. ed Escuela Colombiana de

Ingeniera. Primera edicin. 1996. p 56, 57,58, 106, 116, y 124.
CONTRERAS CARDONA, Lourdes Marcela. Evaluacin preliminar de la

toxicidad aguda de extractos vegetales utilizando Daphnia magna, Hydra
attenuata y Allium cepa. Bogota. Universidad Nacional.
130

DAZ BEZ, Mara Consuelo, PICA GRANADOS, Yolanda RONCO, Alicia.

Ensayos toxicolgicos y mtodos de evaluacin de calidad de aguas.
[citado
de
Agosto
de
2007].
Disponible
en
Internet:
http://www.idrc.ca/openebooks/147-7/#page_65gs\\bioensayos\Captulo 5_
Mtodos Estadsticos para el Anlisis de Resultados de Toxicidad
Internacional.
MARTNEZ YEPES, Pedro Nel, OSORIO Javier. Anlisis del procedimiento

para la determinacin de la dl50 (dosis letal media) a travs del mtodo de
Probit en un bioensayo. [citado 30 de Agosto 2007]. Disponible en Internet:
http://www.monografias.com/trabajos14/dosis-letal/dosis-letal.shtml.
Revista
Colombiana de
Ciencias Pecuarias. Vol 20 N 4. Medelln
Octubre/Diciembre 2007.
Determinacin de la toxicidad aguda de los detergentes mediante sistemas

estticos utilizando Daphnia Magna, Pedro Miguel Escobar Malaver, Luis
Eduardo Garca, 1993.
COX, Caroline. Glifosato, parte 2 La exposicin humana y los efectos

ecolgicos. Oregn. 1995.
ELSA NIVIA. Efectos sobre la salud y el ambiente de herbicidas que

contienen Glifosato. 2003.
Ministerio del medio ambiente. Plan de manejo ambiental Erradicacin de

cultivos ilcitos. 2000.
131

ROMERO, C.E.S.F. Diagnostico del dao causado por herbicidas a cultivos.
URIBE GRANJA, Camilo, Toxicologa del Glifosato. Clnica de Toxicologa.

Bogot.
Instituto Colombiano Agropecuario ICA. Divisin Insumos Agrcolas. Listado

general de plaguicidas registrados hasta agosto 26 de 1998. Santaf de
Bogot.
EPA. Technical Fact Sheets on: Glyphosate. National Primary Drinking

Water Regulations. Documento obtenido por Internet, junio de 1999.
132

ANEXO A.
REGISTRO PARAMETROS DE CONTROL AGUA DURA
FECHA DE
PREPARACION
31/03/2008
15/04/2008
22/04/2008
29/04/2008
06/05/2008
13/05/2008
20/05/2008
27/05/2008
03/06/2008
10/06/2008
17/06/2008
24/06/2008
01/07/2008
08/07/2008
15/07/2008
22/07/2008
29/07/2008
05/08/2008
12/08/2008
19/08/2008
26/08/2008
02/09/2008
09/09/2008
16/09/2008
23/09/2008
30/09/2008
07/10/2008
14/10/2008
21/10/2008
28/10/2008
04/11/2008
11/11/2008
133
DUREZA
pH
OD
TEMPERATURA
170
170
175
165
170
160
164
174
180
175
166
163
160
164
164
176
175
176
175
177
178
180
166
167
168
170
175
177
165
160
172
178
7.43
8.0
7.79
7.3
7.75
7.65
7.73
7.74
7.69
6.63
7.72
7.81
8.0
7.0
7.95
7.81
7.95
8.0
8.0
7.54
7.82
8.0
8.0
7.73
7.70
7.77
7.5
7.09
7.3
7.90
8.0
7.54
6.25
7.81
7.23
6.50
6.25
6.14
6.21
6.14
6.11
6.09
6.0
6.08
6.14
6.05
6.01
6.04
6.02
5.84
6.04
5.94
6.02
6.15
6.04
6.03
6.08
6.12
6.0
6.18
6.03
6.50
6.09
6.15
19.5
18.7
20.2
19.6
19.4
20.0
19.6
19.4
19.4
19.4
19.3
19.1
18.8
18.5
18.1
18.8
18.7
18.6
18.7
18.5
18.4
18.2
19.0
20.2
19.1
20.5
18.4
18.9
19.4
19.2
18.9
19.0

ANEXO B.
REGISTRO ALIMENTO (Scenedesmus acutus)
FECHA DE
PREPARACION
FECHA DE
CENTRIFUGACION
N DE
CELULAS /ml
04/04/2008
18/04/2008
02/05/2008
16/05/2008
30/05/2008
13/06/2008
27/06/2008
11/07/2008
25/07/2008
08/08/2008
22/08/2008
05/09/2008
19/09/2008
03/10/2008
17/10/2008
31/10/2008
16/04/2008
30/04/2008
14/05/2008
28/05/2008
12/06/2008
25/06/2008
09/07/2008
23/07/2008
06/08/2008
20/08/2008
03/09/2008
17/09/2008
01/10/2008
15/10/2008
29/10/2008
12/11/2008
80.58*106
309.12*106
487.2*106
356.04*106
487.2*106
434.34*106
348.05*106
379.50*106
479.88*106
489.18*106
365.21*106
281.88*106
433.89*106
521.14*106
457.31*106
415.26*106
134
DOSIS PTIMA
RECOMENDADA
(clulas por
Daphnia/da)
4.5*106
4.5*106
4.5*106
4.5*106
4.5*106
4.5*106
4.5*106
4.5*106
4.5*106
4.5*106
4.5*106
4.5*106
4.5*106
4.5*106
4.5*106
4.5*106

ANEXO C
REGISTRO DE CONTROL DE CULTIVOS DE
DAPHNIA magna
135

FECHA DE
SIEMBRA
FECHA DEL
CONTROL
PECERA
N
MAMAS
NEONATOS
18/04/2008
25/04/2008
20
20
20
20
18/04/2008
26/04/2008
18/04/2008
28/04/2008
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
0
0
15
0
15
122
114
139
105
480
11
0
0
0
11
18/04/2008
29/04/2009
20
323
20
423
20
417
20
361
20
20
20
20
20
20
20
20
Total
18/04/2008
18/04/2008
18/04/2008
136
30/04/2008
01/05/2008
02/05/2008
1524
20
20
145
20
352
4
Total
1
20
20
399
897
10
20
26
3
4
Total
1
20
20
20
2
2
40
0
20
3
4
Total
20
20
0
0
0

FECHA DE
SIEMBRA
FECHA DEL
CONTROL
PECERA
N
MAMAS
NEONATOS
18/04/2008
03/05/2008
20
135
20
89
20
194
20
57
Total
18/04/2008
05/05/2008
475
20
367
20
400
20
327
20
226
Total
18/04/2008
06/05/2008
1320
20
39
20
55
20
20
Total
18/04/2008
07/05/2008
94
20
19
95
20
100
20
35
Total
18/04/2008
08/05/2008
230
20
319
19
394
19
384
19
321
Total
18/04/2008
137
09/05/2008
1418
19
25
19
79
19
145
4
Total
19
227
476

FECHA DE
SIEMBRA
FECHA DEL
CONTROL
PECERA
N
MAMAS
NEONATOS
18/04/2008
10/05/2008
19
221
17
116
4
Total
16
1
458
17
26
18
17
16
18/04/2008
12/05/2008
Total
18/04/2008
13/05/2008
33
16
17
23
14
52
14
Total
18/04/2008
14/05/2008
83
16
44
17
12
13
45
13
76
Total
18/04/2008
15/05/2008
177
15
42
17
36
12
188
12
119
Total
18/04/2008
16/05/2008
15
126
17
245
12
20
12
Total
138
385
391

FECHA DE
SIEMBRA
FECHA DEL
CONTROL
PECERA
N
MAMAS
NEONATOS
18/04/2008
17/05/2008
14
105
17
20
12
23
12
Total
18/04/2008
19/05/2008
153
13
20
16
45
12
165
10
225
Total
18/04/2008
20/05/2008
455
13
265
16
318
10
238
202
Total
18/04/2008
21/05/2008
1023
13
83
16
39
10
21
Total
18/04/2008
22/05/2008
143
13
76
16
72
10
26
Total
18/04/2008
139
23/05/2008
174
20
41
20
99
128
4
Total
0
268

FECHA DE
SIEMBRA
FECHA DEL
CONTROL
PECERA
N
MAMAS
NEONATOS
18/04/2008
24/05/2008
17
196
18
203
152
Total
18/04/2008
26/05/2008
551
16
174
16
73
Total
18/04/2008
27/05/2008
247
14
229
16
97
46
Total
18/04/2008
28/05/2008
372
20
87
16
93
Total
180
06/06/2008
13/06/2008
1
2
3
4
Total
20
20
20
20
228
215
156
175
774
06/06/2008
14/06/2008
20
67
2
3
4
Total
20
20
20
83
45
144
339
140

06/06/2008
16/06/2008
06/06/2008
17/06/2008
06/06/2008
18/06/2008
06/06/2008
19/06/2008
06/06/2008
20/06/2008
06/06/2008
21/06/2008
06/06/2008
23/06/2008
06/06/2008
24/06/2008
06/06/2008
25/06/2008
141
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
20
20
20
20
20
20
20
20
20
20
20
20
20
20
20
20
19
20
20
18
19
20
18
18
18
18
19
17
13
16
16
16
16
16
16
0
14
59
30
0
103
251
210
254
42
757
191
281
143
137
752
0
47
3
121
171
31
40
36
5
112
121
92
161
0
374
12
25
18
76
131
77
108
158
48
391
0
37
50
0
87

06/06/2008
26/06/2008
06/06/2008
27/06/2008
06/06/2008
28/06/2008
06/06/2008
30/06/2008
06/06/2008
01/07/2008
06/06/2008
02/07/2008
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
16
16
16
0
13
14
15
0
13
14
13
0
13
13
9
0
12
13
9
0
12
11
7
0
Total
06/06/2008
03/07/2008
06/06/2006
04/07/2008
06/06/2006
05/07/2008
06/06/2006
07/07/2008
142
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
152
207
167
0
526
114
67
66
0
247
0
46
86
0
132
226
335
137
0
698
73
37
67
0
177
69
66
33
0
168
20
9
0
0
14
8
0
0
14
7
0
0
14
5
0
28
59
0
0
87
127
77
0
0
204
93
54
0
0
147
66
34
0

06/06/2006
08/07/2008
06/06/2006
09/07/2008
08/08/2008
19/08/2008
08/08/2008
20/08/2008
08/08/2008
21/08/2008
08/08/2008
22/08/2008
08/08/2008
23/08/2008
08/08/2008
25/08/2008
08/08/2008
26/08/2008
08/08/2008
27/08/2008
143
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
0
16
0
0
0
14
0
0
0
11
19
15
14
11
19
15
14
11
19
15
14
11
19
15
14
10
18
15
14
10
18
15
12
10
18
15
12
9
18
0
100
29
0
0
0
29
0
0
0
0
0
16
36
66
77
195
93
83
20
37
233
0
352
308
230
890
0
146
160
0
306
0
117
195
192
504
0
208
41
128
377
13
84
106
0
203
2
323

08/08/2008
28/08/2008
08/08/2008
29/08/2008
08/08/2008
30/08/2008
08/08/2008
01/09/2008
08/08/2008
02/09/2008
08/08/2008
03/09/2008
08/08/2008
04/09/2008
08/08/2008
05/09/2008
08/08/2008
06/09/2008
08/08/2008
08/09/2008
144
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
15
12
6
18
15
12
0
15
14
12
0
15
14
12
0
15
14
12
0
14
14
12
0
14
14
12
0
13
14
12
0
13
14
12
0
11
14
12
0
226
190
741
0
51
246
282
579
0
284
188
51
423
0
256
64
0
320
0
39
177
101
317
0
320
391
282
993
0
93
112
0
205
0
99
83
42
224
0
22
71
14
107
0
16
147
76
239
0

08/08/2008
09/09/2008
08/08/2008
10/09/2008
08/08/2008
11/09/2008
08/08/2008
12/09/2008
08/08/2008
13/09/2008
08/08/2008
15/09/2008
08/08/2008
16/09/2008
08/08/2008
17/09/2008
08/08/2008
18/09/2008
145
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
1
2
3
4
Total
11
14
12
0
10
14
11
0
10
14
10
0
10
13
10
0
10
10
7
0
10
10
2
0
9
11
0
0
5
10
0
0
5
8
0
0
3
6
0
49
56
47
152
0
0
8
0
8
0
0
25
0
25
0
169
170
77
416
0
139
207
25
371
0
60
56
0
116
0
9
0
0
9
0
25
128
0
153
0
2
102
0
104
0
10
55
0
65

08/08/2008
08/08/2008
146
19/09/2008
20/09/2008
1
2
0
3
0
0
3
4
Total
1
2
3
4
Total
6
0
23
0
23
0
0
0
0
0
0
0
4
0

Anexo D.
Formato de registro de pruebas
FACULTAD DE INGENIERIA
AMBIENTAL Y SANITARIA
LB05
LABORATORIO DE
BIOENSAYOS
PRUEBA DE TOXICIDAD
Pgina 8 de 8
Versin 0
LB001
FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL Y SANITARIA

LABORATORIO AREA DE BIOENSAYOS
REGISTRO DE DATOS DEL TEST DE TOXICIDAD AGUDA
Ficha del test esttico definitivo con: ______________________________
Muestra: ____________________________________________________
Datos fisicoqumicos de la muestra
Conductividad: _________________
Dureza: ______________________
pH: __________________________
Inicio de la prueba:
Fin de la prueba :
Agua de dilucin:
pH: _______ ,
Tratamiento de la muestra
Sedimentacin: ______________
Filtracin: ___________________
Ajuste de pH: _______________
____ / ____ / ____ , a las ________ horas

____ / ____ / ____, a las _________ horas
Dureza: _______ ,
Fecha de Preparacin: ____ / ____

RESULTADOS
Concentracin
nominal
No. de organismos
muertos
1
Medidas finales
OD
No. Observado de
muertes / No. Total de
organismos
% mortalidad
obtenido
pH
Elaboro: ESCOBAR MALAVER, Pedro Miguel. Implementacin de un sistema de alerta de riesgo

toxicolgico utilizando Daphnia Pulex para la evaluacin de muestras ambientales. Santaf de Bogot;
1997
147

ANEXO E
RESULTADOS PRUEBAS TOXICOLOGICAS
CON DICROMATO DE POTASIO
148

E.1.PRUEBA PRELIMINAR
Abril 3 de 2008
1
0
0
0
0
3
5
Blanco
0.001
0.01
0.1
1
10

2
3
0
0
0
0
0
0
0
0
3
2
5
5
% MORTALIDAD
OBTENIDO
4
0
0
0
0
0
5
0
0
0
0
40
100
E.2. PRUEBAS DEFINITIVAS

Abril 10 de 2008
% MORTALIDAD
OBTENIDO

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
0.3
0.8
1.5
0
10
15
25
60
100
Anlisis de varianza
Concentracin
Nmero de rplicas
total
promedio
0,5
0,75
1,25
12
20
total
42
10,5
R1
R2
R3
R4
0.3
0.8
1.5
2
Blanco
Fuente: LAB M07
149

TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
las
variaciones
Entre grupos
Suma de
cuadrados
Grados de
libertad
72
Promedio
de
cuadrados
14,4
Dentro de
Grupos
4,5
18
0,25
Total
76,5
23
6
4
24
F
Calculado
F Terico
57,6
2.77
Fuente: LAB M07
CL 50-48 (ppm)
LIMITE SUPERIOR (ppm)
LIMITE INFERIOR (ppm)
1.1867
1.7498
0.8543
Se determina el valor de F para luego poder comparase con el valor de F terico, y poder
concluir teniendo en cuenta dos hiptesis.
Ho: Las diferentes concentraciones producen el mismo efecto en todos los organismos
H1: Las diferentes concentraciones producen un diferente efecto en todos los organismos.
Fc > Ft: se rechaza la hiptesis nula y se acepta la hiptesis alterna
Abril 10 de 2008

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
0.3
0.8
1.5
Fuente: LAB M07
CL 50-48 (ppm)
150
1.0513
1.9266
0.6201
% MORTALIDAD
OBTENIDO
0
20
25
40
50
100

Anlisis de varianza
Nmero de rplicas
Concentracin
R1
R2
R3
R4
total
promedio
0.3
0.8
1,25
1.5
10
2,5
20
Blanco
total
47
11,75
Fuente: LAB M07
Origen de
Suma de
las
cuadrados
variaciones
Entre grupos 59,2083333
TRATAMIENTOS
6
OBSERVACIONES
4
TOTAL
24
Promedio
Grados de
F
de
F Terico
libertad
Calculado
cuadrados
5
11,8416667
Dentro de
Grupos
1,75
18
Total
60,9583333
23
0,09722222
121,8
2,77
Fuente: LAB M07
Abril 10 de 2008
151

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
0.3
0.8
1.5
% MORTALIDAD
OBTENIDO
0
10
25
30
60
100

CL 50-48 (ppm)
1.1092
1.365
0.9076
Anlisis de varianza
Concentracin
Nmero de rplicas
total
promedio
R1
R2
R3
R4
0.3
0,5
0.8
1,25
1,5
1.5
12
20
Blanco
total
45
11,25
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
las
variaciones
Entre grupos
Suma de
cuadrados
Grados de
libertad
67,88
Dentro de
Grupos
2,75
18
Total
70,625
23
Promedio
de
cuadrados
13,575
6
4
24
F
Calculado
0,15277778 88,8545455
F Terico
2,77
Fuente: LAB M07
152

Abril 15 de 2008
% MORTALIDAD
OBTENIDO

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
0.3
0.8
1.5
CL 50-48 (ppm)
0
0
20
30
40
100
1.2874
1.5437
1.0992
Anlisis de varianza
Concentracin
Nmero de rplicas
total
promedio
R1
R2
R3
R4
0.3
0.8
1,5
1.5
20
Blanco
total
38
9,5
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
Suma de
las
cuadrados
variaciones
Promedio
de
cuadrados
13,7666667
0,06
Grados de
libertad
Dentro de
Grupos
18
Total
69,8333333
23
Fuente: LAB M07
153
6
4
24
F
Calculado
F Terico
247,8
2,77

Abril 15 de 2008
% MORTALIDAD
OBTENIDO

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
0.3
0.8
1.5
CL 50-48 (ppm)
0
0
25
30
40
100
1.2548
1.8443
0.9392
Anlisis de varianza
Concentracin
Nmero de rplicas
total
promedio
1,25
1,5
20
total
39
9,75
R1
R2
R3
R4
0.3
0.8
1.5
2
Blanco
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
154
6
4
24

Origen de
las
variaciones
Entre grupos
Suma de
cuadrados
Grados de
libertad
67,875
Promedio
de
cuadrados
13,575
Dentro de
Grupos
3,75
18
0,20833333
Total
71,625
23
F
Calculado
F Terico
65,16
2,77
Fuente: LAB M07
Abril 15 de 2008
% MORTALIDAD
OBTENIDO

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
0.3
0.8
1.5
CL 50-48 (ppm)
0
45
15
25
45
100
1.1675
2.7114
0.7019
Anlisis de varianza
Concentracin
155
Nmero de rplicas
total
promedio
10
2,5
0,75
1,25
10
2,5
20
R1
R2
R3
R4
0.3
0.8
1.5
2

Blanco
total
48
12
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
las
variaciones
Entre grupos
Suma de
cuadrados
Grados de
libertad
62,5
Dentro de
Grupos
25,5
18
Total
88
23
Promedio
de
cuadrados
12,5
6
4
24
F
Calculado
F Terico
1,41666667 8,82352941
2,77
Fuente: LAB M07
Abril 17 de 2008

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
0.3
0.8
1.5
CL 50-48 (ppm)
156
0.9249
1.0722
0.7714
% MORTALIDAD
OBTENIDO
0
0
40
55
90
90

Anlisis de varianza
Concentracin
Nmero de rplicas
total
promedio
11
2,75
18
4,5
18
4,5
Blanco
total
55
13,75
R1
R2
R3
R4
0.3
0.8
1.5
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
Suma de
las
cuadrados
variaciones
6
4
24
Promedio
de
cuadrados
16,4416667
0,48611111 33,8228571
Grados de
libertad
Dentro de
Grupos
8,75
18
Total
90,9583333
23
F
Calculado
F Terico
2,77
Fuente: LAB M07
157

Abril 17 de 2008
% MORTALIDAD
OBTENIDO

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
0.3
0.8
1.5
CL 50-48 (ppm)
0
30
45
45
100
100
0.671
0.9915
0.2982
Anlisis de varianza
Nmero de rplicas
total
promedio
1,5
2,25
Concentracin
R1
R2
R3
R4
0.3
0.8
2,25
1.5
20
20
Blanco
total
64
16
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
Suma de
las
cuadrados
variaciones
Promedio
de
cuadrados
15,7666667
0,47222222 33,3882353
Grados de
libertad
Dentro de
Grupos
8,5
18
Total
87,3333333
23
Fuente: LAB M07
158
6
4
24
F
Calculado
F Terico
2,77

Abril 17 de 2008
% MORTALIDAD
OBTENIDO

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
0.3
0.8
1.5
CL 50-48 (ppm)
0
10
10
30
60
100
1.1854
1.7275
0.8599
Anlisis de varianza
Concentracin
Nmero de rplicas
total
promedio
0,5
0,5
1,5
12
20
total
42
10,5
R1
R2
R3
R4
0.3
0.8
1.5
2
Blanco
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
159
6
4
24

Origen de
las
variaciones
Entre grupos
Suma de
cuadrados
Grados de
libertad
73,5
Promedio
de
cuadrados
14,7
Dentro de
Grupos
18
0,38888889
Total
80,5
23
F
Calculado
F Terico
37,8
2,77
Fuente: LAB M07
Abril 22 de 2008
% MORTALIDAD
OBTENIDO

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
0.3
0.8
1.5
CL 50-48 (ppm)
0
0
20
30
50
100
1.2453
1.4426
1.0818
Anlisis de varianza
Concentracin
160
Nmero de rplicas
total
promedio
1,5
10
2,5
20
total
40
10
R1
R2
R3
R4
0.3
0.8
1.5
2
Blanco

TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
Suma de
las
cuadrados
variaciones
Promedio
de
cuadrados
14,2666667
0,33333333
Grados de
libertad
Dentro de
Grupos
18
Total
77,3333333
23
6
4
24
F
Calculado
F Terico
42,8
2,77
Fuente: LAB M07
Abril 22 de 2008

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
0.3
0.8
1.5
CL 50-48 (ppm)
161
1.1195
0.9864
1.2536
% MORTALIDAD
OBTENIDO
0
0
15
45
70
100

Anlisis de varianza
Nmero de rplicas
Concentracin
total
promedio
0,75
2,25
14
3,5
20
Blanco
total
46
11,5
R1
R2
R3
R4
0.3
0.8
1.5
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
Suma de
las
cuadrados
variaciones
Promedio
de
cuadrados
16,6666667
0,25
Grados de
libertad
Dentro de
Grupos
4,5
18
Total
87,8333333
23
6
4
24
F
Calculado
F Terico
66,6666667
2,77
Fuente: LAB M07
Abril 22 de 2008
162

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
0.3
0.8
1.5
% MORTALIDAD
OBTENIDO
0
0
20
40
45
100

CL 50-48 (ppm)
1.2149
1.4421
1.0376
Anlisis de varianza
Concentracin
Nmero de rplicas
total
promedio
2,25
20
total
41
10,25
R1
R2
R3
R4
0.3
0.8
1.5
2
Blanco
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
Suma de
las
cuadrados
variaciones
6
4
24
Promedio
de
cuadrados
14,0416667
0,15277778 91,9090909
Grados de
libertad
Dentro de
Grupos
2,75
18
Total
72,9583333
23
F
Calculado
F Terico
2,77
Fuente: LAB M07
163

Abril 29 de 2008
% MORTALIDAD
OBTENIDO

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
0.3
0.8
1.5
CL 50-48 (ppm)
0
10
40
55
60
100
0.9104
1.1171
0.7195
Anlisis de varianza
Concentracin
Nmero de rplicas
total
promedio
0,5
R1
R2
R3
R4
0.3
0.8
11
2,75
1.5
12
20
Blanco
total
53
13,25
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
Suma de
las
cuadrados
variaciones
Promedio
de
cuadrados
13,2416667
0,20833333
Grados de
libertad
Dentro de
Grupos
3,75
18
Total
69,9583333
23
Fuente: LAB M07
164
6
4
24
F
Calculado
F Terico
63,56
2,77

Abril 29 de 2008
% MORTALIDAD
OBTENIDO

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
0.3
0.8
1.5
CL 50-48 (ppm)
0
15
30
40
50
100
1.0535
1.7569
0.6575
Anlisis de varianza
Concentracin
Nmero de rplicas
total
promedio
0,75
1,5
10
2,5
20
total
47
11,75
R1
R2
R3
R4
0.3
0.8
1.5
2
Blanco
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
165
6
4
24

Origen de
Suma de
las
cuadrados
variaciones
Promedio
de
cuadrados
12,0416667
0,15277778 78,8181818
Grados de
libertad
Dentro de
Grupos
2,75
18
Total
62,9583333
23
F
Calculado
F Terico
2,77
Fuente: LAB M07
Abril 29 de 2008
% MORTALIDAD
OBTENIDO

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
0.3
0.8
1.5
CL 50-48 (ppm)
0
0
35
10
65
100
1.0063
1.1757
0.8525
Anlisis de varianza
Concentracin
166
Nmero de rplicas
total
promedio
R1
R2
R3
R4
0.3
0.8
1,75
10
2,5
1.5
13
3,25
20
Blanco
total
50
12,5

TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
Suma de
las
cuadrados
variaciones
Promedio
de
cuadrados
15,0666667
0,13888889
Grados de
libertad
Dentro de
Grupos
2,5
18
Total
77,8333333
23
6
4
24
F
Calculado
F Terico
108,48
2,77
Fuente: LAB M07
167

ANEXO F
RESULTADOS PRUEBAS DEFINITIVAS CON
HERBICIDA
168

F.1 PRUEBA PRELIMINAR
% MORTALIDAD
OBTENIDO

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
100
200
300
400
500
0
80
100
100
100
100
F.2. PRUEBAS DEFINITIVAS

Septiembre 3 de 2008
% MORTALIDAD
OBTENIDO

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
20
40
60
80
100
CL 50-48 (ppm)
0
35
55
70
90
85
31.5626
41.8040
18.3913
Anlisis de varianza
Concentracin
Nmero de rplicas
total
promedio
1,75
11
2,75
14
3,5
18
4,5
17
4,25
total
67
16,75
R1
R2
R3
R4
20
40
60
80
100
Blanco
Fuente: LAB M07
169

TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
Suma de
las
cuadrados
variaciones
6
4
24
Promedio
de
cuadrados
11,5416667
0,56944444 20,2682927
Grados de
libertad
Dentro de
Grupos
10,25
18
Total
67,9583333
23
F
Calculado
F Terico
2.77
Fuente: LAB M07
% MORTALIDAD
OBTENIDO

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
20
40
60
80
100
CL 50-48 (ppm)
48.5909
57.7525
39.5340
Anlisis de varianza
Concentracin
170
Nmero de rplicas
total
promedio
R1
R2
R3
R4
20
0,5
40
2,75

60
13
3,25
80
16
100
18
4,5
Blanco
total
55
15
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
Suma de
las
cuadrados
variaciones
6
4
24
Promedio
de
cuadrados
14,2416667
0,54166667 26,2923077
Grados de
libertad
Dentro de
Grupos
9,75
18
Total
80,9583333
23
F
Calculado
F Terico
2,77
Fuente: LAB M07

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
20
40
60
80
100
CL 50-48 (ppm)
171
50.9970
62.1933
40.7487
% MORTALIDAD
OBTENIDO
0

Anlisis de varianza
Nmero de rplicas
Concentracin
total
promedio
0,75
1,25
11
2,75
16
100
17
4,25
Blanco
total
52
13
R1
R2
R3
R4
20
40
60
80
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
las
variaciones
Entre grupos
Suma de
cuadrados
Grados de
libertad
62,33
Promedio
de
cuadrados
12,4666667
Dentro de
Grupos
18
0,27777778
Total
67,333
23
6
4
24
F
Calculado
F Terico
44,88
2,77
Fuente: LAB M07
Blanco
1
0
20
40
60
80
100
172

2
3
4
0
0
0
% MORTALIDAD
OBTENIDO
0

CL 50-48 (ppm)
38.2408
49.6108
25.1876
Anlisis de varianza
Concentracin
Nmero de rplicas
total
promedio
1,5
10
2,5
11
2,75
16
18
4,5
total
61
15,25
R1
R2
R3
R4
20
40
60
80
100
Blanco
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
Suma de
las
cuadrados
variaciones
Promedio
de
cuadrados
10,8416667
0,88
Grados de
libertad
Dentro de
Grupos
15,75
18
Total
69,9583333
23
6
4
24
F
Calculado
F Terico
12,3904762
2,77
Fuente: LAB M07
173

% MORTALIDAD
OBTENIDO

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
20
40
60
80
100
CL 50-48 (ppm)
41.1958
51.1070
30.4792
Anlisis de varianza
Concentracin
Nmero de rplicas
total
promedio
1,5
1,75
11
2,75
16
20
total
60
15
R1
R2
R3
R4
20
40
60
80
100
0.0
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
las
variaciones
Entre grupos
Suma de
cuadrados
Grados de
libertad
65,5
Promedio
de
cuadrados
13,1
Dentro de
Grupos
2,5
18
0,13888889
Total
68
23
Fuente: LAB M07
174
6
4
24
F
Calculado
F Terico
94,32
2,77

% MORTALIDAD
OBTENIDO

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
20
40
60
80
100
CL 50-48 (ppm)
45.4962
59.1399
32.2849
Anlisis de varianza
Concentracin
Nmero de rplicas
total
promedio
1,5
1,5
10
2,5
R1
R2
R3
R4
20
40
60
80
16
100
17
4,25
Blanco
total
55
13,75
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
175
6
4
24

Origen de
Suma de
las
cuadrados
variaciones
Promedio
de
cuadrados
10,6416667
0,31944444 33,3130435
Grados de
libertad
Dentro de
Grupos
5,75
18
Total
58,9583333
23
F
Calculado
F Terico
2,77
Fuente: LAB M07
% MORTALIDAD
OBTENIDO

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
20
40
60
80
100
CL 50-48 (ppm)
42.8240
58.6998
23.3415
Anlisis de varianza
Concentracin
176
Nmero de rplicas
total
promedio
1,75
1,75
11
2,75
17
4,25
R1
R2
R3
R4
20
40
60
80

100
18
4,5
Blanco
total
60
15
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
las
variaciones
Entre grupos
Suma de
cuadrados
Grados de
libertad
58
Promedio
de
cuadrados
11,6
Dentro de
Grupos
18
0,22222222
Total
62
23
6
4
24
F
Calculado
F Terico
52,2
2,77
Fuente: LAB M07

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
20
40
60
80
100
CL 50-48 (ppm)
177
48.9913
58.7242
39.6084
% MORTALIDAD
OBTENIDO
0

Anlisis de varianza
Nmero de rplicas
Concentracin
total
promedio
0,75
1,25
11
2,75
17
4,25
100
18
4,5
Blanco
total
54
13,5
R1
R2
R3
R4
20
40
60
80
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
las
variaciones
Entre grupos
Suma de
cuadrados
Grados de
libertad
70,5
Promedio
de
cuadrados
14,1
Dentro de
Grupos
18
0,33333333
Total
76,5
23
6
4
24
F
Calculado
F Terico
42,3
2,77
Fuente: LAB M07
178

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
20
40
% MORTALIDAD
OBTENIDO
0

60
80
100
CL 50-48 (ppm)
48.5809
57.7525
39.5340
Anlisis de varianza
Concentracin
Nmero de rplicas
total
promedio
0,5
1,5
13
3,25
16
100
18
4,5
Blanco
total
55
13,75
R1
R2
R3
R4
20
40
60
80
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
Suma de
las
cuadrados
variaciones
6
4
24
Promedio
de
cuadrados
14,2416667
0,54166667 26,2923077
Grados de
libertad
Dentro de
Grupos
9,75
18
Total
80,9583333
23
F
Calculado
F Terico
2,77
Fuente: LAB M07
179

% MORTALIDAD
OBTENIDO

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
20
40
60
80
100
CL 50-48 (ppm)
41.1958
51.1070
30.4792
Anlisis de varianza
Concentracin
Nmero de rplicas
total
promedio
1,5
1,75
11
2,75
16
20
total
60
15
R1
R2
R3
R4
20
40
60
80
100
Blanco
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
las
variaciones
Entre grupos
Suma de
cuadrados
Grados de
libertad
65,5
Promedio
de
cuadrados
13,1
Dentro de
Grupos
2,5
18
0,13888889
Total
68
23
Fuente: LAB M07
180
6
4
24
F
Calculado
F Terico
94,32
2,77


organismos
organismos.
% MORTALIDAD
OBTENIDO

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
20
40
60
80
100
CL 50-48 (ppm)
31.8725
41.9194
19.1056
Anlisis de varianza
Concentracin
Nmero de rplicas
total
promedio
1,75
11
2,75
14
3,5
17
4,25
18
4,5
1,75
R1
R2
R3
R4
20
40
60
80
100
Blanco
Fuente: LAB M07
181

TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
Suma de
las
cuadrados
variaciones
6
4
24
Promedio
de
cuadrados
11,5416667
0,56944444 20,2682927
Grados de
libertad
Dentro de
Grupos
10,25
18
Total
67,9583333
23
F
Calculado
F Terico
2,77
Fuente: LAB M07

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
20
40
60
80
100
CL 50-48 (ppm)
182
45.3259
55.3883
35.2295
% MORTALIDAD
OBTENIDO
0

Anlisis de varianza
Concentracin
Nmero de rplicas
total
promedio
0,75
13
3,25
15
3,75
100
18
4,5
Blanco
total
57
14,25
R1
R2
R3
R4
20
40
60
80
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
las
variaciones
Entre grupos
Suma de
cuadrados
Grados de
libertad
62,375
Dentro de
Grupos
3,25
18
Total
65,625
23
Promedio
de
cuadrados
12,475
6
4
24
F
Calculado
0,18055556 69,0923077
F Terico
2,77
Fuente: LAB M07
183

PRUEBAS DE DICROMATO PARALELAS A LAS PRUEBAS CON HERBICIDA

% MORTALIDAD
OBTENIDO

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
0.3
0.8
1.5
CL 50-48 (ppm)
1.2874
1.5437
1.0992
Anlisis de varianza
Concentracin
Nmero de rplicas
total
promedio
R1
R2
R3
R4
0.3
0.8
1,5
1.5
20
Blanco
total
38
9,5
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
Suma de
las
cuadrados
variaciones
Promedio
de
cuadrados
13,7666667
0,05555556
Grados de
libertad
Dentro de
Grupos
18
Total
69,8333333
23
184
6
4
24
F
Calculado
F Terico
247,8
2,77

% MORTALIDAD
OBTENIDO

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
0.3
0.8
1.5
CL 50-48 (ppm)
1.2874
1.5437
1.0992
Anlisis de varianza
Concentracin
Nmero de rplicas
total
promedio
1,5
20
total
38
9,5
R1
R2
R3
R4
0.3
0.8
1.5
2
Blanco
Fuente: LAB M07
TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
185
6
4
24

Origen de
Suma de
las
cuadrados
variaciones
Dentro de
Grupos
Total
69,8333333
Promedio
de
cuadrados
13,7666667
18
0,05555556
Grados de
libertad
F
Calculado
F Terico
247,8
2,77
23
Fuente: LAB M07
% MORTALIDAD
OBTENIDO

2
3
4
0
0
0
Blanco
1
0
0.3
0.8
1.5
CL 50-48 (ppm)
1.2671
1.4904
1.0925
Anlisis de varianza
Concentracin
186
Nmero de rplicas
total
promedio
1,5
2,25
20
total
39
9,75
R1
R2
R3
R4
0.3
0.8
1.5
2
Blanco

TRATAMIENTOS
OBSERVACIONES
TOTAL
Origen de
las
variaciones
Entre grupos
Suma de
cuadrados
Grados de
libertad
69,875
Dentro de
Grupos
5,75
18
Total
75,625
23
Promedio
de
cuadrados
13,975
6
4
24
F
Calculado
0,31944444 43,7478261
F Terico
2,77
Fuente: LAB M07
187

ANEXO G
PROTOCOLO PARA EL MANEJO,
TRANSPORTE, ALMACENAMIENTO Y
DISPOSICIN DE RESIDUOS DE HERBICIDAS
188

PROTOCOLO PARA EL MANEJO, TRANSPORTE,

ALMACENAMIENTO Y DISPOSICIN DE RESIDUOS DE
HERBICIDAS
GLOSARIO
Ambiente: el entorno, incluyendo el agua, aire, suelo, y su interrelacin, as como
las relaciones entre estos elementos y cualesquiera organismo vivo
Autoridad competente: autoridad nacional o internacional designada o
reconocida por el Estado para un determinado fin.
Desecho: material que no tiene ninguna posibilidad de recuperacin y debe ser
eliminado adecuadamente para no afectar el medio ambiente.
Incineracin: Es el proceso de oxidacin trmica mediante el cual los residuos
son convertidos, en presencia de oxgeno, en gases y restos slidos
incombustibles bajo condiciones de oxgeno Estequiomtricas y la conjugacin de
tres variables: temperatura, tiempo y turbulencia. La incineracin contempla los
procesos de pirolisis y termlisis a las condiciones de oxgeno apropiadas.
Mercanca peligrosa: materiales perjudiciales que durante la fabricacin, manejo,
transporte, almacenamiento o uso, pueden generar o desprender polvos, humos,
gases, lquidos, vapores o fibras infecciosas, irritantes, inflamables, explosivos,
corrosivos, asfixiantes, txicos o de otra naturaleza peligrosa, o radiaciones
ionizantes en cantidades que pueden afectar la salud de las personas que entran
en contacto con stas, o que causen dao material.
Norma tcnica: es el documento establecido por consenso y aprobado por un
organismo reconocido, que suministra, para uso comn y repetido, reglas,
directrices y caractersticas para las actividades o sus resultados, encaminadas al
logro del grado ptimo de orden en un contexto dado. Las normas tcnicas se
deben basar en los resultados consolidados de la ciencia, la tecnologa y la
experiencia y sus objetivos deben ser los beneficios ptimos para la comunidad.
Residuos Peligrosos : Sustancias o mezclas de ellas que, independientemente
de su estado fsico, representen un riesgo para el ambiente y la salud, por sus
caractersticas corrosivas, reactivas, explosivas, txicas, inflamables o biolgicoinfecciosas
189

Tarjeta de emergencia: documento que contiene informacin bsica sobre la

identificacin del material peligroso y datos del fabricante, identificacin de
peligros, proteccin personal y control de exposicin, medidas de primeros
auxilios, medidas para extincin de incendios, medidas para vertido accidental,
estabilidad y reactividad e informacin sobre el transporte, que se elabora de
acuerdo con lo estipulado en la NTC4532.
OBJETIVOS
Generar una herramienta til, de incidencia positiva en la manera de almacenar,
transportar, manipular y disponer los residuos del herbicida generados en el
desarrollo de proyectos de investigacin en el laboratorio de Bioensayos.
1. GENERALIDADES
Con la Poltica Ambiental para la Gestin Integral de Residuos Peligrosos y
normatividades como el decreto 2676, se da inicio a una concienciacin de todos
los generadores de residuos peligrosos sobre la responsabilidad compartida para
prevenir la generacin de tales, y propender por el manejo ambientalmente
racional de los mismos. A partir de esto, surge un compromiso por parte del
Laboratorio de Ingeniera Ambiental y Sanitaria de impulsar a travs de sus
servicios el manejo racional de los productos qumicos y sus residuos y proponer
ensayos de tratabilidad de acuerdo al tipo de residuo generado.
Los plaguicidas constituyen una fuente potencial de infeccin, por lo que deben
tomarse medidas para almacenarlos, transportarlos, manejarlos y disponerlos,
separados de los desechos generales.
El manejo y control de los plaguicidas son un tema de inters ambiental tanto
dentro como fuera de las instituciones de salud y afines, ya que pone en peligro la
salud de los trabajadores involucrados en su manipulacin.
Dando cumplimiento a lo exigido en el Decreto 2676:
1. Garantizar la gestin integral de sus residuos hospitalarios y similares y velar
por el cumplimiento de los procedimientos establecidos en el Manual para tales
efectos.
2. El fabricante o importador de un producto o sustancia qumica con propiedad
peligrosa que d lugar a un residuo hospitalario o similar peligroso, se equipara
190

a un generador, en cuanto a responsabilidad por el manejo de los embalajes y

residuos del producto o sustancia, de conformidad con la Ley 430 de 1998.
3. Garantizar ambiental y sanitariamente un adecuado tratamiento y disposicin
final de los residuos hospitalarios y similares conforme a los procedimientos
exigidos por los Ministerios del Medio Ambiente y Salud. Para lo anterior
podrn contratar la prestacin del servicio especial de tratamiento y la
disposicin final.
Un incendio que involucre plaguicidas es siempre un accidente grave, no slo por
los riesgos del propio incendio, como generacin de humos, vapores txicos o
explosiones, sino por los desechos txicos que quedan despus de que el fuego
ha sido extinguido.
Las actividades consideradas en este documento son: almacenamiento,
transporte, manejo de envases, y manejo de desechos lquidos. Todas estas
actividades estn regidas por la regulacin ambiental existente, y su descripcin
busca a travs del conocimiento, reducir el deterioro del hombre y los recursos
naturales.
2. MARCO TEORICO
Los plaguicidas estn sujetos a la accin de varios factores que pueden causar su
deterioro inclusive antes de la fecha de vencimiento, sealada por el fabricante en
la etiqueta. En la siguiente tabla se clasifican los plaguicidas de acuerdo al tipo de
problema que controlan.
TIPO DE PLAGUICIDA
Insecticida
Fungicida
Herbicida
Acaricida
Nematicida
Molusquicida
Rodenticida
PLAGA QUE CONTROLA

Insectos
Hongos causantes de enfermedades
Malezas
caros
Nemtodos
Babosas y caracoles
Ratas y ratones
Los Herbicidas pueden clasificarse por:

A. Su selectividad: Selectivos y no selectivos. No selectivos son aquellos que
afectan todo tipo de plantas y selectivos son los que solamente afectan ciertas
familias o especies de plantas.
191

B. La poca de aplicacin:
Presiembra: se aplican sobre la vegetacin existente en un terreno, preparado o
sin preparar, antes de la siembra.
Presiembra incorporados: Se aplican sobre el terreno convenientemente
preparado y se incorporan o mezclan con el suelo, mediante rastrilladas. Despus
de la incorporacin se siembra la semilla del cultivo.
Pre-emergencia: Se aplican sobre el terreno preparado y sembrado, pero antes de
que el cultivo y/o las malezas hayan nacido.
Post emergencia: Se aplican despus de que el cultivo y/o las malezas han
nacido. La aplicacin en post-emergencia puede ser temprana (malezas recin
germinadas) o tarda.
C. El punto de aplicacin: De aplicacin al suelo y de aplicacin al follaje. Los de
aplicacin al suelo inhiben la germinacin de las semillas de malezas o las matan
en el proceso de germinacin. Los de aplicacin al follaje se aplican sobre
malezas ya nacidas. (Post-emergentes).
D. Su movimiento en la planta: Sistmicos, penetran en la planta y la afectan
totalmente y de contacto, solamente afectan la parte que tocan.
E. Por la clase de malezas que controla: graminicidas, de hoja ancha y de
ciperceas. Un herbicida puede controlar una o varias clases de malezas.
F. Por su persistencia en el suelo: residuales, ejercen control durante 15 a 20 das
y no residuales, se fijan al suelo y/o se descomponen rpidamente.
3. ALMACENAMIENTO
Deber existir buena
ventilacin para evitar la acumulacin de vapores
inflamables o txicos. El diseo del techo debe facilitar la ventilacin. Si la
ventilacin natural es insuficiente deben instalarse extractores.
Para un correcto almacenamiento de los herbicidas se debe tener en cuenta las
recomendaciones siguientes contempladas en el Decreto 1843 de 1991 y la NTC
1319 (Almacenamiento):
Dedicacin exclusiva. No debe almacenarse junto al herbicida alimentos para el
hombre o los animales, ropas, calzado, elementos de proteccin, artculos de uso
192

domstico, drogas ni, en general, ningn elemento cuya contaminacin pueda

representar un riesgo para las personas. (Decreto 1843 de 1991, Cap.VI, art. 54).
Proteccin contra factores de deterioro. Los herbicidas deben protegerse de la
humedad, el sol directo y el calor excesivo, principales factores que contribuyen a
su deterioro.
Los estantes pueden ser metlicos o de madera (a veces en concreto). Los
estantes de madera deben pintarse con pinturas resistentes a los solventes
En ellos los herbicidas deben colocarse teniendo en cuenta su formulacin y
toxicidad: Los lquidos abajo y los slidos arriba; los ms txicos abajo y los
menos txicos arriba.
En estibas o estantes los envases de lquidos deben colocarse con las tapas hacia
arriba. Nunca deben colocarse acostados, salvo en caso de emergencia y por
poco tiempo, cuando presentan filtraciones.
Cuanto mayor cantidad de plaguicidas se almacene, mayor es el riesgo potencial y
por tanto los requisitos son ms estrictos.
Los envases o embalajes de herbicidas no deben colocarse directamente en el
suelo, sino colocar sobre cualquier sistema que evite el contacto con el piso
(Decreto 1843 de 1991, Cap. VI, art. 57)
Para envasar herbicida se utilizan diferentes clases de materiales. Las
formulaciones lquidas se envasan en recipientes de plstico de diversas clases y
metal (hojalata y aluminio) con una capacidad que vara desde 60 hasta 205 litros;
las formulaciones slidas se envasan en bolsas de plstico, aluminio, papel (solos
o combinados), desde pocos gramos hasta, generalmente, 25 kilos. Estos
materiales presentan diferente grado de resistencia frente a impacto, perforacin y
oxidacin. En la figura N 1 se observa el tipo de recipiente que debe ser usado
segn el tipo de residuo a almacenar.
Igual de importante que el recipiente es el etiquetado de este. Para ello el
responsable del laboratorio y del uso del herbicida tendr que asegurarse del
correcto etiquetado, con sus cdigos y smbolos correspondientes.
193

Figura1. Tipo de recipientes
La etiqueta debe ser legible y estar en un lugar visible (ver figura N2).
El gestor actuar en funcin de su etiquetado, retirando solo los residuos que
estn perfectamente identificados y procediendo, posteriormente, al mejor
tratamiento posible.
Para el almacenamiento, se dispone de un espacio en el Laboratorio de Ingeniera

Ambiental, especficamente en la estantera correspondiente para almacenar los
residuos peligrosos.
El plaguicida se almacenar en un recipiente de plstico con capacidad para un
galn, el cual se rotulara como se muestra en la etiquete anexada (ANEXO I).
194

4. TRANSPORTE
El transporte de herbicidas es una actividad en la cual deben tomarse todas las
precauciones necesarias para asegurar que los productos lleguen a su destino sin
problemas. Los principales objetivos son:
A. Minimizar los riesgos para las personas y el ambiente
B. Disponer de respuesta ante eventuales emergencias como derrames o
incendios.
C. Mantener la calidad de los productos, la cual puede afectarse por la luz del sol,
alta temperatura, movimiento y humedad.
D. Asegurar la disponibilidad de productos a tiempo
Los herbicidas deben transportarse nicamente en vehculos cuyo estado de
conservacin general ofrezca garanta de seguridad
Luego de ser utilizado el herbicida en el laboratorio de bioensayos, este se
dispondr a almacenarse en un recipiente de plstico existente dentro del
laboratorio de bioensayos (debidamente rotulado) con capacidad de 5 litros, una
vez es alcanzado los del recipiente, es transportado al recipiente existente en el
Laboratorio de Ambiental, como se muestra en el plano que aclara la ruta de
transporte del herbicida (ANEXO III).
Figura N2. Almacenamiento herbicida
5. MANIPULACION
Para el adecuado uso o manejo del herbicida, es indispensable tener en cuenta
que finalizada la prueba, o la actividad que se este desarrollando, este no podr
ser arrojado al alcantarillado, se deber seguir las instrucciones de
almacenamiento.
195

No podr hacerse uso del herbicida, sin previa gua y autorizacin, de la persona a
cargo del proyecto.
Es indispensable para quien haga uso del Herbicida, portar el completo equipo de
proteccin personal, a continuacin se analizan estos aspectos para los diferentes
elementos de proteccin personal para cualquiera de las actividades que tengan
relacin con el manipuleo o uso de herbicidas.
El equipo de proteccin para manejo de herbicidas est compuesto de diversos
elementos destinados a evitar la exposicin por va dermal e inhalatoria. Los
elementos ms comunes son: ropa (permeable o impermeable) guantes, gorro,
calzado cerrado, casco o sombrero, gafas o protector facial y respirador.
El grado de proteccin que estos elementos puede dar depende de los siguientes
factores:
Su calidad, la cual est relacionada con el material, el diseo y su estado de
conservacin.
Su uso correcto.
Su adecuado mantenimiento.
Actividad a desarrollar
Permeable. Puede ser de una sola pieza o de camisa y pantaln separados. Se
utiliza de algodn o algodn-polister. Deben tener manga larga en brazos y
piernas. Las mangas no deben recortarse ni re-mangarse. Se debe tener cerrada
la cremallera o botones. No debe presentar desgarres: estos deben remendarse.
El almidonar la ropa ofrece mayor resistencia a la penetracin de los herbicidas y
facilita la descontaminacin al lavarlos.
Figura N3. Permeable
Proteccin de cabeza. Puede hacerse por medio de gorros de tela, cascos de

plstico. Previenen la contaminacin por salpicaduras, nube de aspersin o polvos
en suspensin que pueden caer en el cabello y luego, por el sudor, entrar en
contacto con el cuero cabelludo. Deben lavarse a diario.
196

Gafas y protectores faciales. Se fabrican en acetato, PVC y otros materiales.

Previenen la contaminacin por salpicaduras o por la nube de aspersin,
especialmente al aplicar cultivos altos.
Las gafas deben ser cerradas, con ventilacin indirecta. Los protectores faciales,
llamados tambin visores, protegen no slo los ojos sino la cara y se empaan
menos, especialmente en climas calientes y hmedos. Deben lavarse diariamente.
Respiradores. Llamados comnmente mscaras, se obtienen en diferentes
modelos y tipos de filtros (o cartuchos) que se ajustan a diversas necesidades.
(Polvos, o vapores y gases de distinta clase).
Figura N4. Gafas
Los respiradores para polvos ( material particulado) pueden ser desechables, o

estar compuestos por una pieza facial construida en PVC u otro material, con un
filtro reemplazable. Ofrecen diferente capacidad de filtrado de partculas. Las de
tipo A tiene capacidad de filtrar por lo menos un 98% de partculas menores de 10
micras, las de tipo B un 95% y las de tipo C un 90%. Algunos modelos poseen una
vlvula, llamada de exhalacin, que facilita la salida del aire expirado. La mscara
o el filtro se deben cambiar cuando se sienta el olor al contaminante o la
respiracin se haga difcil.
Los respiradores para vapores constan de una pieza facial provista de uno o dos
filtros y una o dos vlvulas de exhalacin. La pieza facial se ajusta a la cara,
cubriendo boca y nariz, mediante bandas elsticas (resortes) y un arns o cabezal.
Esta pieza se puede obtener en diferentes tallas.
Figura N5. Respiradores
197

Las mscaras de cara completa cubren totalmente la cara y estn provistas de un

plstico o acetato transparente, que reemplaza al visor o las gafas. Pueden estar
provistas de dos cartuchos normales o uno de mayor tamao llamado canister.
Son muy tiles cuando se manejan sustancias que producen vapores o gases
irritantes.
En el uso de respiradores
recomendaciones:
debe
tenerse
en
cuenta
las
siguientes
A. Es fundamental que el respirador ajuste hermticamente a la cara: para ello

debe buscarse la talla y diseo apropiados y el usuario no debe tener barba o
patillas largas. Debe verificarse que la vlvula de exhalacin cierra perfectamente.
Para comprobar el ajuste del respirador se tapa el filtro (o los filtros) con las manos
y se inhala: se debe sentir que el respirador se pega a la cara; se contiene la
respiracin por unos segundos: si la pieza facial se afloja, es seal que est
entrando aire y debe verificarse la causa. Adicionalmente, cuando se est
trabajando con productos que presentan algn olor o caractersticas irritantes, se
debe aprovechar estas caractersticas para comprobar el buen funcionamiento del
respirador.
Figura N6. Mascarilla
B. No debe meterse trapos o papel higinico dentro del respirador ya que esto no
mejora la proteccin y s dificulta la respiracin.
C. No se debe tocar o quitar el respirador con las manos o guantes contaminados.
D. La banda elstica debe remplazarse cuando pierda su elasticidad.
E. Los filtros tienen una duracin limitada, establecida por el fabricante, pero esta
vara de acuerdo con las condiciones de trabajo. Debe buscarse la asesora del
fabricante para determinar la vida til de los filtros en diferentes circunstancias de
operacin. Si al respirar se siente el olor al contaminante o la respiracin es difcil,
se debe cambiar el cartucho aunque el tiempo de uso sea inferior al establecido.
198

Al comprar respiradores o cartuchos de repuesto debe especificarse que sean

para plaguicidas, ya que existen cartuchos para diferentes usos.
Al terminar la jornada de trabajo se deben quitar el filtro y limpiar exteriormente
con un trapo hmedo. El prefiltro puede limpiarse golpendolo con la mano o con
un chorro de aire o, si es el caso, cambiarlo. El resto del respirador debe lavarse
con agua, preferiblemente caliente (mximo 65 C) y detergente y dejarlo secar al
aire. Los cartuchos deben guardarse en una bolsa plstica cerrada.
Los elementos de proteccin no deben guardarse en el mismo sitio donde se
almacenan o manipulan herbicidas. Deben renovarse de acuerdo con el tiempo y
condiciones de uso y estado de conservacin. Adems, los elementos de
proteccin deteriorados o muy contaminados, deben inutilizarse antes de
desecharlos e incinerarse en un horno con licencia ambiental segn lo contempla
la resolucin 058 de 2002 de Minambiente.
Vestimenta de proteccin debe ser utilizada por todas las personas que manejen
el componente. Adecuadas facilidades deben estar a disposicin todo el tiempo
durante el manejo y el lugar de manejo debe ser cerrado. Comer, beber y fumar
debe ser prohibido durante el manejo y antes y despus debe limpiarse.
Figura N. 7 Vestimenta de proteccin.
6. DISPOSICION
Una vez los residuos alcancen los del recipiente ubicado en el Laboratorio de
Ingeniera Ambiental, se procede a confirmar con la empresa INCINERACIONES
BOK el da y la hora la cual harn retiro de los residuos generados por el
plaguicida, y ellos harn el respectivo proceso de manejo y eliminacin de estos
residuos y de los recipiente finalizado el proyecto de investigacin.
199

Para el retiro de los residuos almacenados en el laboratorio de Ingeniera

Ambiental, se deber seguir el recorrido descrito en la ruta de retiro de los
residuos. (ANEXO IV)
Existen diversos agentes fsicos, qumicos o biolgicos que degradan los
herbicidas. Los ms conocidos son:
1. Incineracin. En el pas existen varios incineradores que cumplen con la
Resolucin 058 de 2002 del Ministerio del Medio Ambiente y permiten la
eliminacin de desechos pequeos de derrames y empaques y embalajes.
2. Hidrlisis. Muchos plaguicidas se hidrolizan en el agua, especialmente si el
medio es alcalino. Los organofosforados son particularmente sensibles a esta
accin.
3. Accin microbiana. Los microorganismos del suelo degradan los plaguicidas
orgnicos. En suelos ricos en materia orgnica la actividad microbiana es
mayor y en suelos arenosos es menor.
4. Luz solar. Los rayos ultravioleta de la luz del so descomponen algunos
plaguicidas.
5. Oxidacin. La oxidacin a temperatura ambiente es otro agente que contribuye
a la degradacin de muchos plaguicidas.
La accin de uno o varios de estos agentes puede utilizarse para tratar
adecuadamente los desechos siendo la incineracin controlada la mejor opcin
ambiental y la ms utilizada.
7. MEDIDAS DE PRIMEROS AUXILIOS

Ingestin
Ojos
Piel
Inhalacin
Inmediatamente dar a beber agua, no inducir vmito. Consultar al

mdico.
Lavar los ojos con aguas limpia durante quince minutos,
manteniendo los parpados bien abiertos. Consultar al mdico.
Quitar ropa y zapatos contaminados, lavar la zona con abundante
agua y jabn.
Alejar al afectado del rea contaminada, trasladarlo a un rea de
mayor ventilacin y mantenerlo en reposo.
Tabla N1. Medidas de primeros auxilios
200

BIBLIOGRAFIA
http://www.rds.org.co/guias.htm
Gua ambiental para el subsector de plaguicidas. 2003. MINISTERIO DE
AMBIENTE, VIVIENDA Y DESARROLLO TERRITORIAL.
Protocolos de residuos peligrosos. UNIVERSIDAD DE LA
SALLE.
Laboratorio de Ingeniera Ambiental.
201

ANEXO I. ROTULO PARA DEMARCAR ZONA DE ALMACENAMIENTO Y

DESECHOS.
0
3
HERBICIDA ROUNDUP 747
Herbicida no selectivo de amplio espectro, desarrollado

para eliminacin de hierbas y de arbustos, en especial los
perennes. Es un herbicida total.
R 2-4/20-28/36-41/45-48 S 2-4/7-9/15-17/18/20/21/24-26/29/35-39/42/44-46/51
202

ANEXO II. CLASIFICACIN TOXICOLGICA PARA PLAGUICIDAS SEGN

OMS
203

ANEXO III.
PLANO. RUTA DE EVACUACIN DEL RESIDUO DE HERBICIDA
DEL LABORATORIO DE INGENIERIA AMBIENTAL AL CARRO
RECOLECTOR DE RESIDUOS GENERADOS
204

ANEXO IV.
PLANO. RUTA DE EVACUACIN DEL RESIDUO DE HERBICIDA
DEL LABORATORIO DE BIOENSAYOS AL LABORATORIO DE
INGENIERIA AMBIENTAL
205

ANEXO H
REGISTRO DE RESULTADOS
PROGRAMA PROBIT
206

ANEXO I
PROTOCOLO ANALISIS DE VARIANZA
ANOVA
207

ANEXO J
PROTOCOLO PROGRAMA PROBIT
208

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DETERMINACION DE LA CONCENTRACION LETAL MEDIA CL 50-48 DEL HERBICIDA

ROUNDUP 747 SOBRE ECOSISTEMAS ACUATICOS MEDIANTE

DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN LETAL MEDIA (CL50-48) DEL

CATALINA MARIA GAMEZ ROJAS

DETERMINACION DE LA CONCENTRACION LETAL MEDIA CL 50-48 DEL HERBICIDA

DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN LETAL MEDIA (CL 50-48) DEL

CATALINA MARIA GAMEZ ROJAS

Trabajo de grado para optar al

DETERMINACION DE LA CONCENTRACION LETAL MEDIA CL 50-48 DEL HERBICIDA

Firma del Director de Tesis

Firma del Jurado

Firma del Jurado

Bogot D.C., Diciembre de 2008

DETERMINACION DE LA CONCENTRACION LETAL MEDIA CL 50-48 DEL HERBICIDA

Gracias a Dios, porque indudablemente ha estado conmigo en cada paso dado.

Catalina por haber estado ah, en los momentos tristes y alegres,

Llegar al final de este logro,

no hubiese sido posible sin la cooperacin

DETERMINACION DE LA CONCENTRACION LETAL MEDIA CL 50-48 DEL HERBICIDA

A mis padres por su comprensin, apoyo

DETERMINACION DE LA CONCENTRACION LETAL MEDIA CL 50-48 DEL HERBICIDA

Al profesor Pedro Miguel Escobar nuestro director de tesis, quien no solamente

A los profesores Rubn Daro Londoo y Edwin Beltrn, por su colaboracin en la

A los investigadores de bioensayos quienes nos colaboraron cuando los

DETERMINACION DE LA CONCENTRACION LETAL MEDIA CL 50-48 DEL HERBICIDA

Desde 1992, se inicio la prctica de aspersin area con Glifosato bajo la

DETERMINACION DE LA CONCENTRACION LETAL MEDIA CL 50-48 DEL HERBICIDA

Con Daphnia magna se hacen generalmente dos tipos de bioensayos: de

Daphnia magna en ecosistemas acuticos, Instituto Nacional de Limnologa (INALI)

DETERMINACION DE LA CONCENTRACION LETAL MEDIA CL 50-48 DEL HERBICIDA

BIOENSAYO Mtodo para evaluar la potencia relativa

CADENA TRFICA Tambin llamada cadena alimentaria, es la corriente de

CONTAMINANTE Sustancia introducida en el ambiente como resultado, por lo

DUREZA Concentracin en el agua de sales de calcio y magnesio. Se suele

DOSIS Cantidad de sustancia que se absorbe en 24 horas expresada con relacin

ECOSISTEMA ACUTICO Es la unidad funcional bsica de interaccin de los

ECOTOXICOLOGIA Es el estudio de la relacin dosis o concentracin / efecto de

DETERMINACION DE LA CONCENTRACION LETAL MEDIA CL 50-48 DEL HERBICIDA

ECOTOXICOLOGIA ACUATICA Es el estudio cualitativo y cuantitativo de los

EFECTO Es el cambio biolgico producido tanto en el nivel de organismo

EFIPIO Capsula protectora, la cual se encuentra en la cmara incubadora de las

ENSAYO DE TOXICIDAD Permite la deteccin y evaluacin de la capacidad de

ENSAYOS DE LABORATORIO Reproduccin parcial de las condiciones reales

Batera de ensayo que contiene un nmero especificado de

organismos en una concentracin dilucin de muestra definida o de agua de

RESPUESTA Es la proporcin de los problemas que manifiesta un determinado

TOLERANCIA Es la habilidad de un organismo a tolerar una condicin dada por

DETERMINACION DE LA CONCENTRACION LETAL MEDIA CL 50-48 DEL HERBICIDA

TOXICIDAD Es la capacidad de una sustancia de causar algn efecto nocivo

TOXICO Es el agente que puede producir un efecto adverso, dao referido a la

la introduccin puede ser deliberada

(efluentes) accidental (derrames). La cantidad liberada debe superar un nivel

XENOBIOTICO Son aquellas sustancias producidas por actividades antrpicas.

DETERMINACION DE LA CONCENTRACION LETAL MEDIA CL 50-48 DEL HERBICIDA

Mediante pruebas de toxicidad aguda se evalu la concentracin letal media del

DETERMINACION DE LA CONCENTRACION LETAL MEDIA CL 50-48 DEL HERBICIDA

By acute toxicity tests evaluated the average lethal concentration of Roundup

DETERMINACION DE LA CONCENTRACION LETAL MEDIA CL 50-48 DEL HERBICIDA

1.1. OBJETIVO GENERAL

del Herbicida Glifosato

toxicolgicas con Daphnia magna.

1.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

Establecer una comparacin entre los resultados obtenidos de la

Definir pautas para el manejo y disposicin de residuos del herbicida