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1. INTRODUCCIN
Las plantas son una fuente de innumerables recursos tiles para el desarrollo de la ciencia, entre
los ms importantes estn los conocidos principios activos o metabolitos secundarios [2]. Los
compuestos fenlicos son un grupo muy comn de metabolitos secundarios presentes en las
plantas, estos incluyen a los fenoles simples, polifenoles, flavonoides, taninos, entre otros. Los
flavonoides son el mayor grupo de fenoles vegetales y los ms estudiados [9].
Existen dos compuestos fenlicos de gran importancia debido a su amplia y variada actividad
biolgica, estos compuestos son el cido cafeico y el cido clorognico. Las propiedades ms
representativas de estos compuestos son antioxidantes, antibacterianas, antivirales, antifngicas,
anticarcinognicas, antitumorales, antimutagnicas, hepatoprotectoras, antiinflamatorias,
antihipercolesterolmicas e inmunoestimulantes [11].
En [10], los autores determinaron que los compuestos fenlicos ms representativos en la
alcachofa (Cynara scolymus L.) son el cido Cafeico (cido 3.4-dihidroxicinmico), el cido
Clorognico (cido 3-Cafeilquinico), la cinarina, el cinarsido, la isorhoifolina, y la narirutina,
todos estos con propiedades antioxidantes.
Muchas fuentes de informacin mencionan que los principios activos de la alcachofa se
encuentran nicamente en sus hojas y no en otra parte como sus brcteas o el corazn, pero
estudios como el de [7] y [8], demostraron que las brcteas de alcachofa de algunas variedades
poseen concentraciones importantes de compuestos fenlicos con actividad antioxidante, es
decir que contienen lo mismo que las hojas solo que con ciertas diferencias cuantitativas de
concentracin. Segn [7], las brcteas de alcachofa son una importante fuente de compuestos
fenlicos con propiedades beneficiosas para el organismo y, pueden llegar a ser un recurso
alternativo para las aplicaciones farmacuticas tradicionales que solo utilizaban extractos de las
hojas. Esto resalta la importancia de utilizar los subproductos o mal llamados desechos que
constituyen las brcteas de alcachofa como material para obtener este tipo de sustancias. Los
principales compuestos fenlicos encontrados en las brcteas fueron el cido 1.5-Odicafeilqunico (cinarina), seguido del cido clorognico y la 7-O-glucuronida.
2. MATERIALES Y MTODOS
2.1. Obtencin y preparacin de la muestra
Las muestras de brcteas de alcachofa fueron obtenidas de la empresa INAEXPO, perteneciente
a PRONACA, en Puembo, Pichincha-Ecuador. La preparacin de las muestras consisti en
secarlas a una temperatura menor a 40C para evitar la alteracin de los principios activos y,
finalmente fueron pulverizadas.
2.2. Extraccin de principios activos
Los extractos de brcteas de alcachofa se obtuvieron aplicando tcnicas de extraccin slidolquido recomendadas por [12]. La primera tcnica aplicada fue la maceracin del pulverizado
en etanol durante 30 das, utilizando 10 mL de etanol al 99.6% por cada 10g de brcteas
pulverizadas. De este procedimiento se obtuvieron dos extractos, uno alcohlico y otro
hidroalcohlico mediante la adicin de agua durante la maceracin.
La segunda tcnica aplicada para la extraccin de principios activos fue la hidrlisis cida con
cido clorhdrico (HCl) 6N, utilizando 200 mL de HCl por cada 15g de brcteas pulverizadas
durante tres das, luego de la maceracin en cido clorhdrico (HCl) se dej el extracto en
reflujo durante 12 horas. De este procedimiento se obtuvieron dos extractos, un hidrolizado con
calor y otro a temperatura ambiente. Finalmente todos los extractos fueron concentrados en
rotavapor con vaco y a una temperatura menor de 40C.
3. RESULTADOS
3.1. Tamizaje o screening fitoqumico
El pulverizado de brcteas de alcachofa contiene compuestos fenlicos tales como flavonoides,
cumarinas y taninos catquicos, junto con otros compuestos como azcares reductores,
saponinas, esteroles y, carotenoides.
Alcaloides, antocianidinas, lactonas y muclagos no fueron hallados en el screening.
3.2. Reaccin con cloruro frrico (FeCl3)
El extracto alcohlico, hidroalcohlico y el hidrolizado sin calor reaccionaron con el cloruro
frrico evidenciando la presencia de compuestos fenlicos en su composicin.
3.3. Cromatografa en capa fina
En el cromatograma
tograma del extracto alcohlico se evidenci la presencia de cido clorognico.
Tambin encontraron otros compuestos de los cuales no se pudieron identificar.
En el cromatograma del extracto hidroalcohlico (Figura 3.1)
3. se encontr cido clorognico, la
que se presenta mucho ms clara y definida que en el extracto alcohlico. Existiendo ttambin la
presencia de otros componentes no identificados.
identificados
El cromatograma del hidrolizado sin calor present 3 bandas una de las cuales corresponde al
cido cafeico
El cromatograma del hidrolizado con calor no present bandas identificables.. El tratamiento de
las brcteas con cido clorhdrico (HCl)
(
6N y temperatura mayor a 40C no permiti obtener un
extracto que contenga compuestos fenlicos. La tabla 3.1 resume los resultados de la
cromatografa.
3.4. Cromatografa HPLC
El resultado del anlisis realizado al extracto alcohlico (Figura 3.2) e hidroalcohlico mediante
HPLC revela que las concentraciones
concentraci
de cido clorognico son 82.8560 y 40.
0.0613 mg/L,
respectivamente. Estos extractos no contienen cido cafeico y quercetina segn los
cromatogramas.
Alcohlico
0.96
0.54*
Hidroalcohlico
0.95
0.54*
0.84
0.82
Rf Muestra
0.71
0.65
0.59*
0.52*
* Indica que el Rf de la muestra corresponde al del estndar.
Alcohlico
Hidroalcohlico
Hidrlisis con calor
Hidrlisis sin calor
0.153 (0.004)
0.160 (0.004)
0.001 (0.001)
0.142 (0.004)
una concentracin importante dee fenoles totales no tiene la capacidad de capturar radicales
libres en un porcentaje representativo.
representativo. Esto hace suponer que el tratamiento con cido
clorhdrico (HCl) no es el adecuado para elaborar un extracto con propiedades antioxidantes y,
que esta actividad no est completa ni directamente relacionada con el contenido de compuestos
fenlicos.
Del
el anlisis estadstico se determin
determin que existe correlacin media entre la concentracin de
fenoles totales y la capacidad de reducir la concentracin del radical libre DPPH, esto significa
que el anlisis solo puede explicar el 50% de correlacin entre las variables. La interaccin con
otrass molculas y las condiciones del medio tambin influyen en la capacidad capturar radicales
libres. El valor del coeficiente de correlacin de Pearson negativo indica que mientras mayor
sea la concentracin de fenoles totales menor ser la concentracin final
final del radical libre DPPH.
Figura 3. 6 Halos de inhibicin formados por el extracto alcohlico en un cultivo de S. aureus. [3]
4. DISCUSIN
La caracterizacin determin la presencia de compuestos fenlicos en los extractos realizados a
partir de brcteas de alcachofa, confirmando que estos metabolitos no estn presentes solamente
en las hojas. La cromatografa en capa fina y HPLC confirm la presencia del cido clorognico
y cido cafeico en la composicin de los extractos alcohlico e hidroalcohlico de brcteas de
alcachofa. Todo esto concuerda con los resultados de los estudios de [7] y [8].
Los extractos alcohlico e hidroalcohlico presentaron actividad antioxidante al capturar
radicales libres del DPPH en medio lquido, confirmando la actividad antioxidante estudiada por
[7] y [8].
La evaluacin de actividad antibacteriana confirma que los compuestos fenlicos presentes en
los extractos alcohlico e hidroalcohlico tienen efecto sobre Salmonella spp. y Staphylococcus
aureus, bacterias pertenecientes al grupo de microorganismos afectados por estos compuestos
segn la descripcin de los autores de [1].
5. CONCLUSIONES
Las brcteas de alcachofa contienen compuestos fenlicos como fenilpropanoides, taninos
catquicos, flavonoides y cumarinas adems saponinas, carotenoides, azcares reductores y
esteroles.
Las caracterizaciones cualitativa (cloruro frrico y cromatografa en capa fina) y cuantitativa
(Folin-Ciocalteu y HPLC) demostraron que los extractos alcohlico e hidroalcohlico y el
hidrolizado sin calor contienen compuestos fenlicos en su composicin. El mayor contenido de
fenoles totales (mgEQT/100g brcteas frescas) lo contiene el extracto hidroalcohlico
0.160(0.004), seguido del alcohlico 0.153(0.004), del hidrolizado sin calor 0.142(0.004) y,
el hidrolizado con calor 0.001(0.001). El extracto hidroalcohlico contiene mayor
concentracin de fenoles totales porque al ser acuoso posee mayor capacidad de extraccin de
compuestos polares como son los compuestos fenlicos.
La cromatografa en capa fina de los extractos, hidroalcohlico y alcohlico revel que estos
contienen cido clorognico y, en el caso del hidrolizado sin calor, cido cafeico. La
cromatografa HPLC determin que los extractos alcohlico e hidroalcohlico contienen cido
clorognico en 82.8560 y 40.0613 mg/L respectivamente, mas no cido cafeico o quercetina. El
hidrolizado sin calor no fue analizado mediante HPLC porque no present actividad
antioxidante.
Los extractos alcohlico e hidroalcohlico presentaron actividad captora de radicales libres
frente al DPPH, reducindolo 91.46% y 91.28% respectivamente. La correlacin media entre la
concentracin de fenoles totales y la capacidad de reducir la concentracin del radical libre
indica que mientras mayor sea la concentracin de fenoles, menor ser la concentracin final del
radical libre en el medio. Esta actividad tambin depende de la interaccin de los compuestos
fenlicos con otras molculas y de las condiciones del medio.
El tratamiento de las brcteas de alcachofa con cido clorhdrico no es adecuado para
elaborar extractos de compuestos fenlicos con actividad antioxidante porque es un cido muy
fuerte que junto con el calor destruye a los compuestos fenlicos completamente y no solo el
enlace con los azcares que forman las agliconas flavonoides. Por esta razn el hidrolizado sin
calor pudo extraer solamente cido cafeico.