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Tubos de ensayo
Tapas
Campanitas de Durghans
Gradillas
Pipetas de10 ml esterilizadas
Autoclave
Frascos estriles
Cinta de esterilizacin
Mechero de Bunsen
Ansa para sembrado
REACTIVOS
MEDIO PARA CULTIVO MAC CONKEY
a) Solucin de caldo Mac Conkey Doble: Se pesan 70 g de caldo y se lleva a un
litro con agua destilada.
b) Solucin de caldo Mac Conkey Simple : Se pesan 35 g de medio y se lleva a 1
litro de agua destilada
MEDIO PARA CULTIVO CITRATO DE KOSER DESHIDRATADO
Se pesan 2,850 g y se diluye en 500 ml de agua destilada
SOLUCION DE TIOSULFATO DE SODIO AL 3 % :
Se pesan 3 g de Tiosulfato de Sodio en 100 ml de agua destilada
Envases:
Se utilizaran frascos de vidrio neutro con tapn hermtico y
capacidad de 200 a 250 ml; esterilizados en autoclave a 120 C y 1 atm de
presin, durante 15 minutos.
Se deben colocar previamente dentro de cada envase 3 ml de
solucin de Tiosulfato de Sodio al 3 % para inhibir la actividad del cloro en
caso que estuviera presente en la muestra a extraer.
El frasco debe conservarse correctamente y no abrirse hasta el
momento de la toma de muestra.
TCNICA
Sembrado:
Se realizara en un ambiente totalmente asptico con en
mechero de Bunsen encendido permanentemente.
Para cada muestra se utiliza una serie de cinco tubos de los
preparados con Caldo de Cultivo de concentracin Doble
De cada muestra extrada se toma con la misma pipeta
esterilizada cinco porciones del agua a analizar de 10 ml cada una, que se
colocaran respectivamente en un tubo de la serie.
Es importante rotular correctamente el primer tubo de cada
serie con el lugar al que pertenece la muestra y la fecha en la que fue sembrada.
Se llevan finalmente a incubacin en estufa de cultivo a 37 C
durante 48 hs.
Luego de ese lapso de tiempo se observan los resultados y se
determinan si hay algn tubo positivo
Repique
A este procedimiento se someten todos los tubos que segn la
interpretacin de resultados se consideren positivos.
De esta forma se toma, por cada tubo positivo, un tubo de los
preparados con Mac Conkey simple y uno de Koser. Tomando el ansa y
colocndola sobre la llama del mechero hasta que llegue a rojo se siembran en
ambas serie de tubos cada positivo.
Inmediatamente los tubos de Mac Conkey Simple sembrados
se incuban en bao trmico a 42 C durante 48 hs. y, los sembrados con Koser
se colocan en estufa de cultivo a 37 C por el mismo lapso de tiempo.
Finalmente, pasado este tiempo, se observa los tubos y se
leern los datos en la tabla de equivalencias correspondiente para poder obtener
as los resultados.
BACTERIOLOGA DE EFLUENTES
TCNICA DEL N.M.P POR DILUCIN
MATERIALES
Se utilizan los mismos materiales que para la tcnica en agua de consumo ,
la nica diferencia radica en que las pipetas a utilizar deben ser de 1 ml .
REACTIVOS
SOLUCION DE PEPTONA DE CARNE AL 2 % : se prepara pesando 2 g de
peptona en 100 ml de agua destilada . Dispensar en tubos de ensayo 9,3 ml de esta
solucin , tapar y esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 120 C y 1 atm de
presin . Se utiliza un tubo para preparar cada dilucin.
MEDIO DE CULTIVO MAC CONKEY SIMPLE : Ver tcnica anterior. Se
utiliza una serie de tres tubos por dilucin en la siembra ; y los necesarios para el
repique .
MEDIO DE CULTIVO KOSER : ver tcnica anterior. Se utilizan los necesarios
para el repique.
TCNICA :
Siembra :
El mecanismo fundamental es la realizacin de una serie de diluciones para
cada muestra.
De esta forma , en primer lugar se homogeniza correctamente la muestra a
sembrar . Se toma una pipeta de 1 ml y se siembra con ella una serie de tres tubos de
caldo Mac Conkey simple , colocando 1 ml en cada uno .Esta serie es llamada serie O
, y es la correspondiente a la muestra pura , sin diluir . Utilizando la misma pipeta se
coloca 1 ml de muestra en el primer tubo de peptona , se homogeniza en el interior y;
cambiando la pipeta se procede a sembrar , tomando sucesivamente 1 ml de esta
dilucin la segunda serie de tres tubos de Mac Conkey simple . Esta es la serie
llamada A correspondiente a una dilucin 1/10 . Utilizando la misma pipeta , se
toma , 1 ml de la dilucin A hecha en peptona y se colocan en un nuevo tubo de
peptona , se homogeniza , y ; cambiando la pipeta se siembra la siguiente serie de tres
tubos Mac Conkey simple , a la que se rotula como serie B y corresponde a una
dilucin 1/100 .
Sucesivamente se repite el mecanismo las veces que sean necesarias segn
tantas diluciones requiera la muestra de a cuerdo a la carga bacteriana estimada que
posea. Se rotulan sucesivamente C , D , E , F , etc a cada nueva dilucin.
Repique :
Esta etapa de la tcnica es similar a la explicada anteriormente para
bacteriologa de agua de consumo.