Universidad Bernardo OHiggins

Facultad de salud, deporte y recreacin

Escuela de nutricin y diettica

Laboratorio de Biologa : Prctico N3

Extraccin de ADN Vegetal

Asignatura: Laboratorio de biologa

Practica de laboratorio: N3 Extraccin del ADN vegetal
Nombre de los autores: Francisca Serrano Scarlette Gajardo
Nicole Snchez Daniela Medina Heder Moreno
Nombre del profesor: Juan Ulloa
Fecha: 27/04/2016

Introduccin
En el presente informe desarrollaremos la extraccin del ADN de una clula
vegetal (pltano) mediante una serie de pasos: Lisis de la membrana celular,
Extraccin y Precipitacin.
Lisis de la membrana celular: En esta etapa se ocupa un reactivo llamado
Tampn de lisis el cual contiene detergente, la principal funcin de esta
etapa es romper las membranas tanto celular como nuclear. Ya que ambas
membranas tienen la misma naturaleza (fosfolipdica) unidas por interacciones
no covalentes.
Extraccin: En este paso se logran separar los complejos formados por los
cidos nucleicos, de los polisacridos, las protenas y los dems resultados de
la lisis anteriormente utilizada. Lo principal de esta etapa es eliminar los
polisacridos que pueden llegar a reaccionar numerosas veces por medio de
reacciones enzimticas.
Precipitacin: En esta ltima etapa se separan los cidos nucleicos del
detergente, para lo cual la solucin acuosa se le incorpora una solucin de
precipitacin compuesta de NaCL en una concentracin elevada (0.5 M). Esta
solucin es necesaria para que se forme un precipitado de cidos nucleicos, en
estas condiciones el detergente es ms soluble en alcohol donde el ADN
precipita para lograr visualizarlo finalmente.
Las cuales las demostramos a continuacin.

Objetivos

Objetivo
General:
- Aprender las etapas de la extraccin del ADN y llevarlos a la prctica .

Objetivo
Especfico:
Conocer
y
analizar
el
ADN
del
tejido
vegetal.
- Aprender a utilizar los materiales de forma adecuada para que el
procedimiento
se
lleve
a
cabo
de
forma
correcta.
- Conocer la abundancia en la que se encuentra el ADN en toda la
clula.

Actividad N1: Extraccin de ADN vegetal

Procedimiento Experimental
1. Se moli 1/3 de pltano en un mortero 20ml de agua destilada hasta que
qued una pasta homognea.
2. En un vaso precipitado de 100ml se agreg 50ml de agua destilada y
10ml de detergente, agitando cuidadosamente con una varilla por dos
minutos sin formar espuma.
3. Se agreg extracto de tejido al vaso de precipitado con la solucin de
lisis y se revolvi con mucho cuidado por tres minutos, sin formar
espuma.
4. Se filtr mezcla en embudo con papel filtro.
5. Se tom 1,5ml de solucin filtrada en un tubo de ensayo y se agreg
600ml de NaCL 6M.
6. Se mezcl por inversin luego se agreg 4 ml de etanol frio y se mezcl
por inversin.
7. Se observ el ovillo de ADN.

Materiales

1/3 de pltano
Detergente anti graso
Mortero
Agua destilada
NaCl 5M
Etanol fro
Embudo
Papel filtro
Varilla de agitacin
Vaso precipitado 50ml
Tubo de ensayo de vidrio
Micro pipeta
Puntas de micro pipeta

Resultado

Primeramente, se agreg detergente al agua destilada y

se pudo observar, que a medida que se iba revolviendo
suavemente con la varilla, ambas sustancias comenzaron
a homogenizarse.

Luego, la sustancia homogenizada del vaso precipitado

se coloc en el mortero mezclndolo con el pltano ya
molido.
Se revolvi cuidadosamente sin dejar que apareciera
espuma,
originndose una masa parcialmente lquida de color mostaza.

Seguido de esto, se le puso al embudo el papel filtro y se

deposit el contenido del mortero a este, llevando a cabo
la filtracin de una forma exitosa.

Con la micro pipeta, se extrajo cloruro de sodio

depositndolo
posteriormente en la probeta que contena la sustancia
filtrada,
volvindose una masa completamente lquida de un color
mostaza oscuro.

Lo dejamos reposar durante algunos minutos, despus

le agregamos etanol y se agit por inversin, tomando
la sustancia un color amarillento opaco en el inferior
y blanco en la parte superior.

Lo dejamos reposar nuevamente unos minutos, para poder

distinguir con mayor facilidad el ovillo de ADN.
Este tom un aspecto de una nube de algodn mojado,
pequeo y pegajoso de color blanco.

1. Qu mtodo de lisis celular fue empleado?

Se utiliz el Mtodo de tampn de Lisis, el cual consiste en agregar
detergente a la mezcla homogenizada. El detergente contenido en el
tampn provoca la lisis de la membrana, dado que la composicin de los
lpidos y los detergentes son similar, el tampn de lisis captura los
lpidos que integran la membrana celular y nuclear.
2. En la solucin de lisis, que efecto tiene la ARNasa?
Provoca una ruptura del ARN para formar componentes ms pequeos.
3. Qu efecto tiene las protenas K?
Protena que rompe otras protenas (histonas), y as deja libre el ADN.
4. Describa tres aplicaciones que puede tener la preparacin de
ADN de una muestra o clulas o tejidos
El ADN se utiliza para curar enfermedades mediante el remplazo de un
margen por uno bueno.
Ver cmo funcionan los seres vivos, como crecen porque se enferman
etc.
Tambin se puede utilizar para hacer lo llamados de perfiles de ADN en
los que se utilizan los rasgos tpicos y nicos del ADN de una persona
(tcnica utilizada en los test de paternidad).

Discusin
El primer procedimiento que se llev cabo fue el de moler el pltano esto se
hace para que haya una ruptura total del tejido, es decir que se separen las
clulas unas de otras. Es la primera destruccin fsica de la muestra para aislar
el ADN. Al poner en contacto el detergente con la sustancia esta cumple la
funcin de capturar los lpidos y las protenas que forman parte de la
membrana, en este proceso, la membrana plasmtica y la membrana nuclear
han sido destruidas adems del hecho que el detergente permite que las
protenas que acompaan al ADN, que son de gran tamao sean cadenas ms
pequeas y se puedan separar. Sin dejar de lado el agua destilada quien ayuda
de gran manera a la visualizacin del ADN
Una vez filtrada la sustancia se le deposita el NaCL el cual impide que las
cargas negativas de los grupos fosfatos (en el ADN), interaccionen con las
molculas de agua. Por ello el NaCL permite que el ADN se vuelva insoluble y
que las cadenas de ADN no sean cortadas. Otras de las funcionalidades del
NaCL es que ayuda a que no se produzcan uniones de las protenas (histonas)
con el ADN.
Al dejar reposar la sustancia durante algunos minutos le vertimos el etanol, al
ser menos denso que el agua se situ en la capa superior, al encontrarse con el
ADN est se desenrollo, ya que no es soluble en este lquido. Por otro lado, la
parte inferior contiene protenas, lpidos y otros componentes de la clula. De
este modo el etanol aisl el ADN.
Dejamos reposar nuevamente y el ADN se empez a compactar de manera
muy ajustada formando grumos. Se pudo ver que, ha sufrido cambios en su
estructura, se ha desenrollado y en consecuencia adopta esta forma. Adems,
que se puede ser observado y, por ende, extrado al estar en contacto con el
etanol.

Conclusin
Cabe destacar que este practico se llev a cabo de una forma limpia y correcta,
se siguieron los procedimientos al pie de la letra dando paso a interesantes
resultados, como que el producto final no es ADN puro, ya que se encuentran
diminutos fragmentos de ARN e incluso algunas protenas, o que todo el
proceso realizado provoca el desenrolla miento del ADN que tiene la apariencia
de material fibroso.
Tambin es necesario destacar que en la extraccin de ADN se necesita un
proceso secuencial para que as esta molcula se asle de los otros
componentes de la clula. Los reactivos que se utilizaron tambin jugaron un
rol muy importante ya que cada uno tiene ciertas funciones que en conjunto
hacen posible la extraccin de ADN.
En conclusin, se necesitan una serie de procedimientos para que el prctico
se lleve a cabo de una forma exitosa. Esta actividad hizo que conociramos en
profundidad esta molcula de ADN que es vital para los seres vivos ya que
cumple distintas funciones tales como el curar enfermedades, ver cmo
funcionan los seres vivos o como crecen y por qu se enferman entre otras
caractersticas. Conocimos las estructuras que lo componen, la funcionalidad
de cada una, llegando a tener un conocimiento mucho ms completo sobre
esta molcula tan vital.

Referencias
Karp, Gerald. Biologa celular y molecular, y los conceptos y experimentos.
Sptima Edicin. Mxico. Mc Graw Hill. 2013.