CAPITULO IV

RESPIRACIN AEROBIA

4.1. DEFINICIN Y CARACTERSTICAS DE LA RESPIRACIN AEROBIA

La respiracin aerbica implica reacciones que suministran energa y que dependen

del oxigeno. Si el substrato es un azcar simple y se le extrae el mximo de energa,
obtenemos el proceso representado en la siguiente reaccin:
C6HI1206+ 6 O2 6CO2 + 6H2O
Adems, probablemente se formen cerca de 38 molculas de ATP. Todos los tomos
de hidrgeno son removidos y reaccionando con el oxigeno forman agua, que es otro
producto microbiano. Los tomos de carbono son separados uno del otro y adheridos
al oxigeno con el fin de producir dixido de carbono que es otro producto
microbiano.(Figura N 4.1).
Este es el ejemplo clsico de la respiracin aerbica, dado que se verifica en animales
y en una variedad de microorganismos y plantas. En vista de que el oxigeno
desempea un papel prominente debido a que reacciona con los tomos de hidrgeno
y de carbono se reconoce a esta reaccin como oxidacin.
Dentro de la clula, el proceso se lleva a cabo a travs de pequeas secuencias, cada
una catalizada por una enzima y con la produccin de ATP (adenosinatrifosfato), en
ciertas etapas. De esta manera, la energa qumica disponible se convierte en luz y
calor por medio de una combustin que se utiliza en la formacin de ATP en la
oxidacin celular. Las clulas no son completamente eficientes en el uso de la energa
y producen algo de calor ms el ATP correspondiente.
Las bacterias son muy verstiles en cuanto a la gran variedad de compuestos
orgnicos que utilizan en la respiracin aerbica. A pesar de que el trmino respiracin
siempre se aplic a la respiracin animal y al intercambio de oxigeno y dixido de
carbono, ahora tiene un significado ms amplio. La respiracin aerbica incluye todas
las reacciones que proveen energa a la clula, siempre y cuando el oxigeno sirva
como aceptor del hidrgeno, como en el ejemplo previo. Se dice que el oxigeno es el

125

aceptor terminal del hidrgeno, o bien, de los electrones que acompaan a los tomos
de hidrgeno.
Figura N 4.1. Procesos del Metabolismo Celular

Fuente: (Atlas R.M. y R. Bartha. 2005).

La definicin ms precisa de respiracin aerbica es: la serie de reacciones que

suministran energa, en las cuales el oxigeno es el aceptor final de electrones. La
respiracin aerbica realizada por las clulas microbianas o por preparaciones de
tejidos puede medirse al registrar el grado de consumo de oxigeno. (Figura N 4.2)
Figura N 4.2. Respiracin Aerobia

Fuente: (Dreyfus Corts Georges, 1995).

126

4.2. ASIMILACIN DEL OXIGENO

El concepto de respiracin se deriva del clsico proceso respiratorio de
Lavoisier, segn el cual los organismos vivos consumen oxgeno de un modo
anlogo a la combustin de la materia orgnica. De hecho, muchos
microorganismos llevan a cabo dicho proceso en el cual el oxgeno molecular
se convierte en agua en tanto que algn sustrato orgnico desaparece el medio
y todosu carbono se recupera como CO2. El desarrollo de muchos
microorganismos en cultivo puro en un medio con glucosa se realiza de
acuerdo con la estequiometra:

Todo el hidrgeno de la glucosa ha pasado al oxgeno para formar agua. Sin

embargo, las bacterias del cido actico pueden reducir el O2 a H2O sin formar
CO2. En muchos hongos microscpicos se lleva a cabo una degradacin parcial
de la glucosa anloga a la oxidacin del etanol, con la acumulacin de
productos orgnicos caractersticos que estn parcialmente oxidados y son
diferentes del acetato. Figura N 4.3.
Figura N 4.3. Respiracin Aerobia. Metabolismo energtico ms eficiente.
Eucariotas, mayora de bacterias y 50 % de archaeas

Fuente: (Koolman, J. y K, H. Rohm. 2004).

127

Algunos ejemplos ilustrativos pueden ser los siguientes:

Por lo tanto es consistente considerar que la reduccin del oxgeno en la

respiracin puede llevar tanto la mineralizacin como a la degradacin parcial
de los sustratos orgnicos.

El oxgeno tambin puede reducirse biolgicamente con reductores inorgnicos

como H2, compuestos reducidos de nitrgeno o con compuestos reducidos de
azufre o hierro. Esto tiene lugar en el desarrollo de bacterias que pueden crecer
en medios minerales utilizando CO2como nica fuente de carbono.
De hecho, el mismo proceso respiratorio puede considerarse independiente O2,
porque existen microorganismos que pueden utilizar en su lugar NO3-, SO42-,
CO2. . De ah que se distinga una respiracin aerobia de otra anaerobia.

128

En todo caso, la respiracin est ligada a un proceso generador de energa

para el crecimiento. No obstante, la reduccin biolgica del O2 no siempre va
unida a la produccin de ATP.
La fosforilacin que se lleva a cabo con la reduccin de oxigeno y el sistema de
transposicin de protones y la reaccin ATPsica es una caracterstica obligada
de algunas bacterias estrictamente aerobias como Azotobacter, Caulobacter y
muchas Pseudomonas. Sin embargo, ya hemos visto que este mismo sistema
puede funcionar anaerobiamente en la reduccin del CO2 a cido actico o a
metano, y tambin tiene lugar en la reduccin de NO-3 y de SO42-.
4.3. PRINCIPALES ENZIMAS QUE PARTICIPAN
El mecanismo de la respiracin aerobia consiste de una va de reacciones
enzimticas de las cuales los principales productos de la respiracin anaerobia
son oxidados para proporcionar energa, agua y bixido de carbono. Aunque el
oxgeno es un reactivo solamente en el paso final del proceso aerobio, es una
reaccin indispensable y el mecanismo podra cesar si el oxgeno fuera
retenido.Cuadro N 4.1 y Figura N 4.4.
Cuadro N 4.1. Enzimas participantes de las reacciones de la Respiracin
Celular

129

Fuente : Murray, R. K. et. al. 2005.

Figura N 4.4. Esquema simplificado del Sistema de Ciclo de Krebs

Fuente: (Brook, G. F.; Janet Butel y Sthepan, A. Morse, 2005)

130

4.4. CICLO DE LOS CIDOS TRICARBOXILICOS (CAT)

4.4.1.Caractersticas y Rol Bioqumico del CAT
El ciclo de Krebs tambin conocido como ciclo del cido ctrico es la va comn
final de oxidacin del cido pirvico, cidos grasos y las cadenas de carbono de
los aminocidos. Figura N 4.5.
El CAT es la va metablica ms importante para la generacin de ATP en las
bacterias aerobias. La oxidacin completa de una molcula de acetato a CO2
genera tres molculas de NADH + H+, una molcula de ATP y un par de e-.
Estos ltimos entran en las cadenas respiratorias directamente reduciendo el
FAD. Los nucletidos de la piridina reducidos se re oxidan tambin a travs de
las cadenas respiratorias.
En las bacterias anaerobias se encuentra la mayor parte de los enzimas del
CAT, pero stos no tienen la capacidad de transformar el cetoglutarato en
acido succnico. El ciclo queda interrumpido en este punto y no es funcional
como sistema terminal de oxidacin.
Las bacterias auttrofas obligadas tampoco tienen un CAT funcional. Carecen
de cetoglutarato deshidrogenasa y tienen niveles muy bajos de las
deshidrogenasas succnica y mlico.
El CAT tampoco es funcional en los metilotrofos obligados que tienen sistemas
membranosos transversales al eje mayor como Methylomonas, Methylobacter y
Methylococcus.
La primera reaccin del ciclo ocurre cuando la coenzima A transfiere su grupo
acetilo (de 2 carbonos) al compuesto de 4 carbonos (cido oxalactico) para
producir un compuesto de 6 carbonos (cido ctrico).
El cido ctrico inicia una serie de pasos durante los cuales la molcula original
se reordena y contina oxidndose, en consecuencia se reducen otras
molculas: de NAD+ a NADH y de FAD+ a FADH2. Adems ocurren dos
carboxilaciones y como resultado de esta serie de reacciones vuelve a
obtenerse una molcula inicial de 4 carbonos el cido oxalactico.

131

El proceso completo puede describirse como un ciclo de oxalactico a

oxalactico, donde dos tomos de carbono se adicionan como acetilo y dos
tomos de carbono (pero no los mismos) se pierden como CO2.
Figura N 4.5. Etapas Generadoras de Energa del Ciclo de Krebs

Fuente: (Mathews, C. K, K. E. Van Hold y K. G. Ahern, 2002)

Ahora que hemos descrito las caractersticas del sistema de transporte de

electrones, podemos considerar su funcin en la oxidacin del cido pirvico, el
intermediario clave en la oxidacin de la glucosa.
El cido pirvico conserva la mayor parte de la energa presente en la glucosa y
la mayora de los organismos aerobios son-capaces de oxidar completamente
ese compuesto a CO2 a travs de una serie de pasos denominados ciclo del
cido tricarboxlico.
El NADH2 formado en el ciclo del cido tricarboxlico es oxidado de nuevo por
medio de un sistema de transporte de electrones, con produccin concomitante
de ATP por medio de la fosforilacin oxidativa.

132

El cido pirvico es primero descarboxilado, determinando la produccin de una

molcula de NADH2 y de un radical acetilo acoplado con la coenzima A (CoA).
El acetilcoenzima A (abreviado. acetil-CoA) constituye una forma activada del
acetato, siendo el enlace del acetil-CoA rico en energa.

Adems de resultar un intermediario fundamental del ciclo del cido

tricarboxlico, el acetil-CoA tambin desempea muchas otras funciones
importantes en la biosntesis.

El grupo acetilo del acetil-CoA se combina con el compuesto tetracarbonado

cido oxalactico, conduciendo a la formacin de cido ctrico, un cido
orgnico de seis carbonos, utilizndose la energa del enlace rico en energa
del acetil-CoA para llevar a cabo esta sntesis.
Despus siguen reacciones de deshidratacin, descarboxilacin y oxidacin, y
son liberadas dos molculas de C02.
Por ltimo, es regenerado el cido oxalactico, y puede servir de nuevo como
un aceptor de actilo, completndose as el ciclo.
En la Figura N 4.6. se representa una visin de conjunto de las reacciones del
ciclo.

133

Figura N 4.6. Esquema detallado del Ciclo de Krebs

Fuente: (Nelson, D.L y M.M. Cox y C.M.,2005)

4.4.2. Sistemas Enzimticos del CAT

En el CAT existen siete sistemas enzimticos. Todos los sistemas enzimticos son
reversibles excepto la oxidacin de cetoglutarato, la cual requiere TPP, cido

134

lipoico, CoA, FAD y NAD+. Una excepcin la constituye Chlorobium thiosulfatophilum,

donde se ha encontrado una reaccin de carboxilacin

de

succinil CoA

dependiente de la ferredoxina, unida a una 2 oxoglutarato sintasa.

El oxalacetato es el compuesto clave del CAT porque es el aceptor de acetil-CoA. Esta

reaccin est catalizada por la citrato sintasa.

Este sistema es inhibido por el -cetoglutarato, por NADH+H+, ATP y el succinil-CoA

La segunda etapa est constituida por unas reacciones de hidratacin catalizadas por
la enzima aconitatohidratasa.

Se forma una mezcla en equilibrio de cido ctrico, cis-aconitico isoctrico. Se conocen

varias aconitasas. Se requiere Fe2+.
El tercer sistema es el de la isocitrato deshidrogenada (ICDHasa).

135

No se ha demostrado la existencia de una oxalosuccnico descarboxilasa por lo que el

mismo enzima debe catalizar las dos reacciones.
La cuarta reaccin est constituida por el sistema de la

-cetoglutarato

deshidrogenasa:

El sistema de la cetoglutarato deshidrogenasas comprende un complejo de

enzimas que llevan a cabo una descarboxilacin oxidativa del cetoglutarato
semejante a la del piruvato.
En esta reaccin se produce la segunda mlecula de CO2. Participan el NAD+, Mg2+, el
cido lipoico y el TPP en a y el ADP y Pi en b. Se origina ATP. El FAD interviene para
la regeneracin del lipoico:

136

El sistema de la cetoglutarato deshidrogenasa juega un importante papel regulador

en las bacterias anaerobios facultativos. Es extraordinariamente sensible a la
deficiencia de oxgeno y est sujeta a represin por la glucosa. En condiciones
anaerobias, el CAT deja de existir como va metablica cclica y la formacin de
cetoglutarato tiene un sentido puramente biosintticos; el succinato para las
necesidades biosintticas se forma a partir del oxalacetato por lo que se denomina un
brazo reductor del CAT.

La quinta etapa es la deshidrogenacin del succinato, catalizada por la succinato

deshidrogenasa.
(5)

La succinato deshidrogenasa toma los e- y queda en estado reducido. Su reoxidacin

requiere FAD. Tambin se requiere Fe2+. Es el nico enzima del CAT que se
encuentran en la fraccin particulada. La succinato deshidrogenasa es inhibida por el
oxalacetato. Cuadro N 4.2.

La sexta reaccin final del CAT es la deshidrogenacin del malato por la fumarato
hidratasa:
(6)

La reaccin final del CAT es la deshidrogenacin del malato a oxalacetato, catalizada

por la malato deshidrogenas que requiere NAD+:

137

(7)

En E. coli, la Malato deshidrogenasa dependiente de NAD+ es soluble, pero en

Azotobacter agilis y Micrococcus luteus hay, adems, un sistema particulado. La
primera puede estar ausente en Serratia marcescens, Pseudomonas fluorescens y P.
ovalis, que tienes el sistema particulado ligado directamente al O2. Este sistema
tambin puede hallarse en Lactobacillus.
En E. coli se encuentra una malato deshidrogenasa dependiente de NAD+
constitutiva y, adems, otra dependiente de NADP+ inducible.
Esta ltima cataliza la reaccin:

Malato deshidrogenasa (descarboxilante (NADP+))

Este enzima es inhibido por el oxalacetato y acetil CoA. Tambin es inhibido por el
AMP cclico. Al parecer tiene una funcin biosinttica en relacin con la formacin de
cidos grasos. En Micrococcus sp. es la nica deshidrogenasa del malato presente y
juega un importante papel en la carboxilacin del cido pirvico a malato.
En Chromatium no hay ninguno de los dos sistemas antes sealados de
deshidrogenacin del mlico. Sin embrago, el malato se convierte en oxalacetato por
una descarboxilacion a piruvato seguida de una recarboxilacin del piruvato a
oxalacetato.

138

Cuadro N 4.2. Enzimas, Coenzimas, Tipo de reaccin de cada molcula

participante del Ciclo de Krebs.
Molcula

Enzima

Tipo de reaccin

Reactivos/ Productos/
Coenzimas Coenzima

I. Citrato

1. Aconitasa

Deshidratacin

II. cis-Aconitato

2. Aconitasa

Hidratacin

H2O

Oxidacin

NAD+

NADH + H+

III. Isocitrato

IV.Oxalosuccinato

V. -cetoglutarato

VI. Succinil-CoA

VII. Succinato
VIII. Fumarato
IX. L-Malato
X. Oxaloacetato

3. Isocitrato
deshidrogenasa
4. Isocitrato
deshidrogenasa

H2O

Descarboxilacin

5. -cetoglutarato

Descarboxilacin

NAD+ +

NADH + H+

deshidrogenasa

oxidativa

CoA-SH

+ CO2

GDP

GTP +

+ Pi

CoA-SH

FAD

FADH2

6. SuccinilCoAsintetasa
7. Succinato
deshidrogenasa

Hidrlisis

Oxidacin

8. FumaratoHidratasa Adicin (H2O)

9. Malato
deshidrogenasa
10. Citrato sintasa

Oxidacin

H2O
NAD+

NADH + H+

Condensacin

Fuente: (Mathews, C.K.; K.E. Van Holde y K.B. Ahern, 2002)

4.5. BALANCE ENERGTICO DE LAS REACCIONES OXIDATIVAS

Contabilidad total de la Produccin Aerbica del ATP

Cuando una Molcula de Glucosa o Glucgeno se degrada mediante las Vas
aerbicas produce un Total de:
-

38 Molculas de ATP (Degradacin Aerbica de la Glucosa).

139

39 Molculas de ATP (Degradacin Aerbica del Glucgeno): La

Produccin GlucolItica Neta del ATP por el Glucgeno es una Molcula de
ATP Adicional en Comparacin con la Glucosa.

Observando el balance parcial del ciclo de Krebs, se comprueba que en este

proceso no se obtiene energa directamente bajo la forma de ATP (slo se
obtiene 1 GTP que es equivalente a 1 ATP). En cambio se obtienen cantidades
de coenzimas reducidas (NADH y FADH2), y es a travs de la oxidacin
posterior que se obtendr la energa para sintetizar ATP.Cada coenzima NADH
equivale a 3 ATP y cada coenzima FADH2 equivale a 2 ATP. Cuadro N 4.3
Cuadro N 4.3 - Balance Parcial de la Respiracin
PROCESO

SUSTRATO

GLUCLISIS

Glucosa

PRODUCTOS
2 cido pirvico
2 ATP
2 NADH
2 Acetil CoA

ENTRADA AL CICLO DE
KREBS

2 cido pirvico

2 CO2
2 NADH
4 CO2

CICLO DE KREBS

2 Acetil CoA

2 GTP (equivalentes a 2
ATP)
6 NADH
2 FADH2

6 CO2
2 ATP
Glucosa

2 GTP
10 NADH

2 FADH2
Fuente: (Koolman, J. y K, H. Rohm, 2004).

140

La produccin de ATP en la oxidacin aerobia de glucosa por clulas eucariotas es la

siguiente:

Va glucoltica
Fosforilacin a nivel de sustrato (ATP)
Fosforilacin oxidativa con 2 NADH

2 ATP4
6 ATP

2 piruvato a 2 acetil-CoA
Fosforilacin oxidativa con 2 NADH

6 ATP

Ciclo de los cidos tricarboxlicos

Fosforilacin a nivel de sustrato (GTP)

2 ATP

Fosforilacin oxidativa con 6 NADH

18 ATP

Fosforilacin oxidativa con 2 FADH2

4 ATP

Rendimiento aerbico total

Rendimiento total de ATP

38 ATP

36 a 38 ATP

En algunas clulas el costo energtico de transportar los electrones desde el NADH

formado en la gluclisis a travs de la membrana mitocondrial interna deprime el
rendimiento neto de estos 2 NADH a slo 4 ATP.

4.6. LA CADENA RESPIRATORIA

Es Responsable de la Fosforilacin Oxidativa: La Produccin Aerbica dentro de la

Mitocondria o mesosoma.
Va Metablica Final Comn en las Clulas Aerbicas mediante la cual los Electrones
derivados de los diferentes sustratos son transferidos hacia el Oxgeno.
Serie de Reacciones de oxidacin-Reduccin realizadas por unas enzimas altamente
organizadas. Figura N 4.7.

141

Figura N 4.7. Transferencia de Electrones por la Cadena Respiratoria

Fuente: (Frenchel, T.G.M. y T. H. Blackburn, 1998)

Luego de la Gliclisis y del ciclo de Krebs, los electrones pasan a la cadena
transportadora de electrones, un sistema de transportadores de electrones ubicado en
la membrana interna mitocondrial, que actan secuencialmente.
4.6.1. DESCRIPCION DE LA CADENA DE TRANSPORTADORES
La cadena de transportadores puede ser descrita como un gran proceso de 3 eventos,
que son:

142

1.

Transferencia de los electrones del NADH y FADH2 a otras sustancias, donde

finalmente se reoxidan a NAD+ y FAD para seguir participando en mas
reacciones redox.

2.

Los electrones transferidos participarn en la oxidacin-reduccin secuencial de

+10 centros redox en 4 complejos enzimticos, antes de reducir el O2 a H2O.

3.

Durante la transferencia de los electrones, los H+ liberados por las coenzimas,

sern expulsados de la matriz mitocondrial al espacio intermembrana, y
creando una gradiente entre ambas. Finalmente, la G de sa gradiente
electroqumica conducir la sntesis de ATP a partir de ADP y Pi a travs de la
fosforilacin oxidativa.

La cadena transportadora consiste de una serie de transportadores que actan

secuencialmente y que estn unidos a la membrana interna. Los transportadores son
protenas integrales de membrana con grupos prostticos capaces de aceptar y/o
donar 1 o 2 electrones. Figura N 4.8.
Figura N 4.8. Potencial de Oxido-reduccin de los Transportadores de
Electrones.

Fuente: (Moat, A.G.; Foster, J.W. y M.P. Spector, 2002).

143

Los transportadores realizan 3 tipos de transferencias en todo ste proceso:

1.

Transferencia directa de electrones (asociada a metales)

2.

Transferencia de tomo de hidrgeno H+ + e-

3.

Transferencia de in hidruro H- (H+ + 2e-)

Figura N 4.9. Complejos de la Cadena Respiratoria

Fuente: (Smith, C.A. y Wood, E.J., 1998)

En lasFigurasN 4.9 y N 4.10 se muestra que existen 5 tipos demolculas
transportadoras de electrones en ste proceso:
1. NAD+ y NADP+
2. Flavoprotenas
3. Ubiquinona
4. Protenas Ferro-sulfuradas
5. Citocromos

144

Figura N 4.10. Energa libre y Potencial de Oxido reduccin de las

Coenzimas que participan en la Cadena Respiratoria.

Fuente: (Smith, C.A. y Wood, E.J., 1998)

4.6.2. Cadena Transportadora de Electrones en Bacterias
En eucariotas, el NADH es el donador de electrones ms importante. En procariotas,
es decir bacterias y arqueas la situacin es algo ms complicada, debido a que hay un
gran nmero de donante de electrones y un gran nmero de aceptores.
Si generalizamos el transporte en bacterias este podra quedar de la siguiente forma:

145

Puede que los electrones pueden entrar a la cadena en tres niveles: un nivel en
donde participa una deshidrogenasa, otro en la que acta un reservorio de
quinonas, o en un nivel en el que acta un transportador mvil como es el
citocromo. Estos niveles corresponden a sucesivos potenciales redox ms
positivos o sucesivas bajadas de las diferencias en el potencial relativo en los
aceptores de electrones. En otras palabras, corresponden a cambios cada vez
menores en la energa libre de Gibbs.

Las bacterias pueden usar mltiples cadenas de transporte de electrones, e

incluso simultneamente. Las bacterias pueden usar varios donadores
diferentes de electrones. Por ejemplo, Escherichia coli, cuando crece en
condiciones aerbicas usando glucosa como fuente de energa, usa dos NADH
deshidrogenasas diferentes y dos quinol oxidasas diferentes, un total de cuatro
cadenas de transporte que funcionan simultneamente.

Las bacterias tambin generan un gradiente de protones, para ello utilizan al

menos tres bombas de protones, al igual que las mitocondrias, aunque se han
descrito casos en los que solo existen dos o incluso una. Evidentemente
siempre tiene que existir al menos una bomba de protones para poder generar
el gradiente electroqumico, que es esencial para la generacin de ATP.

En la respiracin aerobia el aceptor final de los electrones es el oxgeno que se

reduce a agua. Pero hay organismos que son capaces de respirar sin oxgeno
llevando los electrones hasta otros aceptores con el mismo objetivo final,
obtener mucho ATP.

Hay organismos capaces de respirar:

Nitrato, generando nitrgeno (bacterias denitrificantes)

Sulfato, generando sulfuro (bacterias sulforeductoras)

CO2, generando metano (bacterias metanognicas)

146

Hay algunas cadenas respiratorias bastante bien conocidas, entre las cuales se
describen los siguientes ejemplos:
A. Mycobacterium phlei

Uno de los sistemas de transporte de electrones mejor estudiados es el de

Mycobacterium phlei.
El mismo puede representarse como sigue:

La oxidacin del Malato es catalizada por dos sistemas enzimticos distintos,

uno en la fraccin soluble y otro en la particulada.

En la primera se ha identificado una malato- vitamina K1 reductasa que es

activada por FAD y que cataliza la reduccin de la vitamina K9H de una fraccin
particulada.(Figura N4.11).

La irradiacin a 360 nm inhibe la oxidacin del malato y del succinato, pero

solo la primera es reversible con adicin de vit. K1.
La oxidacin del succinato comprende un compuesto metlico que se inhibe
con cianuro. En el esquema se incluyen los enzimas flavinicos (FP) inhibidos
por la atebrina y el punto de accin de otros inhibidores.

La NOQNO es la N-oxido-2-n-nonilhidroxiquinoleina.

147

Figura N 4.11. Transporte de Electrones de Mycobacterium phlei.

x representa un componente fotolbil a 360 nm.

y un componente no hemnico con hierro.
indica inhibicin por el correspondiente compuesto o por efecto de la
radiacin

Fuente: (Pares, I.F. y A. Jurez, 1997).

B. Bacillus

El sistema de transporte de electrones en el gnero Bacillus seria:

148

Como en el caso anterior la oxidacin del succinato no incluye vit. K. La

menaquinona (K2) ocupa el lugar de la naftoquinona K9.

C. Enterobacteriaceas

No

tienen

citocromo

terminal.

En

condiciones

aerbicas

utilizan

preferentemente ubiquinonas y en anaerobias menaquinonas. Con nitrato

utilizan ubiquinona-8, cit b y nitrato reductasa.

A continuacin se representan las cadenas respiratorias con nitrato y oxigeno

como aceptores terminales de electrones respectivamente.Figura N 4.12.
Figura N 4.12. Cadenas Respiratorias con Nitrato y Oxigeno como
Aceptores Terminales de Electrones.

149

Fuente: (Pares, I.F. y A. Juarez, 1997).

D. Respiracin del Nitrato en las Bacterias Facultativas

La respiracin del nitrato desempea un papel importante en el metabolismo de

las bacterias entricas y es un punto clave para la regulacin de la variedad de
los sistemas disponibles de produccin de energa.

Las cadenas respiratorias de las bacterias entricas pueden utilizar una gran
variedad de sustratos (Figura N 4.12). Cada una de las distintas
deshidrogenadas unidas a la membrana NADH + H+, lactato, succinato,
formiato o L-glicero-3-fosfato deshidrogenadas) pueden dar electrones a un
pool

comn

de

quinona

(ubiquinona-8

en

condiciones

aerobias

menaquinona-8 en condiciones anaerobias), la quinona da a su vez electrones

a las reductasas terminales y a los complejos citocromo o-citocromo d. hay un
gran nmero de posibilidades para una simple cadena constituida por
deshidrogenada-quinona-reductasa.

Los complejos citocromo o y citocromo d tiene un mecanismo similar para la

transposicin protnica. La ubiquinol oxidasa libera un periplasma 2 H+ + 2 e- en
tanto que la insercin de la oxidasa del oxigeno molecular consume 2 H+ + 2 een el citoplasma.

150

Durante el crecimiento del aerobio, el NADH + H+ puede ser reoxidado por la

cadena respiratoria, pero en condiciones anaerbicas el NAD+ se regenera de
otro modo y tienen lugar a cambios metablicos importantes. Figura N 4.13.
Figura N 4.13. Mecanismo del glicolato por Pracoccus denitrificans. (1)
Glioxilatoreductasa dependiente de NAD. (2) Glicinoaminotransferasa. (3)
Eritro-2-hidroxiaspartato

aldolasa.

aspartatodeshidratasa.

Fuente: (Pares, I.F. y A. Juarez, 1997).

E. Azotobacter

151

(4)

Eritro-3-

hidroxi-

Contiene ubiquinona-8 y citocromo a1, a2y citocromo oxidasa. En el bypass

sobre UQ-8, tambin citocromo c4, citocromo c5 y citocromo a1. El sistema de
transporte de electrones en Azotobacter es:

Los estudios de inhibicin con KCN que afecta principalmente al cit a1, han
revelado la existencia de la rama lateral.

F. Bacterias Halofilas

En el esquema siguiente se representa el sistema de transporte de electrones

en Halobacterium.

152

4.7. FOSFORILACIN OXIDATIVA

La generacin de ATP puede lugar bien por fosforilacin a nivel del sustrato, a
travs de un nmero relativamente reducido de reacciones que ya han sido
descritas en los captulos referentes a la formacin de productos finales del
catabolismo, o bien por fosforilacin oxidativa. Este ultimo sistema realmente el
de tipo ms generalizado y es tambin el que est ligado a la cadena
respiratoria. El transporte de dos protones y de dos electrones desde el NAD
hasta el O2 va unido a la formacin de tres molculas de ATP a partir de ADP,
correspondiendo a la reduccin de O2 a H2 O. Tericamente, en la respiracin
aerobia la relacin P/O es de 3, aparte de la posible generacin concomitante
de ATP por fosforilacin a nivel sustrato.

La fosforilacin oxidativa solo ocurre cuando el transporte de electrones tiene

lugar en una estructura inalterada de membrana. La oxidacin de portadores de
electrones va acompaada de la transposicin de protones hacia el exterior con
la creacin de un gradiente de concentracin que determina la nueva entrada
de protones a travs de puntos especficos, con la protena ATPasa dando
lugar a la reaccin.
ADP + Pi +

H+ ATP + H2O

La teora quimiosintetica puede considerarse ampliamente comprobada en la

respiracin aerobia y en sistemas anaerobios ligados a citocromos o sin ellos.
La actividad ATPasica est circunscrita a puntos especficos de la membrana y,
como consecuencia de la actividad metablica, resulta efectivamente un
gradiente de pH entre fuera y dentro de la clula.

La relacin entre las concentraciones de ADP y ATP es crtica para la velocidad

de respiracin. De hecho, en el efecto Pasteur el factor limitante de la
penetracin de glucosa es la disponibilidad de ADP.

153

En bacterias, los valores de la relacin P/O encontrados en preparados libres

de clulas enteras es siempre inferior a 3 y, con frecuencia, un poco mayor que
1.
Es evidente que en las clulas enteras dichos valores puedan ser superiores.
No obstante, es posible que las bacterias tenga lugar una respiracin aerobia
con una relacin P/O inferior a la que se consigue en los microorganismos
eucariotas gracias al sistema mitocondrial.
Las grandes cantidades de NADH que resultan de la actividad del ciclo del ATC
pueden utilizarse para biosntesis reductiva, sin embargo el potencial reductivo
del NADH mitocondrial es ms frecuentemente utilizado para dar energa para
la sntesis de ATP por la va de la fosforilacin oxidativa. La oxidacin del
NADH con la fosforilacin del ADP para formar ATP son procesos que se hacen
con el apoyo del transporte de electrones de la mitocondria y por la sintasa de
ATP, que son complejos proteicos que se encuentran en la membrana
mitocondrial interna.
La cadena de transporte de electrones est compuesta por una serie de
complejos proteicos que catalizan reacciones secuenciales de oxidacin y
reduccin; algunas de estas reacciones son termodinmicamente competentes
para permitir la produccin de ATP por la va de la ATP sintasa proveyendo que
un mecanismo de acoplamiento est disponible, como por ejemplo un
intermediario comn. La translocacin de protones y el desarrollo de un
gradiente de protones transmembrana proveen el mecanismo de acoplamiento.
Figura N 4.14.
Figura N 4.14. La translocacin de protones y desarrollo del gradiente de
protones transmembrana.

154

Fuente: (Mathews, C.K.; K.E. Van Holde y K.B. Ahern, 2002).

Figura N 4.15. Estructura qumica de la coenzima NAD y FAD oxidadas y
reducidas.

155

Fuente: Murray, R. K. et. al. 2005).

4.7.1. Proceso Metablico
La fosforilacin oxidativa es una ruta metablica que utiliza energa liberada por
la oxidacin de nutrientes para producir adenosn trifosfato (ATP). Aunque las
diversas formas de vida utilizan una gran variedad de nutrientes, casi todas
realizan la fosforilacin oxidativa para producir ATP (Figura N 4.15), la
molcula que provee de energa al metabolismo. Esta ruta es tan ubicua,
debido a que es una forma altamente eficaz de liberacin de energa, en
comparacin con los procesos alternativos de fermentacin, como la gluclisis
anaerbica.

156

Durante la fosforilacin oxidativa, los electrones son transferidos desde un

donante de electrones a un aceptor de electrones, como el oxgeno, a travs de
reacciones redox. Estas reacciones liberan energa, la cual es utilizada para
producir ATP. En eucariotas, estas reacciones redox son llevadas a cabo en las
mitocondrias por una serie de complejos de protenas, mientras que en los
procariotas, estas protenas se encuentran ubicadas en la membrana interna de
la clula. Estos grupos relacionados de enzimas son llamados cadena de
transporte de electrones. En eucariotas, estn involucrados cinco complejos de
protenas, mientras que en procariotas se presentan muchas enzimas
diferentes, utilizando una variedad de donantes y aceptores de electrones.

Proceso Mediante el Cual se Forma ATP en la Forma de Electrones y luego

Transferidos hacia el Oxgeno Mediante una Serie de Transportadores de
Electrones.

Proceso Final: El Oxgeno acepta los Electrones que van pasando y se combina
con Hidrgeno para formar Agua.
La energa liberada por estos electrones desplazndose a travs de la cadena
de transporte de electrones es utilizada para transportar protones a travs de la
membrana interna mitocondrial, en un proceso llamado quimiosmosis. Esto
genera energa potencial bajo la forma de un gradiente de pH y un potencial
elctrico a travs de la membrana. El almacenamiento de energa es
aprovechado permitiendo que los protones fluyan de regreso a la membrana a
favor del gradiente, a travs de la enzimaATP sintasa. La enzima utiliza esta
energa para generar ATP desde el adenosn difosfato (ADP), en una reaccin
de fosforilacin. Esta reaccin es llevada a cabo por el flujo de protones, que
provoca la rotacin de una parte de la enzima.

Aunque la fosforilacin oxidativa es una parte vital del metabolismo, produce

especies reactivas del oxgeno tales como superxido y perxido de hidrgeno,
lo que lleva a la propagacin de radicales libres, provocando dao celular,
contribuyendo a enfermedades y, posiblemente, al envejecimiento. Las enzimas

157

que llevan a cabo esta ruta metablica son blanco de muchas drogas y
productos txicos que inhiben su actividad.
4.7.2. Estequiometria de la Fosforilacion Oxidativa
Por cada par de electrones que se originan en el NADH, se sinterizan 3
equivalentes de ATP, lo que requiere 22.4 kcal de energa. As, con 31,2 Kcal
de energa disponible, est claro que el gradiente de protones generado por el
transporte de electrones contiene la energa suficiente para la sntesis normal
de ATP. Los electrones a partir del succinato tienen aproximadamente 2/3 de la
energa de los electrones del NADH: ellos generan PMFs que son
aproximadamente 2/3 de la fuerza que se genera con los electrones del NADH
y llevan a la sntesis de solamente 2 moles de ATP por mol de succinato
oxidado.
4.7.3. Regulacin de la Fosforilacin Oxidativa
Debido a que el transporte de electrones esta acoplado a la translocacin de
protones, el flujo de electrones a travs del sistema de transporte de electrones
se regula por la magnitud de la PMF. Mientras ms alta es la fuerza, ms baja
la proporcin de transporte de electrones, y viceversa. Bajo condiciones de
reposo, con una carga alta de energa en las clulas, la demanda para sntesis
nueva de ATP se limita y, aunque la PMF esta alta, el flujo de electrones hacia
la matriz de la mitocondria a travs de la ATP sintasa es mnima. Cuando las
demandas de energa se incrementan, como durante la actividad muscular
rigurosa, el ADP en el citosol se incrementa y es intercambiado con el ATP de
la mitocondria por medio del transportador transmembrana nucletido de
adenina, la translocasa ADP/ATP.
Las concentraciones altas de ADP hacen que la PMF sea descargada a tiempo
de que los protones fluyen a travs de la ATP sintasa, regenerando as la
cantidad de ATP. As, mientras la proporcin del transporte de electrones
depende de la PMF, la magnitud de la PMF en cualquier momento refleja la
carga de energa de la clula. A su vez la carga de energa, o ms

158

precisamente la concentracin de ADP, normalmente determina la proporcin

del transporte de electrones por principios de accin de masa.
La proporcin del transporte de electrones usualmente se mide al determinar la
proporcin de consumo de oxigeno y a esto se refiere como la tasa de
respiracin celular. La tasa de respiracin se conoce como estado 4 cuando la
carga de energa es alta, la concentracin de ADP es baja, y el transporte de
electrones est limitado por el ADP. Cuando los niveles de ADP aumentan y el
fsforo inorgnico est disponible, el flujo de protones a travs de la ATP
sintasa es elevado y se observan proporciones altas en el transporte de
electrones; la tasa respiratoria resultante se conoce con el nombre de estado 3.
As, bajo condiciones fisiolgicas la actividad respiratoria mitocondrial esta en
un ciclo entre los estados 3 y 4. Figura N 4.16.
Figura N 4.16. Transporte de electrones en la membrana.

Fuente: (Dreyfus Corts G.1995).

4.7.4. Inhibidores de la Fosforilacin Oxidativa
La va del flujo de electrones a travs del ensamblaje para el transporte de los
mismos, y las propiedades nicas de la PMF, han sido determinadas por medio
de el uso de varios antimetabolitos importantes. Cuadro N 4.3.

159

Algunos de estos agentes son inhibidores del transporte de electrones en sitios

especficos en el ensamblaje de transporte de electrones, mientras otros
estimulan el transporte al descargar el gradiente de protones.Figura N 4.17.

Por ejemplo, la antimicina A es un inhibidor especfico del citocromo b. En

presencia de antimicina A, el citocromo b puede ser reducido pero no oxidado.
Como es de esperarse, en presencia de la antimicina A el citocromo c
permanece oxidado, as como tambin los citocromos posteriores a y a3.
Una clase importante de antimetabolitos son los agentes desacopladores
ejemplificados por el 2,4-dinitrofenol (DNP). Figura N 4.18.

Los agentes desacoplantes actan como cidos lipoflicos dbiles, que se

asocian con protones en el exterior de la mitocondria, que pasan a travs de la
membrana unidos a un protn, y que se disocian del protn en el interior de la
mitocondria.

Estos agentes causan tasas de respiracin mxima pero el transporte de

electrones no genera ATP, debido a que los protones translocados no regresan
a la matriz mitocondrial a travs de la ATP sintasa. Cuadro N 4.4.

Cuadro N 4.4. Inhibidores de la Fosforilacin Oxidativa

Nombre

Rotenona

Amital

Funcin
inhibidor del
transporte de e
inhibidor del

160

Sitio de Accin

Complejo I

Complejo I

transporte de e

Antimicina A

Cianuro

Monxido de
Carbono

Azida

inhibidor del
transporte de e
inhibidor del
transporte de e
inhibidor del
transporte de e
inhibidor del
transporte de e

Complejo III

Complejo IV

Complejo IV

Complejo IV

Transportador
2,4,-dinitrofenol

Agente desacoplante

transmembrana
de H+
Transportador

Pentaclorofenol

Agente desacoplante

transmembrana
de H+

Oligomicina

Inhibe la

Fraccin OSCP

sintasa de

de la sintasa

ATP

de ATP

Fuente: (Audesirk, T. y G. Audesirk. 2003)

161

Figura N 4.17. Tipos de inhibidores de la fosforilacin

Fuente: (Pares, I.F. y A. Juarez, 1997).

162

Figura N 4.18. Estructuras qumicas de los inhibidores fosforilativos.

Fuente: (Pares, I.F. y A. Juarez, 1997).

4.8. REACCIONES ANAPLEROTICAS

Son reacciones que regeneran intermediarios del ciclo de Krebs cuando stos
han sido utilizados en reacciones biosintticas, situacin en la cual no hay
disponible oxalacetato (sustrato regenerador) indispensable para el inicio del
ciclo.Figura N 4.19.
Para que el ciclo sea funcional es necesario que haya cierta concentracin de
oxalacetato, el cebador del ciclo. La degradacin de algunos aminocidos
proporciona metabolitos intermediarios del C.A.T. que pueden alimentar al ciclo.

163

Otra reaccin que puede suministrar oxalacetato es la de carboxilacin del

piruvato:
Oxalacetato + ADP + Pi + 2 H+

Piruvato + CO2 + ATP + H2O

A estas reacciones, que procuran intermediarios al C.A.T., se les denomina

anaplerticas.
Figura N 4.19. Formacin de intermediarios al C.A.T. por las reacciones
anaplerticas.

Fuente: (Murray, R. K. et. al. 2005)

164

4.8.1. Mecanismos de las Reacciones Anaplerticas

En la oxidacin del piruvato se libera una molcula de CO2 y por lo tanto solo dos
tomos de C ingresaran en el CAT. El drenaje de -cetoglutarato, succinato y
oxalacetato con fines biosintticos produce una disipacin importante de intermediarios
que puede agotar el ciclo. Hay dos sistemas para impedir que esto ocurra:
a) Las reacciones anaplerticas, que generan compuestas C4 por fijacin de CO2.
Estas reacciones tienen lugar principalmente cuando se utilizan azcares como
sustratos.
b) El relleno de compuestos C4 a partir del metabolismo de compuestos C2 por la
va del glioxilato.
En bacterias se han caracterizado cinco enzimas para las reacciones anaplerticas:
1. La llamada reaccin de Wood Werkman, en la cual el cido pirvico es
fosforilado a fosfoenol pirvico con ATP y la piruvato fosfotransferasa. La
fosfoenolpiruvato carboxiquinasa (ATP) forma oxalacetato, requirindose ADP
para formar ATP.

El acido fosfoenol pirvico es el verdadero aceptor de CO2 y el ADP o el IDP

funcionan como aceptores de fosfato.

2. Hay una reaccin muy parecida a la anterior catalizada por una fosfoenol
piruvato carboxilasa que requiere bicarbonato y fosfato inorgnico, el cual es
convertido en pirofosfato:

165

3. Un piruvatocarboxilasa (Cuadro N 4.5)dependiente de la biotina que produce

oxalacetato desde el piruvato con ATP:

Hay una enzima diferente en los mamferos que lleva a cabo esta reaccin con
acetil CoA y no es dependiente de la biotina.

4. La reaccin de los enzimas mlico (malato deshidrogenasa descarboxilante

(NADP+ / NAD+)) que catalizan la carboxilacin reductora del piruvato a malato,
utilizando bien NADPH + H+ o bien NADH + H+ :

No hay duda de que no todos estos enzimas se hallan presentes a la vez en el mismo
microorganismo.

166

Cuadro N 4.5. Caractersticas de las etapas de las reacciones anaplerticas

Desde

Reaccin

Notas

Esta reaccin es catalizada por

piruvato +

Piruvato

oxalacetato

la piruvatocarboxilasa,

CO2 + H2O + una enzima activada por Acetil-CoA,

indicando una falta de oxalacetato.
ATP
oxalacetato
+ ADP + Pi
+ 2H+

El Piruvato puede tambin ser

convertido en L-malato, otro
intermediario, mediante una va
similar.
Esta reaccin es reversible pudiendo
formar oxalacetato a partir

Aspartato

oxalacetato

de aspartato en una reaccin

detransaminacin, va aspartato
transaminasa.

glutamato +
NAD+ +

Glutamato

cetoglutarato

H2O
NH4+ + cetoglutarato

Esta reaccin est catalizada por

la glutamato deshidrogenasa.

+ NADH +
H +.
Cuando se oxidan cidos grasos de
-

cadena impar, se forma una

oxidacinde cidos succinil-CoA -

molcula de succinil-CoA por cada

grasos

cido graso. La enzima final es

la metilmalonil-CoAmutasa.

Fuente: (Frenchel, T.G.M. y T.H. Blackburn, 1998)

167

4.8.2. Enzimas de las Reacciones Anaplerticas

En las reacciones anaplerticas, de hecho, donde intervienen enzimas como la

piruvato carboxilasa , la acetil-CoA carboxilasa, la propionil-CoA carboxilasa y la
3-metilcrotonil-CoA carboxilasa. La fosfoenolpiruvato carboxiquinasa, la malato
deshidrogenasa-NADP (enzima mlica), la NADP-isocitrato deshidrogenasa, y
catalizan procesos reversibles que, al menos en teora, pueden conducir a la
fijacin de CO2.

La acetil-CoA carboxilasa se encuentra en el citosol y cataliza la carboxilacin

de acetil-CoA a malonil-CoA y est considerada como el paso limitante en la
biosntesis de cidos grados de cadena larga.
La propionil-CoA carboxilasa ha sido localizada exclusivamente en
mitocondrias. Las deficiencias de biotina causan una marcada reduccin de la
actividad de esta enzima que est implicada en el metabolismo del propionato y
los aminocidos ramificados.

La piruvato carboxilasa, se encuentra principalmente en mitocondrias y

cataliza la formacin de oxalacetato a partir de piruvato.
Posiblemente, esta enzima es la principal responsable de la fijacin del CO2,
puesto

que

la

fosfoenolpiruvato

carboxiquinasa

tiene

una

funcin

descarboxilante y la enzima mlica carece de suficiente actividad para fijar la

cantidad observada de CO2. Parece que la incorporacin de CO2 a travs de la
piruvato carboxilasa depende de la disponibilidad de piruvato.

La actividad anaplertica de la piruvato carboxilasa provee a-cetoglutarato y

glutamina que sirven como precursores para el restablecimiento de la reserva
de neurotransmisores.
La malato deshidrogenasa-NADP (enzma mlica) se han encontrado en
citosol y en mitocondrias y favorece la lipognesis durante el desarrollo.

168

La isocitrato deshidrogenasa-NADP se encuentra en citosol y mitocondria de neuronas

y favorece, posiblemente, la lipognesis. Esta enzima existe en tejidos de mamferos
como dos isoenzimas, una que se encuentra en el citosol y la otra en la mitocondria.
La participacin de la forma citoslica de la isocitrato deshidrogenasa-NADP en una
lanzadera con el a-cetoglutarato a sido demostrada, aunque su contribucin en proveer
grupos acetilo para la sntesis de cidos grasos es relativamente pequea.
Las enzimas catalizadoras de las cuatro principales reacciones anaplerticas, esto es
la piruvato carboxilasa, la enzima mlica, la isocitrato deshidrogenasa-NADP y la
fosfoenolpiruvato carboxiquinasa, podran causar la oxidacin completa de los
intermediarios del ciclo de los cidos tricarboxlicos, en el caso de que existiera una
escasa produccin de piruvato, o como mecanismo para la oxidacin de aminocidos.

La enzima fosfoenolpiruvatocarboxilasa (PEPC) est ampliamente distribuida en

clulas vegetales, bacterias fotosintticas y no fotosintticas, cianobacterias y en algas
verdes. Participa en procesos de la ruta fotosinttica en la fijacin del CO2 atmosfrico
en plantas C4 y en las plantas con metabolismo cido crasulceo (CAM); tambin es
la enzima anaplertica ms importante de todos los tejidos vegetales, que suministra
cidos dicarboxlicos al ciclo de los cidos tricarboxlicoscuando son utilizados
intermediarios para biosntesis.

En la prctica parece que la piruvato carboxilasa es responsable de la mayor parte de

la fijacin de CO2, dado que aproximadamente un 7-10% de todo el piruvato utilizado
sirve para sustituir los intermediarios del ciclo de los cidos tricarboxlicos durante el
normal funcionamiento de este ciclo.

La enzima mlica y la fosfoenolpiruvato carboxiquinasa contribuyen de forma poco

significativa,

ya

que

sus

estados

de

equilibrio

favorecen

mucho

ms

la

descarboxilacin que la carboxilacin. Adems, las reacciones de transaminacin

pueden generar intermediarios del ciclo de los cidos tricarboxlicos en condiciones
cinticas favorables y, por tanto, servir como funcin anaplertica.Figura N 4.20.

169

Figura N 4.20. Enzimas de las reacciones Anaplerticas

Fuente: (Koolman, J. y K, H. Rohm.2004).

4.8.3 Rol bioqumico de las Reacciones Anaplerticas

Por lo que podemos concluir que las reacciones anaplerticas permiten:
o

Reacciones que permiten la entrada de intermediarios de carbono al

Ciclo de Krebs.

170

Intermediarios que entren al ciclo de esta manera son sintetizados en

otras rutas metablicas.

Formacin de intermediarios del Ciclo de Krebs:

o

Oxaloacetato

Malato

Alfa-cetoglutarato

Formacin por carboxilacin y transaminacin.

Los intermediarios del ciclo son repuestos mediante las reacciones ANAPLEROTICAS
(Figura N 4.21).
Figura N 4.21. Reacciones Anaplerticas

Fuente: (Ganong, W.F.1996).

171