GRADIENTES DE CAMPO MAGNTICO EN

EXPERIMENTOS DE RMN
Teodor Parella
Servei de Resonancia Magntica Nuclear, Universitat Autnoma de Barcelona
08193 Bellaterra, Barcelona
teodor.parella@uab.es

1. Introduccin
La resonancia magntica nuclear (RMN) ha sido tradicionalmente reconocida como
una herramienta poderossima en el anlisis estructural y dinmico de molculas en solucin,
tanto en el campo de la qumica como en bio-molculas, especialmente en el mundo de las
protenas. Su gran versatilidad tambin se ve reflejada en otros mbitos de la RMN bien
diferentes como pueden ser, por ejemplo, el anlisis de muestras en estado slido, en estado ni
slido-ni lquido (HR-MAS), la combinacin con otras tcnicas analticas (por ejemplo,
HPLC-RMN-MS), y en aplicaciones biomdicas, que van desde la espectroscopia in-vivo
(MRS) a tcnicas de micro y mini-imagen tanto en el mundo animal como en anlisis clnico
(MRI).
En cada una de estas aproximaciones juega un papel fundamental las caractersticas
tcnicas propias de la configuracin de cada equipo (imanes, sondas, componentes
electrnicos...) de manera que la mayora de espectrmetros suelen estar especializados en
una o diversas de estas aplicaciones, pero no en todas. Adems de la importancia del
desarrollo tecnolgico, la facilidad y la versatilidad con que se puede manipular los spins para
obtener un tipo de informacin estructural determinado define cada experimento de RMN que
viene caracterizado con la llamada secuencia de pulsos. Existe una infinidad de secuencias de
pulsos para cada una de las posibles tcnicas mencionadas anteriormente que permiten la
medida de algn parmetro de RMN (desplazamientos qumicos, constantes de acoplamiento
escalares o dipolares, efectos NOE, tiempos de relajacin T1 y T2, coeficientes de difusin,
forma de lnea...) que suele estar directamente relacionado con alguna caracterstica molecular
(entorno electrnico, interaccin a travs de los enlaces, interaccin intra- o inter-molecular a
travs del espacio, aspectos dinmicos como rotaciones de enlaces, cambios
conformacionales, intercambio qumico, movimientos rotacionales o traslacionales, ...).

58

Teodor Parella

El conocimiento de los diferentes experimentos (y versiones) de RMN es de vital

importancia a la hora de sacar el mximo rendimiento tanto al espectrmetro cmo a la
resolucin de los problemas de uno mismo (fsico, qumico, bioqumico, mdico...) que
requieran el uso de la RMN. El principal objetivo de este captulo es dar una aproximacin
simple al anlisis de secuencias de pulsos haciendo principal hincapi en unos elementos
indispensables, los gradientes de campo magntico, y dar algunas nociones que puedan ser de
ayuda a la hora de escoger qu experimentos/estrategias nos pueden ser tiles en el trabajo
diario dentro del laboratorio de RMN.
2. Elementos de una secuencia de pulsos.
Para un mejor conocimiento de las secuencias de pulsos, vamos a empezar
describiendo sus principales elementos. Las secuencias de pulsos son una serie de eventos
(bsicamente pulsos de radiofrecuencia separados por periodos de tiempo), aplicados en el
tiempo de una manera secuencial, ordenada y predefinida, que provocan una modificacin
especfica sobre el sistema de spins y, que luego, se pueden relacionar con algn parmetro
molecular a partir del anlisis del espectro de RMN resultante. Vamos a utilizar la secuencia
estndar del experimento 2D HMQC como ejemplo (fig. 1) para analizar los elementos que la
componen:

Figura 1: Secuencia de pulsos correspondiente al experimento de correlacin heteronuclear 2D 1H-X HMQC. El

camino de transferencia de coherencia (CTC) representado en la parte inferior esquematiza las diferentes
componentes de magnetizacin que son activas en cada momento de la secuencia.

Pulsos de Radiofrecuencia:
Provocan rotaciones respecto a un eje determinado (x, y, -x, -y), normalmente de 90
o 180. Cuando la fase del pulso no se especifica en el diagrama, por defecto se
supone que se aplica desde el eje x.

Gradientes de campo magntico

59

Los pulsos son aplicados a una frecuencia especfica (son particulares para cada
ncleo, representados en este caso por los canales de 1H y X), con una duracin
especfica y potencia determinada (en funcin de la selectividad y del hardware
disponible).
Cada pulso va asociado a un ciclo de fases (ver ms adelante).

Periodos de tiempo (delays):

Espacios de tiempo entre pulsos donde la magnetizacin se ve afectada por los efectos
de relajacin, constantes de acoplamiento, desplazamientos qumicos, interacciones
dipolares, ...
En el ejemplo habra que destacar el periodo d1 que determina el tiempo de repeticin
del experimento y es funcin del T1(1H), el periodo que se optimiza a 1/(4*JXH) y el
periodo de evolucin variable t1 que permite la evolucin indirecta del
desplazamiento qumico del heteroncleo X, y que define qu parmetro aparecer en
la dimensin F1 del espectro 2D resultante.
Adquisicin:
La FID est representada en el canal del ncleo que es detectado.
En este caso, simultneamente a la deteccin de H, se aplica desacoplamiento de X
(mediante una secuencia de pulsos GARP) para eliminar el acoplamiento H-X en la
dimensin F2 del espectro 2D resultante.
El receptor tambin va asociado al ciclo de fases (ver ms adelante).
1

Ciclo de fases:
La secuencia de pulsos se suele repetir un nmero determinado de veces cambiando
las fases relativas de uno o varios pulsos (en el ejemplo representado por 1=x,-x) en
consonancia con el detector (representado por rec=0,2), de manera que la seal
deseada se va sumando y la no deseada es eliminada al final del ciclo.
Gradientes de campo magntico:
Representados en la lnea Gz con los smbolos G1, G2 y G3.
Aunque son elementos opcionales y su uso depender de si se dispone de los
accesorios correspondientes, hoy en da pueden considerarse esenciales y suelen estar
incorporados por defecto en la configuracin estndar de la sonda.
En la inmensa mayora de experimentos de RMN modernos el uso de los gradientes
ofrece diversas mejoras y su uso puede clasificarse de rutinario.
En el diseo y anlisis de las secuencias de pulsos hay diversos factores importantsimos:

La evolucin de la seal durante la secuencia viene definida por el diagrama de los

caminos de transferencia de coherencia (CTC) que suele representarse en la parte
inferior y que nos permite conocer, a simple vista, cules son las componentes activas
en cada momento de la secuencia.
El punto de partida y el punto final son factores importantes que afectan a la
velocidad de repeticin y a la sensibilidad del experimento. Es por eso que, siempre
que sea posible, las secuencias empiezan y terminan en 1H, porque es el ncleo ms
sensible y adems relaja relativamente rpido. Estos detalles son muy importantes en
experimentos heteronucleares y es lo que explica la necesidad del uso de gradientes en

60

Teodor Parella

mtodos basados en espectroscopia inversa (ver ms adelante). La sensibilidad

(relacin seal/ruido; S/N) viene determinada por:
3/2
S / N N excited det
ected Bo / kT

(1)

3. Operadores desplazamiento y orden de coherencia.

Los experimentos de RMN se pueden analizar mediante diferentes modelos. Aunque
el ms clsico es el modelo vectorial, el ms apropiado es el formalismo de los operadores
producto, basado en los operadores cartesianos Iz, Ix, Iy que representan las componentes de la
magnetizacin z, x e y, respectivamente. Como veremos posteriormente, los experimentos de
RMN que utilizan gradientes se pueden analizar de una manera muy sencilla utilizando los
llamados operadores desplazamiento:

I + = I x + iI y

(2a)

I = I x iI y

(2b)
+

donde el operador I (operador raising) corresponde a un orden de coherencia p=+1, mientras

el operador I (operador lowering) representa un orden de coherencia p=-1. La combinacin de
las ecuaciones anteriores nos da
1 +
I + I)
(
2
1
Iy = (I+ I )
2i
Ix =

(3a)
(3b)

El orden de coherencia, representado por p, viene definido por el nmero de operadores

desplazamiento I+ y I que se encuentran definidos en un operador producto determinado:
Iz representa coherencia p=0
I+ y I- representan coherencias simple-cuanta (p=+1 y p=-1, respectivamente)
I+I+ y I-I- representan coherencias doble-cuanta (p=+2 y -2 respectivamente)
I+I- representan coherencias cero-cuanta (p=0).
Importante: Slo son observables las coherencias single-cuanta.
4. Caminos de transferencia de coherencia.
La evolucin de la magnetizacin en una secuencia de pulsos puede seguirse mediante
el diagrama de CTC. En una primera aproximacin, la magnetizacin es modulada por tres
efectos: pulsos, evolucin de desplazamiento qumico () y evolucin debido al acoplamiento
escalar (J). Para la definicin, anlisis e interpretacin de los CTC hay una serie de reglas
bsicas, derivadas de las transformaciones de los operadores cartesianos a los operadores
desplazamiento, que suelen ser de gran utilidad:

Gradientes de campo magntico

61

Regla 1: El punto de partida de cualquier secuencia siempre es p=0 (Iz)

Regla 2: El punto final de cualquier secuencia siempre es p=-1 (I-=Ix-iIy; equivalente a la
deteccin en cuadratura) para el ncleo que detectamos y p=0 para los que no detectamos. El
anlisis de los factores de amplitud que acompaan al operador I al final de la secuencia
permite conocer cules son los niveles de sensibilidad y la dependencia de la seal detectada
en cada experimento.
tI

I z
I x
I x cos (I t ) + I y sin (I t ) =

1 + iI t
( I e + I eiI t )
2

(4)

Regla 3: Los rdenes de coherencia (p) slo cambian por el efecto de los pulsos. Durante los
perodos de tiempo de evolucin libre, el valor de p no se altera. La evolucin bajo los efectos
de desplazamiento qumico slo produce modulacin sen/cos:
tI

I
z I p cos ( p t ) iI p sin ( p t )
I p
I
I

(5)

y el acoplamiento escalar (J) slo genera trminos en fase/anti-fase bajo modulacin sen/cos:
Jt 2 I S

z z I cos ( Jt ) m 2iI S sin ( Jt )

I
z

(6a)

z z 2 I S cos ( Jt ) m iI sin ( Jt )
2 I S z
z

(6b)

Jt 2 I S

pero no cambia el orden de coherencia (p) existente.

Regla 4: Un pulso cualquiera slo afecta al orden de coherencia del ncleo en cuestin. Los
pulsos de 1H no afectan al orden de coherencia del ncleo X, que se suelen representar con un
CTC diferente.
Regla 5: El pulso de 90(I) aplicado sobre Iz (la mayora de secuencias empiezan de esta
manera) crea cantidades iguales de I+ y I-.
90( x )
I z
I y =
90( y )
I z
Ix =

i +
(I I )
2

1 +
(I + I )
2

(7a)
(7b)

Regla 6: Cualquier pulso de 180 nicamente cambia el signo del orden de coherencia de +p a
-p.

62

Teodor Parella

180( x )
I z
I z

(8a)

180( y )

(8b)

I
I

Regla 7: Un pulso de 90 aplicado a un operador transversal I+ o I- puede generar, en

principio, cualquier orden de coherencia.
1 +
( I + I ) iI z
2
90( y ) 1
I
(I + I m ) Iz
2
90( x )
I

(9a)
(9b)

Regla 8: Cuando aplicamos un gradiente y tenemos diferentes CTCs posibles, slo se

seleccionar aqul que cumpla la condicin de reenfoque. Esto es importante en experimentos
multidimensionales (2D, 3D...), donde durante el perodo t1 normalmente tenemos dos
caminos posibles que pueden contribuir a la seal detectada. Si aplicamos un gradiente
durante este periodo t1, slo seleccionamos uno de los dos posibles. Por lo tanto, perdemos la
mitad de la seal terica y adems el espectro resultante se tiene que representar en modo
magnitud (modulacin en fase). Cmo alternativa se utiliza la metodologa PEP: se adquieren
por separado dos espectros (eco y anti-eco) y se procesan adecuadamente para generar, como
norma general, espectros sensibles a la fase (modulacin en amplitud) y sin prdida de
sensibilidad.
5. Ciclo de fases y espectroscopia diferencia.
El mtodo tradicional de seleccin de coherencias en secuencias de RMN multi-pulsos se
basa en el uso de ciclo de fases. El resultado neto del ciclo de fases es que la seal
proveniente del CTC deseado se va sumando mientras todas las seales no deseadas son
canceladas al final del ciclo. Este sistema de seleccin presenta bsicamente dos
inconvenientes:

La necesidad de un ciclo completo que puede provocar largos tiempo de adquisicin.

Un proceso de sustraccin muchas veces imperfecto que suele provocar importantes
artefactos (por ejemplo, ruido-t1) que pueden dificultar el anlisis final del espectro.
5.1 Espectroscopia inversa
Los experimentos basados en deteccin inversa sirven como ejemplo claro del

Gradientes de campo magntico

63

funcionamiento del ciclo de fases en experimentos de RMN. En estos experimentos se

detectan ncleos de baja sensibilidad (debido a baja abundancia natural o pequea constante
magnetogrica, por ejemplo 13C o 15N) via ncleos de alta sensibilidad (tpicamente 1H). Entre
estos experimentos podemos destacar las secuencias de correlacin H-X directas HMQC (ver
fig. 1) y HSQC, HMBC (correlaciones a dos y tres enlaces), experimentos hbridos (HSQCTOCSY...), o la mayora de experimentos 3D y 4D diseados especficamente para protenas
y cidos nucleicos.
1

13

Experimentalmente, el desafo radica en seleccionar las seales de H enlazado a C (1.1%) en

presencia de la intenssima seal de H enlazado a C (99%). Como ejemplo, mostraremos el
espectro tpico que presenta los protones del grupo metilo del cido actico (CH3COOH) a
abundancia natural:
1

12

Figura 2: Espectro terico de 1H para los diferentes istopos presentes en una seal de cido actico.

1. Un intenso singlete debido a

1

12

12

CH3- COOH, que es detectado en experimentos

convencionales H- H del tipo COSY, TOCSY, NOESY o ROESY.

1

13

12

2. Un doblete (separado por el valor de JCH) debido al istopo CH3- COOH (0.55%
de intensidad cada uno), observado en experimentos de correlacin directa, como el
experimento HMQC y HSQC.
2

12

13

3. Un doblete (separado por el pequeo valor JCH) debido al istopo CH3- COOH
(0.55% de intensidad cada uno), observado en experimentos de correlacin a larga
distancia, como el experimento HMBC.
1

13

13

4. Un pequesimo doble-doblete ( JCH+ JCH) debido a CH3- COOH (1 de cada 10000

molculas aprox.), observado en experimentos muy insensibles del tipo INEPTINADEQUATE o ADEQUATE.
La secuencia HMQC (fig. 1) tiene un ciclo de fases mnimo de dos (1=x,-x; r=x,-x):

64

Teodor Parella

12

13

El primer scan, detecta H- C y H- C con la misma fase.

El segundo scan invierte H- C sin modificar H- C.
1

13

12

Para sustraer estos dos espectros lo que se hace es invertir el receptor, de manera que la seal
de H- C se suma en los dos espectros mientras el H- C se resta, anulndose. En la prctica, la
resta de estas dos seales de H- C nunca es perfecta y, por lo tanto, imperfecciones tan solo
del 1-2% son del mismo rango que la seal que se desea detectar.
1

13

12

12

Por eso, es necesario alternativas que refuercen este proceso de sustraccin como pueden ser
un ciclo de fases ms largo y ms elaborado que minimiza dichos artefactos (por ejemplo, ver
scan 3 y scan 4), el uso de una secuencia BIRD-periodo de recuperacin que minimiza la
seal de H- C inicial, el uso de periodos de spin-lock o, como veremos posteriormente, el uso
de gradientes.
1

12

5.2 Experimento 1D NOE diferencial.

Como segundo ejemplo de los artefactos derivados de la espectroscopia diferencial,
pero que no usa el llamado ciclo de fases, es el experimento NOE diferencia. Este
experimento ha sido tradicionalmente muy utilizado para la determinacin de interacciones
1
H-1H a travs del espacio (NOE) en molculas de tamao pequeo y mediano.

Gradientes de campo magntico

65

El experimento se basa en la adquisicin de dos espectros de protn por separado, uno en el

que durante un largo periodo de relajacin se irradia una resonancia de protn en concreto, y
en el segundo donde se irradia una zona vaca del espectro. El resultado de restar estos dos
espectros muestra los cambios en intensidad producidos por el efecto NOE en aquellas
seales cercanas en el espacio al protn irradiado. No obstante, el problema prctico radica en
que los cambios de intensidad debido a NOE suelen ser pequeos, del orden del 0.5-5%, con
lo que la presencia de artefactos debido a una mala sustraccin suelen dificultar el anlisis de
los espectros resultantes y conducir a posibles errores de interpretacin. Actualmente, se
utilizan experimentos ms robustos basados en versiones selectivas 1D de los experimentos
NOESY y ROESY con uso de gradientes.
6. Qu es un gradiente de campo
magntico?

El mtodo alternativa de
seleccin a los ciclos de fase o
espectroscopia diferencia son los
gradientes de campo magntico. Un
gradiente se define como un corto
periodo de tiempo (del orden de
milisegundos)
dnde
el
campo
magntico esttico B0 se hace
espacialmente no homogneo en una
direccin especfica, normalmente el eje
(B(z)). Despus de aplicar un gradiente
duracin , esta dependencia espacial, X
(r,), viene definida por:

(r , ) = sBg (r ) p j j

z
de

(10)

siendo s es el shape factor, Bg (r) es la intensidad del gradiente, y p y son el orden de

coherencia y la constante magnetogrica, respectivamente, de las especies nucleares

66

Teodor Parella

individuales j que intervienen en la coherencia. Suponiendo la configuracin ms estndar, en

donde el gradiente se aplica nicamente desde el eje z, el gradiente varia linealmente de
acuerdo a
Bg (r) = Gz

(11)

siendo G es la fuerza del gradiente (expresada en G/cm) y z la posicin en el eje z.

6.1. Los conceptos de desfase y reenfoque.
Cuando tenemos una muestra dentro del
imn hay que considerar siempre el efecto
permanente del campo magntico esttico
(Bo), que se encuentra alineado en el eje z.
En funcin de la intensidad del campo, los
spins se alinearn a favor o en contra de este
campo creando una magnetizacin inicial
(llamada longitudinal), Iz, que llevar
asociada una velocidad de precesin,
comnmente llamada frecuencia de Larmor
(dependiente de B0), que es la que genera la seal de RMN.
En el experimento de RMN bsico (Fig. 3A), el pulso de 90 gira la magnetizacin Iz al eje y,
-Iy. Esta magnetizacin transversal empieza a girar a su particular frecuencia de Larmor, que
se detecta normalmente.

Figura 3: Diagramas de secuencias de pulsos y efecto de los gradientes de campo magntico en la adquisicin de
la seal. Ver el texto para comentarios.

Qu pasara si modificamos la secuencia bsica introduciendo un gradiente G1 entre el pulso

y la deteccin (Fig. 3B)?. Durante este gradiente G1, la magnetizacin Iy empieza a girar a
diferentes frecuencias de Larmor, en funcin de su posicin en el eje z, y el resultado es la
ausencia de una componente neta en el plano xy que, por lo tanto, no dar seal durante la
adquisicin. Este fenmeno es lo que se conoce como desfase. De acuerdo con la condicin
de reenfoque, el resultado es la desaparicin virtual de la seal.

Gradientes de campo magntico

67

No obstante, esta seal desaparecida

puede recuperarse mediante la sencilla
aplicacin de un segundo gradiente de
igual intensidad y duracin pero sentido
opuesto a G1 (Fig. 3C). As, el efecto de
este segundo gradiente es exactamente
lo contrario al efecto producido
inicialmente por G1 por lo que, despus
del efecto de desfase, se producir el
llamado efecto de reenfoque: la seal
volver a girar a su frecuencia de
Larmor, independiente de su posicin z.

Para evitar el efecto de la evolucin del desplazamiento qumico durante la aplicacin de los
dos gradientes, se puede introducir un pulso de 180 en medio de los dos gradientes,
formndose la conocida secuencia eco de spn con gradientes, PFGSE (fig. 3D) El pulso de
180 lo que hace es invertir el sentido de rotacin de los espines despus del gradiente G1, por
lo que luego aplicando un gradiente G2=G1 es suficiente para reenfocar la seal deseada. Esta
secuencia PFGSE es la base de una serie de experimentos muy importantes, en el que el pulso
de 180 puede ser reemplazado por cualquier elemento de inversin. La figura 4 muestra el
esquema general y el gran nmero de aplicaciones de RMN basadas en el eco de spin.
6.2. La condicin de reenfoque.
La base principal de la seleccin de coherencias mediante gradientes de campo
magntico es la llamada condicin de reenfoque:

68

Teodor Parella

Figura 4: Esquema general de las secuencias de pulsos y experimentos homonucleares basados en un eco de spn
en funcin del elemento de inversin utilizado.

Slo se detectarn aquellos caminos de coherencia que sean reenfocados justo antes de
empezar la adquisicin. Aquellos caminos que hayan adquirido una fase neta diferente de
cero, sern completamente ausentes.
n

sG ( p
i =1

i i

ij

ij

)=0

(12)

Dicho de otra manera, no sern detectados todos aquellos CTCs que hayan adquirido una fase
neta diferente de cero. Si asumimos que los gradientes que intervienen en la misma secuencia
tienen la misma duracin y forma, la eq. (13) se simplifica a
n

G ( p
i =1

ij

ij

)=0

(13)

Esta expresin es fundamental a la hora de optimizar las intensidades relativas entre los
diferentes gradientes que intervienen en cualquier secuencia de pulsos. Aunque no ser
discutido aqu, es interesante desde el punto de vista experimental, que los gradientes de
desfase y reenfoque no estn muy separados en el tiempo. Esto podra provocar prdidas
debido a efectos de difusin que podran afectar a la sensibilidad del espectro resultante.

Gradientes de campo magntico

69

6.3 Velocidad de desfase.

Adquiere especial relevancia la posicin que ocupan los gradientes dentro de una
secuencia de pulsos y los efectos que puedan tener sobre la resolucin y la sensibilidad del
espectro resultante. As, los gradientes pueden ser utilizados con dos finalidades muy
relacionadas entre s:

Cmo mtodo de seleccin, en el cual un nico CTC es seleccionado mientras todos

los dems son desfasados antes de la adquisicin. En estos casos, este mtodo puede
estar relacionado con una reduccin terica de la sensibilidad si se compara con un
experimento anlogo basado en ciclo de fases. En la prctica, esta prdida de
sensibilidad, cuando ocurre, suele ser compensada por la posibilidad de obtener
espectros de altsima calidad en tiempos generalmente ms reducidos.

Cmo mtodo de purga, en el cual los gradientes son situados en lugares estratgicos
dentro de la secuencia para desfasar y, por tanto, eliminar la magnetizacin no deseada
(p 0) mientras las deseadas no son afectadas porque se encuentran temporalmente en
el eje z (p=0). Esta aproximacin no afecta a la sensibilidad global del experimento y
suele ser utilizada cuando la sensibilidad debe ser maximizada, como es el caso de
aplicaciones sobre muestras de baja concentracin.

Algunos ejemplos de a qu velocidad se desfasan () algunos operadores producto:

I z ( p = 0) 0

I + ( p = +1) + I

I ( p = 1) I

I1+ I 2 z ( p = +1) + I

I1+ I 2+ ( p = +2) +2 I

I1+ I 2 ( p = 0) 0

I1x I 2 y = ( I1+ + I1 )( I 2+ I 2 ) = I1+ I 2+ I1+ I 2 + I1 I 2+ I1 I 2

Caso heteronuclear:

I z S ( pI = 0; pS = 1) S

I + S ( pI = +1; pS = 1) + I S

I z S z ( pI = 0; pS = 0) 0

7. La secuencia de dos pulsos: experimento homonuclear COSY.

El experimento 2D ms simple (COSY) consiste de 2 pulsos separados por un tiempo de

evolucin variable t1 (fig. 5). En principio, y siguiendo las reglas 1 y 2 descritas
anteriormente, hay dos caminos posibles. No obstante, si aplicamos gradientes slo podemos
seleccionar uno de estos dos caminos.

70

Teodor Parella

Figura 5: Secuencia de pulsos del experimento COSY 2D con gradientes y sus CTCs correspondientes.

Figura 6: Esquema general y transformaciones bsicas de los experimentos 2D homonucleares.

90( x )
90( x )
t1
I1z
I1
I1 (1t1 ) + I1 I 2 z (1t1 )
I1 (1t1 ) + I1z I 2 (1t1 )
t2

I1 (1t1 ; 1t2 ) + I1z I 2 (1t1 ; 2t2 )

(14)

El clculo de la intensidad de los gradientes se realiza segn la condicin de reenfoque:

Gradientes de campo magntico

p1G1 + p2G2 = 0

71

(15)

Cmo por definicin, p2=-1, tenemos dos soluciones:

G1=G2; selecciona p1=+1 (lnea continua, datos eco)
G1=-G2; selecciona p1=-1 (lnea discontinua, datos eco)
La mayora de experimentos 2D homonucleares se pueden construir sobre la base descrita
para el experimento COSY y variando el proceso de mezcla (fig. 6).
8. Caso Heteronuclear: Experimento HMQC.

El experimento HMQC (fig. 1) es un buen ejemplo para analizar el efecto de los

gradientes en experimentos heteronucleares. Siguiendo las reglas mencionadas anteriormente,
la obtencin de los CTC correspondientes es tambin casi automtica.
Se utiliza un anlisis retrosinttico: Para el 1H, ya que debe empezar en p=0 y terminar en
p=-1, solo hay un camino posible marcado por el pulso de 180 central. Para X, hay dos
caminos posibles. Al aplicar los gradientes, tal como estn especificados, slo seleccionan
uno de estos dos caminos, de manera que se pierde el 50% de la seal terica y adems, el
espectro final se debe representar en modo magnitud:
t1 / 2 180( x.I ) t1/ 2
90( x , I )
90( x , S )

I z
I +
I + S z
I + S

90( x , S )
t2

I S z (S t1 )
I (S t1 )
I (S t1 ; I t2 )
I S (S t1 )

(16)

Para el clculo de la intensidad de los gradientes:

n

G ( p
i

i =1

ij ij

)=0

( p1, H H + p1, X X )G1 + ( p2, H H + p2, X X )G2 + ( p3, H H + p3, X X )G3 = 0

(17)

( H + p1, X X )G1 + ( H + p2, X X )G2 + ( H )G3 = 0

En el caso que queramos seleccionar p1,X=p2,X=+1, representado por la lnea continua
(datos eco), la expresin se simplifica en el caso de X=13C a:
( H + C )G1 + ( H + C )G2 + ( H )G3 = 0
5G1 3G2 4G3 = 0

(18)

Una relacin entre los gradientes G1:G2:G3 de 2:2:1 selecciona dicho CTC, mientras
una relacin 2:2:-1 seleccionara el CTC marcado con lneas discontinuas (datos anti-eco:
p1,X=p2,X=-1).

72

Teodor Parella

9. Experimento de tres pulsos.

Extrapolando las ideas de la secuencia de dos pulsos (experimento COSY), es un buen

ejercicio analizar la secuencia de tres pulsos (fig. 7) donde aumentan las posibilidades de
seleccin. Analizando la secuencia utilizando operadores cartesianos, justo despus del
segundo pulso de 90, tenemos las siguientes componentes:

Figura 7: Secuencia de 3 pulsos de 90. La diferente optimizacin de los gradientes G1, G2 y G3 permiten la
seleccin de los diferentes CTCs esquematizados en los experimentos A, B ,C, D y E.

Gradientes de campo magntico

73

Cmo se puede observar entre el segundo y el tercer pulso de 90 tenemos la posibilidad de

seleccionar especficamente coherencias de orden 0, 1, 2, 3, ... en funcin de los gradientes
que utilicemos. La condicin general para todas estas opciones se reduce a:
G1 p1 + G2 p2 G3 = 0

(19)

Experimento A:

G1 + 2G2 G3 = 0
(20)
Relacin 1:1:3
Cmo durante G1 aplicamos un gradiente, dar un espectro en modo magnitud.
Es un experimento 2D COSY-DQF en modo magnitud. El trmino DQF viene porque
durante el gradiente G2 seleccionamos coherencias DQ (p=+2).

Experimento B:

G1 + 3G2 G3 = 0
(21)
Relacin 1:1:4
Cmo durante G1 aplicamos un gradiente, dar un espectro en modo magnitud.
Es un experimento 2D COSY-TQF en modo magnitud. El trmino TQF viene porqu
durante el gradiente G2 seleccionamos coherencias TQ (p=+3).

Experimento C:

2G2 G3 = 0
(22)
Relacin 0:1:2
Cmo durante G1 no aplicamos un gradiente, dar un espectro sensible a la fase.
Es un experimento 2D COSY-DQF sensible a la fase. El trmino DQF viene porqu
durante el gradiente G2 seleccionamos coherencias DQ (p=+2).

Experimento D:

G1 G3 = 0

(23)

74

Teodor Parella

Relacin 1:0:1
Cmo durante G1 aplicamos un gradiente, dar un espectro en modo magnitud. El
valor de G2 tiene que ser 0 porque seleccionamos los dos CTC durante este gradiente
Es un experimento 2D RELAY en modo magnitud, relacionado al experimento COSY
descrito en la seccin anterior.

Experimento E:

Este es un experimento diferente a los otros descritos. Durante G2 necesitamos

seleccionar coherencia p=0. Adems, segn el diagrama, durante t1 seleccionamos los
dos CTC por la necesidad de dar un espectro sensible a la fase
Relacin 0:n:0
Este gradiente G2, que puede tener cualquier valor, es un gradiente de purga. Sirve
para eliminar cualquier componente de la magnetizacin que est en el plano
transversal (con p 0) durante la aplicacin de G2.
Es un experimento 2D NOESY sensible a la fase.
10. Conclusiones

En captulos posteriores ya se explicarn con ms detalles y ms ejemplos las

principales ventajas y caractersticas de los experimentos descritos en este captulo. Cmo
principales conclusiones es que los gradientes son unos elementos muy importantes para el
buen funcionamiento de la mayora de secuencias de pulsos. Permiten obtener espectros de
buena calidad, libres de la presencia de artefactos, en tiempos de adquisicin relativamente
cortos y evitando, en muchos casos, la necesidad de largos ciclos de fases para la seleccin de
la seal.
Hay que prestar mucha atencin donde incorporamos los gradientes dentro de una secuencia
de pulsos, porque esto podra provocar una prdida indeseable de sensibilidad o la obligacin
de representar espectros en modo magnitud. Si bien stos son tiles para anlisis rutinarios,
siempre es ms deseable obtener espectros sensibles a la fase para optimizar mejor la
sensibilidad y la resolucin. En estos casos, el uso de gradientes como elementos de purga
(filtros z, filtros zz, water flip-back...) suelen ser una buena opcin para obtener espectros
ntidos sin grandes requisitos.
Los principios descritos aqu permiten se pueden extrapolar a experimentos
multidimensionales que a simple vista puedan parecer muy sofisticados pero que, a menudo,
son extensiones de conceptos bsicos.
Lectura Recomendada:

1.

T. Parella, Magn. Reson. Chem. 36, 467 (1998). Este artculo de revisin, aunque escrito hace algunos
aos, sigue siendo totalmente vlido para la mayora de aplicaciones que se utilizan normalmente hoy
en da.
2. T. Parella, Bruker Pulse Program Catalogue (2005). Incluido dentro del software NMRGuide v4.0 /
TOPSPIN v1.3 (BRUKER). El catlogo incluye alrededor de 800 secuencias de pulsos diferentes que
engloban la mayora de experimentos 1D/2D/3D. Los experimentos se encuentran descritos en la
enciclopedia de RMN que forma parte de NMRGuide v4.0.