DETERMINACIN DE LA CAPACIDAD METABLICA DE MICROORGANISMOS

AMBIENTALES

OBJETIVOS

Caracterizar microorganismos con actividad amiloltica y proteoltica.

Determinar cualitativamente la capacidad de un microorganismo para
hidrolizar sustrato especfico.

METODOLOGA
Gracias a las pruebas bioqumicas es posible realizar una seria anlisis qumicos y
fsicos para determinar la actividad de una va metbolica incorporando un sustrato
en un medio de cultivo. De esta manera, se puede llevar un control del
comportamiento de los microorganismos ante esta situacin.
Inicialmente se tom una colonia grande de la muestra recogida, y se dividi a la
mitad. Ambas se sembraron en diferentes cajas Petri, una con casena y la otra con
almidn. El objetivo era observar la hidrlisis de almidn y la deradacin de la
casena.
Las bacterias pueden usar alimentos macromoleculares; para ello, es necesario una
hidrlisis extracelular preliminar, igual que sucede en los animales superiores. Las
distintas bacterias elaboran para este fin una cierta variedad de enzimas
extracelulares que se segregan al medio, los cuales pueden ser determinados
posteriormente y concluir finalmente si el microorganismo puede hidrolizar almidn
o no.
Para la hidrlisis de casena, los microorganismos presentes en el cultivo utilizan la
casena como fuente de energa y de carbono. Cuando la enzima caseinasa cataliza
la hidrlisis de la casena, los aminocidos resultantes se disuelven en el medio
acuoso, y el medio se torna de nuevo transparente alrededor de la colonia del
microorganismo. As, es posible detectar la degradacin de esta protena.

Observaciones:
Microorganismo + Almidn + Lugol

Microorganismo + Casena + cido

Clorhdrico

Hidrlisis del almidn: El lugol con el almidn forman un complejo de color caf (con
tonos prura) en nuestro experimento no se not esta coloracin por lo que este
microorganismo dio negativo.
Degradacin de la casena: La casena es una protena que toma un color blanco al
agregar cido clorhdrico, la muestra dio positiva ya que desapareci el color blanco
alrededor de las colonias.
Preguntas:
1. Defina sustrato, enzima, producto y revelador en el contexto de pruebas
bioqumicas:

Sustrato: (en este caso almidn y casena).

Un Sustrato es una molcula sobre la que acta una enzima. Las enzimas
catalizan reacciones qumicas que involucran al sustrato o los sustratos. El
sustrato se une al sitio activo de la enzima, y se forma un complejo
enzima-sustrato. El sustrato por accin de la enzima es transformado en
producto y es liberado del sitio activo, quedando libre para recibir otro
sustrato. Es el medio o superficie en la cual se dejar el/los
microorganismos

Enzima: (en este caso amilasa y caseinasa)

Las enzimas son protenas que catalizan todas las reacciones bioqumicas.
Adems de su importancia como catalizadores biolgicos, tienen muchos

usos mdicos y comerciales. La mayora de las reacciones de los sistemas

vivos son reversibles, es decir, que en ellas se establece el equilibrio
qumico. Por lo tanto, las enzimas aceleran la formacin de equilibrio
qumico, pero no afectan las concentraciones finales del equilibrio.

Producto: (en este caso glucosa y aminocidos)

Es la molcula o molculas finales de una ruta metablica y tambin, la
molcula o molculas que se obtienen tras la accin de una enzima.

Revelador: (en este caso lugol y cido clorhdrico)

Son aquellos productos que permiten arrojan un resultado positivo o
negativo en la realizacin de una prueba bioqumica, desarrollan las
condiciones necesarias y el medio para que se propicien reacciones que
favorezcan o no la obtencin de un producto determinado de inters
E + S ES E + P
Sustrato (contenido en el medio de cultivo)
Enzima o va metablica (secretada o en el interior del microorganismo)
Producto
Revelador y/o indicador (aunque algunas no los emplean)

Hidrlisis del Almidn

Agar Almidn
Sustrato: Almidn (polmero de glucosa).
Enzima: Amilasa (exoenzima).
Producto: Glucosa.
Revelador: Lugol.

El lugol con el almidn forman un complejo color caf-prpura que desaparece

cuando el almidn ha sido degradado.
Hidrlisis de la casena

Agar Leche
Sustrato: Casena (protena).
Enzima: Caseinasa (Proteasa,exoenzima).
Producto: Aminocidos.
Revelador: cido clorhdrico (aunque generalmente no requiere)

Las proteasas son excretadas al medio para la degradacin de protenas, la casena

es la protena de la leche que le confiere el color blanco, cuando la casena es
hidrolizada desaparece el color blanco alrededor del crecimiento microbiano.