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NANOBIOSENSORES A BASE DE NANOPARTCULAS DE ORO SINTETIZADAS

POR ABLACIN LSER
OBJETIVO: Entender como se obtienen nanopartculas de oro por el mtodo de ablacin
laser y reconocer el potencial de los mismos desarrollados en biosensores para fines
mdicos.
ANTECEDENTES
Un biosensor se define como una herramienta o un sistema analtico compuesto por
un material biolgico que est inmovilizado como enzimas, anticuerpos y orgnulos. Este
material biolgico est en contacto con un sistema transductor adecuado que convierte la
seal bioqumica en una seal elctrica que se puede cuantificar.
Los nanobiosensores son una nueva generacin de biosensores que se estn
desarrollando mediante varias estrategias de la nanotecnologa de tipo top-down( reducir
los componentes y estructuras de mayor a menor.),como la fabricacin de nanoelectrodos
por tcnicas de nanofabricacin o bottom-up( se le conoce tambin como auto
ensamblado. Consiste en crear y montar de menor a mayor, es decir, partimos por ejemplo
de una molcula y mediante un proceso de montaje se crea una estructura mayor.) Como la
obtencin de nanopartculas a partir de sntesis u organizacin controlada de distintos
materiales. La biofuncionalizacin de estos nano-objetos con distintos elementos de
reconocimiento biolgico (clulas, ADN, enzimas, anticuerpos, minibodies, aptmeros,
materiales biomimticos, etc.) en combinacin con tcnicas pticas, elctricas o mecnicas
de anlisis est revolucionando el mundo de los biosensores. Esta gran expectativa se basa
en que la implantacin de los mismos supondr una mejora en sensibilidad, selectividad,
coste, capacidad de multi-deteccin y monitorizacin en vivo. A pesar del considerable
esfuerzo realizado por la comunidad cientfica en cuanto al desarrollo de biosensores an
contina siendo un gran desafo el desarrollo de plataformas sensoras a tiempo real, que en
el caso particular del diagnstico clnico sean capaces de realizar una valoracin mltiple
para la deteccin precoz en el mismo punto de atencin (consulta mdica, block quirrgico,
ambulancias, lugares de trabajo, en nuestros propios hogares, operaciones militares,
misiones espaciales, etc.), y que puedan a su vez ser utilizadas con diversas muestras
clnicas (sangre, orina, biopsias, etc). Adems de mejoras en el mbito del diagnstico
clnico, crucial para la prevencin de enfermedades y mejora de las tcnicas teraputicas, el
desarrollo de nanobiosensores supondra mejoras en mltiples campos de aplicacin tales
como la monitorizacin de txicos y contaminantes.
En otras palabras los nanobiosensores son, bsicamente, los sensores que se componen de
nanomateriales y curiosamente estos no son los sensores especializados que pueden
detectar los eventos y acontecimientos a nanoescala. Algunos de estos materiales

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empleados incluyen nanotubos, nanocables, nanorods, nanopartculas y pelculas delgadas
hechas de materia nanocristalina.
La clasificacin de nanobiosensores es un rea muy diversa. Esto es as ya que se basa en la
naturaleza de los nanomateriales incorporados en la operacin de biodeteccin. Adems de
la clasificacin no es igual. En caso de biosensores, clasificamos los sensores en de acuerdo
al tipo de material que se analiza y la otra es sobre la base del mecanismo de transduccin
de seales empleada. Por ejemplo, cualquier antgeno o enzima a travs de los biosensores,
les nombramos como biosensores antgeno o biosensores enzimticos.
En los nanomateriales, debido su tamao reducido a unos cuantos nanmetros, se modifican
sus propiedades que finalmente difieren del mismo material con dimensiones de slido
volumtrico, de las molculas y los tomos.
Los nanomateriales se clasifican de acuerdo al nmero de dimensiones que se encuentren
en el rgimen nanomtrico. Los nanomateriales de dimensin cero: las tres dimensiones se
ubican en el rgimen nanomtrico, a esta corresponden las nanopartculas. Las
nanopartculas metlicas en particular, poseen propiedades interesantes con aplicaciones en
diversas reas tecnolgicas.
Respecto a sus primeros usos puede citarse el caso de la cultura egipcia, que empleaba
nanopartculas de oro como coloides medicinales para conservar la juventud y mantener
buena salud y la civilizacin china las empleaba como colorantes inorgnicos en
porcelanas.
Desde esa poca hasta la fecha, grandes avances se han logrado en el conocimiento de las
nanopartculas, se han desarrollado diversos mtodos de sntesis qumicos y fsicos, con la
finalidad de poder disear sus dimensiones, forma, composicin, y modificadores de
superficie, y con esto controlar su comportamiento frente a diversos estmulos (radiacin
electromagntica o reactividad qumica). En la medicina se utilizan nanopartculas
metlicas de oro para la deteccin de niveles de glucosa, y en conjunto con nanopartculas
magnticas para la deteccin de clulas cancergenas, de VIH y Alzheimer en etapas
tempranas.
INTRODUCCIN
Los biosensores, al igual que cualquier otro tipo de instrumento, han evolucionado a
lo largo de la historia. Anecdticamente, podramos decir que los primeros biosensores
fueron los canarios; ya que estas aves se utilizaban antiguamente en las minas de carbn
para detectar gases txicos. Los canarios se mueren antes que las personas en presencia de
monxido de carbono o metano y como suelen estar cantando la mayora del tiempo el
hecho de que no lo hicieran se converta en una alarma sonora.

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Se puede decir que el padre de estos dispositivos es Leland C. Clark Jr., que en 1956
finaliz sus trabajos con el electrodo de O2, en 1962 propuso hacer sensores ms
inteligentes. Lo que l quera decir con esto era que sera una buena idea combinar las
enzimas y otros materiales biolgicos con los sensores electroqumicos que haba hasta esa
poca. Con la ayuda de Lyon, construy el primer biosensor. Este consista en un electro de
O2 con la enzima glucosa oxidasa inmovilizada. Este biosensor permita relacionar
directamente la concentracin de glucosa con la disminucin de la concentracin de
oxgeno.
Posteriormente, Guilbault y Montalvo detallaron el primer electrodo enzimtico
potenciomtrico basado en la inmovilizacin de la enzima ureasa sobre un electrodo
selectivo de amonio.
En 1975 esto se convirti en una realidad comercial, ponindose a la venta el primer
analizador de glucosa basado en la deteccin amperomtrica de perxido de hidrgeno.
Clemens incorpor un biosensor de glucosa en un pncreas artificial que se comercializ
como el Biostator. Actualmente este biosensor ya no est en venta. En este mismo ao una
empresa Suiza construy un biosensor que utilizaba el lactato deshidrogenasa; ste fue muy
til para mejorar los anlisis en clnica y en deportes.
En 1982, se construyeron la nueva generacin de biosensores electroqumicos, basndose
en esto se describi la implantacin de un biosensor subcutneo para la determinacin de
glucosa.
A principios del siglo XXl, los avances en la nanotecnologa dieron auge a la
nanobiotecnologa y con ella se crearon los nanobiosensores.

NANOPARTCULAS DE ORO
Existen diferentes tipos de materiales para la sntesis de nanopartculas (plata,
platino, silicio, etc.), pero la razn por la cual las nanopartculas hechas a base de oro son
muy utilizadas se debe a que este metal no reacciona o reacciona muy poco con otras
sustancias, por lo tanto, tiene poca susceptibilidad a oxidarse o corroerse. Estas
caractersticas lo hacen un material compatible con la vida y, por ende, un buen candidato
para ser utilizado en la medicina, puesto que, a dosis teraputicas, no origina toxicidad,
cogulos en la circulacin sangunea, cncer u otras complicaciones. Otra caracterstica
favorable es que las nanopartculas de oro son relativamente sencillas de sintetizar y
manipular, permitiendo la obtencin de una gran diversidad de formas, por ejemplo,
esferas, cilindros, tubos, rombos, cajas, canastillas, entre otras.

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Las nanopartculas de oro, que son estructuras menores a 1 micra; especficamente, las de
oro se caracterizan por contener de 20 a 15,000 tomos, y sus dimensiones van de 1 a 1,000
nanmetros (nm); en general, las ms utilizadas suelen estar en el rango de 10 a 100 nm.
Podemos decir que su tamao es tan pequeo como el de un virus (20450 nm), una protena (5-50 nm) o un gen (2 nm de ancho y 10-100 nm
de largo), y gracias a ello, estas estructuras de oro pueden atravesar las
paredes de los vasos sanguneos y las membranas celulares para
distribuirse ampliamente por el organismo e, incluso, alcanzar
componentes ms pequeos dentro de las clulas.
El oro puede formar fcilmente uniones estables con azufre, carbono y
otros elementos como flor, cloro, bromo y yodo, gracias a esto se le
puede unir molculas de origen biolgico para conferir a las
nanopartculas de oro mltiples propiedades fsico-qumicas y biolgicas.
Los anticuerpos son un ejemplo de molculas orgnicas que pueden ser
unidas a las nanopartculas con el fin de reconocer un objetivo
especfico. Otro ejemplo es la unin entre una nanopartcula de oro y
polietilenglicol (una estructura qumica conformada por mltiples
subunidades); este complejo nanopartcula-polietilenglicol tiene la
caracterstica de permanecer en el torrente sanguneo por tiempo
suficiente para alcanzar tumores y acumularse en su interior, lo que
permite su uso en el transporte de frmacos. En el mismo sentido, se ha
evaluado el uso conjugado de cido flico y nanopartculas de oro,
puesto que las clulas cancergenas presentan mayor expresin de
receptores para esta vitamina, en comparacin con el resto de las
clulas del cuerpo. La unin del conjugado cido flico-nanopartcula de
oro, dirigida a su receptor especfico en las clulas cancergenas,
permite su transporte y por lo tanto su identificacin, para luego ser
utilizada con fines diagnsticos y teraputicos.

ABLACIN LSER
La ablacin lser es un procedimiento que se usa para quitar o extraer el material de
la superficie de un slido (de manera ocasional se puede usar en lquidos) mediante la
irradiacin de este con un rayo lser. Cuando el flujo de radiacin es bajo, la superficie del
material se calienta al absorber la energa de los fotones del rayo y sublima, o se evapora.
La ablacin con lser de femtosegundos de un objetivo de oro en soluciones acuosas se ha
utilizado para producir nanopartculas de oro coloidales con la qumica de superficie

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controlada. Un anlisis qumico detallado mostr que las nanopartculas formadas se
oxidaron parcialmente por el oxgeno presente en solucin. La hidroxilacin de estos
compuestos Au-O, seguido por una prdida de protn para dar superficie Au-O-, dio lugar a
la carga negativa de las nanopartculas. La oxidacin parcial de la superficie de
nanopartculas de oro aumenta su reactividad qumica y por consiguiente tiene un fuerte
impacto sobre su crecimiento. En particular, la superficie oxidada hace reaccionar de
manera eficiente con Cl- y OH- para aumentar su carga superficial neta. Esto limitaba la
coalescencia de las partculas, debido a la repulsin electrosttica, y dio lugar a una
reduccin significativa de su tamao. Aprovechando el efecto de repulsin, control tamao
eficiente se logr utilizando diferentes sales (7 5 nm para KCl 10 mM, 5,5 4 nm de
NaCl 10 mM, 8 5 nm de NaOH, pH 9,4), una mejora considerable comparativamente a
partculas preparadas en agua desionizada, usando condiciones de ablacin idnticos, en nm
se producen partculas de 1 a 250. La superficie de oro parcialmente oxidado tambin era
adecuada para modificacin de la superficie a travs de ambas interacciones covalentes y
electrostticas durante la formacin de partculas. El uso de soluciones de N-propilamina,
mostramos un control eficaz del tamao de las nanopartculas (5-8 4-7 nm) por la
participacin de estas interacciones. Los resultados obtenidos ayudan a desarrollar
metodologas para el control del crecimiento de nanopartculas a base de lser de ablacin y
la funcionalizacin de superficies de las nanopartculas por las interacciones especficas.
Siendo una tcnica muy comn para la sntesis de nano partculas de Oro, siendo de tamao
aproximadamente de 10 nanmetros junto a la sntesis se desea la implementacin de
protenas por atraccin por fuerzas de Van der Walls protenas receptoras para la clula que
se desea bombardear siendo esta la estructura diana (targeting moiety), todo en un sistema
acuoso ya que se permite la adhesin de las protenas a las nano partculas

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NANOBIOSENSORES A BASE DE NANOPARTCULAS DE ORO SINTETIZADAS
POR ABLASIN LSER

NANOPARTCULAS DE ORO BASADO EN BIOSENSORES ELECTROQUMICOS

Las propiedades nicas de las nanopartculas de oro para proporcionar un

microambiente adecuado para biomolculas inmovilizacin retener su actividad biolgica,
y para facilitar la transferencia de electrones entre las protenas inmovilizadas y superficies
de los electrodos, han llevado a un uso intensivo de este nanomaterial para la construccin
de biosensores electroqumicos que se mejora el analtico rendimiento con respecto a otros
diseos de biosensores. Las caractersticas operativas ventajosas de los dispositivos
biosensores diseados haciendo uso de nanopartculas de oro se destacan con respecto a los
biosensores nanoestructurados.
Se consideran los biosensores enzimticos electroqumicos incluyendo los que utilizan
materiales hbridos con nanotubos de carbono y polmeros, matrices sol-gel, y arquitecturas
de capa por capa. Por otra parte, los inmunosensores electroqumicos, las nanopartculas de
oro desempean un papel crucial en la mejora electrodo de transduccin de la reaccin de
afinidad, as como en la eficiencia de inmunorreactivos inmovilizacin en un modo estable.
Del mismo modo, los recientes avances en el desarrollo de biosensores de ADN utilizando
nanopartculas de oro para mejorar la inmovilizacin de ADN en superficies de los
electrodos y etiquetas como adecuados para mejorar la deteccin de eventos de hibridacin.

CIRCUITO CATALIZADOR DE ADN LIBRE DE ENZIMAS PARA LA DETECCIN

AMPLIFICADA DE LA AFLATOXINA B1 USANDO NANOPARTCULAS DE ORO
COMO INDICADORES COLORIMTRICOS

Un biosensor libre de enzimas para la deteccin amplificada de aflatoxina B1,

micotoxina producida en pequeas concentraciones por hongos, se ha
construido en base a un circuito de ADN cataltico.
Tres sondas de ADN con biotina de horquilla (H1, H2 y H3) fueron diseados como los
componentes del conjunto para construir el sistema de deteccin (triplex H1-H2-H3
producto). Se obtuvo en cascada capacidad de amplificacin de la seal a travs de
reacciones de desplazamiento de cadena mediante punto de apoyo para abrir las horquillas
y reciclar el ADN gatillo.
Mediante el uso de nanopartculas de oro con estreptavidina funcionalizado como los
indicadores de seal, la lectura colorimtrica puede ser observada por el ojo desnudo. En
presencia de una diana, el agregado de nanopartculas individuales (rojo) en una red
reticulada de nanopartculas (azul) a travs del acoplamiento de biotina-estreptavidina. El
ensayo colorimtrico es ultrasensible, lo que permite la deteccin visual de niveles de trazas

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de aflatoxina B1 (AFB1) bajos sin instrumentacin. El lmite calculado de deteccin (LOD)
es de 2 horas, en trminos de 3 veces la desviacin estndar sobre la respuesta en blanco. El
sensor es robusto y funciona incluso cuando desafi con matrices de muestras complejas,
tales como muestras de arroz.
BIOSENSOR DE MERCURIO BASADO EN NANOPARTCULAS COLOIDALES DE ORO

Se desarroll un sensor de mercurio basado en la inhibicin de fluorescencia que

ejercen nanopartculas (NPS) coloidales de oro sobre la Rodamina560. Las NPS coloidales
fueron generadas por la Ablacin Lser de una placa de oro (99.99%) sumergida en
soluciones etnolicas de Rodamina560. Se evala la inhibicin por parte de las NPS en
diferentes concentraciones del colorante para encontrar una concentracin ptima de
trabajo. Se encontr que las NPS de oro inhiben satisfactoriamente la emisin radiativa de
la Rodamina560. En esta solucin se aplic un flujo de Hg0, producto de la reduccin de
soluciones acuosas de Hg2+, empleando como agente reductor NaBH4 (Mtodo de Vapor
Fro). Se observa un incremento en la emisin de fluorescencia de la solucin NPSRodamina en presencia del Hg0. Estos resultados pueden ser atribuidos a que el Hg 0
amalgama la partcula, rompiendo de esta manera su asociacin con el colorante,
liberndolo y presentando nuevamente su emisin radiativa caracterstica.
Por lo anteriormente expuesto, es posible detectar la presencia de Hg 0 en solucin,
mediante la determinacin de la variacin de la seal de fluorescencia. El desarrollo de esta
tcnica ofrece una nueva oportunidad para la deteccin del mercurio en soluciones acuosas
a niveles de ppb.
DETECCIN ELECTROQUMICA ULTRASENSIBLE DE LA PROTENA TIROSINA
QUINASA-7 POR NANOPARTCULAS DE ORO Y AZUL DE METILENO ASISTIDA
AMPLIFICACIN DE LA SEAL

Presentamos aqu una estrategia ultrasensible y simple para quinasa-7 de deteccin

de la protena tirosina (PTK7) basado en el reconocimiento inducida por el cambio de la
estructura de aptmero sgc8, y el cambio de la seal de azul de metileno (MB) que
interactuaba con complejo de ADN intercalado. Para construir un sensor de este tipo, un
nano-superficie homognea se form en primer lugar sobre el electrodo de carbono vtreo
(GCE) mediante el uso de carga negativa Nafion (NF) como la capa interna y carga positiva
nanopartculas de oro ((+) AuNPs) como la capa exterior, seguido por la inmovilizacin de
aptmero sgc8 basado en unin Au-S. En presencia de sonda helper (HP), se form
complejo de ADN intercalada entre el aptmero sgc8 y la sonda de nanopartculas de oro
ADN modificado (DNA-AuNPs).
A continuacin, una seal de corriente fuerte se produjo debido a la captura de molculas
MB abundantes por tanto el complejo de ADN insertado y los mltiples ADNs que
modificaron en la superficie AuNPs. Sin embargo, la unin de aptmero sgc8 con PNK7
especfica desencadenara una transicin estructura de la misma, y directamente impedido
la siguiente formacin de la estructura intercalada y la captura de MB. Por lo tanto, la

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deteccin PTK7 podra llevarse a cabo con base en el seguimiento de la reduccin de la
seal de MB tras la incubacin de aptmero sgc8 con PTK7. En condiciones ptimas, se
obtuvo un bajo lmite de deteccin de 372 FM para la deteccin PNK7. Debido al empleo
de aptmero sgc8, el biosensor propuesto exhibi una alta selectividad a PNK7. Adems, se
obtuvieron resultados satisfactorios cuando se aplica el mtodo propuesto para la deteccin
PNK7 en restos celulares.

SUPERFICIES DE CARBN VTREO MODIFICADAS CON COMPUESTOS

ORGNICOS Y NANOPARTCULAS DE ORO COMO SENSORES DE
DOPAMINA.
La dopamina es el neurotransmisor catecolaminrgico ms importante
del sistema nervioso central (SNC) de los mamferos y es por ello que es
de gran inters mdico y farmacolgico. Cambios en la concentracin de
este neurotransmisor en ciertas regiones del cerebro pueden dar origen
a una variedad de enfermedades, tales como, la enfermedad de
Parkinson , esquizofrenia y epilepsia .
El comportamiento de dos sensores electroqumicos construidos a partir de superficies de
carbn vtreo modificadas electroqumicamente con sustancias orgnicas, tales como
tiourea (TIO) y quitosano (QUIT) y nanopartculas de oro (AuNPs) fue investigado en
solucin buffer acetato pH = 6,7 + dopamina (DA) + cido ascrbico (AA) + cido rico
(AU), empleando las tcnicas: voltamperometra cclica (VC) y voltamperometria de onda
cuadrada (VOC). Ambos sensores mostraron una alta selectividad y sensibilidad hacia la
DA en presencia de los interferentes AA y AU como resultado de la atraccin electrosttica
que ejercen las AuNPs sobre la forma protonada de la DA. Con el sensor electroqumico
AuNPs/TIO/CV, en presencia de AA y AU 100 M, se obtuvo un lmite de deteccin de
0,15 M de DA y una sensibilidad de 70.000 A

mM 1

mientras que con el sensor

electroqumico AuNPs-QUIT/CV en presencia de AA y AU 100 M el lmite de deteccin

1
fue de 0,08 M y una sensibilidad de 74.220 A mM
.

NANOPARTCULAS DE PLATA Y ORO FUNCIONALIZADAS IN SITU

CON EL POLMERO CONJUGADO FLUORESCENTE PPET3OC12-SQS.
SNTESIS,
PROPIEDADES
MORFOLGICAS,
PTICAS
Y
ELCTRICAS.
La optoelectrnica molecular orgnica ha tomado relevancia en los ltimos 30 aos como
una tecnologa intermediaria entre la electrnica y la fotnica en donde se produce corriente

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elctrica a partir de luz (celdas solares) o bien luz a partir de corriente (diodos
electroluminiscentes). Los polmeros y oligmeros conjugados son materiales ideales para
aplicaciones en esta rea debido a que combinan las propiedades optoelectrnicas de los
semiconductores inorgnicos con la ventaja que tienen los plsticos de poder ser
procesados. Entre los materiales orgnicos conjugados de mayor inters se encuentran los
poli(fenilenetinilenos) (PFE) en los cuales la combinacin de anillos aromticos con triples
enlaces conjugados da lugar a una elevada deslocalizacin electrnica y por consiguiente a
peculiares propiedades pticas de emisin.
La sntesis de nanopartculas de oro y plata funcionalizadas in situ con un
pol(fenilenetinileno) fluorescente y portador de la secuencia flexible C(O)S-(CH2)2S(CH2)2S-C(O)-. La sntesis se llev a cabo por mtodos de qumica coloidal y para la plata
tambin por ablacin lser. Todas las partculas se caracterizaron por Microscopa
Electrnica de Transmisin (MET), RMN de 1 H, espectroscopia UV-Vis y fluorescencia.
Se determin que las partculas de oro son ms pequeas y aisladas mientras que las de
plata presentan aglomeracin y de forma ms marcada para las que se obtuvieron por
ablacin lser. Debido a la aglomeracin, las partculas de plata no permitieron formar
pelculas homogneas por lo que estas se elaboraron solamente para las nanopartculas de
oro. La funcionalizacin de nanoparticulas de oro mejora las propiedades morfolgicas y
elctricas obteniendo pelculas con menor rugosidad y mayor conductividad elctrica con
respecto a las del polmero

CONCLUSIONES
Hoy en da la nanotecnologa ha logrado avances muy importantes para todas las
reas de la ciencia. Los biosensores a escala nanomtrica nos permite detectar con mayor
facilidad y afinidad las distintas enfermedades que puede haber en el organismo de un ser
vivo, estos sensores pueden detectar con mayor facilidad ciertas cargas elctricas y as
determinar el tipo de enfermedad que fue programada el nanobiosensor.
Claramente entre mayores avances y ms precisos sean los nanos vectores, los tratamientos
llegaran a ser ms efectivos. Varios miles de nanos vectores han sido reportados, pero una
pequea minora ha sido probada su efectividad en tratamientos cancergenos, siendo un
gran ejemplo de la importancia de mejorar y continuar esta ciencia como un apoyo
fundamental para tratamientos e identificacin de enfermedades o tumores en las clulas
para su pronta accin y cura.

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