BIOMETRIA HEMATICA

OBJETIVOS.
Determinar la cantidad de hemoglobina presente en la sangre.
Determinar el nmero de eritrocitos presentes en la sangre del paciente.
Conocer el porcentaje del volumen de los eritrocitos presentes en la
sangre.
Identificar el nmero de leucocitos presentes en la sangre.
Hacer una correcta extensin sangunea.
Realizar una identificacin de los glbulos blancos.
INTRODUCCION.
La biometra hemtica es un auxiliar en el diagnostico y seguimiento de
anemias, leucemias, pacientes con quimioterapias, sndrome febril e
infecciones.
La biometra hemtica tambin denominada hemograma, es uno de los
estudios de rutina de mayor importancia, ya que da informacin que de
aqu se deriva i nos proporciona una idea muy confiable del estado
general de salud del paciente.
Este estudio consta de varios parmetros
HEMOGLOBINA.
La hemoglobina es una mediada indirecta de la capacidad de transporte
de oxigeno de la sangre.
La sangre se diluye en lquido de Drabkin, que destruye los eritrocitos y
convierte la hemoglobina en cianometahemoglobina. La solucin que se
produce se examina por medio de un espectrofotmetro o un colormetro.
Su grado de absorbancia es proporcional a la cantidad de hemoglobina
que contenga la sangre.
El mtodo fotoelctrico de la cianometahemoglobina permite hacer los
clculos ms precisos de la cantidad de hemoglobina existentes.
CUENTA DE ERITROCITOS.
El nmero de eritrocitos contenidos en un litro de sangre se denomina
concetracion de nmero de eritrocitos. Es difcil lograr determinaciones

precisas de la concentracin de nmero de eritrocitos con una cama para

recuento.
Los eritrocitos se diluyen por medio del lquido para diluir eritrocitos. Los
eritrocitos se cuentan con el microscopio en una cmara para recuento y
se calcula el nmero por litro.
MICROHEMATOCRITO.
Volumen del paquete globular, despus de centrifugacin respecto del
volumen sanguneo total expresado en litros/litros.
El volumen total que ocupan los eritrocitos en un volumen dado de sangre,
dividido entre el volumen de sangre, se denomina fraccin de volumen de
eritrocitos.
El resto de sangre se compone de casi completamente de plasma, junto
con una reducida cantidad de glbulos blancos.
RECUENTO DE LEUCOCITOS.
Constituye una gua muy til sobre la gravedad de la enfermedad. En
distintos procedimientos, se observa patrones especficos de las respuestas
leucocitarias.
La concentracin de leucocitos es el nmero de ellos que se encuentra en
un litro de sangre
La sangre se deposita en un lquido para diluir leucocitos (trk), que:
-destruye los eritrocitos y deja intacto a los glbulos blancos.
FROTIS SANGUINEO.
La extensin se prepara repartiendo uniformemente una gota pequea de
sangre sobre un portaobjetos de manera que solo se deposite uan acapa
de clulas.
Despus de teirlas, las extensiones se sangre se utilizan para.
-

Determinar las fracciones de nmero de los tipos de leucocitos.

Para detectar glbulos rojos anormales
Identificar ciertos parsitos.

TINCIONES (Wright y Giemsa)

Una tincin de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos
de oxidacin, as como eosina Y. La accin combinada de estos
colorantes produce el efecto de Romanowsky y da una coloracin
purprica a los ncleos de los leucocitos y a los grnulos neutrfilos y de
color rosado a los eritrocitos. Los componentes principales causantes de
este efecto son el azul B (un producto de oxidacin del azul de metileno) y
la eosina Y. La amplia variacin en los colores y sombras observadas con la
tincin de Romanowsky permiten distinciones sutiles de las caractersticas
celulares.
La naturaleza cida o bsica de las estructuras celulares determina su
avidez por los componentes del colorante policromtico de Wright; es as
como los cidos nucleicos se tien con azul B que es el bsico y la
hemoglobina con la eosina Y que es cida. Otras estructuras se tien por
una combinacin de ambos y se denominan neutrfilas.
La tincin de Giemsa es un mtodo habitual para el examen de frotis
sanguneos y otro tipo de muestras biolgicas
Permite la tincin diferencial de zonas con un alto contenido de ADN, y
concretamente de uniones A-T.
Esto permite distinguir perfectamente al microscopio ncleo celular

Los ndices eritrocitarios son aquellos q se miden el tamao y su contenido

de hemoglobina, su utilidad extrema es para clasificar eritrocitos, se basan
en las mediciones de la hemoglobina, el numero de eritrocitos y el
hematocrito.

MATERIAL
Tubos de ensaye de 13X100
Pipetas de 1 y 5 ml
Pipeta de shally (0.02ml)
Pipeta de Thoma para globulos rojos y blancos
Cmara de Neubauer

Tubo de Witrobe graduado

Tubos capilares
Porta y cubreobjetos
Papel parafilm
Cerillos
Guantes
Gasas
Gradilla
Instrumentos.
Microscopio
Agitador de pipetas
Espectofotometro
Centrifuga
Lector de hematocrito
Reactivos.
Liquido de Trk
Etanol al 70%
Liquido de Hayem
Reactivo de Drabkin
Solucin estantard de cianometahemoglobulina

DESARROLLO:
A). Hemoglobina
1. En un tubo de ensaye agregue 4 ml de cianometahemoglobina y
0.02 ml de sangre, agitar cuidadosamente. Reposar 10 minutos y leer
la absorbancia o el % de transmitancia contra el blanco reactivo.
B). cuenta de eritrocitos.
1. Llenar con sangre bien mezclada, la pipeta de Thoma hasta la
marca 0.5
2. Limpiar cuidadosamente la parte externa de la pipeta, completar
con el lquido de Hayem, hasta la marca de 101.

3. Sellar con papel parafilm, agitar durante 3 minutos, mezclar

perfectamente.
4. Colocar el cubrehematimetro sobre la cmara.
5. Descartar las primeras 4-5 gotas de la pipeta y llenar la cmara por
capilaridad por uno de los bordes del cubrehematimetro sobre la
cmara.
6. Dejar reposar de 3-5 minutos., con el objetivo de 40x se cuentan los
eritrocitos contenidos en los 80 cuadros pequeos.
C). Microhematocrito.
1. Se llena con sangre proveniente del tubo de la muestra, las 2/3
partes de dos tubos capilares.
2. El extremo vacio de cierra con la flama o plastilina.
3. Colocar en los canales de centrifuga, con el extremo cerrado
dirigido hacia fuera, centrifugar a 12000 rpm por 5 minutos.
D). Leucocitos.
1. Homogenizar la sangre, con la pipeta de toma para glbulos
blancos, aspirar sangre hasta la marca de 0.5, secar
cuidadosamente la parte superior de la pipeta.
2. Completar con lquido de Trk hasta la marca 11, agitar 2 minutos.
3. Desechar las primeras 4-5 gotas y se carga la cmara de Neubauer.
4. Dejar reposar la cmara con la muestra durante 3 minutos. Observar
al microscopio con el objetivo de 10x.
5. Se cuentan los leucocitos en cada uno de los cuadrados de 1 mm2
de las esquinas de la cmara.
E). Frotis sanguneo.
1. Se coloca un agita de sangre anticoagulada en uno de los extremos
de un portaobjetos, se sujeta colocando pulgar e ndice en extremos
opuestos, con un segundo portaobjetos se toca la gota de sangre y
por capilaridad difunde, en un ngulo de 30 se desliza rpida y
firmemente en la direccin opuesta.
F). Tincin de Wright
1. En el soporte de tincin se coloca el frotis en posicin horizontal

2. Se le aade colorante de Wright, sobre el frotis de manera que

quede todo cubierto con el colorante. Se deja actuar durante 2 min.
3. Agregar sol. Amortiguadora, de manera que se forme una capa
metlica, con una pipeta soplar para que la muestra sea uniforme,
se deja la muestra durante 3-6 minutos.
4. Se lava la tincin con agua corriente y se dejas secar.
G). Tincin de Giemsa.
1. Colocar el frotis en el soporte de tincin, fijar el frotis con metanol de
de 10-20 minutos.
2. Se cubre el frotis con el colorante de Giemsa y 10 ml de
amortiguador de fosfatos por 30 min.
3. Se lava la tincin con agua corriente y el frotis se seca al aire libre.
4. Se observa al microscopio con el objetivo de 40x.
H). ndices eritrocitarios.
Se calculan cada uno de los ndices.

RESULTADOS
Cuenta eritrocitaria
Clculos:

Formula
Nx200x10x400
80

Sustitucin
184x200x10x400
80

Cuenta Eritrocitaria
Valores de Referencia
Hombres
Mujeres
4.5 6.1x106 /mm3
4.0 5.3x106 /mm3

Resultado
1,840,000

Resultado Obtenido
1.84 x106 /mm3

Hematocrito:
Clculos:

Hematocrito
Valores de Referencia
Hombres
Mujeres
40.7 50.3%
36.1 44.3%

Resultado Obtenido
28%

HEMOGLOBINA
Clculos:
Formula
Sustitucin Resultado
Absorbancia x Standard = g/dL 0.23 x 36.7
8.4
Hemoglobina
Valores de Referencia
Hombres
Mujeres
12 18 g/dL
12.1 15.1 g/dL

Resultado Obtenido
8.4 g/dL

CUENTA LEUCOCITARIA
Clculos:
Formula
Sustitucin Resultado
Nx20(dilucin)x10(conc. de altura) 208x20x10
10,400
4
4

Cuenta Leucocitaria
Valores de Referencia
Hombres
Mujeres
4,000 10,000 cel/mm3 4,000 10,000 cel/mm3

Cuenta Diferencial
Clulas
Campos Linfocitos Monocitos Eosinofilos Basofilos
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Total

2
2
1
2
3
2
2
2
2
2
20

1
0
1
0
1
1
0
1
1
2
8

1
1
0
0
1
0
0
0
1
0
4

0
1
0
1
0
1
0
0
1
0
4

Resultado Obtenido
10.4x103 cel/mm3

Neutrofilos
Neutrofilos
segmentados en Banda
4
0
5
1
5
0
4
1
5
0
5
0
5
1
5
0
5
0
5
1
48
4

Valores de Referencia
Clulas
Porcentaje
Neutrofilos Segmentados
50 70%
Neutrofilos en Banda
0 2%
Basofilos
0 2%
Eosinofilos
0 4%
Linfocitos
20 40%
Monocitos
2 10%

Indices eritrocitarios
VCM
(Volumen Corpuscular Medio)
Valores de Referencia
80 100 Fl
Menos de 80 Fl
Mayor de 100Fl

Formula
Hematocrito / Cuenta Eritrocitaria x 10
= Fl

Indica
Anemia Normocitica
Anemia Microcitica
Anemia Macrocitica

Sustitucin
28% / 1.84 x106 /mm3 x
10

Resultado
152.17 Fl

HCM
(Hemoglobina Corpuscular Media)
Valores de Referencia
27 31 Pg
Menor de 27 Pg
Mayor de 31 Pg

Formula
Hemoglobina / Cuenta Eritrocitaria x
10 = Pg

Indica
Anemia Normocromica
Anemia Hipocromica
Anemia Hipercromica

Sustitucin
Resultado
8.4 g/dL / 1.84 x106 /mm3
45.6 Pg
x 10

CHCM
(Concentracin de Hemoglobina Corpuscular Media)
Valor de Referencia
31 36 g/dL

Formula
Sustitucin
Resultado
Hemoglobina / Hematocrito x 100 = g/dL 8.4 g/dL / 28% x 100 30 g/dL