Objetivos:

Conocer los fundamentos, partes bsicas y el manejo general del

espectrofotmetro molecular a fin de obtener resultados confiables.
Reproducir el espectro de absorcin del azul de timol e identificar la longitud de
onda de mxima absorcin.
Aplicar los conocimientos tericos adquiridos para efectuar adecuadamente la
cuantificacin del analito mediante una curva de calibracin.

Introduccin
La medida de la concentracin mediante un mtodo instrumental se basa en la
existencia de una relacin proporcional entre dicha concentracin y la seal
analtica o respuesta que genera un instrumento.
Generalmente esta relacin es lineal, de modo que puede expresarse como:
y =a+bCA
donde CA es la concentracin del analito, y la seal medida, a la ordenada en el
origen y b la pendiente de la recta.
La ecuacin de la recta se obtiene mediante calibracin con disoluciones de
concentracin perfectamente conocida (disoluciones patrn) a partir de la
medida de la seal analtica proporcionada por stas. Los pares de valores
concentracin-seal se ajustan a una recta, a partir de la cual pueden
obtenerse la concentracin del analito en muestras desconocidas.

En general, la etapa de calibracin y la obtencin de la concentracin

de analito en una muestra consta de los siguientes pasos:
Paso 1: Preparacin de los patrones
Paso 2: Obtencin de la relacin seal-concentracin
Paso 3: Uso de la recta de calibrado

Paso 1: Preparacin de los patrones

Se preparan patrones del analito que cubran un intervalo adecuado de
concentraciones, y se mide la seal analtica proporcionada por los mismos.

Disoluciones del analito de concentracin conocida y creciente

Paso 2: Obtencin de la relacin seal-concentracin

Se traza un grfico con las seales frente a la concentracin de analito y se
calcula la recta que "mejor" se ajusta a los datos mediante un ajuste por
mnimos cuadrados. De esta forma se obtiene la pendiente (b) y la ordenada
(a) en el origen que definen la recta.

Grfico seal-concentracin y recta ajustada por mnimos cuadrados

En la actualidad las calculadoras cientficas realizan el ajuste por mnimos cuadrados y, dicho
ajuste, tambin puede realizarse en el ordenador mediante la hoja de clculo EXCEL.
A continuacin se os da una plantilla para el ajuste por mnimos cuadrados mediante la hoja de
clculo EXCEL y dos tutoriales que os ayudarn a utilizar dicha plantilla y la herramienta de
grficos de dicho programa.
Pantilla EXCEL para el ajuste por mnimos cuadrados.
Tutorial 1 que explica como utilizar la plantilla de EXCEL.
Tutorial 2 que explica como utilizar la herramienta grficos de EXCEL para obtener una recta
ajustada por mnimos cuadrados.

Paso 3: Uso de la curva de calibrado

Se mide la seal analtica para las muestras desconocidas y se interpola en la
recta de calibrado para obtener valores de concentracin de analito.

Obtencin de la concentracin de analito en las muestras a partir de la grfica y la recta

Finalmente, para obtener la concentracin de analito en la muestra hay que tener en cuenta en los
clculos las posibles diluciones a las que se ha sometido la muestra para obtener las disoluciones
M1, M2 y M3 de medida.

Material y Reactivos
Material
Matraz aforado
Vaso de precipitado
Pizeta
Celdas
Espectrofotmetro
Agua destilada
NaOH
Azul de Timol

Cantidad
1
1
10
7
2
2
1
2

Observacin
100mL
50mL
10mL
25mL
50mL
100mL

0.5g

Metodologa
1.Se prepararon las siguientes soluciones
NaOH- 0.1M- Se pes 0.5g del reactivo y se afor a 100mL (Sol.A)
Solucin estndar (Stock)- Se pes aproximadamente 20mgde Azul de
Timol se disolvi y se afor a 50 mL con NaOH (Sol.A)
De est solucin se tomaron 5 mL y se afor a 100 mL con agua
destilada.
2.-Para construir la curva de calibracin se prepararon los siguientes sistemas
ver Tabla 1. A partir de la solucin estndar stock. Cada dilucin fue preparada
tomando el volumen indicado y aforando a 10mL.
Tabla1. Preparacin de los sistemas para la curva de calibracin.

Sistema
Sol.proble
ma
Stock Azul
de Timol
(mL)
Aforo
NaOH
0.1M

0
0

1
0

2
0

3
0

4
0

5
0

6
0

7*
V

10

10

10

10

10

10

10

10

*Este sistema es el problema y se prepara de acuerdo a las diluciones propuestas por cada equipo.

3.- Con el sistema ms concentrado de la curva (sistema 6)se efectu el

espectro de Absorcin de Absorbancia del analito (Abs vs ). Para ello se fue
variando la longitud de onda en el equipo de 10 en 10 nm. Los resultados se
muestran en la tabla 2.
4.- Se midi la absorbancia de los sistemas que conforman la curva de
calibracin, iniciando del ms diluido hacia el ms concentrado y al ltimo se
analiz la solucin problema. Los resultados se muestran en la tabla 3.

Resultados
Tabla 2.
Longit
ud de
onda
A
%T
Longit

540

550

560

570

580

590

600

610

620

630

0.8
16
640

0.95
11
650

1.2
7.5
660

1.3
5
670

1.6
3
680

1.8
2
690

2
1
700

1.9
3
710

1.6
3
720

1.05
9

ud de
onda
A
.7
0.45 0.3
0.22 0.21
%T
20
35
50
60
62
SSistema
CConcentracin
Azul de Timol (M)
6
1
8.8298x 10

0.29
51.5

0.33
46.5
%T

0.3

50

0.6

26

0.85

13.5

1.25

1.9

1.5

0.5

32

17.6597x 10

26.4894x 10

35.3192x 10

44.149x 10

52.9788x 10

Problema

0.23 0.26
59
55
A

6
6