I n o c u l a c i n d e V i r u s e n

H u e v o s E m b r i o n a d o s
I.
Introduccin:
Se han utilizado huevos fecundados para cultivar virus durante ms
de1 5 a o s . E l c u l t i v o d e v i r u s g r i p a l e n h u e v o e m b r i o n a d o f u e
e m p l e a d o p o r primera vez por Burnet en 1935, demostrando que el
embrin de pollo es unm e d i o m u y s e n s i b l e p a r a e l a i s l a m i e n t o d e
e s t o s v i r u s , s i e n d o a d e m s u n medio estril y poco costoso. Ha sido
posible cultivar virus de diversos gruposen varias cavidades del huevo
fecundado, o en el propio embrin en desarrollo.Tambin se emplearon
huevos de pato y de ganso para cultivar ciertos virus,pues estos
animales tienen un periodo de incubacin mas prolongado que
elp o l l o ; p e r o c o m o r e g l a , s i g u e u s n d o s e h u e v o d e g a l l i n a d e 6
a 8 das
de i n cu b aci n ap roxi mad ame n te (a ve ce s se u sa hu e vos
d e m a s t i e m p o d e incubacin).Los virus slo pueden reproducirse en
determinadas partes del embrin;por consiguiente, se deben inyectar en la
regin apropiada, P. ej. los
mixovirusc r e c e n b i e n e n l a m e m b r a n a c o r i o a l a n t o i d e a , e n t
a n t o q u e e l v i r u s d e l a parotiditis prefiere la cavidad alantoidea. La
infeccin puede producir una lesiontisular local conocida como pstula, cuyo
aspecto, a menudo, es caracteristicodel virus.El mtodo exacto de
inoculacin y la edad del embrin que se emplea, dependen del virus
problema. P. ej. para aislar en forma primaria el virus de lainfluenza a partir de
material recogido de la garganta, suele inocularse este enl a c a v i d a d
amn i ti ca de e mb ri one s de 7 a 8 d as; pe ro el vi ru s se
d u p l i c a fcilmente en la membrana alantoidea de embriones de 12 a 13 das,
despusde varias resiembras (adaptacin) en el amnios. Los focos
mas utilizadospara la inoculacin, a parte de las cavidades amnitica
y alantoidea, son lamembrana corioalantoidea y el saco vitelino. Algunas
veces, puede inyectarsedirectamente el virus en el embrin
en desarrollo, recurriendo a la inoculacinintravenosa, intraperitoneal
o intracerebral. Una vez que se duplic el virusdentro de las clulas
de las membranas o del embrin, puede liberarse a los lquidos vecinos,
los cuales constituyen entonces una buena fuente de virus. P.ej. el virus de la
influenza, que se duplica en el sistema respiratorio del embriny en las
clulas de la membrana amnitica, pasa al lquido amnitico, que luegopuede
recogerse con una jeringa y aguja. En cambio, otros virus, como p.ej. losde la
viruela y el herpes, que se duplican en la membrana
corioalantoidea,siguen unidos a las clulas en las lesiones o
pstulas que se forman sobre d i c h a m e m b r a n a . A l m o l e r y
d e s h a c e r e n u n a s o l u c i n s a l i n a i s o t n i c a l a s membranas, logran
liberarse estos virus.E n c o n s e c u e n c i a e l c r e c i m i e n t o d e u n v i r u s e n
u n e m b r i n d e p o l l o puede provocar la muerte del embrin (p.ej.
virus de la encefalitis), producir pstulas o placas sobre la membrana
corioalantoidea (como herpes, viruela, vacuna), desarrollar hemaglutininas

en los lquidos o tejidos embrionarios (p.ej.influenza) o desarrollar virus

infectante (p.ej. poliovirus tipo 2).En el caso de los virus herpes y vaccinia,
estos se pueden cuantificar por la tcnica de inoculacin de huevos
embrionados al correlacionar el nmero depstulas contadas con la dilucion
viral inoculada. Actualmente el mtodo preferido para cultivar virus de
influenza aviar esla inoculacin en huevos embrionados libres de patgenos
especficos (SPF) ohuevos negativos a anticuerpos especfi cos (SAN). El
sobrenadante de loscentrifugados de las muestras se inocula en el saco
alantoideo de al menos 5huevos de 9-11 das de incubacin y se incuba
a 35-37C durante 4-7
das.L u e g o l o s h u e v o s c o n e m b r i o n e s m u e r t o s , c u a n d o e s t o o c u
r r a , o l o s q u e q u e d e n a l fi n a l d e l p e r i o d o d e i n c u b a c i n s e
re f ri ge r an a 4 C y el
lquidoa l a n t o i d e o s e c h e q u e a c o n l a p r u e b a d e h e m a g l u t i
n a c i n . S i s e d e t e c t a actividad de hemoaglutinatin hay una
probabilidad alta de la presencia de virus A de influenza o de un
paramixovirus aviar. Los fluidos que den reaccinnegativa deben inocularse al
menos en otro lote de huevos.Entre los lugares de inoculacin tenemos:
Membrana Corioalantoidea:
Se emplean embriones de 10 12 das y l a c a n t i d a d d e i n c u l o e s
d e 0 . 1 0 . 5 m l . A p r o p i a d a e s p e c i a l m e n t e p a r a e l aislamiento y
cultivo de virus variolicos; virus de laringotraqueitis aviar y de
lae n f e r m e d a d d e B e y e r ( P s e u d o r r a b i a ) ; q u e p r o v o c a n
f o c o s o p s t u l a s fcilmente visibles.
Cavidad Alantoidea:
S e e m p l e a n e m b r i o n e s d e 9 1 2 d a s y l a cantidad de
inoculo es de 0.1 0.2 ml. Entre los virus que desarrollan en
ele n d o d e r m o a l a n t o i d e o t e n e m o s : p e s t e , N e w C a s t l e , v i r u s d e l
a bronquitisinfecciosa, encefalitis equina occidental y oriental
Ve n e z u e l a , p a r o t i d i t i s . Ventaja: simplicidad de la inoculacin y toma de
muestra
Cavidad Amnitica:
Se emplean embriones de 7 15 das y la
cantidadd e i n c u l o e s d e 0 . 1 0 . 2 m l . l a e
d a d d e l o s m i s m o s d e p e n d e fundamentalmente del
tipo de virus o del estudio que se realiza.
Saco Vitelino:
Se emplean embriones de 5 8 das de incubacin y la c a n t i d a d d e
inculo es de 0.2 1 ml. Va es sumamente adecuada para
el ai sl ami e n to y cu l ti vo d e l os vi ru s d e en f e rme d ade s ven re a s,
ne u m o n a y r i cke t t s i a s . E l v i t el o e s e mp l e ad o p ar a l a p re p a r a ci
n d e v a c u n a s y c o m o antgeno para reacciones serolgicas de los virus
ya mencionados.
Va Intravenosa:
La membrana corialantoidea est irrigada por vasossanguneos, es
susceptible de inoculacin para casos especiales, virus queocasionan
cambios hematolgicos; por ejemplo, virus de la Leucemia.

Sonempleados embriones de 10 - 15 das y la cantidad de inculo es

de 0.02 -0.05 ml.
Va Intracerebral (embrin):
Se emplea embriones de 8 14
d a s , especfi camente para virus
que producen alteraciones cerebrales: la rabia,herpes, etc; 0.01 0.02
ml.