ENZIMAS

MSc Ana C. Colarossi

Dpto de Bioqumica, Biologa
Molecular y Farmacologa

Introduccin
En los diversos compartimientos celulares transcurre
un gran nmero de reacciones qumicas que
proporcionan a la clula energa y los componentes
necesarios para su mantenimiento.
La vida depende de la existencia de catalizadores
poderosos y especficos

ENZIMAS
Protenas que funcionan como
catalizadores biolgicos
Ribozimas son molculas de
RNA que funcionan como
catalizadores biolgicos

Estructura de las enzimas

Puede estar formada por:

Una cadena peptdica

(estructura terciaria)

Varias cadenas peptdicas:

estructura cuaternaria)

El sitio activo es el sitio unin del sustrato a la enzima y donde

se lleva a cabo la catalisis

Es necesario el arreglo tridimensional adecuado de los

aminocidos que forman la cadena polipeptdica de la enzima
para lograr la actividad funcional correcta

Caractersticas generales de las enzimas

No sufren modificacin al final de la reaccin.
No cambian la constante de equilibrio de una
reaccin qumica.
Son muy especficas.
Aceleran varios ordenes de magnitud mayor con
respecto a la reaccin no catalizada.
Actan en condiciones moderadas de presin y
temperatura.

Incrementos de velocidad
producidos por enzimas

Anhidrasa carbnica
Carboxipeptidasa A
Fosfoglucomutasa
Ureasa

107
1011
1012
1014

Representacin de una reaccin qumica:

Ke

A B
Representacin de la reaccin qumica catalizada por
Ke
una enzima:

S+E P+E

S representa el (los) reactante(s)

(llamado sustrato)
P representa el (los) producto(s)

Reacciones qumicas son reversibles,sin embargo las

enzimas pueden catalizar una reaccin de manera
reversible o irreversible

Ejemplo de reaccin catalizada de manera reversible

por una enzima

LDH
LDH

Ejemplo de reaccin catalizada de manera irreversible por una enzima

Isoenzimas
Las isoenzimas o isozimas son enzimas que
difieren en la secuencia de aminocidos, pero que
catalizan la misma reaccin qumica. Estas enzimas
suelen mostrar diferentes parmetros cinticos , o
propiedades de regulacin diferentes.
La existencia de las isoenzimas permite el ajuste del
metabolismo para satisfacer las necesidades
particulares de un determinado tejido o etapa del
desarrollo.

Muchas enzimas requieren cofactores para su

actividad:
Pueden ser de naturaleza.
Inorgnica
Orgnica (coenzimas)

Trminos relacionados con la accin enzimtica

Apoenzima:
Referido solo a la parte proteica de la enzima

Holoenzima:
Es la protena unido a una coenzima y/o in metlico

Grupo Prosttico:
Componente orgnico unido fuertemente (covalentemente) a la
apoenzima. Es frecuente la confusin entre cofactor y grupo
prosttico, pero la diferencia radica en la fuerza de su unin a la
enzima

Trminos relacionados con la accin enzimtica

Cofactor:
Son molculas orgnicas inorgnicas, cuya presencia es
necesaria para que la enzima sea activa.

a) Iones inorgnicos
Fe2+, Mg2+, Mn2+, Zn2+ etc.
b) Complejos orgnicos (Coenzimas)
Vitaminas hidrosolubles

Nomenclatura
Nombre Trivial: sufijo asa (ej. Ureasa, Hexoquinasa)
Nombre Sistemtico: El nmero de clasificacin es
una serie de 4 dgitos que designan la clase,
subclase,sub-subclase y nmero de orden de la
enzima dentro de la clasificacin internacional que va
precedido por las siglas EC

Nomenclature Committee of the

International Union of Biochemistry and Molecular
Biology (NC-IUBMB)
http://www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/

EC 1
EC 1.4
EC 1.4.1

OXIDOREDUCTASE
Acting on the CH-NH2 group of donors
With NAD+ or NADP+ as acceptor

Examples:
EC 1.4.1.1
EC 1.4.1.2
EC 1.4.1.3
EC 1.4.1.4
EC 1.4.1.5
EC 1.4.1.6
EC 1.4.1.7
EC 1.4.1.8
EC 1.4.1.9
.

alanine dehydrogenase
glutamate dehydrogenase
glutamate dehydrogenase [NAD(P)+]
glutamate dehydrogenase (NADP+)
L-amino-acid dehydrogenase
deleted, included in EC 1.4.4.1
serine 2-dehydrogenase
valine dehydrogenase (NADP+)
leucine dehydrogenase

 Las enzimas son clasificadas por la reaccin que catalizan

1. Oxido-Reductasas

1. Oxido-Reductasas
Peroxidasa.- Utilizan como oxidante H2O en lugar de oxgeno.
Ejm NADH Peroxidasa, citocromo oxidasa
NADH+H+ + H2O2 --------- NAD+ + 2H2O

Catalasa.- Transforma dos molculas de H2O2 en dos molculas de

agua con desprendimiento de oxgeno.
H2O2 + H2O2 ----------2H2O + O2

2. Transferasas
Transfieren grupos funcionales de un donante a un aceptor,
estos grupos funcionales pueden ser un carbono, grupos
aldehdos o cetnicos, fosfatos, aminos etc.
a) Aminotransferasas.- Transfieren grupos aminos de un
aminocido a un alpha ceto cido.
b) Quinasas.- Transferencia de un grupo fosforilo del ATP a
una molcula sustrato.
c) Glucosiltransferasa.- Transferencia de glucosa activada
(UDP-Glucosa) a la cadena creciente de glucogeno.

2. Transferasas

3. Hidrolasas
Catalizan reacciones de hidrlisis

4. Liasas
Enzimas que remueven o agregan los elementos del agua,
amonio o CO2. Ejm descarboxilasas, deshidratasas etc.

5. isomerasas
Catalizan isomerizacin de varios tipos que incluyen:
a) Epimerasas: Catalizan la inversin a nivel del carbono
asimtrico.
b) Mutasas: Hacen la transferencia intramolecular de un grupo
funcional.
c) Interconversion Aldosa-Cetosa
d) Interconversin de Cis-Trans

5. isomerasas

6. Ligasas
Formacin de enlaces con ruptura de enlaces de alta energa
(ATP)

Modelo de la llave y cerradura

E y S tienen forma
complementaria

Modelo del
sitio
inducido

II.CINETICA ENZIMATICA
Estudia la velocidad de las reacciones
catalizadas enzimticamente
Los principios generales de las
reacciones
qumicas
se
aplican
tambin a las reacciones enzimticas

Definicin de la velocidad de reaccin

V= -d[S] = d[P]
dt
dt

Conceptos bsicos de cintica qumica

Las reacciones qumicas se clasifican en:
Monomoleculares, bimoleculares y trimoleculares
segn el nmero de reaccionantes sea uno, dos o
tres.
A
P
A+B P
A+B+C P
Las reacciones qumicas tambin se clasifican en:
reacciones de orden cero, primer orden, segundo
orden y tercer orden dependiendo de cmo la
velocidad de reaccin es influenciada por la
concentracin de los reaccionantes. V= -d[S] =d[P]
dt
dt

Conceptos bsicos de cintica qumica

En una reaccin de orden cero, la velocidad de
formacin del producto es independiente de la
concentracin de sustrato: v = k
En una reaccin de primer orden la velocidad de
formacin de los productos es directamente
proporcional a la concentracin del sustrato: v = k [A]
Una reaccin de segundo orden es aquella en la que la
velocidad de formacin del producto depende
de la concentracin de dos sustratos (como en
una reaccin de condensacin): v = k [A1] [A2]
del cuadrado de la concentracin de un nico
sustrato (reaccin de dimerizacin): v = k [A]2

Factores que afectan la velocidad de

una reaccin enzimtica
1.
2.
3.
4.
5.

Concentracin de Enzima
Concentracin de sustrato
pH
Temperatura
Presencia de Inhibidores

Factores que afectan la velocidad de

una reaccin enzimtica
1. Concentracin de Enzima

2. Concentracin de sustrato

Modelo Cintico de
Michaelis - Menten
La derivacin de la ecuacin se basa en:
1) que la concentracin de S es mayor que la
concentracin de E
2) La concentracin de Producto al inicio de la
reaccin es insignificante
3) el paso limitante de la velocidad es la
transformacin de ES a E+P

Se puede asumir:
En equilibrio rpido:

En estado estacionario:

En equilibrio rpido:
Ks= K2 = [E] [S]
K1
[ ES]

[ES ] = [E][S]/Ks

Si vo=k3 [ES]

Vo = k3 [ES]
[E]t [E]+ [ES

Si k3 [E]t = Vmax

Vo =
Vmax

Vo =
Vmax

Vo =
Vmax

Vo

[E][S]/Ks
[E]+ [E][S]/Ks
Vmax [S]
Ks + [S]

[ES]
[E]+ [ES]
[S]/Ks
1 + [S]/Ks

En estado estacionario:
K1 [E] [S] = k2 [ES] + K3 [ES]

[ES] =K1 [E] [S]

(k2 + K3 )

Si vo=k3 [ES]

Vo = k3 [ES]
[E]t [E]+ [ES

Si k3 [E]t = Vmax

Vo =
Vmax

Vo = K1 [E][S]/(k2 + K3 )
Vmax [E]+ K1 [E][S]/(k2 + K3 )

Vo =
Vmax

Vo

Km=

Vmax [S]
Km + [S]

[ES]
[E]+ [ES]
[S]/Km
1 + [S]/Km
(k2 + K3 )
K1

Estado estacionario: La concentracion del complejo ES se

Mantiene constante en el tiempo

Ecuacin de la velocidad de una reaccin enzimtica

Por qu determinar Km?

Km es una medida de la afinidad de la enzima por
el sustrato cuando k3<k2. Km=(k 2+k3)/k1
Km establece un valor aprox. para el valor
intracelular de sustrato
Km es constante para una enzima dada, permite
comparar enzimas de diferentes organismos o
tejidos o entre distintas protenas
Un cambio en el valor de Km es un modo de
regular la enzima

Kcat/ Km es una medida de la eficiencia cataltica

K3 = k cat

Vmax = Kcat Et

Kcat=Vmax/Et Nmero de recambio

Tomando las inversas de la ecuacin de velocidad, tenemos:

Plot de Lineweaber-Burk

3. pH del medio

3. Efecto del pH del medio

El sitio activo de la enzima esta frecuentemente
compuesto de grupos ionizables que deben estar en
la forma inica adecuada para mantener la
conformacin, unir los sustratos o catalizar la
reaccin.
La actividad de la enzima debe ser medida al pH
ptimo

4. Efecto de la Temperatura
A medida que aumenta la temperatura por lo general
aumenta la actividad catalitica dentro del margen de
estabilidad de la enzima

Ecuacin de Arrhenius:

log k= -Ea 1 + log A

2.3RT T

La forma integrada:

log k2 = Ea T2-T1
k1 2.3R T2T1
Ea = 2.3RT2T1 log k2
T2-T1
k1
Ea = 2.3RT2T1 log Q10
10