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9 Norte 2212 Col. Humboldt Puebla, Pue.

TCNICAS PARA EL RECUENTO DE BACTERIAS

Resultados
Muestra de agua de la red
24 horas de incubacin
Presencia de bacterias mesoflicas aerobias

Prueba presuntiva de coliformes

Medio:Caldo nutritivo

Medio: caldo lactosado sin inhibidores

Positiva:

hay

presencia

de

bacterias

Positiva: Hay turbidez y presencia de gas

mesoflicas

en cada uno de los tubos, aunque la

Caja no contable: presencia de ms de 250

proporcin de gas es diferente en cada

colonias de bacterias en la muestra de

uno.

agua

En el tubo 1 marcado con SSG se present

Valor fuera de rango

muy poca cantidad de gas, solo unas

burbujas pequeas
En el tubo 2 se present una cantidad de
gas casi igual a la del tubo 1
En el tubo 3 hubo una cantidad de gas
mucho mayor

Valor fuera de rango

Valores de referencia segn la NOM-127-SSA1-1994
Lmite mximo permisible de bacterias

Lmite mximo permisible de coliformes

mesoflicas aerobias:

fecales:
CERO UFC/ mL

Debido a que se trataba de una caja no contable se utiliz el siguiente

mtodo:
Promedio de las colonias presentes en 10 cuadros de

Sacando el nmero

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1cm2

total de colonias en

60+100+97+90+79+77+68+72+67+56=766

766
=76.6
10

toda la placa
76.6 X 56 = 4289.6

Resultado: 4289.6 UFC/mL

Unidades formadoras de colonias, 4289.6 colonias UFC/mL, de bacterias

aerobias en placa agar para cuenta estndar, incubadas 24 horas a 45 C.

Muestra de agua de la red

48 horas de incubacin
Presencia de bacterias

mesoflicas

aerobias

Prueba confirmativa de coliformes

Medio: bilis-verde brillante

Medio: caldo nutritivo

Positiva: Hay presencia de bacterias

Positiva para coliformes: Presencia de

mesoflicas

gas en los tubos.

Caja no contable: presencia de ms

El gas difiere en cantidad de tubo a tubo.

de 250 colonias de bacterias

Despus

de

24

horas

ms

de

incubacin se increment el nmero

de colonias de bacterias mesoflicas
Valores de referencia segn la NOM-127-SSA1-1994
Lmite mximo permisible de bacterias Lmite mximo permisible de coliformes
mesoflicas aerobias:

fecales:

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CERO UFC/ mL

Debido a que se trataba de una caja no contable se utiliz el siguiente

mtodo:
Promedio de las colonias presentes en 10 cuadros de 1cm 2

Sacando

el

total

colonias

de

nmero
en

toda la placa
103+96+97+100+112+120+99+132+110+94=1063

106.3 X 56 = 5952.8
1063
=106.3
10

Resultado: 5952.8 UFC/mL

Unidades formadoras de colonias, 5952.8 colonias UFC/mL, de bacterias

aerobias en placa agar para cuenta estndar, incubadas 48 horas a 45 C.

Nmero de UFC encontradas en las placas sembradas en las diferentes

diluciones:

No se hizo dilucin alguna debido a que las condiciones en que se obtuvo la

muestra tericamente indican que la cantidad de bacterias a obtener es menor de
100 bacterias mesoflicas por mililitro de agua, dicho esto se esperara que la
placa fuera contable. Sin embargo, despus de las primeras 24 horas de
incubacin se encontr una cantidad de bacterias mesoflicas fuera de rango,
superando la cantidad de bacterias permitidas en la NOM

Placa representativa y nmero de dilucin:

La placa obtenida a las 24 horas de incubacin

Nmero de UFC/mL presente en la muestra:

Para cuantificar la cantidad de bacterias presentes en la muestra se utliz el

mtodo siguiente:
60+100+97+90+79+77+68+72+67+56= 766/10=76.6 X 56 = 4289.6 colonias
Evaluacin a cerca de la muestra de agua:
Dado que las unidades formadoras de colonias se encuentran por encima del
rango establecido en la NOM-127-SSA1-1994 se puede ver que la calidad del
agua no es la mejor, lo cual nos puede indicar que el agua pudo contaminarse a

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travs de una conexin cruzada, por una rotura de las tuberas del sistema de
distribucin o por conexiones y reservorios domiciliarios defectuosos, adems de
ausencia o irregular mantenimiento de dichas instalaciones facilitando el ingreso y
proliferacin de microorganismos. Sin embargo esto tambin nos indica que
existen factores secundarios que permiten el crecimiento de microorganismos en
el agua dentro de los sistemas de distribucin y almacenamiento, ya que las
bacterias normalmente tenderan a morir en el agua ya que no hay una fuente de
nitrgeno ni de carbono en el agua, en pocas palabras reflejan la exposicin de la
muestra a la contaminacin en general.
Sin embargo, la presencia de coliformes fecales, nos dice que hay una fuente de
contaminacin reciente y que la eficacia del tratamiento del agua no es bueno.
Cabe destacar que algunas coliformes se encuentran en grandes cantidades en el
ambiente y no estn asociadas necesariamente con la contaminacin fecal y no
plantean ni representan un riesgo evidente para la salud. La presencia de
coliformes fecales nos dice que tenemos un agua orgnicamente enriquecida por
ejemplo debido a un entrecruzamiento con efluentes industriales o de materias
vegetales y suelos en descoposicicin.
Debido a esto se puede pensar que debido a la forma en la que fue tomada la
muestra (directamente de donde cae el agua para llenar la cisterna) las tuberas
que abastecen el agua se encuentran en condiciones ideales para la entrada y
proliferacin

de

microorganismos

que

probablemente

la

fuente

de

contamionacin de coliformes se encuentre en el sistema de tuberas pudiendo

provenir del entrecruzamiento con efluentes industriales o de un agujero que
permita la entrada de microorganimos y que toda la colonia o toda la seccin que
es abastecida tenga agua de poca calidad que realmente no se puede considerar
potable.

Observaciones

Para tomar la muestra es necesario tomarla directamente de donde se

abastece y no hablar para evitar la contaminacin de la muestra, as mismo

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es importante que la bolsa o recipiente en el que se guarde la muestra se

encuentre libre de contaminantes.

Antes de hacer el vaciado en placa se debe agitar 25 veces en un ngulo

de 30 cm aproximadamente
Se desinfect la mesa antes de trabajar con la muestra para evitar en lo
posible la contaminacin de la placa debido al polvo u otros factores

externos.
Se aplic en mtodo de trabajo establecido en la NMX-F-286 haciendo girar
la placa 6 veces a la izquierda, 6 veces a la derecha, 6 veces hacia arriba y
6 veces hacia los lados sobre una superficie lisa y horizontal hasta lograr
una completa incorporacin del inoculo en el medio, cuidando que el medio

no mojara la cubierta de las cajas. Dejndolo solidificar posteriormente.

Para llevar a cabo el procedimiento para verificar la presencia de coliformes

se llevan a cabo tres pruebas.

La presuntiva
La confirmativa
La completa
Aunque se pens que se obtendra una caja contable debido a los limites
de coliformes y bacterias mesoflicas presentes en el agua que establece la
NOM-127-SSA1-1994, la calidad del agua era poca por lo que la placa se
volvi no contable

Cuestionario
1.- Investiga las tcnicas que existen para el conteo total de microorganismos e
indica su fundamento.

Consiste en el plaqueo de una muestra de volumen conocido del alimento que

serie de factores como son el mtodo de muestreo, el tipo de microorganism

Contaje en placa

del medio de cultivo. Los cultivos pueden hacerse tanto en masa como en sup

cultivos en masa son letales para la flora psicotrofa. Cada bacteria viable form

en una placa normal o por medio de un plaqueador en espiral que va depos

Filtros de membrana

ms diludas de la muestra
utilizados cuando el nmero de bacterias es bajo. Son filtros con un poro de 0

un volumen dado y se coloca el filtro sobre una placa del medio de cultivo a
procesada para epifluorescencia previamente, lo que facilita el recuento (la

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naranja de acridina que tie especficamente los c

DEFT son las iniciales en ingls de Direct Epifluorescence Filter Technique (t

En esta tcnica las bacterias se filtran para retenerlas en una membrana apro

agente fluorescente (como la naranja de acridina) para teir las clulas b

Microcolonias en DEFT

tratamiento previo con detergentes para destruir las clulas somticas). La

hacerse mediante microscopa de fluorescencia o por cualquier otro mtodo d

Contaje de microcolonias al
microscopio

casos, las membranas se incuban para producir colonias que so

Se aade un pequeo volumen de agar-cultivo a un porta y se incuba para
microscopio.
Se hacen diluciones de la muestra (solucin madre) y se depositan gotitas de

Gotitas de agar

+ agar). Se examina el crecimiento de las colonias en las g

Son pelculas deshidratadas de medios de cultivos generales o selectivos en l

Films secos (petrifilm)

Mtodo del nmero ms probable
Mtodos basados en la reduccin
de colorante

rehidrata el medio. Tras la incubacin se hace

Basado en series de diluciones y clculo estadstico del nmero de bacterias

puede hacer con 3 5 tubos. El mtodo es popular au

Usando azul de metileno o resazurina. Colorantes reducidos por las bacteria

medible. Usado en medios lquidos (lct

son tubos hermticamente cerrados en los que hacindolos girar se forma un

Tubos rodantes

de anaerobios

Contaje microscopio directo

Usando cmaras de cuenta, se coloca un volumen determinado

2.- Qu ventajas e inconvenientes presenta el mtodo utilizado en la prctica?

Ventajas

D
Requiere bastan

Las bacterias crece

La tcnica es rpida

En medios diferenciales las

Es una tcnica barata

superficie no son adec

Mide el nmero de clulas viables

Uniformidad en la ex

Microorganismos sensibles al calor pueden reasultar daados por

el agar fundido

Estos mtodos se basan e

los micro

Se requiere de poco material

Se emplean medios de cul

Se requiere de poca cantidad de muestra

y diferenciales dependiendo

No pretende poner en ev

3.- Escribe 3 ejemplos donde se aplique este procedimiento.

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En el conteo de

la comunidad microbiana en suelos la cual es

importante por su relacin con la fertilidad del suelo y con los ciclos

biogeoqumicos de los elementos

Tiene una posibilidad de uso potencial de los miembros especficos para

aplicaciones ambientales e industriales.

Esta tcnica puede aplicarse para la estimacin de microorganismos
viables en una amplia variedad de alimentos.

4.- Por qu es necesario hacer diluciones en esta tcnica?

Se emplean soluciones diluidas o diluciones de una muestra concentrada para
que cada colonia formada provenga de un solo microorganismo aunque
algunas agrupaciones no pueden ser separadas por las diluciones. Se utilizan
principalmente para la cuantificacin de bacterias, levaduras y hongos
filamentosos. Se sigue sta tcnica cuando la muestra contiene tantos
microorganismos que la dilucin no se puede realizar en una sola etapa.
5.- Cul es el criterio para seleccionar la placa representativa?
Se consideran representativas las cajas que tienen un nmero de colonias
dentro del rango de sensibilidad del mtodo, en este caso, entre 25 y 250 UFC.

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P.L.F. Sandra Snchez Gmez