FACULTAD DE INGENIERIA

ESCUELA DE INGENIERA AGROINDUSTRIAL Y COMERCIO

EXTERIOR
ESPECTROFOTOMETRIA
CURSO:
Analisis de productos agroindustriales
DOCENTE:
Ing. Sandra Pagador
ALUMNA:
Fiorella Hernandez Ynguil
CICLO:
V
FECHA:
31-05-16

Trujillo Per
2016

LABORATORIO N10: ESPECTROFOTOMETRIA

I.

II.

OBJETIVOS
- Graficar el espectro de pigmentos naturales.
- Determinar la longitud de onda de mxima absorbancia de
una solucin.
FUNDAMENTOS TERICOS:
La Espectrofotometra es una de las tcnicas experimentales
ms utilizadas para la deteccin especfica de molculas. Se
caracteriza por su precisin, sensibilidad y su aplicabilidad a
molculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomolculas,
etc)

estado

de

agregacin

(slido,

lquido,

gas).

Los

fundamentos fsico-qumicos de la espectrofotometra son

relativamente sencillos.
Las molculas pueden absorber energa luminosa y almacenarla
en forma de energa interna. Esto permite que se inicien ciclos
vitales de muchos organismos, entre ellos el de la fotosntesis
en plantas y bacterias. La Mecnica Cuntica nos dice que la luz
est compuesta de fotones cada uno de los cules tiene una
energa:

donde c es la velocidad de la luz, es su frecuencia, su

longitud de onda y h= 6.6 10-34 Js es la constante de Planck.
Cuando decimos que una sustancia qumica absorbe luz de
longitud de onda , esto significa que las molculas de esa
sustancia absorben fotones de esa longitud de onda.
En esta prctica estudiaremos la absorcin de luz en el
ultravioleta cercano (325-420 nm) y en el visible (420-900
nm). Cuando una molcula absorbe un fotn en este intervalo
espectral, se excita pasando un electrn de un orbital del

estado fundamental a un orbital excitado de energa superior.

De est manera la molcula almacena la energa del fotn:

Como la energa se conserva, la diferencia de energa entre el

estado fundamental de la molcula (A) y su estado excitado
(A*) debe ser exactamente igual a la energa del fotn. Es decir,
una molcula slo puede absorber fotones cuya energa h sea
igual a la energa de un estado molecular excitado. Cada
molcula tiene una serie de estados excitados discretos (o
bandas) que dependen de su estructura electrnica y que la
distinguen del resto de molculas. Como consecuencia, el
espectro de absorcin, es decir, la luz absorbida en funcin de
la longitud de onda, constituye una verdadera seal de
identidad de cada sustancia o molcula.
Cuando dos o ms sustancias aparecen mezcladas en una
misma

muestra

sus

espectros

de

absorcin

aparecen

superpuestos tal como se representa en la siguiente figura:

Figura 1. Espectros de absorcin de A y B

Los espectros de absorcin se miden mediante un instrumento
denominado espectrmetro. Los instrumentos que vamos a

usar en esta prctica constan de una fuente de luz blanca

caracterizada por un espectro de emisin continuo en un
intervalo amplio de longitudes de onda (en nuestro caso 325
nm-900 nm) y de un monocromador que acta como filtro
ptico transmitiendo un haz de luz de longitud de onda fija e
intensidad I0. Este haz de luz penetra en la cubeta de anlisis
donde se encuentra la muestra. Un detector sensible a la luz
mide la intensidad del haz a la salida If.

La intensidad del haz de luz se va atenuando a medida que

atraviesa la cubeta debido a la absorcin de las molculas de la
muestra. El ritmo de absorcin depende de la intensidad inicial
de luz y de la concentracin de molculas. De esta manera,
cuando un haz de luz de intensidad I recorre una distancia dL
en una muestra con una concentracin de molculas [B], se
produce una atenuacin de intensidad dI dada por:

La constante k se denomina coeficiente de absortividad molar.

La expresin anterior se puede integrar de la siguiente forma:

lo cual da lugar a la ley de Beer-Lambert 1 para la absorcin

que relaciona la intensidad a la salida e la muestra If, con la

intensidad inicial I0, la concentracin de molculas y la

distancia recorrida por la luz en la muestra, L:

El espectrofotmetro, en lugar de la intensidad, mide la

absorbancia A que se define por:

La utilizacin de la absorbancia al realizar los espectros tiene la

ventaja de ser directamente proporcional a la concentracin de
III.

molculas en la muestra.
MATERIALES Y MTODOS:

Materiales:
-Materia prima vegetal
- 100 mL de

- 8 beakers 250

acetona
-

mL
- 4 embudos
- 4 probetas 10

Espectrofotmetro
- 1 centrfuga
- 24 tubos de
ensayo
- 4 pizetas con
agua destilada
- 4 morteros
- 8 pipetas 10 mL
- 8 pipetas 5 mL

mL
- 4 matraces 250
mL
- 4 esptulas
- 4 cuchillos
- 4 tablas de picar
- 1 licuadora
- Papel filtro
- Papel toalla

Mtodos:
Extraccin de Pigmentos
Se pes 1 g de hojas de perejil y se machac en un mortero

hasta obtener una pasta homognea.

Se aadi 10 mL de acetona y se filtr a travs de papel

filtro (humedecido con acetona y escurrido).

Se repiti la extraccin en dos ocasiones ms con 5 mL de

acetona en cada caso.

Se trasvas el sobrenadante a una probeta para determinar

el volumen final del extracto.

Se centrifug el filtrado durante 5 min para separar las

partculas en suspensin.
Se tom 1 mL del sobrenadante en un tubo de ensayo
S aadi 4 mL de acetona y medir la absorbancia a

diferentes longitudes de onda

Curva Espectral
Se midi la absorbancia de la solucin de pigmentos a

diferentes longitudes de onda

Despus de cada medicin se calibr el espectrofotmetro.
Se grafic absorbancia vs. Longitud de onda.
Se seleccino la longitud de onda de mxima absorbancia.
Se eligi la Longitud de Onda ms alta o de mxima
absorcin, ya que con ello se consigue una sensibilidad
mxima y se hace menor la posibilidad de cometer errores
resultantes de la inadecuada posicin del monocromador.

IV.

RESULTADOS Y DISCUSIONES:
Cuadro 1. Datos curva espectral
MUESTRA: APIO
Absorbancia
Longitud de
(A)
0.890
0.428
0.298
0.333

Onda ()
500
510
520
530

0.338

540

Grafico 1. Curva espectral del apio entre la A y la longitud de

onda
Discusiones:
- Se realiz

la

medicin

de

la

absorbancia

en

el

espectrofotmetro de absorcin de luz uv-visible a la

muestra del alimento del Apio, se tomaron 5 mediciones y
se grafic. En este caso se tomo en cuenta el punto ms
alto, y segn la grfica 1 nos indica que el punto mas alto
para el apio es 0.890 A a 500nm mostrando su espectro en
la regin verde, mismo color del compuesto que era verde. Y
su punto ms bajo a 0.298A en una longitud de 520nm.
Segn

Diaz

dice:

El

espectro

de

absorcin

es

una

representacin grfica que indica cantidad de luz absorbida

() a diferentes valores de . En la regin visible apreciamos
el color visible de una solucin y que corresponde a las
longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe. El
color que absorbe es el complementario del color que
transmite. Por tanto, para realizar mediciones de absorcin
es necesario utilizar la longitud de onda en la que absorbe
luz la solucin coloreada. La cual en la experiencia que se

hizo en el laboratorio
se cumpli con lo que
describi el autor.
V.

BIBLIOGRAFA:
Se logr graficar el
espectro de pigmentos
naturales.
Se logr determinar
la longitud de onda de
mxima absorbancia de

VI.
-

una solucin.
REFERENCIAS

BIBLIOGRFICAS
Daz Abril, Espectrofometra: Espectros de absorcin y
cuantificacin colorimtrica de biomolculas, departamento
de bioqumica, cordova, 2011.

ANEXOS: