Distribucin de Organelos

Citoplasmticos y trfico de molculas

Retculo endoplsmico y sntesis

de protenas asociadas a
membranas
(Repasar clase de transcripcin y traduccin)

Recordatorio RE
Es una red membranosa en forma de laberinto que
ocupa gran parte del citosol (ms de la mitad del sist.
membranoso celular total). Est constitudo por sacos,
cisternas y tubos, que estn interconectados entre s.
RER: RE rugoso, cercano al ncleo, con ribosomas
sntesis de prots:
de transmb: > destinadas a mb plasmtica y de otros
organelos
Solubles: se translocan completamente al lumen del RE y
son >% destinadas al lumen de otro organelo o de
secrecin.

REL: RE liso, continuacin del RER, sin ribosomas

sntesis de lpidos

Brevemente: secuencia en la sntesis,

anclaje y translocacin de una protena al
lumen del RE

Voet & Voet 2 Ed

Plegamiento de las protenas en el lumen del RE

.
Una de las ms importantes protenas chaperonas (ayudan a mantener desplegada la
prot) del RE de la familia de las Hsp 70 (heat shock proteins) es BiP (binding protein).

BiP se une a la protena no plegada apenas sta cruza la membrana y luego media el

plegamiento y ensamblaje de las protenas formadas por mltiples subunidades dentro del
RE.

BiP presenta afinidad por regiones hidrofbicas expuestas e hidroliza ATP uniendo y
liberando la protena en cada ciclo de hidrlisis.

Glicosilacin de unin-N
Las protenas del retculo son modificadas por la adicin de
azcares (glicosilacin) a la cadena lateral de residuos
Asparragina dentro de una secuencias especfica de AsN-XSer/Thr . Debido a que la glicosilacin ocurre en el grupo
NH2 esto se llama glicosilacin de unin-N o N-Glicosilacin.

enlace glicosidico

unin-N
Por oligosacaril-transferasa
en el interior del RE

No es cualquier Asparragina (Asn) sino una secuencia consenso de Asn-X-Ser/Thr

Si no se remueven las 3 molculas de glucosa y una manosa, la protena no puede
ser exportada hacia el aparato de Golgi

Primera importancia de la Glicosilacin: Control de Calidad

Figure 12-53 Molecular Biology of the Cell (

Garland Science 2008)

Primera importancia de la Glicosilacin: Control de Calidad

Figure 12-53 Molecular Biology of the Cell (

Garland Science 2008)

No todos los dominios de las protenas adquieren su estructura correcta de manera

autnoma. Muchos necesitan apoyo de protenas chaperonas.
La unin de Calnexina y Calreticulina (chaperonas) permite que las protenas
adquieran su conformacin correcta.
La glucosil-transferasa evala la condicin de las protenas y, si estn mal plegadas, le
adiciona una glucosa a su rbol de glicosilaciones, devolvindole la afinidad por las
chaperonas.
Pese a esto, hasta un 80% de los polipptidos de algunas protenas terminan mal
estructurados (por ejemplo: hoja en lugar de helix). Estas protenas son dislocadas al
citoplasma, ubiquitinadas y degradadas por el proteosoma.

Formacin de enlaces disulfuro.

La formacin de los enlaces disulfuro, S-S, entre las cadenas laterales de los residuos
cistena es un importante aspecto del plegamiento de protenas en el RE.
Estos enlaces no se forman en el citosol ya que posee un ambiente reductor que
mantiene los residuos cistena en su estado reducido (R-SH). En el RE el ambiente es ms
oxidante lo que facilita la formacin de estos enlaces.
La formacin de enlaces disulfuro es catalizada por la enzima protena disulfuro isomerasa
(PDI) localizada en el lumen del RE.

El ensamblaje de subunidades en protenas multimricas ocurre en el RE.

Muchas protenas de membrana y secretadas estn constituidas de dos o ms
cadenas polipeptdicas (o subunidades). En todos los casos son ensambladas en el RE.
Ejemplos: inmunoglobulinas, que contienen dos cadenas pesadas y dos livianas todas
unidas por puentes S - S.

Papel de la glicosilacin en las protenas

Los oligosacridos pueden jugar variadas funciones segn la protena.
1.- Pueden hacer a la protena ms resistente a la digestin por proteasas
2.- Ayudar en el proceso de plegamiento en el ER.
3.- Guiar la protena al organelo de destinacin, sirviendo de seal para el empacamiento
de la protena en la vescula apropiada.
4.- Muchos oligosacridos se exponen en la superficie celular formando la capa de
carbohidratos y pueden funcionar en el reconocimiento entre las clulas.

Thy-l: precursor de glicoprotena de membrana

Trfico Vesicular

En verde: ruta endoctica

En rojo: ruta biosinttica-secretora
En azul: rutas de retorno

Aparato de Golgi

Qu es?
Dnde est?
Cul es su funcin?
Cmo llegan a l las protenas del RE?

Qu es?
Consiste en una serie de sacos aplanados o cisternas formando pilas.
Cada pila consiste de 3 a 6 cisternas y su nmero depende del tipo
de clula.
Est compartimentalizado en tres regiones: cis, medial y trans.

Alberts et al, 2002

Dnde se ubica?
En clulas animales muchas pilas estn unidas por conexiones tubulares entre
ellas formando un solo complejo.
El aparato de Golgi se ubica cerca del ncleo y en clulas animales vecino al
centrosoma.
En las clulas vegetales pueden existir hasta cientos de estos apilamientos
normalmente dispersos en el citoplasma.

Cmo est conformado?

Cada pila de Golgi tiene dos caras: una de entrada o cis, adyacente al
RE y una de salida o trans, dirigida hacia la MP.
La cisterna ms externa de cada cara est comunicada a una red de
tbulos y vesculas interconectados: la red Golgi cis (CGN), y la red
Golgi trans (TGN).
RE

MP

Alberts et al, 2002

Funcin
Procesar y empacar macromolculas (lpidos,
protenas) antes de que ellas sean enviadas a
su destino. (Ppal. Glicosilacin de protenas)
Modificaciones de N-glicosilacin: continuacin
del procesamiento realizado en RE. Se eliminan
grupos de manosas, y se agregan otros
azcares como galactosa, fucosa, Nacetilglucosamina y c. Silico.
Modificaciones de O-glicosilacin.

O-glicosilacin
Generalmente serina y treonina unen directamente Nacetilgalactosamina a la que se pueden agregar otros
azcares, de uno a la vez, y son catalizada por
diferentes glicosiltransferasas. El proceso comienza en
el Golgi cis y finaliza en el trans (no requiere la
secuencia aminoacdica Asn-X-Ser/Thr)
Los oligosacridos de unin-O son generalmente cortos
(1 a 4 residuos de azcares).

Ruta Biosinttica secretora: protenas van desde RE a membrana plasmtica,

o mediante endosomas tardos a los lisosomas.
Ruta Endoctica, las molculas son ingeridas y trasladadas a endosomas
tempranos y va endosomas tardos van a los lisosomas
Rutas de Recuperacin (de retorno)

Existen 3 tipos de vesculas recubiertas:

Vesculas recubiertas por clatrina
Vesculas recubiertas por COPI (coatmero)
Vesculas recubiertas por COPII (coatmero)

Donde:
Transporte desde A. de Golgi y M. Plasmtica
b. y c. Transporte desde RE y desde cisternas del A. de Golgi
Figure 13-4 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Vesculas recubiertas y Transporte Vesicular.

Figure 13-5 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Ensamblaje de las Vesculas recubiertas por Clatrina.

Subunidad de clatrina
Triskelion

Protenas Adaptadoras se unen a Protenas de Transmembrana, que capturan

molculas solubles (cargo)

Ensamblaje y Desensamblaje de la Cubierta de Clatrina.

Una vez que la vescula se ha formado se pierde la cubierta de clatrina.

Figure 13-9 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Formacin de una Vescula recubierta por COPII

Protena Sar-GTP: se une a membrana y recluta a las protenas de cubierta.

Figure 13-13d Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Las vesculas yemadas del RE se funden formando estructuras llamadas agrupaciones

tbulo vesiculares. Estas estructuras se movilizan hacia el Golgi cis a travs de
microtbulos y en su camino van yemando vesculas cubiertas de protenas (no
clatrina): COPI.
Estas vesculas regresan al RE protenas residentes en el RE (i.e. BiP) que han escapado
y otras que participan en la yemacin del organelo.
Alberts et al, 2002

SNAREs: guan el Transporte Vesicular.

V-SNAREs y t-SNAREs:
SNAREs permiten un acoplamiento y fusin selectivos.
v-SNAREs son empacadas junto a las protenas de cubierta durante la formacin
de la vescula (membrana donante). Se unen a las t-SNAREs complementarias en
la membrana blanco.
Protenas Rab: GTPasas de destinacin vesicular, ayudan a controlar la fusin de v
y t-SNAREs.

Formacin y destinamiento de vesculas del Aparato de Golgi

Este mecanismo es utilizado en la sinapsis neuronal

para la liberacin de vesculas cargadas con
neurotransmisores

Las GTPasas Rab son de gran importancia en el reconocimiento inicial de

la membrana blanco, de manera similar a v-snare y las t-snare
determinan la especificidad de la direccin de la vescula.

Figure 13-14 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

REPASO!!!
Transporte desde RE a Golgi

Todo el transporte posterior a RE ocurre mediante vesculas (ocurren ciclos de

yemacin y fusin).
Las protenas abandonan el RE en vesculas recubiertas por COPII.
-> Slo las protenas plegadas correctamente abandonan el RE.

Organizacin y transporte de protenas en las cisternas del Golgi

Modelos para explicar la mantencin de la estructura polarizada del Golgi y la movilizacin de las
protenas de un compartimento a otro.
Modelo de transporte vesicular: las cisternas son estructuras estticas y las protenas en trnsito
se transportan en vesculas COP-I que yeman de un compartimento y se funden con el siguiente. El
flujo retrogado se hara tambin a travs de vesculas COP-I.
Modelo de maduracin de las cisternas : Las cistenas son estructuras dinmicas que maduran a
medida que se movilizan al travs de la pila. La compartimentalizacin de las enzimas del Golgi se
hara por flujo retrgrado en vesculas COP-I.
Alberts et al, 2002

Compartimentalizacin funcional del

Aparato de Golgi .
Las cisternas del Golgi estn organizadas
en una serie de compartimentos de
procesamiento: red Golgi cis, cisternas
cis, cisternas mediales, cisternas trans,
red Golgi trans.
Durante su paso a travs del Golgi las
protenas
sufren
posteriores
modificaciones covalentes de las
cadenas de oligosacridos en estos
compartimentos.
En las clulas vegetales el aparato de
Golgi adems est involucrado en la
sntesis del los polisacridos complejos
de la pared celular.

REPASO!!!
Protenas que son residentes del RE y se escapan al cis Golgi son devueltas por
transporte vesicular.
Un R de membrana del cis Golgi las captura y regresa (reconocen la seal de
retencin de RE).

Si se elimina la seal la protena es secretada (y a la inversa).

Recordemos:
Modificacin de los Oligosacridos unidos a Protenas (N-linked) ocurre en
el Ap. Golgi

Oligosacrido complejo

Oligosacrido con alto contenido de manosa

Oligosacridos aadidos en el A. de Golgi

Transporte desde la Red Trans Golgi hacia los Lisosomas

Todas las protenas llegan hasta la zona trans para ser destinadas (con excepcin
de las protenas residentes permanentes del A. de Golgi)

Lisosomas: organelo donde ocurre digestin intracelular

Los lisosomas contienen hidrolasas cidas o enzima hidrolticas (digieren desechos

intra y extracelulares, microorganismos fagocitados, entre otros).
En su membrana hay protenas de transporte para que salgan: azcares,
nucletidos, aminocidos (para excrecin o re-utilizacin).
Adems estn las bombas de H+ (mantienen el pH cido del lisosoma).
Los lisosomas no son formados directamente, son el producto de la maduracin de
los Endosomas tardos que van recibiendo enzimas y transportadores desde el Ap.
Golgi

0.2 a 0.5 um

az
c
are
s

Amino
cidos

Activar al revs la animacin!

Para ver esta pelcula, debe

disponer de QuickTime y de
un descompresor .

os
d
i
t
e
l
c
nu

pH: 5

ATP

H+

ADP + Pi

Maduracin
pH: 5

Cmo se destinan las protenas que van desde el A. de Golgi hasta el Lisosoma?
La manosa de los N-oligosacridos de la protenas de los lisosomas se fosforilan.
Las enzimas lisosomales se clasifican en la red trans Golgi por un receptor proteico
que reconoce al marcador manosa 6-fosfato.
Se dirigen a ---- a Endosomas Tardos - Lisosomas

Vescula de Transporte

Cmo se destinan las protenas que van desde el A. de Golgi hasta el Lisosoma?
La manosa de los N-oligosacridos de la protenas de los lisosomas se fosforilan.
Las enzimas lisosomales se clasifican en la red trans Golgi por un receptor proteico
que reconoce al marcador manosa 6-fosfato.
Se dirigen a ---- a Endosomas Tardos - Lisosomas

Vescula de Transporte

Las Tres Rutas de Degradacin en los Lisosomas

1 Endocitosis:
-El material se descarga en los
Endosomas Tempranos donde:
Parte del material se recicla a la
membrana plasmtica
Parte se descarga en los
Endosomas Tardos, organelos
que vienen del RE con hidrolasas
cidas (pH del organelo = 6)
A partir de
Tardos
se
Lisosomas.

los Endosomas
generan
los

Las Tres Rutas de Degradacin en los Lisosomas

2 Ruta de
Lisosomas

Degradacin

en

Degradacin de partes de la
propia clula. Ejemplo: organelos
como la mitocondria.
Membranas del RE engloban
mitocondria
formndose
Autofagosoma,
el
posteriormente se unir a
Lisosoma.

a la
un
que
un

3 Ruta de Degradacin en
Lisosomas
Ocurre en clulas especializadas
en fagocitar microorganismos
(macrfagos y neutrfilos).
Se forman fagosomas los que
formarn ms tarde Lisosomas.

Transporte desde la membrana Plasmtica va Endosomas:

Endocitosis

Pinocitosis: fluidos y solutos pequeos (<150 nm dimetro)

Fagocitosis: grandes partculas como microorganismos (>250 nm dimetro)

Para que haya Endocitosis deben formarse las vesculas recubiertas por clatrina

Formacin de Vesculas recubiertas por clatrina en la membrana plasmtica (M.P.)

Las vesculas se forman a partir de depresiones de la M.P. recubiertas en su parte

citoslica por clatrina (pits).
En la mayora de las clulas animales estas vesculas se utilizan para captar
macromolculas especficas Endocitosis mediada por Receptor.

Las clulas captan colesterol (proceso de

endocitosis mediada por receptor)

Vesculas de Transporte:
Transporte
Se forman en regiones revestidas de la membrana (revestidas de clatrina o
coatmero).
Este recubrimiento se elimina antes de la fusin con la vescula receptora.

Adaptina: captura a diferentes R.

Clatrina: media el transporte de los R de transmembrana de LDL y de manosa 6P.

Coatmero (Protenas COP): media el transporte vesicular en la ruta por defecto (REGolgi-Mb. Plasmtica)

Transporte desde el Trans Golgi hacia la Superficie Celular:

Exocitosis

Ruta de Secrecin Constitutiva:

Constitutiva vesculas con flujo constante. La membrana
plasmtica obtiene as sus protenas y lpidos. Las protenas solubles son destinadas a
la matriz extracelular.
Ruta de Secrecin Regulada: Las protenas se almacenan en vesculas de secrecin
las que se liberan cuando son necesarias. Ejemplo: neurotransmisores, hormonas.

Ruta por defecto no regulada.

Vescula recubierta por clatrina Va Regulada

Liberacin del producto por Exocitosis.

Por seal, ejemplo, los neurotransmisores se liberan por un cambio
en el potencial de accin (estmulo elctrico).
Entra calcio a la clula y la vescula se fusiona con la M.P.

Endocitosis existe a la par de la Exocitosis

Transporte al interior de Mitocondrias y Cloroplastos

La mayora de sus protenas son sintetizadas en

el citosol (informacin en genes del ncleo).

Mitocondria:
Espacio intermembrana
Matriz Mitocondrial
Membrana externa
Membrana interna (genoma de la mitocondria)
Cloroplasto:
Espacio y membrana tilacoidal (genoma del
cloroplasto)
Por ende, las protenas se translocan hasta
llegar al lugar de destino.

Transporte hacia la Matriz Mitocondrial

Hay un pptido seal de entre 20 a 80 residuos de aminocidos en el
extremo amino terminal (con carga + y apolares) ->hlice anfiflica.
Las protenas cruzan ambas membranas mitocondriales a la vez (a
travs de protenas transportadoras, o complejos proteicos, se le
denomina tambin lugar de contacto).
Cuando se ha producido la importacin el pptido seal es degradado
en la matriz (por enzimas conocidas como peptidasas).

Transporte de Protenas hasta la Matriz de la Mitocondria

-Canal de Traslocacin

El transporte requiere ATP y un gradiente electroqumico de la membrana interna.

Chaperonas: protenas que ayudan al cruce de la protena en su estado

desplegado y ayudan a su posterior plegamiento.

Chaperonas hsp70 se requieren para Translocacin a Matriz

Hsp60 mitocondrial = facilita el plegamiento

Las protenas cruzan en estado desplegado.

Transporte hacia Cloroplastos

Semejanzas con Transporte a Mitocondrias:
1. Es post-traduccional
2. Requieren energa
3. Requieren seales hidrofbicas en su extremo amino terminal que
luego sern eliminadas.
Diferencia:
En los cloroplastos no se usa la energa del gradiente electroqumico
para el transporte.
Se requiere ATP y GTP.

Transporte a luz del Tilacoide (Cloroplasto)

Se requieren dos seales

1 Seal contiene Ser y Thr, adems de a hidrofbicos y se halla en el extremo

N terminal.
2 Seal tilacoidal hidrofbica.

Transporte a Peroxisomas

Organelos delimitados por una sola membrana.

Pptido Seal: 3 aminocidos ubicados en el extremo carboxilo terminal

Peroxisomas
Son pequeos organelos que contienen enzimas
involucradas en una diversidad de reacciones
metablicas,
incluyendo
varios
aspectos
del
metabolismo energtico.
Carecen de DNA y sus protenas son codificadas por
genes nucleares. Se replican por divisin.
Contienen enzimas que oxidan
varios sustratos
orgnicos, generando perxido de hidrgeno (H2O2).
La oxidacin de los cido grasos en peroxisomas
produce grupos acetilo (CH3-CO-), usados en reacciones
biosintticas, pero no ATP.
Junto a las mitocondrias, son los principales sitios de
utilizacin de oxgeno.
Una hiptesis es que los peroxisomas son un vestigio de
un antiguo
organelo que llevaba a cabo todo el
metabolismo
de oxgeno en clulas eucariticas
ancestrales.
Las inclusiones paracristalinas electro-densas estn
compuestas de la enzima urato oxidasa.

Peroxisomas
En su interior presentan catalasa.
catalasa
Las enzimas usan el O2 para eliminar
tomos de hidrgenos de compuestos
orgnicos formando el H2O2.
La catalasa usa el H2O2 para oxidar
fenoles, alcoholes (ejemplo: etanol a
acetaldehdo), entre otros compuestos,
formando Agua.
Organelo detoxificador (hgado y rin).

Funciones Peroxisomales
50 Enzimas diferentes
Metabolismo Lipdico:
-oxidacin de cidos grasos de Cadena muy larga
Very Long Chain Fatty Acids (VLCFA)
Corresponde a una importante fuente de energa
celular

Formacin y ruptura de Perxido de Hidrgeno:

catalasa
Biosntesis Lipdica (colesterol y plasmalgenos)
Sntesis de aminas y de cidos biliares
Catabolismo de Purinas (urato oxidasa)

Peroxisomas

-Vida media:, 1 da
-Posiblemente su funcin primordial fue la
defensa contra el oxgeno.
-Sus protenas son traducidas en en citoplasma
y luego son dirigidas al organelo mediante seales
carboxilo-terminales de su secuencia.
-PTS1, seal de protenas de matrz peroxisomal (Ser-LysLeu) que es reconocida por receptores solubles que
dirigen la protena al peroxisoma.
- Las protenas de membrana poseen otras seales y
algunas provienen del retculo endoplsmico.

Biognesis Peroxisomal

-Las protenas integrales de membrana PEX10/12/2

forma un sistema de canal y receptor

Biognesis Peroxisomal

-tetrmero -> dmero de Pex5

Biognesis Peroxisomal

Pex11 est involucrada en la proliferacin de los peroxisomas

Proteosoma y protelisis selectiva

1.

Qu es?
Es un complejo de protenas (proteasas dependientes de ATP )
que degradan protenas que poseen una seal para
degradacin y que contienen errores en su secuencia
aminoacdica (mutaciones, transcripcin, splicing, traduccin
- mal plegamiento).
2.
Dnde su ubica?
Se encuentran dispersos en el citoplasma y ncleo, en varias
copias.

Figura 5-37. Molecular Biology of the Cell. 3 Edicin

Cmo est formado?

Un cilindro central formado de
muchas proteasas que tienen
sitios activos que se orientan
hacia el interior del cilindro.
Los extremos estn
delimitados por un complejo
de prots (complejo CAP) de
10 polipptidos (algunos
hidrolisan ATP).
F(x) CAP: selecciona,
despliega y expone a las
proteasas aquellas protenas
blanco para destruccin.
Proteasas: degradan
protenas a pptidos
pequeos.

Fig 6-89. Mol Biol of the Cell. 5 Ed

Procesividad
Mantiene la protena blanco unida a su complejo hasta que
todo el polipptido es degradado a pequeos fragmentos.

Fig 6-90 Mol Biol of the Cell. 5 Ed

Seal para degradacin?

Ubiquitina: pequea protena que se encuentra libre o
unida a otras protenas del citoplasma.

Fig 5-38 Mol Biol of the Cell. 3 Ed

Fig 5-39 Mol Biol of the Cell. 3 Ed

Existen protenas normales que

tienen vida corta y son
marcadas para destruirlas

NO SIEMPRE IMPLICA
DEGRADACIN.

Fig 6-93. Mol Biol of the Cell 5 Ed. Distinta marcacin de las
protenas por la ubiquitina

Fig 6-94. Mol Biol of the Cell 5 Ed